PEMBERIAN EKSTRAK METANOL DAUN DAN BUAH JERUJU …digilib.unila.ac.id/56810/3/TESIS TANPA BAB PEMBAHASAN.pdf · 2019. 5. 3. · pemberian ekstrak metanol daun dan buah jeruju (acanthus

PEMBERIAN EKSTRAK METANOL DAUN DAN BUAH JERUJU

(Acanthus ilicifolius L.) SERTA TAURIN TERHADAP PENURUNAN

KADAR GLUKOSA DAN KOLESTEROL TOTAL DARAH SERTA

KUALITAS DAN KUANTITAS SPERMATOZOA MENCIT

(Mus musculus L.) YANG DIINDUKSI ALOKSAN

(Tesis)

Oleh

Wulan Ayu Nurfitri

PROGRAM PASCASARJANA MAGISTER BIOLOGI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS LAMPUNG

BANDAR LAMPUNG

2019

ABSTRACT






By

Wulan Ayu Nurfitri

Diabetes one of the leading cause of death in the world caused

abnormalities or disorder work the secretion of insulin, that can be had an

influence on fertility. Leaves and fruit Acanthus ilicifolius L. and taurine organic

compounds have antidiabetic compounds. Research aims to understand effect

extract methanol leaves and fruit Acanthus ilicifolius L., and taurine to blood

glucose levels , cholesterol and the number of spermatozoa mice male induced

alloxan. The research method used Completely Randomized Design with 5

treatment groups and 5 repetitions. Treatment of them, K1 for control negative

(normal), K2 as a control positive ( induced alloxan ), K3 namely induced alloxan

and given extract leaves Acanthus ilicifolius L. 22,4 mg / bw for 14 days, K4

namely induced alloxan and given extract fruit Acanthus ilicifolius L. 22,4 mg /

bw for 14 days, and K5 as a group that is induced alloxan and given taurine 15.6

mg/ bw for 14 days. Parameters observed included body weight, blood glucose

levels, cholesterol levels, number of spermatozoa, and the weight of the testis.

Data analyzed by OneWay-ANOVA and followed by test fisher the first 5 %.

Results showing that extracts methanol leaves and fruit Acanthus ilicifolius L. and

taurine did not affect the body weight, but significantly lower blood glucose and

cholesterol levels, although only fruit and taurine positively increase the number

of spermatozoa of male mice induced by alloxan. The research results show that

extracts methanol leaves and fruit and taurine jeruju can be lowered blood glucose

levels and cholesterol total significantly and can improve the quality and quantity

of spermatozoa in mice who were given extract fruit jeruju and taurine and

capable of repairing cells hearts, pancreas and testicles induced aloksan.

Key Words: Jeruju, Taurine, Aloksan, Blood Glucose, Cholesterol, Spermatozoa, Mice

ABSTRAK






Oleh

Wulan Ayu Nurfitri

Diabetes adalah penyebab kematian tertinggi di dunia bersama tiga penyakit

lainnya (penyakit kardiovaskular, kanker dan penyakit pernafasan) mencakup

lebih dari 80% kematian dini. Hiperglikemia pada penderita diabetes disebabkan

kelainan sekresi insulin atau gangguan kerja dari insulin yang mana dapat

berpengaruh terhadap fertilitas. Beberapa kajian menunjukkan bahwa daun jeruju

dan buah jeruju serta senyawa organik taurin memiliki senyawa antidiabetik.

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek ekstrak metanol daun dan buah

jeruju (Acanthus ilicifolius L.), serta taurin terhadap kadar glukosa darah,

kolesterol total darah, kualitas dan kuantitas spermatozoa mencit jantan yang

diinduksi aloksan. Metode penelitian menggunakan Rancangan Acak Lengkap

(RAL) dengan 5 (lima) kelompok perlakuan dan diulang 5 kali. Perlakuan

diantaranya, yaitu K1 sebagai kontrol negatif (tanpa induksi aloksan maupun

bahan uji), K2 sebagai kontrol positif (diinduksi aloksan), K3 sebagai kelompok

yang diinduksi aloksan dan diberi ekstrak daun jeruju 22,4 mg/bb selama 14

hari, K4 sebagai kelompok yang diinduksi aloksan dan diberi ekstrak buah jeruju

22,4 mg/bb selama 14 hari, dan K5 sebagai kelompok yang diinduksi aloksan dan

diberi taurin 15,6 mg/bb selama 14 hari. Data dianalisis dengan One Way Anova

dan Uji Fisher pada taraf α = 0,05. Hasil Penelitian menunjukkan bahwa ekstrak

metanol daun dan buah jeruju serta taurin dapat menurunkan kadar glukosa dan

kolesterol total darah secara signifikan dan dapat memperbaiki kualitas dan

kuantitas spermatozoa pada mencit yang diberi ekstrak buah jeruju dan taurin dan

mampu memperbaiki sel hati, pankreas dan testis yang diinduksi aloksan.

Kata kunci : Jeruju, Taurin, Aloksan, Glukosa darah, Kolesterol, Spermatozoa,

Mencit






(Tesis)

Oleh

Wulan Ayu Nurfitri

Sebagai Salah Satu Syarat untuk Mencapai Gelar

MAGISTER SAINS

Pada

Program Studi Magister Biologi

Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Lampung

PROGRAM PASCASARJANA MAGISTER BIOLOGI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS LAMPUNG

BANDAR LAMPUNG

2019

RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan di Bayah-Lebak pada tanggal 22

Desember 1991, sebagai anak pertama dari pasangan Bapak

Yaya Mulyadijaya, S.Pd. dan Ibu Nurhayati, S.Pd.

Penulis menyelesaikan pendidikan Taman Kanak-kanak di

TK Pelita Bayah Lebak Tahun 1998. Dilanjutkan dengan sekolah dasar di SD

Negeri Bayah Barat 5 yang lulus pada tahun 2004. Sekolah Menengah Pertama

(SMP) di SMP Negeri 1 Bayah pada tahun 2007. Tahun 2010, penulis

menyelesaikan pendidikan Sekolah Menengah Atas (SMA) di SMA Negeri 1

Bayah. Pada tahun yang sama, penulis melanjutkan pendidikan S1 di Universitas

Pasundan, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan Program Studi Pendidikan

Biologi dan lulus pada tahun 2014.

Tahun 2017 penulis terdaftar sebagai mahasiswa Program Studi Magister Biologi

Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Lampung dan

dinyatakan lulus pada tahun 2019.

MOTTO

“Dunia itu cuma terdiri dari tiga hari

Kemarin, telah berlalu apa yang kau lakukan

Besok, kamu tidak tahu tentang besok

Dan hari ini, dimana kamu berada didalamnya

Sebenarnya kamu tidak memiliki apa-apa

kecuali satu hari saja,

Maka rebutlah hari yang satu itu

Hari ini ...................................................”

Sesungguhnya bersama

kesulitan ada kemudahan.

Maka apabila engkau telah

selesai (dari sesuatu

urusan), tetaplah bekerja

keras (untuk urusan yang

lain). Dan hanya kepada

Tuhanmulah engkau

berharap.

(Q.S. ASY-SYARH : 6-8)

Dengan menyebut nama Allah yang Maha pengasih lagi Maha penyayang

PERSEMBAHAN

Segala puji hanya milik Allah SWT, atas rahmat dan nikmat yang selalu dilimpahkan.

Sholawat serta salam selalu tercurah kepada Rasulullah SAW.

Ku persembahkan karya ini sebagai tanda bakti dan cinta kasihku yang tulus kepada:

Yang tercinta, ayahanda dan ibunda yang telah mendidik

dan membesarkanku dengan segala doa terbaik mereka, kesabaran dan limpahan cinta dan kasih sayang, selalu mendukung segala langkahku

untuk mencapai kesuksesan dan kebahagiaan, yang takkan pernah bisa terbalas sampai kapan pun.

Kakak dan adikku tercinta yang selalu memberikan semangat serta dukungan dan doa serta kasih sayangnya untukku, selalu mengingatkanku

ketika aku mulai bosan dan mengeluh, dan selalu mendengarkan segala keluhanku.

SANWACANA

Alhamdulillah puji syukur kehadirat ALLAH SWT yang Maha Pengasih dan

Maha Penyayang karena atas rahmat dan karunia-Nya, penulis dapat

menyelesaikan Tesis yang berjudul “Efek Ekstrak Metanol Daun dan Buah Jeruju

(Acanthus ilicifolius L.) serta Taurin dalam Menurunkan Kadar Glukosa dan

Kolesterol Total Darah serta Kualitas dan Kuantitas Spermatozoa Mencit

(Mus musculus L.) yang Diinduksi Aloksan. Penelitian ini didanai oleh DRPM-

Kemenristek Dikti Program Tim Pasca Sarjana tahun ajaran 2017-2018. Ucapan

terimakasih dan penghargaan yang sebesar-besarnya penulis tujukan kepada

semua yang telah membantu sejak memulai kegiatan sampai terselesaikannya tesis

ini, ucapan tulus penulis sampaikan kepada:

1. Ibu Endang Linirin Widiastuti, Ph.D., selaku pembimbing I dan selaku

pembimbing akademik yang telah banyak meluangkan waktu untuk

memberikan bimbingan, semangat, ilmu, arahan, ide, saran, dan kritik dengan

penuh kesabaran selama penulisan tesis ini.

2. Ibu Dr. Endang Nurcahyani, M.Si., selaku pembimbing II yang telah

meluangkan waktu untuk memberikan bimbingan, semangat, ilmu, arahan,

ide, saran, dan kritik dengan penuh kesabaran selama penulisan tesis ini.

3. Bapak Dr. G. Nugroho Susanto M.Sc., selaku pembahas I atas saran, kritik,

ilmu serta dukungan yang telah diberikan sehingga tesis ini terselesaikan.

4. Bapak Dr. Hendri Busman, M.Biomed., selaku pembahas II atas saran, kritik,

ilmu serta dukungan yang telah diberikan sehingga tesis ini terselesaikan.

5. Bapak Prof. Hasriadi Mat Akin, M. P., selaku Rektor Universitas Lampung

6. Bapak Prof. Drs. Mustofa, M.A., Ph.D., selaku Direktur Program Pascasarjana

Universitas Lampung.

7. Bapak Drs. Suratman, M.Sc., selaku Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu

Pengetahuan Alam Universitas Lampung.

8. Bapak Drs. M. Kanedi, M.Si., Selaku Ketua Jurusan Biologi Fakultas

Matematika dan Ilmu pengetahuan Alam Universitas Lampung.

9. Bapak Dr. Sumardi, M.Si., Ketua Program Studi Magister Biologi Fakultas

Matematika dan Ilmu pengetahuan Alam Universitas Lampung.

10. Ibu Dr. Emantis Rosa, M. Biomed., selaku Kepala Laboratorium

Biomolekuler dan Mba Nunung Cahyawati, A.Md., selaku laboran yang telah

banyak membantu penulis selama penulisan tesis ini.

11. Bapak dan Ibu dosen, staf beserta laboran Jurusan Biologi FMIPA Unila atas

ilmu dan pengalaman yang telah diberikan kepada penulis.

12. drh. Joko Siswanto, drh. Eva, mas Bayu, dan mbak Heni dari Balai Penyidikan

dan Pengujian Veteriner (BPPV) Lampung Regional III, atas bantuannya

dalam histopatologi.

13. Ayahanda dan Ibunda tercinta (Yaya Mulyadijaya S.Pd dan Nurhayati S.Pd)

yang telah memberi dorongan materil dan moril serta do’a dan kasih

sayangnya selama ini yang tidak mungkin terbalas oleh apapun dan sampai

kapanpun.

14. Keluarga besar Agus Saeful Bahri di Lampung yang telah memberi dukungan

baik materil maupun moril selama penulisan tesis ini.

15. Kakak dan adikku tercinta yang menjadi tempat untuk berbagi keluh kesah,

canda tawa dan motivasi kepada penulis.

16. Iffa Afiqa Khairani, S.Si., yang telah membimbing penulis selama penelitian

dan mau berbagi ilmu, dorongan serta motivasi kepada penulis.

17. Lily, Yona, Ara, Winda, Tyas, Yogi, dan Harnes yang kompak sebagai partner

selama melakukan penelitian.

18. Teman-teman anggota laboratorium biologi molekuler yaitu; mba Nung, Sayu

Kadek, Lily, Yona, Arra, Winda, Tyas, Tia, Inas atas kebersamaannya selama

melakukan penelitian.

19. Teman-teman seangkatan pada Magister Biologi 2017 FMIPA Universitas

Lampung, Novriadi S.Si, Desfika Ardia Putri S.Pd, Yogi Kurnia S.Pd,

Yoharnes S.Si, Rizka Arifianti S.Si, Evi Yunita Sari S.Pd, dan Tika Lidia Sari

S.Pd., atas kebersamaan selama menempuh pendidikan di semester-semester

awal.

20. Serta almamater Universitas Lampung tercinta

Bandar Lampung, April 2019

Penulis,

Wulan Ayu Nurfitri

i

DAFTAR ISI

Halaman

DAFTAR ISI......................................................................................................... i

DAFTAR TABEL .............................................................................................. iv

DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ v

I. PENDAHULUAN ........................................................................................ 1

A. Latar Belakang .......................................................................................... 1

B. Tujuan Penelitian ...................................................................................... 5

C. Kerangka Pemikiran .................................................................................. 6

D. Hipotesis .................................................................................................... 7

II. TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................... 8

A. Diabetes Melitus ....................................................................................... 8

1. Diabetes Melitus Tipe 1....................................................................... 9 2. Diabetes Melitus Tipe 2 ...................................................................... 9 3. Gestational Diabetes Mellitus (Gdm) .............................................. 10 4. Kriteria Diagnosis Diabetes Mellitus................................................. 10

B. Kolesterol ………………………………………………………………. 11 C. Jeruju ........................................................................................................ 12

1. Kalasifikasi Tumbuhan Jeruju........................................................... 12

2. Deskripsi Tumbuhan Jeruju...................................................... .......... 13

3. Kandungan Kimia Jeruju...................................................... .............. 14

4. Kegunaan Jeruju ................................................................................. 15

D. Taurin............................................................ ............................................ 16

E. Mencit ....................................................................................................... 17

F. Hati ............................................................ ............................................... 19

G. Pankreas............................................................ ........................................ 22

H. Sistem Reproduksi Mencit Jantan............................................................ . 23

I. Aloksan ..................................................................................................... 26

III. METODE PENELITIAN ............................................................................ 28

A. Waktu dan Tempat Penelitian .................................................................. 28

ii

B. Alat dan Bahan .......................................................................................... 28

C. Metode Penelitian ..................................................................................... 30

1. Rancangan Percobaan ......................................................................... 30

2. Populasi dan Sampel ........................................................................... 31

D. Pelaksanaan Penelitian................................................................................ 32

1. Persiapan Hewan Uji...................................................... ..................... 32

2. Persiapan Bahan Uji...................... .. ................................................... 33

2.1 Persiapan Ekstrak Daun dan Buah Jeruju....... ................................. 33

2.2 Pengujian Fitokimia Ekstrak Daun dan Buah Jeruju ................... 34

2.3 Persiapan Taurin................................................. ......................... 35

3. Induksi Aloksan...................... .. .......................................... .............. 35

4. Preparat Histopatologi....... ................................................................. 36

E. Parameter Penelitian.............................................................................. ..... 37

1. Rerata Berat Badan Mencit.................................................................. 37

2. Kadar Glukosa dan Kolesterol Total Darah ............ ........................... 38

3. Rerata Berat Testis.................................. ............................................ 39

4. Rerata Jumlah Spermatozoa ............ .................................................. 39

5. Motilitas........ ...................................................................................... 40

6. Penilaian dan gambaran histologi hati serta pankreas pada mencit .. 40

6.1 Hati ........ ...................................................................................... 40

6.2 Pankreas........................................................................................ 41

6.3 Testis ........................................................................................... 41

E. Analisis Data.............................................................................. ............... 42

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................................... 43

A. Hasil Uji Fitokimia................................................................................ 43 B. Rerata Berat Mencit............................................................................... 44 C. Rerata Kadar Glukosa Darah Puasa (GDP) Mencit.............................. 46 D. Rerata Kadar Kolesterol Total Darah. Mencit........................................ 50 E. Rerata Berat Testis Mencit................................................................... 52 F. Rerata Jumlah Spermatozoa Mencit...................................................... 54 G. Motilitas Spermatozoa Mencit................................................................. 57 H. Penilaian Dan Gambaran Histologi Pankreas, Hati, Dan Testis

Mencit.. ..................................................................................................... 60

1. Rerata Jumlah Kerusakan Pankreas................................................... 60 2. Gambaran Histopatologi Pankreas Mencit........................................... 61

2.1 Histopatologi Pankreas Mencit Kelompok Normal (K1) .............. 61 2.2 Histopatologi Pankreas Mencit Kelompok Aloksan (K2) .............. 63

2.3 Histopatologi Pankreas Mencit Kelompok Diinduksi Aloksan

dan Diberi Ekstrak Daun Jeruju (A.ilicifolius L.) (K3) .................... 65

2.4 Histopatologi Pankreas Mencit Kelompok Diinduksi Aloksan dan Diberi Ekstrak Buah Jeruju (A.ilicifolius L.) (K4).................... 66

2.5 Histopatologi Pankreas Mencit Kelompok Diinduksi Aloksan dan Diberi Taurin (K5) ..................................................... ………. 68

3 Hati ....................................................................................................... 69 4 Gambaran Histopatologi Hati Mencit ………………………………… 70

4.1 Histopatologi Hati Mencit Kelompok Normal (K1)………………. 71 4.2 Histopatologi Hati Mencit Kelompok Aloksan (K2) .................. … 72 4.3 Histopatologi Hati Mencit Kelompok Diinduksi Aloksan

iii

dan Diberi Ekstrak Daun Jeruju (A.ilicifolius) (K3) .................... 74

4.4 Histopatologi Hati Mencit Kelompok Diinduksi Aloksan dan Diberi Ekstrak Buah Jeruju (A.ilicifolius) (K4)..................... 75

4.5 Histopatologi Hati Mencit Kelompok Diinduksi Aloksan dan Diberi Taurin (K5) ..................................................... …….. 76

5 Testis .................................................................................................... 77

V. HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................................... 83

A. Simpulan .................................................................................................. 83

B. Saran ........................................................................................................ 84

DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 85

iv

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 1. Kriteria Diagnosis Diabetes ............................................................ 11

Tabel 2. Fitokimia Daun Jeruju Menggunakan Ekstrak Metanol ................ 14

Tabel 3. Fitokimia dari Acanthus ilicifolius L. ............................................. 15

Tabel 4. Sifat Biologis Mencit ..................................................................... 18

Tabel 5. Rancangan Percobaan Penelitian .................................................... 31

Tabel 6. Prosedur Pengujian Fitokimia ........................................................ 34

Tabel 7. Kriteria Penilaian Derajat Kerusakan Histopatologi Hati .............. 41

Tabel 8. Kriteria Penilaian Derajat Kerusakan Histopatologi Pankreas ...... 41

Tabel 9. Kriteria Johnsen score ................................................................... 42

Tabel 10. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Daun dan Buah Jeruju ...................... 43

Tabel 11. Rerata Berat Badan Mencit .......................................................... 44

Tabel 12. Rerata Kadar Glukosa Darah Mencit ............................................ 46

Tabel 13. Rerata Kadar Kolesterol Total Darah Mencit ............................... 50

Tabel 14. Rerata Jumlah Spermatozoa Mencit ............................................. 54

Tabel 15. Persentase Motilitas Spermatozoa Mencit .................................... 57

v

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1. Tumbuhan Jeruju ......................................................................... 12

Gambar 2. Struktur Tumbuhan Jeruju ........................................................... 13

Gambar 3. Struktur Taurin ............................................................................ 17

Gambar 4. Mencit (Mus musculus L.) ........................................................... 18

Gambar 5. Struktur Histologi Hati Mencit Jantan Kontrol............................ 19

Gambar 6. Gambaran Histologi Hati Mencit ............................................... 21

Gambar 7. Histologi Pulau Langerhans yang Dinduksi Aloksan................. 23

Gambar 8. Sistem Reproduksi Mencit (Mus musculus L.) ........................... 24

Gambar 9. Proses Spermatogenesis.............................................................. 26

Gambar 10. Struktur Kimia Alloxan.............................................................. 27

Gambar 11. Rerata Berat Testis Mencit ………............................................ 52

Gambar 12. Skor Kerusakan Pankreas Mencit .............................................. 60

Gambar 13. Histopatologi Pankreas Mencit Kelompok Normal.................... 62

Gambar 14. Histopatologi Pankreas Mencit Kelompok yang Diinduksi

Aloksan ...................................................................................... 64


Aloksan dan Diberi Ekstrak Daun Jeruju (A. ilicifolius L.).......... 66


Aloksan dan Diberi Ekstrak Buah Jeruju (A. ilicifolius L.)........ 66


vi

Aloksan dan Diberi Taurin .......................................................... 68

Gambar 18. Skor Kerusakan Hati Mencit .................................................... 69

Gambar 19. Histopatologi Hati Mencit Kelompok Normal.......................... 71

Gambar 20. Histopatologi Hati Mencit Kelompok Positif ........................... 72

Gambar 21. Histopatologi Hati Mencit Kelompok yang Diinduksi Aloksan

dan Diberi Ekstrak Daun Jeruju …………............................... 74


dan Diberi Ekstrak Buah Jeruju …………............................... 76


dan Diberi Taurin …………..................................................... 77

Gambar 24. Skor Histopatologi Testis Mencit .............................................. 78

Gambar 25. Sayatan Melintang Tubulus Seminiferus Testis Mencit

Kelompok Normal (K1) ............................................................... 79


Kelompok yang Diinduksi Aloksan (K2)...................................... 79


Kelompok yang Diberi Ekstrak Daun Jeruju (K3)........................ 80


Kelompok yang Diberi Ekstrak Buah Jeruju (K4)......................... 80


Kelompok yang Diberi Taurin (K5).............................................. 81

I. PENDAHULUAN

A. Latar Belakang dan Masalah

Diabetes melitus (DM) merupakan penyakit gangguan metabolik menahun

dimana pankreas tidak bisa menghasilkan cukup insulin atau tubuh tidak bisa

menggunakan insulin yang diproduksi secara efektif dari dalam tubuh.

Insulin ialah hormon yang mengatur keseimbangan gula darah dalam tubuh

(Infodatin, 2014). Menurut International Diabetes Federation (IDF), diabetes

diklasifikasikan menjadi tiga tipe yakni: diabetes tipe 1, diabetes tipe 2, dan

diabetes gestasional. Diabetes tipe 2 merupakan tipe diabetes yang paling

banyak ditemukan yakni sekitar 90% dari semua kasus diabetes yang terjadi

(IDF, 2017).

Diabetes merupakan salah satu keadaan darurat kesehatan global terbesar

pada abad ke-21. Diabetes menjadi penyebab salah satu kematian tertinggi di

dunia bersama tiga penyakit lainnya (kardiovaskular, kanker, dan penyakit

pernafasan) mencakup lebih dari 80% kematian dini. Pada tahun 2017,

sekitar 4 juta orang berusia 20-79 tahun diperkirakan meninggal akibat

diabetes yang setara dengan satu kematian setiap delapan detik. Diabetes

bertanggungjawab sekitar 10,7% kematian secara global untuk orang-orang

di kelompok usia 20-79 tahun lebih tinggi dibandingkan dengan gabungan

2

jumlah kematian akibat infeksi penyakit (1,1 juta kematian akibat

HIV/AIDS, 1,8 juta dari tuberkulosis, dan 0,4 juta dari malaria). Jumlah

penderita diabetes meningkat menjadi 451 juta jika umurnya diperluas

sampai 18-99 tahun. Jika hal ini terus berlanjut, pada tahun 2045 akan ada

693 juta orang usia 18-99 tahun atau 629 juta orang usia 20-79 tahun akan

memiliki diabetes (IDF, 2017).

Pada tahun 2017, Indonesia memiliki sekitar 10,3 juta penderita diabetes

yang merupakan peringkat ke-6 di dunia dengan rentang usia penderita

diabetes sekitar 20-79 tahun. Di kawasan Pasifik Barat, Indonesia berada

diperingkat ke-2 dengan jumlah penderita diabetes sekitar 10,6 juta orang

pada rentang usia 18-99 tahun (IDF, 2017).

Kelainan sekresi insulin dan gangguan kerja dari insulin dapat menyebabkan

hiperglikemia. Keadaan hiperglikemia menyebabkan radikal bebas meningkat

diikuti dengan penurunan sejumlah antioksidan dan akhirnya terjadi peristiwa

yang disebut stres oksidatif (Gunawan, 2014). Stres oksidatif dapat

menyebabkan kerusakan berbagai makromolekul dalam sel yang berperan

dalam patogenesis penyakit degeneratif (Winarsi, 2007).

Stres oksidatif pada penderita diabetes akan meningkatkan pembentukan

Reactive Oxygen Species (ROS) di dalam mitokondria yang akan

mengakibatkan berbagai kerusakan oksidatif berupa komplikasi diabetes

(Tiwari et al, 2002). Beberapa komplikasi yang terjadi dari diabetes ialah :

meningkatnya resiko penyakit jantung dan stroke, neuropati (kerusakan

syaraf) di kaki yang meningkatkan kejadian ulkus kaki, infeksi dan bahkan

3

keharusan untuk amputasi kaki, retinopati diabetikum yang merupakan salah

satu penyebab utama kebutaan yang mana terjadi akibat kerusakan pembuluh

darah kecil di retina, diabetes juga merupakan salah satu penyebab utama

gagal ginjal (Infodatin, 2014).

Stres oksidatif dapat juga menjadi penyebab infertilitas karena produk reactiv

oxygen species (ROS), baik endogen maupun eksogen melebihi tingkat

antioksidan di dalam tubuh. Mitokondria memproduksi molekul-molekul

ROS endogen (Utami, 2009). Cara mencegah komplikasi diabetes salah

satunya dengan menormalkan kadar Reactive Oxygen Species (ROS) di

dalam mitokondria untuk mencegah kerusakan oksidatif (Tiwari et al, 2002).

Stres oksidatif pada penderita diabetes dapat berkurang dengan menggunakan

antioksidan sehingga diharapkan dapat mencegah komplikasi lebih lanjut

(Rosen et al, 2002).

Pengunaan obat-obat sintesis relatif mengeluarkan biaya yang cukup mahal

dan menghasilkan efek samping. Oleh karena itu, maka diperlukan obat

alternatif dari berbagai jenis tumbuhan untuk mengobati penyakit dengan

efek samping yang sangat kecil. Obat tradisional yang mengandung metabolit

sekunder dapat digunakan sebagai alternatif untuk pengembangan obat

karena lebih mudah diterima oleh tubuh dibandingkan obat sintetik (Galih

dan Esyanti, 2014). Pengobatan tradisional sebagian besar menggunakan

ramuan yang berasal dari tumbuh-tumbuhan baik berupa akar, batang, biji,

bunga, daun, ataupun kulit kayu. Bagian-bagian dari tumbuhan tersebut

mengandung senyawa metabolit sekunder yang terdiri dari empat golongan

4

utama, yaitu steroid, flavonoid, alkaloid, dan terpenoid. Senyawa metabolit

sekunder tersebut memiliki aktivitas biologi (Lahamado et al, 2017). Obat

tradisional juga digunakan masyarakat sebagai obat pilihan untuk mengobati

penyakit berat, penyakit yang belum memiliki obat yang memuaskan seperti

kanker dan AIDS, serta berbagai penyakit menahun misalnya hipertensi dan

diabetes melitus tanpa pengawasan dokter (Dewoto, 2007).

Salah satu tumbuhan yang dapat dijadikan tumbuhan obat ialah tanaman

jeruju (Acanthus ilicifolius L.). Tanaman jeruju (Acanthus ilicifolius L.)

merupakan tanaman obat penting yang berasal dari hutan mangrove, namun

nilai obatnya belum sepenuhnya dieksplorasi. Berbagai bagian tanaman ini

dieksplorasi secara ilmiah untuk aktivitas biologinya seperti hepatoprotektif,

aktivitas anti osteoporosis, antimikroba, antikanker, analgesik, antiinflamasi,

antidiabetik, dan antiulcer (Gayathri et al, 2014).

Penelitian terkini tentang penyaringan fitokimia ekstrak daun jeruju

(Acanthus ilicifolius L.) menunjukan adanya protein, resin, steroid, tanin,

gula, glikosida, sterol, terpenoid, fenol, alkaloid, glikosida jantung dan

katekol. Potensi ekstrak tumbuhan disebabkan adanya metabolit sekunder,

dan ekstraknya terbukti mengandung berbagai senyawa bermanfaat untuk

efek antioksidan dan antiinflamasi (Velmani et al, 2016).

Senyawa lain yang memiliki sifat antikanker dan antioksidan adalah taurin.

Taurin adalah suatu antioksidan yang sangat kuat sehingga dapat mencegah

kerusakan DNA pada konsentrasi yang rendah. Berdasarkan penelitian

5

dilaporkan bahwa taurin mencegah penyakit diabetes serta fibrosis hati

melalui mekanisme antioksidannya (Tasci et al, 2007).

B. Tujuan Penelitian

Tujuan dari penelitian ini adalah :

1. Untuk mengetahui efek ekstrak metanol daun dan buah jeruju

(Acanthus ilicifolius L.) serta taurin terhadap kadar glukosa dan

kolesterol total darah pada mencit (Mus musculus L.) yang diinduksi

aloksan.

2. Untuk mengetahui ekstrak metanol daun dan buah jeruju

(Acanthus ilicifolius L.) serta taurin terhadap kualitas dan kuantitas

spermatozoa mencit (Mus musculus L.) yang diinduksi aloksan.

3. Menguji efek antidiabet ekstrak metanol daun dan buah jeruju

(Acanthus ilicifolius L.) serta taurin terhadap gambaran histopatologi

pankreas, hati, dan tubulus seminiferus pada mencit (Mus musculus L.)

yang diinduksi aloksan.

6

C. Kerangka Pemikiran

DIABETES Salah satu penyebab kematian

tertinggi di dunia.

Indonesia memiliki sekitar 10,3

juta penderita diabetes yang

merupakan peringkat ke-6 di

dunia

Upaya

Pengobatan

Obat

modern

Obat-obat

tradisional

Harganya

cukup mahal

Adanya efek

samping

Mudah di dapat di

alam

Efek samping

yang sangat kecil

Obat berbahan alami

Jeruju

(Acanthus ilicifolius L.)

Taurin

(Asam amino)

Daun jeruju

Buah

jeruju

Menurunkan kadar glukosa serta kolesterol total darah

Mempertahankan kualitas dan kuantitas spermatozoa mencit jantan (Mus musculus L.)

Memperbaiki kerusakan sel pankreas, hati, dan tubulus seminiferus mencit

(Mus musculus L.)

Aloksan

Menyebabkan kerusakan sel β pankreas

Sekresi insulin mengalami penurunan

Hiperglikemia

7

D. Hipotesis

Hipotesis yang diajukan dalam penelitian ini adalah :

1. Pemberian ekstrak metanol daun dan buah jeruju (Acanthus ilicifolius L.)

serta taurin mampu menurunkan kadar glukosa darah dan kolesterol total

darah mencit (Mus musculus L.) yang telah diinduksi aloksan.


serta taurin mampu mempertahankan kualitas dan kuantitas spermatozoa

mencit jantan (Mus musculus L.) yang diinduksi aloksan.


serta taurin mampu memperbaiki kerusakan sel pankreas, hati, dan tubulus

seminiferus mencit (Mus musculus L.) yang telah diinduksi aloksan.

8

II. TINJAUAN PUSTAKA

A. Diabetes Melitus

Diabetes melitus (DM) ialah suatu kondisi kronis dimana kadar glukosa

darah (KGD) mengalami peningkatan (hiperglikemia) sehingga pengaturan

homeostasis glukosa tidak berjalan dengan baik (Ridwan, 2012). Keadaan

hiperglikemia terjadi karena tubuh tidak dapat menghasilkan banyak atau

cukup hormon insulin atau menggunakan insulin secara efektif. Insulin

adalah hormon penting yang diproduksi di kelenjar pankreas dan berfungsi

mengangkut glukosa dari aliran darah ke dalam sel-sel tubuh di mana glukosa

diubah menjadi energi (IDF, 2017).

Hiperglikemia jika dibiarkan dalam jangka waktu yang lama bisa

menyebabkan kerusakan pada berbagai organ tubuh. Berbagai kerusakan

tersebut menyebabkan berkembangnya gangguan kesehatan seperti penyakit

kardiovaskular, neuropati, nefropati dan penyakit mata, retinopati dan

kebutaan. Komplikasi serius dapat dicegah dengan pengelolaan diabetes

secara tepat (IDF, 2017).

Menurut International Diabet Federation (IDF), Dibetes mellitus secara luas

ada tiga tipe utama diabetes, diabetes tipe 1, diabetes tipe 2 dan diabetes

9

gestasional (GDM). Ada juga beberapa jenis diabetes yang kurang umum

yang meliputi diabetes monogenik dan diabetes sekunder. Diabetes

monogenik adalah hasil dari mutasi genetik tunggal pada gen dominan

autosomal dari pada kontribusi beberapa gen dan faktor lingkungan seperti

yang terlihat pada diabetes tipe 1 dan tipe 2. Diabetes sekunder timbul

sebagai komplikasi penyakit lain seperti gangguan hormon (misalnya

penyakit Cushing atau akromegali), penyakit pankreas (misalnya

pankreatitis) atau akibat obat-obatan (misalnya kortikosteroid) (IDF, 2017).

1. Diabetes melitus tipe 1

Diabetes tipe 1 disebabkan oleh kelainan autoimun berupa penghancuran

sel-sel β pankreas oleh sistem kekebalan (Campbell et al, 2008).

Kerusakan sel-sel β pankreas tersebut menyebabkan produksi insulin oleh

tubuh sedikit bahkan mengalami defisiensi insulin relatif atau absolut.

Penyakit ini terjadi pada usia berapa pun. Diabetes tipe 1 paling sering

terjadi pada anak-anak dan remaja. Penderita diabetes tipe 1

membutuhkan suntikan insulin setiap hari agar kadar glukosanya berada

dalam kisaran normal. Penderita diabetes tipe 1 mampu bertahan jika ada

insulin (IDF, 2017).

2. Diabetes melitus tipe 2

Diabetes tipe 2 adalah jenis diabetes yang paling umum, terhitung sekitar

90% dari semua kasus diabetes. Hiperglikemia pada diabetes tipe 2 terjadi

karena ketidakmampuan tubuh yang tidak memadai untuk merespons

sepenuhnya insulin (resistensi insulin). Selama keadaan resistensi insulin,

10

insulin tidak efektif dan oleh karena itu pada awalnya mendorong

peningkatan produksi insulin untuk mengurangi kenaikan glukosa, tapi

seiring waktu keadaan produksi insulin yang relatif tidak memadai dapat

berkembang. Diabetes tipe 2 paling sering terlihat pada orang dewasa

yang lebih tua, namun semakin terlihat pada anak-anak, remaja dan orang

dewasa muda karena meningkatnya tingkat obesitas, ketidakaktifan fisik

dan pola makan yang buruk (IDF, 2017).

3. Gestational Diabetes Mellitus (GDM)

Keadaan intoleransi glukosa yang tidak ada atau diblokir selama

kehamilan disebut gestational diabetes mellitus. Gestational diabetes

mellitus (GDM) terjadi karena pankreas wanita tidak berfungsi mengatasi

keadaan diabetes saat kehamilan (Gilmartin et al, 2008). Sekitar 7% dari

semua kehamilan diperparah oleh GDM, dimana menghasilkan lebih dari

200.000 kasus per tahun. Prevalensi dapat berkisar dari 1 hingga 14%

dari semua kehamilan (ADA, 2003).

4. Kriteria Diagnosis Diabetes Mellitus

Untuk diagnosa diabetes, kriteria diagnostik telah diperdebatkan dan

diperbarui selama beberapa dekade namun kriteria terkini dari Organisasi

Kesehatan Dunia (WHO) menyatakan bahwa diabetes didiagnosis dengan

mengamati peningkatan kadar glukosa dalam darah (IDF, 2017). Kriteria

diagnosis disajikan pada Tabel 1 sebagai berikut :

11

Tabel 1. Kriteria Diagnosis Diabetes (IDF, 2017)

Diabetes didiagnosis

jika satu atau lebih

dari kriteria berikut

terpenuhi

Toleransi glukosa yang

diperbaiki (igt) harus

didiagnosis jika kedua

kriteria berikut

terpenuhi

Glukosa darah puasa

terganggu (ifg) harus

didiagnosis jika apapun

dari kriteria berikut

terpenuhi

Glukosa darah

puasa ≥7.0

mmol/L (126 mg/dL)

Glukosa darah puasa

12

dapat dibedakan menjadi beberapa macam, yaitu : LDL (Low Density

Lipoprotein) dinamakan sebagai kolesterol jahat karena kadar LDL tinggi di

dalam darah menyebabkan terjadinya pengendapan kolesterol di dalam arteri.

HDL (High Density Lipoprotein) sebagai kolesterol baik karena dapat

membuang kelebihan LDL di pembuluh arteri kembali ke hati untuk diproses

selanjutnya akan dibuang. VLDL (Very Low Density Lipoprotein)

mengandung sebagian besar trigliserida dalam darah (Soeharto, 2004).

C. Jeruju (Acanthus ilicifolius L.)

Jeruju merupakan tumbuhan yang habitatnya di kawasan mangrove dan

sangat jarang di daratan. Jeruju tumbuh liar di tanah yang berlumpur dan

berair payau, di daerah pantai, dan di tepi sungai. Jeruju memiliki ciri khas

yaitu tumbuhan herba yang rendah dan kuat. Tumbuhan jeruju dapat dilihat

pada Gambar 1 sebagai berikut :

1. Klasifikasi Tumbuhan Jeruju ( Acanthus ilicifolius L. )

Jeruju diklasifikasikan berdasarkan sistem Angiosperm Phylogeny Group

II (2003) sebagai berikut :

Kerajaan

Divisi

:

:

Plantae

Magnoliophyta

Kelas : Magnoliopsida

Bangsa : Lamiales

Suku : Acanthaceae

Marga : Acanthus

Jenis : Acanthus ilicifolius L.

Gambar 1. Tumbuhan Jeruju

13

Nama daerah

Jeruju hitam, daruyu, darulu

2. Deskripsi Tumbuhan Jeruju ( Acanthus ilicifolius L. )

Jeruju (A. ilicifolius L.) adalah tanaman yang kuat dan agak berkayu,

tanaman herba rendah yang terjurai di permukaan tanah, dan berada

dalam ketinggian hingga 2 m. Daun jeruju memiliki dua sayap gagang

daun yang berduri serta terletak di tangkai. Permukaan daunnya halus dan

memiliki tepi daun yang bervariasi seperti : zigzag/bergerigi besar-besar

seperti gergaji atau agak rata dan secara gradual menyempit menuju

pangkal. Memiliki bentuk daun lanset lebar dengan ujung meruncing

serta berduri tajam. Letak daun sederhana dan berlawanan. Memiliki

ukuran daun sekitar 9-30 x 4-12 cm. Bunga jeruju mempunyai mahkota

bunga berwarna biru muda hingga ungu lembayung, kadang agak putih.

(Noor et al, 2012). Struktur tumbuhan jeruju (A. ilicifolius L.) disajikan


Gambar 2. Struktur Tumbuhan Jeruju 1. Daun 2. Bunga 3. Mahkota bunga

beserta putik dan benang sari 4. Buah

(Sumber : Saranya dan Ramanathan, 2015).

14

3. Kandungan kimia Jeruju (Acanthus ilicifolius L.)

Penelitian tentang penyaringan fitokimia ekstrak daun jeruju

(A. ilicifolius L.) menunjukan adanya protein, resin, steroid, tanin, gula,

glikosida, sterol, terpenoid, fenol, alkaloid, glikosida jantung dan katekol.

Potensi ekstrak tumbuhan disebabkan oleh adanya metabolit sekunder,

dan ekstraknya terbukti mengandung berbagai senyawa bermanfaat untuk

efek antioksidan dan anti-inflamasi (Velmani et al, 2016).

Konstituen kimia dari kelas yang berbeda telah diisolasi dan

dikarakterisasi dari jeruju (A. ilicifolius L.). Ekstrak yang diperoleh dari

etanol, metanol, kloroform dan heksana berasal dari bagian tanaman yang

berbeda seperti akar daun, batang telah ditemukan mengandung beberapa

unsur kimia yang berbeda : Alkaloid, glikosida, lignans, saponin, sterol,

asam lemak, dan derivat asam koumarat (Singh dan Aeri, 2013).

Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan tentang aktivitas

atinociceptive dari ekstrak metanol daun jeruju (A. ilicifolius L.), skrining

awal menunjukkan adanya berbagai kelas konstituen seperti flavonoid,

saponin, tanin, glikosida dan steroid, yang dapat dilihat pada Tabel 2 :

Tabel 2. Fitokimia Daun Jeruju Menggunakan Ekstrak Metanol

Pengujian Hasil

Flavonoid +

Tanin +

Steroid +

Saponin +

Alkaloid -

Glikosida +

(Sumber: Islam et al, 2012)

15

Penelitian yang dilakukan oleh (Ernianingsih, 2014) tentang

Etnofarmakologi Tumbuhan Mangrove Achantus ilicifolius L.,

Acrostichum speciosum L., dan Xylocarpus rumphii Mabb. di Desa

Sungai Tekong Kecamatan Sungai Kakap Kabupaten Kubu Raya

diperoleh data fitokimia dari Achantus ilicifolius L. yang dapat dilihat

pada Tabel 3 sebagai berikut :

Tabel 3. Fitokima dari Achantus Ilicifolius L. (Ernianingsih et al, 2014)

Spesies Organ Fitokimia

Alkaloid Saponin Flavonoid Terpenoid Fenol

A. Ilicifolius Daun + ++ + + + Buah + + + + + Bunga + + - - + Akar + + + + + Kulit

Batang

- + + + +

4. Kegunaan Jeruju (Acanthus ilicifolius L.)

Secara tradisional tanaman jeruju (A. ilicifolius L.) digunakan untuk

dispepsia, kelumpuhan, asma, sakit kepala, rematik, dan penyakit kulit.

Tanaman ini dikenal dengan nama “Krishnasaireyaka” atau

“Karimkurunji”, merupakan satu dari sembilan tanaman yang disamakan

dengan obat “Sahachara”, yang digunakan dalam pengobatan Ayurveda

(Ilmu pengobatan tradisional di India) untuk penanganan rematik (Singh

dan Aeri, 2013). Selain itu dapat juga mengobati penyakit diabetes,

leukimia, rematik neuralgia (Saranya dan Ramanathan, 2015).

Tanaman jeruju (A. ilicifolius L.) merupakan tanaman obat penting yang

berasal dari hutan mangrove, namun nilai obatnya belum sepenuhnya

dieksplorasi. Berbagai bagian tanaman ini dieksplorasi secara ilmiah

16

untuk aktivitas biologinya seperti hepatoprotektive, aktivitas anti

osteoporosis, antimikroba, antikanker, analgesik, antiinflamasi,

antidiabetik, dan antiulcer (Gayathri et al, 2014). Daun jeruju

(A. ilicifolius L.) digunakan untuk mengobati rematik, neuralgia, gigitan

ular, kelumpuhan dan asam. Teh yang diseduh dari daun mengurangi rasa

sakit dan memurnikan darah. Ekstrak alkohol jeruju (A. ilicifolius L.)

terbukti efektif melawan perkembangan tumor dan pembentukan

papiloma kulit karsinogen yang diinduksi pada tikus. Studi biologi

ekstrak methanol daun jeruju (A. ilicifolius L.) menunjukkan bahwa ia

memiliki efek penghambatan edema-edema pada tikus (Islam et al, 2012).

D. Taurin

Taurin ialah asam amino β sulfonat yang berasal dari metabolisme metionin

dan sistein (Redmond et al, 1998). Taurin termasuk asam amino bebas yang

banyak terdapat di tulang, jaringan jantung dan otak. Taurin terdapat di

tuna albakor, ikan hiu, ikan pari, mackerel, dan salmon hasil budidaya .

Taurin banyak dimanfaatkan untuk mereduksi tekanan darah, meningkatkan

kesehatan jantung, dan mereduksi kolesterol dalam darah (Kadam dan

Prabhasankar, 2010). Taurin berperan dalam berbagai fungsi biologis tubuh

seperti stabilitas membran, keseimbangan homeostatis dari kalsium

antioksidan, osmoregulasi dan memacu pertumbuhan (Widyasti et al, 2013).

Struktur taurin dapat dilihat pada Gambar 3.

17

Gambar 3. Struktur Taurin (Birdsall, 1998)

E. Mencit (Mus musculus L.)

Penelitian saat ini menggunakan hewan model yang secara patologis dibuat

dalam kondisi Diabetes milletus. Kondisi patologis pada hewan model

bertujuan untuk melakukan pencegahan, menetapkan diagnosa, mengetahui

patogenesis, dan terapi yang digunakan untuk penanganan penyakit Diabetes

milletus (Erwin et al, 2012). Mencit (Mus musculus L.) banyak digunakan

sebagai hewan uji karena sifat-sifatnya yang menguntungkan diantaranya:

tubuhnya kecil, mudah dikelola, penanganan mudah, reproduksinya cepat

serta jumlah anak perkelahiran (litter size) tinggi, dan tidak mengeluarkan

biaya yang banyak selama pengelolaannya (Kartiarso et al, 2006).

Penelitian biasanya memakai mencit jantan karena mencit jantan tidak

terpengaruh oleh adanya siklus menstruasi dan kehamilan seperti pada mencit

betina. Mencit jantan juga mempunyai kecepatan metabolisme obat yang lebih

cepat dan kondisinya lebih stabil dibandingkan mencit betina

(Mangkoewidjojo, 1988). Gambaran mencit jantan disajikan pada Gambar 4.

dan sifat biologi yang dimiliki mencit jantan disajikan pada Tabel 4.

18

1. Klasifikasi Mencit (Mus musculus L.)

Klasifikasi mencit jantan menurut (Arrington, 1972) sebagai berikut :

Kerajaan : Animalia

Filum : Chordata

Kelas : Mamalia

Bangsa : Rodentia

Suku : Muridae

Marga : Mus

Jenis : Mus musculus L.

Gambar 4. Mencit (Mus musculus L. )

Tabel 4. Sifat Biologis Mencit (Mus musculus L.)

Kriteria Keterangan

Lama hidup 1-3 tahun

Lama bunting 19-21 hari

Kawin sesudah beranak 19-24 hari

Umur sapih 21 hari

Umur dewasa kelamin 35 hari

Umur dikawinkan 8 minggu

Siklus estrus 4-5 hari

Lama estrus 12-14 jam

Berat Jantan

Berat Betina

20-40 kg

18-35 kg

Berat lahir 0,5-1,0 g

Berat sapih 18-20 g

Jumlah anak lahir 6-15 ekor

Kecepatan tumbuh 1 g/hari

(Sumber : Smith dan Mangkoewidjojo, 1988)

19

F. Hati

Hati terdiri atas unit-unit heksagonal yaitu lobus hepaticus (hati). Bagian

tengah setiap lobulus terdapat sebuah vena sentralis yang dikelilingi secara

radial oleh lempeng sel hati ( Lamina hepatocytica), yaitu hapatosit dan

sinusoid ke arah perifer. Struktur histologi hati disajikan pada Gambar 5.

Gambar 5. Struktur Histologi Hati Mencit Jantan (Mus musculus L.)

Kontrol (Perbesaran 100x dengan Pewarnaan HE) (Julio et al, 2013)

Hati adalah organ tubuh yang berperan sebagai penetral racun. Hati

bertanggung jawab dalam mengubah zat-zat berbahaya menjadi zat yang

tidak berbahaya. Proses biotransformasi tersebut menyebabkan sel hati

mudah sekali mengalami kerusakan. Kerusakan yang terjadi biasanya

kerusakan dalam struktur sel dan terjadinya gangguan fungsi pada hati

(Corwin, 2001).

Hati berfungsi dalam mengatur kadar glukosa di darah. Makanan yang

mengandung glukosa akan diserap di usus kemudian oleh hati diteruskan

Sel Hepatosit

Vena Sentral

sinusoid

20

kepada vena portal. Glikogen dalam hati akan dipecah menjadi glukosa.

Kadar glikogen normal dapat mempertahankan kadar glukosa darah. Hati

dapat mengalami gangguan sehingga dapat menyebabkan terjadinya

hiperglikemia atau hipoglikemia (Ganiswarna, 1995).

Diabetes mellitus adalah salah satu penyakit yang mengakibatkan kelainan

dan gangguan pada hati sehingga gambaran hati mengalami perubahan.

Kerusakan yang terjadi pada sel hati dapat bersifat sementara dan tetap.

Perubahan yang sifatnya sementara disebut degenerasi. Degenerasi terjadi

karena gangguan biokimiawi sehingga mengakibatkan kerusakan pada sel

hati akibatnya tidak terjadi keseimbangan pengeluaran dan pemasukan ion

serta air (Salasa et al, 2015).

Kerusakan sel hati meliputi degenerasi parenkimatosa, degenerasi hidropik,

dan nekrosis. Degenerasi paling ringan ialah degenerasi parenkimatosa. Pada

degenerasi parenkimatosa terjadi pembengkakan dan kekeruhan sitoplasma.

Degenerasi ini terjadi akibat gangguan oksidasi di mitokondria dan

retikulum endoplasma maka bersifat reversibel. Sel yang terkena jejas tidak

dapat mengeliminasi air sehingga tertimbun di dalam sel dan sel mengalami

pembengkakan. Degenerasi yang lebih berat ialah degenerasi hidropik,

dimana vakuola terlihat berisi air dalam sitoplasma yang tidak mengandung

lemak atau glikogen. Perubahan yang terjadi akibat gangguan metabolisme

seperti hipoksia atau keracunan bahan kimia. Degenerasi hidropik bersifat

reversibel meskipun tidak menutup kemungkinan bisa menjadi irreversibel

apabila penyebab cederanya menetap. Sel yang mengalami robekan pada

21

membran plasmanya dan terjadi perubahan inti sehingga menyebabkan sel

mati disebut nekrosis (Utomo et al, 2012). Perubahan sel hati dapat dilihat


Gambar 6. Gambaran Histologi Hati Mencit dengan Perbesaran 100x (A)

dan 400x (B). Ket: (a) Vena Sentralis; (b) sinusoid; (c) sel hepatosit

normal; (d) degenerasi bengkak keruh; (e) degenerasi hidrofik; (f) nekrosis

(Radela, 2017)

22

G. Pankreas

Pankreas ialah organ yang terletak di cekung duodenum dan meluas ke

belakang peritoneum dari dinding posterior perut, menuju kearah kiri

mencapai hilus limfa. Berukuran panjang dan besar. Pankreas merupakan

kelenjar eksokrin dan endokrin. Pulau Langerhans merupakan bagian

endokrin pankreas. Pulau Langerhans banyak tersebar di seluruh pankreas,

terlihat seperti massa bundar, sel-selnya pucat dengan banyak mengandung

pembuluh darah, dan tidak teratur (Bloom, 2002).

Pulau Langerhans terbagi atas beberapa sel yang memproduksi beberapa

hormon yang berbeda. Selnya terdiri dari sel alfa (α), sel beta (ß), sel delta

(d), dan sel polipeptida pankreas (PP) yang memproduksi glukagon, insulin,

somatostatin dan polipeptida pankreatik secara berurut. Sel-sel tersebut saling

berpengaruh satu sama lain melalui efek parakrin dalam pulau Langerhans.

Hal tersebut memperlihatkan adanya interaksi antar sel untu mempertahankan

fungsi normal pada tubuh manusia (Banjarnahor dan Wangko, 2012).

Proses sintesis dan sekresi insulin ini terjadi tepatnya pada sel-sel β pulau-

pulau Langerhans pankreas. Kedua proses ini melibatkan berbagai komponen

yang mendukung perlangsungan proses-proses tersebut dengan hasil akhirnya

insulin. Pada keadaan tertentu komponen-komponen yang berada dalam sel

ini dapat mengalami disfungsi, yang akan mengganggu sintesis dan sekresi

sehingga menimbulkan penyakit (Banjarnahor dan Wangko, 2012).

Gambaran histologi Pulau Langerhans disajikan pada Gambar 7.

23

Gambar 7. Histologi Pulau Langerhans yang Dinduksi Aloksan.

K= kontrol normal (tanpa perlakuan) K- = kontrol negatif (dengan aloksan)

(Jeli dan Makiyah, 2011)

H. Sistem Reproduksi Mencit Jantan

Sistem reproduksi mencit jantan terdiri dari testis, saluran dari testis,

kelenjar-kelenjar yang berhubungan dengan sistem reproduksi dan penis.

Testis adalah organ reproduksi kelamin primer pada jantan (Napitupulu et al,

2014). Testis merupakan suatu kelenjar endokrin karena menghasilkan

testosteron yang diproduksi oleh sel Leydig. Hormon testosteron

berpengaruh pada sifat-sifat jantan dan berperan dalam spermatogenesis.

Testis mencit terdiri dari tubulus seminiferus dan jaringan stroma. Lapisan

dalam epitel tubulus seminiferus terdapat sel germinatif dan sel sertoli,

sedangkan pada jaringan stroma terdapat pembuluh darah, limfe, sel saraf,

sel makrofag dan sel Leydig. Gambaran sistem reproduksi mencit dapat

dilihat pada Gambar 8 sebagai berikut:

24

Gambar 8. Sistem Reproduksi Mencit (Mus musculus L.) (Cook, 1965)

Sekresi endokrin testis paling utama ialah memproduksi hormon testosteron

yang dihasilkan sel interstial. Produksi testosteron oleh testis tergantung oleh

rangsangan LH dari lobus anterior hipofisis. Hormon testosteron

berpengaruh terhadap proses spermatogenesis dan berperan dalam mengatur

sifat-sifat seks sekunder (Bloom, 2002).

1. Sel Spermatogenik

Spermatogenesis memerlukan waktu sekitar 64 hari dimulai dari sel yang

letaknya tepat diatas lamina basal yaitu spermatogonia. Spermatogonia

sendiri dibedakan menjadi 3 tipe yaitu : spermatogonia gelap tipe A,

spermatogonia pucat tipe A, dan spermatogonia tipe B. Sel-sel

spermatogonia tipe B akan berdiferensiasi menjadi spermatosit primer.

Spermatosit primer ialah sel benih yang ukurannya besar terdapat di

tubulus seminiferus. Pembelahan miosis spermatosit primer akan

menghasilkan spermatosit sekunder. Kedua spermatosit sekunder yang

tetap berhubungan akan membelah siri secara mitosis menghasilkan

25

spermatid (empat sel). Spermatid terletak di dekat lumen. Spermatid akan

mengalami perubahan melalui diferensiasi yang pesat (spermiogenesis)

menjadi spermatozoa (Bloom, 2002).

2. Spermatogenesis

Spermatogenesis adalah proses pembentukan dan perkembangan sperma.

Sel-sel germinal yang belum berdiferensiasi akan multifikasi dan maturasi

membentuk spermatozoa fungsional melalui tiga fase yaitu: fase

spermatogonia, fase spermatosit, dan fase spermatid (Campbell et al,

2008). Proses spermatogenesis bermula dari sel germinativum sampai

pembentukan sperma di tubuli seminiferi testis. Sel germinativum

mengandung sel sertoli dan sel-sel germinal yaitu spermatogonia,

spermatosit, dan spermatid. Sel sertoli berfungsi sebagai pelindung sel-sel

germinal kecuali spermatogonia, selama proses meiosis terhadap

lingkungan luar (Nugroho dan Soeradi, 2002).

Spermatogenesis terjadi melalui tiga tahapan yaitu proliferasi, meiosis dan

diferensiasi. Pada tahap proliferasi terjadi di basal tubulus seminiferus.

Spermatogonia menjalani beberapa pembelahan mitosis dengan

pembelahan terakhir yang menghasilkan spermatosit primer. Tahap

meiosis terjadi di kompartemen adluminal dari tubulus seminiferus. Pada

prosesnya terjadi pengurangan jumlah kromosom pada gamet menjadi

setengah (dari diploid ke haploid). Spermatosit primer mengalami meiosis

I dan menjadi spermatosit sekunder dan kemudian menjalani meiosis II

menghasilkan putaran spermatid. Tahap diferensiasi terjadi di

26

kompartemen adluminal dari tubulus seminiferus. Spermatid matang

mengalami elonginasi. DNA menjadi sangat kental, akrosom terbentuk,

flagela (ekor) dibentuk, dan sel menjadi berpotensi motil. Spermatid

memanjang bergerak lebih dekat ke lumen tubulus seminiferus.

Untuk proses spermatogenesis dapat dilihat pada Gambar 9 sebagai

berikut :

Gambar 9. Proses Spermatogenesis (Senger, 2003)

I. Aloksan

Aloksan memiliki nama kimia 2,4,5,6-Tetraoxypyrimidine; 2,4,5,6

pyrimidinetetrone (Ashok et al, 2007). Aloksan adalah suatu senyawa yang

banyak digunakan untuk menginduksi diabetes eksperimental pada hewan

coba (Szkudelski, 2001). Aloksan dapat menghasilkan radikal hidroksil yang

27

sangat reaktif dan dapat menyebabkan diabetes pada hewan coba (Studiawan

dan Muljad Hadi, 2005).

Mekanisme toksisitas aloksan diawali dengan masuknya aloksan ke dalam

sel-sel beta pankreas dan kecepatan pengambilan akan menentukan sifat

diabetogenik aloksan (Prameswari dan Widjanarko, 2014). Aloksan yang

masuk dapat merusak sel beta pankreas sehingga tubuh kurang mampu

menghasilkan insulin. Diduga penurunan aktivitas enzim yang terlibat dalam

sintesis glikogen pada keadaan diabetes berhubungan dengan resistensi

insulin pada berbagai jaringan (Suarsana et al, 2010). Struktur aloksan dapat

dilihat pada Gambar 10.

Gambar 10. Struktur Kimia Alloxan (Lenzen, 2008)

28

III. METODE PENELITIAN

A. Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini dilakukan pada bulan November sampai Desember 2018.

Pembuatan ekstrak metanol daun dan buah jeruju (A. ilicifolius L.) serta

larutan taurin dan pembedahan dilakukan di Laboratorium Biologi Molekuler

FMIPA Universitas Lampung. Pemeliharaan mencit, menginduksi aloksan,

pemberian ekstrak metanol daun dan buah jeruju (A. ilicifolius L.) serta

larutan taurin dilakukan di Laboratorium MIPA Terpadu Fakultas

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Lampung. Proses

mikroteknik dan pengamatan histopatologi dilakukan di Laboratorium

Biologi Molekuler FMIPA Universitas Lampung, dan Balai Penyidikan dan

Pengujian Veteriner (BPPV) Lampung.

B. Alat dan Bahan

1. Alat-alat Penelitian

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah : kandang mencit

yang ditutup dengan penutup yang terbuat dari kawat dan tempat minum

mencit sebanyak 30 buah, 2 buah gavage/sonde mencit untuk

memberikan ekstrak metanol daun dan buah jeruju (A.ilicifolius L.) serta

larutan taurin ke mencit secara oral, alat uji glukosa dan kolesterol darah

29

Nesco® multicheck berikut strip uji glukosa darah sebanyak 120 buah dan

90 buah strip uji kolesterol darah, 1 buah thermometer dan hygrometer

untuk mengetahui suhu dan kelembaban ruang kandang, spidol marker

untuk menandakan ulangan, kertas label, timbangan digital untuk

mengukur berat badan mencit dan berat organ mencit, serta 1 buah jarum

untuk mengambil darah mencit. Adapun proses pembuatan ekstrak

metanol daun dan buah jeruju (A. ilicifolius L.) dibutuhkan: beaker glass

500 ml, gelas ukur 500 ml, erlemneyer, staining jar, penggiling/blender,

sarung tangan, oven, batang pengaduk, lap, pisau, tissue, peralatan

refluks, rotary evaporator, peralatan partisi, peralatan penyaringan, dan

timbangan.

Untuk menghitung jumlah spermatozoa menggunakan Hemocytometer,

gelas arloji, spatula, pipet volume, mikroskop, beaker glass, erlemneyer,

botol gelap. Untuk membuat histopatologi diperlukan: peralatan bedah

dan perlengkapannya, mikrotom dan perlengkapannya, sarung tangan,

mikroskop dan kamera, objek dan cover glass, tissue cassette, pisau

scalpel, oven, mangkuk stainles steel, pembakar bunsen, dan tabung film

60 buah.

2. Bahan-bahan Penelitan

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian antara lain: sebagai

sampel penelitian menggunakan 30 ekor mencit jantan (Mus musculus L.)

yang berasal dari Balai Penyidikan dan Pengujian Veteriner (BPPV)

Lampung yang berumur 2-3 bulan dengan berat rata-rata 30-40 gram.

30

Bahan lain yang digunakan adalah ekstrak metanol daun dan buah jeruju

(A. ilicifolius L.) serta taurin. Induksan diabetes menggunakan bubuk

alloxan monohidrat (Sigma-Aldrich) yang diperoleh dari P.T. Sawittoku

Chemical Laboratories Makasar.

Selama perawatan mencit bahan yang digunakan ialah : pakan mencit

berupa pellet yang berasal dari pellet unggas dan diberikan secar ad

libitum, air minum, dan sekam padi sebagai alas. Untuk melarutkan

aloksan menggunakan Aqua pro injection. Untuk proses ekstraksi daun

jeruju dan buah jeruju menggunakan metanol. Untuk proses dehidrasi saat

pembuatan histopatologi jaringan bahan yang diperlukan antara lain:

etanol 70%, etanol 80%, etanol 90 %, etanol absolute, xylol, dan parafin

cair. Sedangkan untuk pewarnaan Hematoksilin Eosin (HE) bahan yang

diperlukan antara lain: xylol, ethanol absolute, etanol 90%, etanol 80%,

air keran, larutan hematoksilin, larutan scott, larutan eosin dan cairan

perekat.

C. Metode Penelitian

1. Rancangan Percobaan

Penelitian yang dilakukan termasuk penelitian eksperimental. Rancangan

yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan

kelompok perlakuan 5 kelompok terdiri dari 5 ulangan dan 1 mencit

cadangan. Jumlah individu yang dipakai sebagai ulangan sebanyak 6 ekor

mencit. Hal ini dapat dilihat pada Tabel 5:

31

Tabel 5. Rancangan Percobaan Penelitian

Kelompok Keterangan Jumlah

Kelompok 1

(Kontrol Negatif)

kelompok yang tidak diberi perlakuan

apapun, hanya diberi pakan standar hingga

penelitian berakhir

6

Kelompok 2

(Kontrol Positif)

Mencit yang diberi induksan aloksan tetapi

tanpa pemberian bahan uji

6

Kelompok 3

Diinduksi aloksan, kemudian diberi ekstrak

metanol dari daun jeruju (Acanthus

ilicifolius L.) dengan dosis 22,4

mg/ekor/hari.

selama 14 hari.

6

Kelompok 4

Kelompok yang diberi induksan aloksan

dan kemudian diberi ekstrak metanol dari

buah jeruju (Acanthus ilicifolius L.)

dengan dosis 22,4 mg/ekor/hari.

selama 14 hari.

6

Kelompok 5

Kelompok yang diberi induksan aloksan dan

kemudian dilajutkan dengan pemberian

taurin selama 14 hari dengan dosis 15,6

mg/ekor/hari

6

2. Populasi dan Sampel

Populasi yang digunakan dalam penelitian ini adalah mencit jantan yang

diperoleh dari BPPV Lampung. Mencit yang digunakan dalam penelitian

ini berjumlah 30 ekor dengan usia 2-3 bulan dan berat badan ± 30-40

gram. Digunakan mencit jantan karena sistem imun pada mencit jantan

cenderung lebih tidak dipengaruhi oleh hormon reproduksi. Hal ini

disebabkan karena kadar hormon estrogen pada mencit jantan relatif

32

rendah dibanding mencit betina. Pada pengukuran berat badan juga

terlihat bahwa kelompok mencit betina lebih sulit mengalami

pertambahan berat badan karena mencit betina sangat rentan terjadi stress

dan bersifat menetap (Astuti dan Elfi, 2014).

D. Pelaksanaan Penelitian

1. Persiapan Hewan Uji

Hewan uji yang dipakai ialah mencit jantan (Mus musculus L.) dengan

berat ± 30-40 gram dan berumur 2-3 bulan. Mencit diperoleh dari Balai

Penyidikan dan Pengujian Veteriner (BPPV) Regional III Bandar

Lampung. Mencit dipelihara pada lingkungan homogen secara individu

dan di tempatkan kedalam kandang plastik berukuran 20x30 cm serta

penutup berbahan kawat dan wadah air minum.

Aklimatisasi mencit dilakukan selama 7 hari sebelum perlakuan

diberikan, hal ini bertujuan agar mencit dapat menyesuaikan dengan

kondisi kandang. Keadaan hewan selama aklimatisasi dan perlakuan

dikontrol pada suhu lingkungan yang tetap. Makanan yang diberikan

berupa pakan standar (pelet) dan minuman mencit diberikan secara

ad libitum. Setiap lima hari berat badan mencit ditimbang dan diamati

perilakunya. Mencit yang digunakan adalah mencit yang sehat dan

selama aklimatisasi. Selanjutnya mencit dikelompokan ke dalam 6

kelompok dan diberi perlakuan sesuai dengan rancangan percobaan yang

akan diujikan.

33

2. Persiapan Bahan Uji

2.1 Persiapan Ekstrak Daun dan Buah Jeruju (A. ilicifolius L.)

Bahan uji yang digunakan adalah esktrak daun jeruju, ekstrak buah jeruju

yang didapatkan dari Kecamatan Labuhan Maringgai, Lampung Timur.

Daun jeruju dan buah jeruju dipilah yang terbaik kemudian dibersihkan

dengan menggunakan air yang mengalir sampai bersih. Selanjutnya daun

jeruju dan buah jeruju dikeringkan memakai oven dengan suhu 30-35 oC.

Dengan menggunakan penggiling dan blender maka haluskanlah daun

jeruju dan buah jeruju. Setelah itu lakukan maserasi selama 24 jam

dengan menggunakan pelarut metanol (perbandingan 1:10) hingga

diperoleh maserat daun dan buah jeruju. Filtrat dipekatkan memakai

rotary evaporator pada suhu 50oC hingga diperoleh ekstrak kental, lalu

dimasukkan ke oven untuk mendapatkan ekstrak dalam bentuk pasta.

Kemudian ekstrak dilarutkan dengan menggunkan CMC 1 %.

Ekstrak daun jeruju diberikan kepada mencit kelompok 3 dan ekstrak

buah jeruju diberikan kepada mencit kelompok 4 selama 14 hari setelah

diinduksi aloksan. Menurut (Venkataiah et al, 2013) pemberian dosis

ekstrak daun jeruju pada tikus wistar dengan berat 200 g sebanyak 400

mg/kb dapat memberikan hasil lebih baik dalam regenerasi sel ß.

Berdasarkan tabel konversi dosis Laurence & Bacharach (1964), nilai

konversi dari tikus ke mencit yaitu 0,14 (mencit dengan berat badan 20

g), maka dosis ekstrak daun jeruju dan ekstrak buah jeruju yang diberikan

pada mencit dengan berat 30-40 g adalah 80 mg × 0,14 × 2 = 22,4

mg/ekor/hari.

34

2.2 Pengujian Fitokimia Ekstrak Daun dan Buah Jeruju (A. ilicifolius L.)

Untuk mengetahui kandungan senyawa yang terdapat didalam ekstrak

daun dan buah jeruju (A. ilicifolius L.) maka dilakukan uji fitokimia.

Dalam penelitian ini menggunakan pelarut metanol. Metanol merupakan

pelarut yang bersifat universal sehingga dapat melarutkan analit yang

bersifat polar dan nonpolar (Astarina et al, 2013). Langkah –langkah

pengujian fitokimia ekstrak daun dan buah jeruju (A.ilicifolius L.) dapat

dilihat pada Tabel 6 berikut :

Tabel 6. Tabel Prosedur Pengujian Fitokimia (Tasmin et al, 2014)

Jenis uji Perlakuan Indikator

Saponin 0,5 mL sampel + 5 mL

akuades, kemudian dikocok

selama 30 detik

Busa

Steroid 0,5 mL sampel + 0,5 asam

asetat glacial + 0,5 mL H2SO4

Warna sampel

berubah menjadi

biru atau ungu

Terpenoid 0,5 mL sampel + 0,5 asam

asetat glacial + 0,5 mL H2SO4

Warna sampel

berubah menjadi

merah atau kuning

Tanin 1 mL sampel + 3 tetes larutan

FeCl3

Warna larutan

menjadi hitam

kebiruan

Alkaloid 0,5 mL sampel + 5 tetes

kloroform + 5 tetes pereaksi

Mayer (1 g KI dilarutkan

dalam 20 mL akuades dan

ditambahkan 0,271 g HgCl2 hingga larut)

Warna larutan

putih kecokelatan

Flavonoid 0,5 mL sampel + 0,5 g serbuk

Mg + 5 mL HCl pekat

(ditambahkan tetes demi tetes

Warna larutan

merah atau kuning,

terbentuk busa

35

2.3 Persiapan Taurin

Pemberian taurin secara oral pada mencit. Taurin diberikan kepada

mencit kelompok 5 (setelah diinduksi aloksan). Dosis taurin yang

diberikan yaitu 15,6 mg/ekor/hari selama 14 hari. Berdasarkan penelitian

(Widiastuti, 2017), pemberian dosis taurin 15,6 mg/ekor/hari selama 14

hari dapat meningkatkan jumlah spermatozoa mencit yang mengalami

diabetes.

3. Induksi Aloksan

Untuk menciptakan keadaan hiperglikemik pada mencit maka perlu

dilakukan penginduksiaan aloksan. Aloksan dapat merusak reseptor

insulin dengan diikuti kerusakan dari sel ß pankreas. Akibat reseptor

insulin dan sel ß pankreas mengalami keruskan menyebabkan insulin

tidak dapat dihasilkan secara normal, sehingga glukosa darah tidak bisa

digunakan menjadi energi, akibatnya kadar glukosa dalam darah menjadi

tinggi (Szkudelski, 2001).

Percobaan induksi aloksan agar diabetes pada dosis 160 mg/kg/bb ialah

pada tikus setelah dipuasakan merupakan dosis yang dapat membuat

hewan uji menjadi hiperglikemia. Hewan uji menunjukkan keadaan

diabetes selama berbulan-bulan, dan tidak kembali menjadi keadaan

normal tanpa bantuan medis (Ashok et al, 2007).

Pembuatan mencit menjadi kondisi DM dimulai dengan mempuasakan

mencit jantan selama ± 18 jam, setelah itu mencit diukur kadar glukosa

36

darah dan berat badannya. Dua jam berikutnya, setelah luka pada ekor

mengering, mencit disuntik dengan larutan aloksan. Aloksan yang

dipakai sebelumnya dilarutkan dengan memakai 0,3 ml aqua pro

injection.

Setelah 24 jam induksi, mencit diberi 3 ml air gula 5% secara oral, untuk

mencegah terjadinya hipoglikemia yang fatal. Untuk melihat pengaruh

pemberian aloksan pada mencit, dilakukan optimasi larutan selama 5 hari.

Berdasarkan International Diabetes Federation (2017), kriteria diagnosa

terjadinya diabetes melitus (DM) apabila diperoleh kadar glukosa darah

puasa ≥ 126 mg/dl.

4. Preparat Histopatologi

Setelah hari ke 14, semua mencit yang diteliti dibedah. Selanjutnya organ

hati diambil dan dilakukan penimbangan. Setelah data bobot hati

diperoleh selanjutnya organ hati difiksasi selama 24 jam kemudian dibuat

sayatan histologi hati dengan menggunakan metode parafin. Pengamatan

pada organ hati dilakukan dengan menghitung jumlah sel yang

mengalami kerusakan, dan sel hati yang normal di lima lapang pandang

sekitar vena sentralis. Pada masing-masing lapang pandang dihitung

jumlah sel hati (hepatosit) yang mengalami kerusakan kemudian dibagi

dengan jumlah hepatosit dalam satu lapang pandang

(Kurniawan et al, 2014).

37

Lima kelompok hewan percobaan yang telah diberikan perlakuan selama

dua minggu diterminasi dengan cara dislokasi leher kemudian diambil

organ pankreasnya untuk selanjutnya dilakukan pembuatan preparat

histopatologi dengan metode pewarnaan Hematoxylin-Eosin. Preparat

histopatologi diamati di bawah mikroskop dengan perbesaran 400x dan

dicatat perubahan mikroskopik yang ditemukan pada 5 lapang pandang

(Dharma et al, 2015).

Setelah hewan percobaan di dislokasi leher, kemudia ambil organ

testisnya. Setelah berat testis ditimbang, letakan testis ke dalam botol film

yang berisi larutan buffer formalin, kemudian pembuatan preparat

histologi dilakukan dengan menggunakan metode parafin dan pewarnaan

Hematoxylin Eosin (HE). Setelah itu proses pembuatan preparat

mikroskopis testis, diamati dan dinilai gambaran histopatologi

spermatogenesisnya menggunakan kriteria Johnsen score dengan kriteria

skor 1-10 (Adelati et al, 2016).

E. Parameter Penelitian

1. Rerata Berat Badan Mencit

Pengukuran berat badan dilakukan dalam empat waktu, yaitu hari ke-0

(berat badan mencit sebelum diinduksi aloksan), hari ke 3 (berat badan

mencit setelah diinduksi aloksan), hari ke-10 (berat badan mencit setelah

7 hari pemberian ekstrak daun jeruju, buah jeruju, dan taurin) dan hari

ke-17 (berat badan mencit setelah 14 hari pemberian ekstrak daun jeruju,

buah jeruju dan taurin). Alat yang digunakan dalam pengukuran berat

38

badan yaitu timbangan digital. Semua berat badan yang diperoleh ialah

berat badan setelah sebelumnya dipuasakan selama ± 6-8 jam.

2. Kadar Glukosa dan Kolestrol Total Darah

Pengukuran kadar glukosa darah dilakukan sebanyak 4 kali. Pengukuran

kadar glukosa dilakukan setelah mencit dipuasakan selama ± 6-8 jam,

kemudian kadar glukosa diukur menggunakan glukometer. Pengukuran

kadar glukosa dilakukan sebanyak empat kali pada tiap-tiap perlakuan

setelah mencit dipuasakan selama ± 6-8 jam. Pengukuran pertama yaitu

hari ke-0 (kadar glukosa mencit sebelum diinduksi aloksan), pengukuran

kedua dilakukan setelah injeksi aloksan untuk mengetahui keberhasilan

terjadinya induksi diabetes mellitus pada tiap sampel pada hari ke 3,

pengukuran ke tiga pada hari ke-10 (kadar glukosa mencit setelah 7 hari

pemberian ekstrak daun jeruju, buah jeruju, dan taurin) dan pengukuran

glukosa ke empat pada hari ke-17 (kadar glukosa mencit setelah 14 hari

pemberian ekstrak daun jeruju, buah jeruju dan taurin). Adapun

pengukuran kolesterol dilakukan sebanyak 3 kali yaitu pada hari ke 3,

ke 7 dan ke 14 setelah pemberian ekstrak. Pada hari ke 14, dilakukan

pemeriksaan kadar glukosa dan kolesterol darah total. Sampel darah

mencit diambil melalui pembuluh vena ekor (intravena). Sampel darah

kemudian diuji kadar glukosa dan kolesterolnya dengan memakai alat

Nesco® multicheck.

39

3. Rerata Berat Testis

Berat testis diukur pada hari ke-14, yaitu setelah mencit dibedah. Organ

testis diambil kemudian dicuci dengan larutan ringer, selanjutnya organ

testis beratnya ditimbang memakai timbangan analitik.

4. Rerata Jumlah Spermatozoa

Pengambilan spermatozoa dilakukan setelah hewan uji diberi ekstrak

daun jeruju, ekstrak buah jeruju dan taurin selama 14 hari. Mencit

dipreparasi dengan cara dislokasi leher. Kemudian mencit ditelentangkan

di papan bedah dan dibedah pada bagian abdomen, kemudian diambil

bagian kauda epididimis kanan dan kiri. Kauda epididimis dibersihkan

dari lemak sampai bersih, kemudian diletakkan pada gelas arloji yang

berisi 100 µL larutan ringer (NaCl 0,9%). Selanjutnya kauda epididimis

dipotong untuk mengeluarkan spermatozoa dan dihomogenkan sampai

terbentuk suspensi spermatozoa. Perhitungan jumlah spermatozoa

menggunakan ruang hitung Improved Neubauer (Hemocytometer).

Suspensi spermatozoa yang telah diencerkan dengan larutan ringer

diambil 10 µL kemudian dimasukkan ke dalam ruang hitung

hemocytometer. Hemocytometer yang telah terisi suspensi spermatozoa

kemudian diamati dibawah mikroskop dengan perbesaran lensa objektif

40× dan lensa okuler 100x. Data berupa jumlah spermatozoa dihitung

dengan rumus “Total spermatozoa (juta/ml ejakulat) = jumlah

spermatozoa terhitung x 200.000 “ (Christijanti, 2009).

40

5. Motilitas

Untuk menghitung motilitas pada mencit terlebih dahulu membuat

suspensi yang homogen dari cairan epididimis. Kauda epididimis

dimasukan kedalam gelas arloji yang telah terisi 1 mL larutan garam

fisiologis (NaCl 0,9 %), kauda epididimis dipotong dengan menggunakan

gunting yang tajam dan runcing, terus ditekan-tekan supaya cairan yang

berada di dalam kauda epididimis keluar dan tersuspensi dengan pelarut

(Desak, 2013).

Pemeriksaan motilitas spermatozoa dilakukan dengan memakai

mikroskop cahaya perbesaran 400x. Motilitas spermatozoa

dikelompokkan ke dalam kategori sel spermatozoa progresif (A),

progresif lambat (B). nonprogresif (C), dan imotil (D), lalu secara

bersamaan presentase motilitas dihitung menggunakan rumus sebagai

berikut (Dina et al, 2016) :

6. Penilaian dan Gambaran Histologi Hati serta Pankreas pada Mencit

6.1 Hati

Untuk melihat gambaran histopatologi hati dilakukan menggunakan

mikroskop cahaya dengan perbesaran 400x. Di setiap lapangan pandang,

dihitung 20 sel secara acak dan dinilai skor tiap sel dengan model skoring

Histopathology Manja Roenigk. Jenis kerusakan hati yang diamati

meliputi nekrosis, degenerasi parenkimatosa dan degenerasi hidrofik

dapat dilihat pada Tabel 7. Berdasarkan kriteria tersebut maka skor

41

minimal yang mungkin didapat adalah 100 jika semua sel yang

ditemukan dalam keadaan normal. Skor maksimal 400 jika semua sel

dalam keadaan nekrosis.

Tabel 7. Kriteria Penilaian Derajat Kerusakan Histopatologi Hati

Tingkat Kerusakan Skor

Normal 1

Degenerasi Parenkimatosa 2

Degenerasi Hidropik 3

Nekrosis 4

(Sumber: Maulida et al, 2013)

6.2 Pankreas

Preparat histopatologi diamati dan diskoring berdasarkan kategori yang

dapat diihat pada Tabel 8 sebagai berikut :

Tabel 8. Kriteria Penilaian Derajat Kerusakan Histopatologi Pankreas

Tingkat Kerusakan Skor

Tidak ada nekrosis sel pankreas 0

¼ total nerkosis sel pankreas 1

½ total nekrosis sel pankreas 2

¾ total nekrosis sel pankreas 3

Nekrosis seluruh sel pankreas 4

(Sumber: Dharma et al, 2015)

6.3 Testis

Pemeriksaan dan penilaian dilakukan dengan cara preparat testis diamati

menggunakan mikroskop pada perbesaran 400x. Pemberian skor

dilakukan pada 5 lapangan pandang tiap lapang pandang terdiri dari 1

tubulus seminiferus. Skor dari 5 lapangan pandang dirata-rata, sehingga

didapatkan skor untuk masing-masing mencit, untuk penilaian kriteria

42

histopatologi testis dapat dilihat pada Tabel 9 sebagai berikut :

(Adelati et al, 2016).

Tabel 9. Kriteria Johnsen Score

Skor Penilaian

10 Epitel tubulus normal, spermatogenesis

lengkap, lumen tubulus terbuka, sel

spermatozoa ≥ 10

9 Epitel tubulus rusak, lumen tubulus tertutup,

sel spermatozoa ≥ 10

8 Sel spermatozoa < 10

7 Sel spermatozoa 0, Sel spermatid ≥ 10

6 Sel spermatozoa 0, Sel spermatid < 10

5 Sel spermatozoa dan Sel spermatid 0, sel

spermatosit ≥ 5

4 Sel spermatozoa dan Sel spermatid 0, sel

spermatosit < 5

3 Sel spermatogenik hanya terdiri atas sel

spermatogonium

2 Sel spermatogenik 0, hanya ada sel sertoli

1 Tidak ada sel sama sekali dalam tubulus

(Sumber: Johnsen, 1970)

F. Analisis Data

Data yang diperoleh selama penelitian akan dianalisis memakai program Minitab

16 dengan memakai metode statistik One Way Anova (Analysis of Variance) pada

taraf nyata 5% untuk melihat perbedaan yang nyata antar kelompok perlakuan.

Jika terdapat perbedaan maka dilanjutkan dengan Uji Fisher pada taraf nyata 5%.

83

V. SIMPULAN DAN SARAN

A. Simpulan

Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, dapat diambil beberapa

kesimpulan diantaranya :

1. Pemberian ektrsak metanol daun dan buah jeruju (Acanthus ilicifolius L.)

serta taurin dapat menurunkan kadar glukosa dan kolesterol total darah

pada mencit.

2. Pemberian ektrsak metanol buah jeruju (Acanthus ilicifolius L.) serta

taurin mampu meningkatkan kualitas dan kuantitas spermatozoa mencit

(Mus musculus L.), sedangkan pemberian ekstrak metanol daun jeruju

(Acanthus ilicifolius L.) menyebabkan penurunan kualitas dan kuantitas

spermatozoa mencit (Mus musculus L.) yang diinduksi aloksan.

3. Pemberian ektrsak metanol daun dan buah jeruju (Acanthus ilicifolius L.)

serta taurin mampu memperbaiki kerusakan histopatogi pankreas, hati

dan testis pada mencit jantan (Mus musculus L.) yang diinduksi aloksan

84

B. Saran

Disarankan agar dapat dilakukan lebih lanjut, dengan :

1. Menambahkan variasi dosis dan penambahan waktu yang lebih lama

dalam pemberian ekstrak metanol daun dan buah jeruju (Acanthus

ilicifolius L.) serta taurin. Tujuan mencari dosis yang tepat sebagai

pengobatan alternatif dalam menurunkan kadar glukosa dan kolesterol

total darah.

2. Mengkombinasikan ekstrak metanol daun dan buah jeruju (Acanthus

ilicifolius L.) serta taurin untuk menurunkan kadar glukosa dan kolesterol

total darah serta kualitas dan kuantitas spermatozoa.

85

DAFTAR PUSTAKA

Abdelmoaty, M.A., Ibrahim, M.A., Ahmed, N.S., and Abdelaziz, M. A. 2010.

Confirmatory Studies on the Antioxidant and Antidiabetic Effect of Quercetin in

Rats. Indian Journal of Clinical Biochemistry, 25(2) pp.188-192.

ADA (American Diabetes Association). 2010. Diagnosis and Classification of Diabetes

Mellitus. Diabetes Care Journal. Volume 33 (1): 562-569.

Adelati, S., A. Z. Juniarto., I. P. Miranti. 2016. Histopatologi Spermatogenesis Testis

Tikus Wistar Diabetes Melitus. Jurnal Kedokteran Diponegoro Volume 5 (4):

1760-1769.

Amoreaux, W. J., C. Cuttitta., A. Santora., J. F. Blaize., J. Tachjadi., A. E. Idrissi. 2010.

Taurine regulates insulin release from pancreatic beta cell lines. Journal of

Biomedical Science.

APG (Angiosperm Phylogeny Group). 2003. An update of the Angiosperm Phylogeny

Group classification for the orders and families of flowering plants: APG II.

Botanical journal of the Linnean Society, 141 (4) : 399-436.

Akhlaghi M, Bandy B. 2009. Review article: mechanisms of flavonoid protection against

myocardial ischemia– reperfusion injury. Journal Molecullar and Cellular

Cardiology 46: 309–317.

Arjadi F, Mustofa. 2017. Ektrak Daging Buah Mahkota Dewa Meregenerasi Sel Pulau

Langerhans Pada Tikus Putih Diabetes. Jurnal Ilmiah Biologi (Biogenesis)

Volume 5(1) : 27-33.

Arrington, J.B. E.B. Prophet and B. Mills. 1992. Laboratory Methods in Histotechnology.

Armed Forces Institute of Pathology. Washington C.

Artha, C., A. Mustika., S. W. Sulistyawati. 2017. Pengaruh Ekstrak Daun Singawalang

terhadap Kadar LDL Tikus Putih Jantan Hiperkolesterolemia. Artikel Penelitian.

Vol 5 (2): 105-109.

Ashok, P., B. Meenakshi. 2004. Contraceptive Effect Of Curcuma longa (L.) in Male

Albino Rat. Asian J Androl Volume 6 (1): 71-74.

Astutik, W., dan E. Kuswati. 2014. Efektivitas Pemberian Jus Kulit Manggis

terhadap Kadar Hormon Kortisol pada Mencit (Mus musculus) yang Mengalami

Stress. Jurnal Skala Husada Volume 11 (1) : 91-95

Banjarnahor, E., dan S. Wangko. 2012. Sel Beta Pankreas Sintesis Dan Sekresi Insulin.

Jurnal Biomedik Volume 4(3) : 156-162

86

Birdsall, T. C. 1998. Therapeutic Applications of Taurine. Altern Med Rev 3 : 128-136.

Bloom William, Don W. Fawcett. 2002. Buku ajar histologi. Edisi 12. Terjemahan Jan

Tambayong. Jakarta: EGC

Campbell, N. A., J. B. Reece, L. G. Mitchell. 2008. Biologi Edisi Kedelapan Jilid

3. Jakarta: Erlangga

Cook, M. J., 1965. The Anatomy of the Laboratory Mouse. England: Academic Press.

Diunduh di http://www.informatics.jax.org/cookbook/ pada tanggal 4 Januari

2019

Corwin, E.J. 2001. Buku Saku Patofisiologi. (Diterjemahkan Brahmu). Penerbit Buku

Kedokteran, Jakarta.

Christijanti, W. 2009. Penurunan Jumlah Dan Motilitas Spermatozoa Setelah Pemberian

Ekstrak Biji Pepaya (Kajian Potensi Biji Papaya Sebagai Bahan Kontrasepsi

Alternatif). Biosaintifika. Volume 1(1): 19 – 26.

Dehghan MH., Martin T., Dehghanan R. 2005. Antifertility effect of Iranian neem seed

alcoholic extract on epididymal sperm of mice. Iranian Journal of Reproductive

Medicine, 3(2):83-89

Dewoto, H. R. 2007. Pengembangan Obat Tradisional Indonesia Menjadi Fitofarmaka.

Majalah Kedokteran Indonesia 57 (7).

Dharma I. G. B. S., I. K. Berata, dan Samsuri. 2015. Studi Histopatologi Pankreas Tikus

Putih (Rattus

Documents

PEMBERIAN EKSTRAK METANOL DAUN DAN BUAH JERUJU …digilib.unila.ac.id/56810/3/TESIS TANPA BAB PEMBAHASAN.pdf · 2019. 5. 3. · pemberian ekstrak metanol daun dan buah jeruju (acanthus