pembahasan komplemen

8/10/2019 pembahasan komplemen

1/27

BAB II

PEMBAHASAN

ENDAHULUAN

Begitu antibodi tersangkut pada permukaan

mikroorganisme yang menyerang, serangkaian protein

plasma yang disebut komplemen akan teraktivasi.Protein komplemen ini mampu menghancurkan

penyerang tersebut. Proses ini dimulai oleh perubahan

konformasional pada daerah Fc suatu antibodi pada saat

berikatan dengan antigen. Jika antigen tersebut melayang

bebas dalam sirkulasi sebagai molekul tunggal,

kompleks imun yang terbentuk dapat berikatan pula

dengan komplemen. Komplemen dalam kompleks

tersebut kemudian dapat membantu menarik sel-sel

fagosit, yang akan menelan dan membuang antigen yang

diinaktivasi dari sirkulasi.

Jika antigen merupakan bagian dari dinding sel bakteri,

komplemen dapat melekat pada antibodi yang terikat,

pada akhirnya akan melemahkan dan membunuh bakteritersebut. Proses yang sama dapat terjadi pada sel darah

yang ditransfusikan jika terdapat ketidaksesuaian dengan

resipiennya, dan oleh karenanya menyebabkan


2/27

hemolisis.

Melalui aktivasi komplemen yang disebut jalur klasik,komplemen pertama C1q melekat pada daerah Fc pada

dua molekul IgG yang berdekatan yang menjadi saling

berdekatan karena berikatan pada suatu permukaan

asing. Selain itu, satu molekul IgM dapat menarik C1q

karena IgM mempunyai lima daerah Fc. Selanjutnya,

subunit C1r dan C1s terikat pada C1q. Subunit-subunit

ini mempunyai aktivitas enzimatik yang memecah dua

komponen lain (C4 menjadi C4a dan C4b, dan C2

menjadi C2a dan C2b). C4 berikatan langsung dengan

permukaan dekat tempat aktivasinya, dan C2a berikatan

dengan C4b. Kompleks C4b-C2a kemudian memecah C3

menjadi C3a dan C3b, yang pada akhirnya melekat

dipermukaan yang berdekatan. Interaksi antara C2a danC3b akan memecah C5 yang kemudian akan mengikat

C6 dan C7 dan juga melekat pada permukaan. C8 dan C9

tertarik untuk membentuk tambahan akhir pada

kompleks ini. Pada titik ini, permukaan sel bakteri akan

mengalami kerusakan yang serius, yang pada akhirnya

akan menyebabkan lisis. Rangkaian aktivasi komplemen

ini sama tidak tergantungpada antigen spesifik yang

terlibat dalam kompleks imun. Antibodi spesifik yang

mengarahkan dan memulai keseluruhan proses ini.

Jalur alternatif merupakan cara lain aktivasi komplemen.


3/27


4/27

komponen-komponennya disaring dengan baik sekali

dengan pemeriksaan hemolitik yang ditunjukkan CH50.Pada pemeriksaan ini, pengenceran serum manusia yang

akan diuji aktivitas komplemennya dicampur dengan

larutan terstandarisasi eritrosit domba yang disensitisasi

dengan adsorpsi antibodi spesifik. Komplemen yang ada

dalam serum uji akan menyebabkan hemolisis, yang

dihitung secara spektrofotometrik sebagai jumlah

hemoglobin yang dilepaskan dari eritrosit domba yang

lisis. CH50 ini sebaiknya dipakai untuk pemeriksaan

penyaring untuk fungsi komplemen pada keadaan yang

dicurigai adanya defisiensi kongenital salah satu

komponen. Pada masa lalu, CH50 telah dipakai untuk

menunjukkan aktivitas komplemen kuantitatif sebagai

bagian dari proses penyakit. Namun pemeriksaanimunologis modern terhadap masing-masing komponen

telah menggantikan sebagian besar peran CH50 dalam

pemantauan penyakit. Salah satu alasan laboratorium

imunokimia yang sangat baik sekalipun dapat

menunjukkan variasi kadar CH50 yang bermakna, yaitu

bahwa sel-sel domba menunjukkan adanya fluktuasi

stabilitas musiman. Oleh karena itu, pemeriksaan CH50

fungsional sebaiknya dibedakan pada hampir semua

keadaan untuk pemeriksaan komponen yang lebih

spesifik, yang telah terstandarisasi dengan baik untuk


5/27

jangka waktu lama. CH50 mempunyai rentang normal

sekitar 50-200 unit. Kadar dibawah rentang normalmenunjukkan adanya peningkatan konsumsi atau

penurunan sintesis. Pemeriksaan hemolitik mempunyai

sensitivitas tertentu untuk kadar komponen C2, C4 dan

C5. suatu nilai nol dari aktivitas hemolitik menunjukkan

adanya defisiensi satu atau lebih komponen dan

sebaiknya dilanjutkan dengan investigasi yang rinci

untuk menggambarkan abnormalitasnya. Peningkatan

kadar CH50 tidak bermakna kecuali sebagai reaktan fase

akut.

Komponen komplemen yang paling sering diperiksa

dalam serum adalah C3 (75-175 mg/dL) dan C4 (15-45

mg/dL). Keduanya pada keadaan normal merupakan

faktor komplemen yang terbanyak dalam serum danapaling mudah diukur dengan metode imunologis

(biasanya nefelometri atau imunodifusi). Penurunan

kadarnya dapat saling dihubungkan secara serial dari

waktu ke waktu untuk pemantauan suatu penyakit

autoimun. Kadar yang rendah menunjukkan kekurangan

akibat aktivasi skunder terhadap progresi penyakit.

Kadar normal atau tinggi menunjukkan kebalikannya,

regresi penyakit atau respons terhadap terapi.

Pemeriksaan komponen lain yang lebih canggih

diperoleh dari laboratorium rujukan khusus. Termasuk


6/27

diantaranya penentuan C1q, C2, C4, C4d, C5, C6, Faktor

B (properdin) dan inhibitor esterase C1. Pemeriksaan-pemeriksaan ini dapat dipakai untuk membedakan

gangguan imunologis dari keadaan peradangan lain dan

juga untuk mendiagnosis suatu defisiensi spesifik.

PEMERIKSAAN KOMPLEMEN

Perubahan dalam kadar komplemen menunjukkan

adanya proses penyakit. Kadarnya yang meningkat

sering ditemukan pada inflamasi akut dan infeksi dan

berhubungan dengan peningkatan AFP.

Defisiensi komplemen dapat dibagi menjadi defisiensi

primer yang ditentukan faktor genetik dan defisiensi

sekunder yang diakibatkan oleh pemakaian komplemen

dalam interaksi antigen-antibodi yang lebih memberikanhubungan dengan patogenesis penyakit.

Komplemen dapat dibagi dalam 3 golongan sebagai

berikut :

a. Komplemen dini pada jalur klasik (C1, C4 dan C2)

b. Komplemen dini pada jalur alternatif (faktor B, D dan

P)

c. Komplemen lambat pada kedua jalur (C3 dan C9)

Bila kadar C4 dan C3 rendah tetapi faktor B normal,

maka itu berarti aktivasi komplemen hanya terjadi


7/27

melalui jalur klasik. Bila kadar C4, C3 dan faktor B

semuanya rendah, kemungkinan besar juga terjadiaktivasi melalui jalur alternatif. Tetapi bila kadar C4

normal dengan kadar C3 dan faktor B rendah, berarti ada

aktivasi melalui jalur alternatif saja.

Pengukuran C3 dan C4 akan membantu dalam

pemantauan pengobatan penderita glomerulonefritis dan

vaskulitis. Kadar yang rendah biasanya menjadi normal

pada remisi.

Telah diketahui bahwa pada suatu interaksi antigen-

antibodi, komplemen yang ada dalam serum dapat diikat

atau dikonsumsi oleh kompleks antigen-antibodi

tersebut, dan bahwa komplemen dapat diaktivasi oleh

kompleks erithrosit-hemolisin, sehingga mengakibatkan

eritrosit tersebut melisis.Complement Fixation Test (CFT) atau uji Fiksasi

komplemen merupakan cara untuk menentukan antigen

atau antibodi yang hanya bereaksi bila ada komplemen.

Antibodi dicampur dengan antigen dan komplemen.

Komplemen akan diikat kompleks antigen-antibodi. Bila

tidak terjadi ikatan komplemen, maka komplemen akan

ditemukan bebas dalam larutan. Adanya komplemen

bebas tersebut dapat diperlihatkan dengan menambahkan

sel darah merah dan hemolisin. Lisis sel darah merah

akan terjadi atas pengaruh komplemen yang bebas tadi.


8/27

Kenyataan ini dipakai untuk menggunakan komplemen

sebagai salah satu bahan untuk penetapan antigenmaupun antibodi. Pengujian ini didasarkan atas reaksi

yang terdiri atas 2 tahap, yaitu tahap pertama dimana

sejumlah tertentu komplemen oleh suatu kompleks

antigen-antibodi, dan tahap kedua dimana komplemen

yang tersisa (bila ada) menghancurkan eritrosit yang

telah dilapisi hemolisin. Banyaknya komplemen yang

tidak dikonsumsi pada reaksi tahap pertama, dan yang

mengakibatkan hemolisis pada reaksi tahap kedua,

secara tidak langsung merupakan parameter untuk

antibodi atau antigen yang diperiksa.

Untuk mendapatkan hasil yang bisa dipercaya, semua

reaktan yang diperlukan untuk uji ini harus disesuaikan

satu dengan yang lain dan berada dalam jumlah atau titeryang optimal. Oleh karena itu sebelum melaksanakan

pemeriksaan pada sampel penderita, terlebih dahulu

dilakukan uji pendahuluan untuk menstandarisasi titer

hemolisin dan titer komplemen yang dipakai pada sistem

uji ini.

Titer hemolisin ditentukan oleh pengenceran tertinggi

hemolisin yang masih dapat melisiskan eritrosit

berkonsentrasi 2% secara lengkap, bila ada komplemen.

Titer hemolisin ini disebut 1 unit dan untuk pemeriksaan

sampel penderita dipakai 2 unit.


9/27

Oleh karena uji fiksasi komplemen melibatkan suatu

sistem yang terdiri atas berbagai reaktan, disampingtitrasi hemolisin dan komplemen diatas, setiap reaktan

harus diuji terhadap ada tidaknya faktor penghambat atau

faktor yang meningkatkan aktivasi komplemen

(antikomplemen atau prokomplemen). Untuk keperluan

ini, pada titrasi komplemen diikutsertakan antigen dan

antigen kontrol, serta pada pemeriksaan sampel selalu

harus diikutsertakan kontrol serum positif maupun

negatif. Suatu hasil pemeriksaan, baru bisa dipercaya

apabila semua reaktan pada sistem ini terkontrol dengan

baik.

Uji fiksasi komplemen dipakai pertama kali oleh

Wassermann, Neisser dan Bruck untuk menentukan

diagnosis Sifilis (Test Wassermann), akan tetapikemudian prinsip pengujian yang sama dipakai juga

dalam diagnosis serologik berbagai penyakit lain,

diantaranya penyakit-penyakit yang disebabkan oleh

parasit, seperti Trypanosoma, Schistosoma, serta

penyakit-penyakit yang disebabkan oleh virus, seperti

virus Hepatitis B, Herpes, Rotavirus, Rubella dan lain-

lain.

SISTEM KOMPLEMEN

Pendahuluan


10/27

Komplemen merupakan sekumpulan molekul protein

dan interaksinya yang terjadi secara berantai,mengakibatkan efek bilogis pada membran, pada sifat sel

dan interaksi protein lain. Sedikitnya ada 11 jenis protein

komplemen yang ada dalam plasma normal, masing-

masing ada dalam keadaan inaktif tetapi bila komplemen

diaktivasi, setiap jenis komplemen mempunyai fungsi

spesifik. Akivasi dapat dimulai dengan reaksi antigen

dengan IgG atau IgM atau bila ada kontak dengan IgA

yang menggumpal, selain itu aktivasi dapat pula dimulai

oleh kontak dengan polisakarida atau lipopolisakarida,

oleh produk yang terjadi akibat aktivasi sistem pembe

kuan atau kalikrein.

Aktivitas BiologisKomplemen dinyatakan dengan nomor dan huruf. Proses

aktivasi tidak berlangsung berurutan sesuai dengan

urutan nomor komplemen. Disepakati bahwa urutan

interaksi komplemen adalah : C1q, C1r, C1s, C4, C2,

C3, kemudian C5 sampai C9. Aktivasi komplemen dapat

merupakan proses pemecahan molekul-molekul secara

enzimatik yang menghasilkan zat yang aktif atau proses

penyesuaian tanpa pemecahan. Pada beberapa tahap dari

proses ini diperlukan ion kalsium dan magnesium.

Aktivasi lengkap dari C1 sampai C9 mengakibatkan


11/27

pecahnya membran dan kerusakan sel yang tidak dapat

diperbaiki lagi. Aktivasi lengkap terjadi dengan tahapan-tahapan sebagai berikut : C2 melepaskan suatu peptida

dengan berat molekul kecil dan aktivitas kinin, hasil

aktivasi C3 dan C5 merangsang mastosit, otot halus dan

leukosit sehingga terjadi efek anafilaktik, unsur lain dari

C3 dan C5 berikatan dengan membran sel dan

menyebabkan sel lebih mudah di fagositosis, proses ini

disebut opsonisasi, fragmen C3 dan C4 menyebabkan

proses perlekatan yaitu partikel yang dilapisi komplemen

melekat pada permukaan sel yang memiliki reseptor

untuk komplemen, C3 dan C4 aktif dapat pula

menetralisir virus, dan akhirnya fragmen C3 da C4

merangsang aktivitas kemotaktik neutrofil sehingga

neutrofil bergerak menghampiri fragmen protein yangbersangkutan. Kompleks C5-C9 mempunyai aktivitas

prokoagulan trombosit dan sebaliknya aktivitas

prokoagulan faktor XII dapat mencetuskan aktivasi C1.

Plasmin dan trombin bersifat proteolitikdan dapat

memecah C3 hingga terbentuk C3 aktif.

Jalur aktivasi

Pada jalur klasik, aktivasi komplemen diawali dengan

aktivasi C1q, C1r dan C1s oleh kompleks antigen-

antibodi. Karena C1q tidak tahan panas, maka


12/27

pemanasan serum dapat melumpuhkan seluruh aktivitas

komplemen. Untuk penggabungan C1qrs diperlukanCa++ sedangkan Mg++ diperlukan oleh C4 untuk

mengaktivasi C2. Bila digunakan antikoagulan yang

mengikat ion, naka plasma kehilangan kation sehingga

komplemen yang ada didalamnya tidak dapat diaktivasi.

Setelah C1qrs aktif mengaktivasi C4 dan kemudian C4

akut mengaktivasi C2, maka kontak dengan C2 aktif

menyebabkan C3 pecah menjadi 2 bagian yaitu : bagian

yang kecil dan tetap berada dalam cairan dan C3b yang

lebih besar dan melekat pada membran sel. C3b

diperlukan untuk mengaktivasi C5, tetapi setalah itu sisa

kompleks C5-C9 terbentuk dengan sendirinya tanpa

aktivasi oleh enzim.

Jalur alternatif tidak melibatkan aktivasi C1, C4 dan C2tetapi dimulai dengan pemecahan C3. Setelah C3b

terbentuk, aktivasi C5 sampai C9 berlangsung dengan

sendirinya. Kunci dari jalur alternatif adalah aktivasi

properdin, yaitu suatu protein serum yang tidak

mempunyai efek biologis bila ia berada dalam keadaan

tidak aktif. Kontak dengan IgA yang menggumpal,

endotoksin atau kompleks melekul seperti dekstran, agar

dan zymosan dapat merubah properdin kemudian

mencetuskan proses yang menghasilkan C3b.


13/27

Tes Fiksasi Komplemen

Berbagai prosedur untuk menentukan adanya interaksiantigen-antibodi dengan cara mengukur penurunan kadar

komplemen dalam serum, setelah dipaparkan pada bahan

yang akan diperiksa. Test fiksasi komplemen hanya

dapat dipakai bila reaksi antigen antibodi benar-benar

mengikat komplemen. Cara dipengaruhi oleh berbagai

faktor kesulitan teknik maupun imunologik dan hanya

dipakai bila tidak ada cara lain yang lebih baik.

Komplemen

Teknik radioimunoassay dan imunodifusi

memungkinkan untuk menentukan kadar setiap

komponen komplemen termasuk komponen dalam jalur

alternatif. Sebagian besar pemeriksaan ini terutamadipakai dalam penelitian. Untuk keperluan klinik,

penetapan aktivitas komplemen secara umum biasanya

sudah memadai. Cara yang paling mudah adalah

menentukan hemolisis lengkap dari eritrosit domba

dalam suatu reaksi yang memerlukan komplemen.

Dalam hal ini eritrosit domba dilapisi dengan antibodi

yang hanya dapat bereaksi dengan antigen bila ada

komplemen, sehingga derajat hemolisis eritrosit dapat

dipakai sebagai ukuran untuk aktivitas komplemen. Hasil

tes dinyatakan dengan unit CH50, yang menyatakan


14/27

pengenceran serum tertinggi yang dapat menghancurkan

separuh dari jumlah eritrosit yang dipakai pada test.Setiap laboratorium harus menentukan nilai rujukan

sendiri karena hasilnya akan berbeda pada kondisi yang

berlainan misalnya perbedaan dalam kadar antibodi dan

eritrosit yang dipakai, cara penyimpanan, elektrolit dan

suhu.

Kadar C3 dan C4 masing-masing dapat ditentukan

dengan cara imunodifusi radial. Cara ini memerlukan

waktu 24-36 jam, disamping itu hasilnya menunjukkan

variasi akibat aktivitas komplemen in vivo dan cara

penanganan spesimen yang berbeda-beda.

Aktivitas komplemen meningkat pada berbagai penyakit

tetapi jarang dirasakan perlu untuk mencari kelainan

pada komplemen. Komplemen merupakan protein faseakut, kadarnya meningkat pada inflamasi, analog dengan

peningkatan LED dan CRP pada keadaan yang sama.

Penetapan komplemen lebih sering diperlukan untuk

mengetahui ada tidaknya penurunan aktivitas

komplemen.

Penurunan aktivitas komplemen

Komplemen dikonsumsi pada reaksi antigen-antibodi,

khususnya reaksi yang membentuk kompleks imun.

Penurunan CH50 biasanya terdapat pada penyakit


15/27

imunologis sistemik terutama SLE dan glomerulonefritis

akibat kelainan imunologis. Pada SLE penurunan kadarkomplemen dan peningkatan titer anti-DNA

menunjukkan adanya glomerulonefritis akut dan pada

saat penyakit tenang kadar komplemen biasanya kembali

normal. Pada penyakit kolagen-vaskuler yang lain seperti

skleroderma dan artritis reumatoid. Kadar komplemen

biasanya menurun waktu penyakit kambuh. Banyak jenis

vaskulitis dan artritis diakibatkan oleh pembentukan

kompleks imun, penurunan titer CH50 sering

memastikan adanya kompleks imun khususnya yang

menyertai beberapa jenis infeksi seperti hepatitis B,

Streptokokus, Mononukleosis infeksiosa dan penyakit

parasit.

Pada hipotensi akut yang tidak diketahui sebabnya, kadarkomplemen dalam serum biasanya rendah, hal ini

menunjukkan adanya aktivitas sistem imun secara

menyeluruh atau adanya aktivitas melalui jalur alternatif.

Keadaan tersebut mungkin disebabkan oleh beberapa hal

misalnya aktivasi granulosit dalam sirkulasi sistemik

atau sirkulasi paru-paru, interaksi heparin dan protamin

dan aktivasi sistem bradikinin. Penderita artritis

reumatoid sering menunjukkan penurunan aktivitas

komplemen dalam cairan sendi, walaupun kadar

komplemen dalam serum normal.


16/27

Ada kemungkinan terjadi defisiensi komplemen secara

spesifik tetapi hal ini jarang dijumpai. Penyakit autoimunsering dijumpai pada penderita dengan defisiensi salah

satu komponen komplemen, sedangkan defisiensi C3

merupakan predisposisi umum untuk penyakit infeksi.

Infeksi Neisseria yang menyeluruh dapat terjadi bila ada

defisiensi C6, C7 atau C8. Pada defisiensi setiap

komponen komplemen, penetapan CH50 menunjukkan

nilai nol.

UJI FIKSASI KOMPLEMEN

Telah diketahui bahwa pada suatu interaksi antigen-

antibodi, komplemen yang ada dalam serum dapat diikat

atau dikonsumsi oleh kompleks antigen-antibodi

tersebut, dan bahwa komplemen dapat diaktivasi olehkompleks erithrosit-hemolisin, sehingga mengakibatkan

eritrosit tersebut melisis.

Kenyataan ini dipakai untuk menggunakan komplemen

sebagai salah satu bahan untuk penetapan antigen

maupun antibodi. Pengujian ini didasarkan atas reaksi

yang terdiri atas 2 tahap, yaitu tahap pertama dimana

sejumlah tertentu komplemen oleh suatu kompleks

antigen-antibodi, dan tahap kedua dimana komplemen

yang tersisa (bila ada) menghancurkan eritrosit yang

telah dilapisi hemolisin. Banyaknya komplemen yang


17/27

tidak dikonsumsi pada reaksi tahap pertama, dan yang

mengakibatkan hemolisis pada reaksi tahap kedua,secara tidak langsung merupakan parameter untuk

antibodi atau antigen yang diperiksa.

Untuk mendapatkan hasil yang bisa dipercaya, semua

reaktan yang diperlukan untuk uji ini harus disesuaikan

satu dengan yang lain dan berada dalam jumlah atau titer

yang optimal. Oleh karena itu sebelum melaksanakan

pemeriksaan pada sampel penderita, terlebih dahulu

dilakukan uji pendahuluan untuk menstandarisasi titer

hemolisin dan titer komplemen yang dipakai pada sistem

uji ini.

Titer hemolisin ditentukan oleh pengenceran tertinggi

hemolisin yang masih dapat melisiskan eritrosit

berkonsentrasi 2% secara lengkap, bila ada komplemen.Titer hemolisin ini disebut 1 unit dan untuk pemeriksaan

sampel penderita dipakai 2 unit.

Oleh karena uji fiksasi komplemen melibatkan suatu

sistem yang terdiri atas berbagai reaktan, disamping

titrasi hemolisin dan komplemen diatas, setiap reaktan

harus diuji terhadap ada tidaknya faktor penghambat atau

faktor yang meningkatkan aktivasi komplemen

(antikomplemen atau prokomplemen). Untuk keperluan

ini, pada titrasi komplemen diikutsertakan antigen dan

antigen kontrol, serta pada pemeriksaan sampel selalu


18/27

harus diikutsertakan kontrol serum positif maupun

negatif. Suatu hasil pemeriksaan, baru bisa dipercayaapabila semua reaktan pada sistem ini terkontrol dengan

baik.

Uji fiksasi komplemen dipakai pertama kali oleh

Wassermann, Neisser dan Bruck untuk menentukan

diagnosis Sifilis (Test Wassermann), akan tetapi

kemudian prinsip pengujian yang sama dipakai juga

dalam diagnosis serologik berbagai penyakit lain,

diantaranya penyakit-penyakit yang disebabkan oleh

parasit, seperti Trypanosoma, Schistosoma, serta

penyakit-penyakit yang disebabkan oleh virus, seperti

virus Hepatitis B, Herpes, Rotavirus, Rubella dan lain-

lain.

Uji Fiksasi Komplemen untuk penetapan antibodi

terhadap virus

Peralatan dan bahan yang diperlukan (cara mikro)

1. Peralatan yang dipakai sama seperti untuk teknik

mikrohemaglutinasi

2. Kit reagens (Behring) terdiri atas antigen virus,

komplemen, eritrosit domba, hemolisin dan larutan

penyangga.


19/27

Cara kerja :

I. Uji Pendahuluan

1. Titrasi hemolisin

a. Sediakan 9 tabung reaksi. Masukkan kedalam tabung

pertama dan seterusnya larutan penyangga dengan

volume seperti pada gambar.

b. Masukkan 1,0 ml hemolisin yang telah diencerkan

1:100 kedalam tabung pertama, lalu campur kemudian

pindahkan 1 ml kedalam tabung berikutnya, demikian

seterusnya hingga tabung terakhir.

c. Sediakan 12 tabung, kemudian kedalam 9 tabung

pertama dimasukkan masing-masing 0,2 ml larutan

hemolisin dari tabung-tabung permulaan. Tabung 10-12

dipakai untuk kontrol erithrosit.d. Kedalam tabung 1-9 dimasukkan 0,1 ml komplemen

yang sudah diencerkan 1:30, 0,2 ml suspensi eritrosit 2%

dan 0,5 ml larutan penyangga.

e. Kedalam tabung 10-12 masukkan 0,2 ml suspensi

eritrosit 2% dan 0,8 ml larutan penyangga.

f. Campur lalu inkubasikan tabung-tabung tersebut pada

suhu 37OC selama 30 menit.

g. Perhatikan adanya hemolisis dan tentukan tabung

dengan pengenceran hemolisis tertinggi yang

menyebabkan hemolisis lengkap. Pengenceran ini


20/27

disebut 1 unit dan untuk pemeriksaan sampel penderita

dipakai 2 unit.h. Pembuatan sistem hemolitik

Campur eritrosit 2% sama banyak dengan hemolisin

yang titernya 2 unit. Biarkan dalam suhu kamar selama

minimal 10 menit sebelum dipakai.

2. Titrasi Komplemen

a. Sediakan 3 baris tabung yang jumlahnya masing-

masing 8 buah. Kedalam tabung-tabung baris I

masukkan larutan penyangga, komplemen dan larutan

antigen, lalu campur

b. Lakukan hal yang sama pada tabung baris ke II dan ke

III, hanya sebagai pengganti antigen, kedalam tabung

baris II dimasukkan antigen kontrol dan kedalam tabungbaris ke III dimasukkan larutan penyangga.

c. Inkubasikan semua tabung dalam penangas air dengan

suhu 37OC selama 30 menit.

d. Masukkan sistem hemolitik (1h) kedalam semua

tabung sebanyak 0,2 ml. Campur dan inkubasikan lagi

pada suhu 37OC selama 30 menit.

e. Perhatikan hemolisis yang terjadi dan tentukan

pengenceran komplemen tertinggi yang menyebabkan

hemolisis lengkap. Apabila hemolisis lengkap pada

ketiga baris tabung terjadi pada pengenceran komplemen


21/27

yang sama, berarti semua reaktan pada sistem ini baik.

f. Pengenceran tertinggi komplemen yang dapatmenyebabkan hemolisis lengkap disebut 1 unit dan

dipakai 2 unit untuk pengujian.

II. Pemeriksaan sampel

Pada setiap pemeriksaan selalu harus diikutsertakan

kontrol antigen, kontrol sistem hemolitik, kontrol

eritrosit dan kontrol komplemen.

Serum penderita terlebih dahulu diinaktifkan dalam

penangas air dengan suhu 56OC untuk menghilangkan

komplemen yang ada dalam serum, sehingga satu-

satunya sumber komplemen hanya yang dibubuhkan

pada pengujian dan diketahui titernya.

1. Sampel

Pakai satu baris sumur untuk sampel pertama (sampel

akut) dan satu baris lain untuk sampel kedua

(konvalesen).

a. Masukkan ke dalam sumur 1 dan sumur 4-12 larutan

penyangga sebanyak 25 ul.

b. Masukkan ke dalam sumur 1-4 sampel yang terlebih

dahulu telah diencerkan 1:5 sebanyak 25 ul.

c. Buat pengenceran serum mulai sumur 4 sampai 12

dengan mikrodiluter.


22/27


23/27

diuraikan dibawah ini :

Masukkan ke dalam sumur 1 dan 2 larutan penyanggasebanyak 50 ul dan komplemen sebanyak 25 ul.

4. Kontrol eritrosit

Masukkan ke dalam sumur 3 dan 4 larutan penyangga

sebanyak 75 ul dan sistem hemolitik sebanyak 50 ul.

5. Kontrol komplemen

a. Masukkan ke dalam sumur 5-12 larutan penyangga

sebanyak 25 ul, ke dalam sumur 5-8 antigen virus

sebanyak 25 ul dan kedalam sumur 9-12 antigen kontrol

sebanyak 25 ul.

b. Buat pengenceran komplemen dalam tabung terpisah

sehingga memperoleh larutan komplemen 2 unit, 1,5unit, 1,0 unit dan 0,5 unit.

c. Masukkan ke dalam sumur 5 dan 9 komplemen 2 unit

sebanyak 25 ul, ke dalam sumur 6 dan 10 komplemen

1,5 unit sebanyak 25 ul, ke dalam sumur 7 dan 11

komplemen 1,0 unit sebanyak 25 ul dan ke dalam sumur

8 dan 12 komplemen 0,5 unit sebanyak 25 ul.

d. Campurlah reaktan dalam setiap sumur.

6. Plate ditutup dengan plate lain kemudian

diinkubasikan pada suhu 4-6OC selama 18 jam dalam


24/27

kotak yang lembab (diberi kain basah).

7. Keesokkan harinya, biarkan plate dalam suhu kamar

selama 15 menit, kemudian masukkan ssitem hemolitik

ke dalam semua sumur.

8. Kocok, lalu inkubasikan pada suhu 37OC selama 15-

30 menit.

9. Reaksi dianggap selesai bila telah timbul hemolisis

lengkap dalam sumur yang berisi komplemen 2 dan 1,5

unit, hemolisis tak lengkap dalam sumur berisi

komplemen 1 unit dan tidak ada hemolisis dalam sumur

berisi komplemen 0,5 unit.

10. Perhatikan hemolisis yang terjadi pada sumur-sumur

berisi sampel dan nyatakan pengenceran tertinggi sampel

yang tidak menyebabkan hemolisis.

Penafsiran

1. Adanya reaksi positif (tidak ada hemolisis) berarti

dalam serum terdapat antibodi terhadap virus

bersangkutan.

2. Titer antibodi dalam serum tunggal belum memastikan

apakah ada infeksi atau pernah divaksinasi.


25/27

3. Untuk mengetahui adanya infeksi diperlukan

pemeriksaan serum ganda, yaitu 2 sampel yang diperolehpada masa akut dan masa konvalesen dengan jarak

waktu 2 minggu. Suatu kenaikan titer sebanyak 4 kali

merupakan indikasi adanya infeksi.

4. Reaksi positif pada kontrol antigen berarti dalam

serum antibodi terhadap zat-zat nonspesifik yang

menyertai antigen. Untuk memastikan, titrasi terhadap

serum diulang dengan menggunakan kedua jenis antigen

secara paralel. Adanya antibodi spesifik dapat dipastikan

bila titernya terhadap antigen virus 4 kali titer terhadap

antigen kontrol.

5. Serum kontrol yang diperoleh dari binatang, kadang-

kadang mengandung antibodi terhadap antigen kontrol

hingga dapat menimbulkan hemolisis.

Uji fiksasi (penambatan) komplemen didasarkan pada adanya antibodi penambatan

komplemen di dalam serum. Adanya komplemen menyebabkan antibodi ini melisis sel-sel.

Tujuan uji fiksasi komplemen adalah untuk menentukan ada atau tidaknya antibodi spesifik

di dalam serum. Uji ini terdiri dari dua sistemyaitu sebagai berikut.

1. Sistem penambatan komplemen

Dalam sistem ini serum, suspense bakteri (antigen lain), dan komplemen dicampurkan.

Bila antigen dan antibodi dari dalam serum itu bergabung, maka komplemen itu dinyatakan

tertambat.

Karakteristika Sistem Komplemen adalah sebagai berikut.

* Komplemen adalah nama yang diberikan terhadap suatu seri protein(plasma) yang terdiri

dari 21 protein

* Mekanisme kerja sistem ini seperti proses pembekuan darah yang membentuk suatu


26/27

sistem enzim yang terstimulasi dalam plasma yang kebanyakan adalah proteinase-

proteinase.

* Ciri spesifik sistem ini : menghasilkan suatu respon yang cepat dan bertingkat terhadapsuatu stimulus yang dapat berupa kompleks imun.

* Protein plasma yang diberi simbol C diikuti dengan angka, menunjukkan nomor penemuan

komplemen tersebut, bukan suatu nomor urutan reaksi.

* Protein komplemen utama yaitu : C1 (q,r,s), C2, C3, C4 ,dst hingga C9, faktor B, faktor D,

faktor H, properdin,dll.

* Pada setiap tahap aktivasi selalu dihasilkan suatu aktivitas enzim baru yang juga

komponen komplemen.

* Produk reaksi pertama berlaku sebagai katalis enzimatik yang mengaktifkan komponen-

komponen selanjutnya, demikian seterusnya hingga dihasilkan suatu respon bertingkat yang

menyerupai cascade. Kerja ini menyerupai air terjun yang terus berlangsung tanpa bisadihentikan di tengah-tengah reaksi. Fragmen enzim diberi nama a dan b misalnya C2a dan

C2b.

* Pusat katalitik sistem ini berada pada C3.

* Akhir dari aktivitas komplemen adalah : terbentuknya suatu pori fungsional pada

membran sel di mana komplemen tersebut melekat, kemudian terjadi perubahan

konformasi fosfolipid sel yang menyebabkan lisis dan berakhir dengan kematian sel. Hal ini

disebut MAC (membrane attack complex).

Sistem Komplemen terdiri dari tiga jalur yaitu sebagai berikut.

* Jalur Klasik. Jalur ini diawali dengan stimulasi dari kompleks antigen-antibodi yang

kemudian mengaktivasi C1q, C1r, C1s, ketiga komponen ini menghasilkan komponen

enzimatik yang menstimulasi C4, C4 menghasilkan komponen enzimatik yang

menstimulasiC2, komponen C2 ini kemudian menghasilkan komponen enzimatik dan

menstimulasi C3 Convertase (pusat katalitik sistem komplemen).

* Jalur MB-Lecitin. Jalur ini diawali oleh stimulasi dari kompleks manosa binding protein

pada permukaan patogen yang kemudian menstimulasi MBL, MASP-1, MASP-2. Ketiga

komponen ini kemudian mnghasilkan komponen enzimatik yang menstimulasi C4, (seperti

halnya pada jalur klasik) C4, C4 menghasilkan komponen enzimatik yang menstimulasiC2,

komponen C2 ini kemudian menghasilkan komponen enzimatik dan menstimulasi C3

convertase (pusat katalitik sistem komplemen).

* Jalur Alternatif. Jalur ini diawali oleh stimulasi dari permukaan patogen yang mengandung

LPS (Lipopolisakarida) yang kemudian langsung menstimulasi C3, C3 menghasilkan

komponen enzimatik yang menstimulasi faktor B, faktor B menghasilkan komponen

enzimatik yang menstimulasi fakator D, faktor D kemudian menghasilkan komponen

enzimatik yang akhirnya mensimulasi C3 convertase.

Setelah Ketiga jalur tersebut mengaktivasi C3 Convertase, C3 convertase ini kemudian


27/27

menghasilkan C3a, C5a dan C3b. C3a, C5a kemudian menstimulasi peptida mediator untuk

inflamasi dan menstimulasi rekrutmen sel fagositik. C3b kemudian berikatan dengan

reseptor komplemen pada sel fagositik dan kemudian menstimulasi opsonisasi danpenghilangan kompleks imun. Selain itu, C3b juga menstimulasi komponen terminal

komplemen yang kemudian terjadi reaksi cascade : menstimulasi C5b, C6,C7,C8,C9 dan

akhirnya membentuk Membran attack complex dan menyebabkan lisis pada patogen.

Persamaan atara ketiga jalur tersebut adalah sebagai berikut.

o Ketiganya sama-sama akan mengaktivasi pusat katalitik sistem komplemen yaitu C3;

Ketiganya pada akhirnya akan menginduksi C9; dan ketiganya sama-sama membentuk

membran attack complex.

Perbedaan atara ketiga jalur tersebut adalah sebagai berikut.

o Stimulus yang menginduksi masing-masing jalur berbeda-beda. Jalur Lecitin distimulasi

oleh kompleks antigen antibodi, Jalur MB-Lecitin distimulasi oleh kompleks manosa-bindingLecitin, dan Jalur Alternatif distimulasi LPS (lipopolisakarida) dari permukaan patogen.

o Komponen yang distimulasi oleh stimulus masing-masing jalur berbeda. Jalur Lecitin

selanjutnya mengaktivasi C1q,C1r,C1s, C4 dan C2, jalur MB Lecitin selanjutnya mengaktivasi

MBL, MASP-1, MASP-2, C4 dan C2, dan jalur alternatif mengaktivasi C3, B,dan D.

2. Sistem indikator hemolitik

Antibody hemolitik (hemolisin)dibuat dengan cara mengimunisasi kelinci dengan sel-sel

darah merah biri-biri. Serum dari kelinci yang sudah diimunisasi dengan sel biri-biri ini

dicampur dengan sel-sel darah merah biri-biri. Bila komplemen tertambat digunakan di

dalam reaksi antibodi uji dan atigen maka tidak akan terjadi hemolisis. Oleh sebab itu, reaksi

hemolitik meninjukan uji negatif. Ini menunjukan bahwa semua reaktan didalam uji fiksasi

komplemen harus disesuaikan dengan tepat.

Uji fiksasi komplemen terutama bermanfaat bila kombinasi antara antigen uji dan

antibodi tidak menimbulkan reaksi kasat mata seperti yang terjadi pada aglutinasi dan

presipitasi. Uji fiksasi komplemen ini banyak digunakan secara luas di dalam diagnosis

laboratories penyakit menular, termasuk penyakit yang disebutkan oleh bakteri, virus,

protozoa, dan cendawan. Salah satu penerapan yang diketahui paling baik dari uji ini adalah

uji Wasserman untuk sifilis, meskipun uji ini telah diganti oleh uji-uji lain.

Documents

pembahasan komplemen