MIKROBIOLOGI ANALISISMIKROBIOLOGI ANALISIS(FK(FK--3207)3207)

Marlia Singgih WibowoMarlia Singgih WibowoSchool of Pharmacy ITBSchool of Pharmacy ITB

PerkuliahanPerkuliahan

KuliahKuliah duadua araharahActive Learning System Active Learning System TugasTugas, , KuisKuis, , KuesionerKuesionerUTS UTS dandan UASUASKehadiranKehadiran : min.80%: min.80%

PenilaianPenilaian

TugasTugas, , KuisKuis, , PresentasiPresentasi (20%)(20%)UTS (30%)UTS (30%)UAS (40%)UAS (40%)PartisipasiPartisipasi MahasiswaMahasiswa (10%)(10%)

MateriMateri PerkuliahanPerkuliahanPendahuluanPendahuluanStandarStandar kualitaskualitas mikrobiologimikrobiologi produkproduk farmasifarmasiMetodeMetode samplingsamplingUjiUji mikrobiologimikrobiologi berdasarkanberdasarkan FarmakopeFarmakopeIndonesia Indonesia edisiedisi 4 :4 :

UjiUji Batas Batas MikrobaMikrobaUjiUji SterilitasSterilitasUjiUji EfektivitasEfektivitas PengawetPengawetPenetapanPenetapan PotensiPotensi AntibiotikAntibiotikPenetapanPenetapan KadarKadar VitaminVitamin

MateriMateri PerkuliahanPerkuliahan ((lanjutanlanjutan))

UjiUji toksisitastoksisitasUjiUji mutagenmutagenUjiUji endotoksinendotoksinMetodeMetode instrumentasiinstrumentasi untukuntuk analisisanalisis mikrobiologimikrobiologiMetodeMetode cepatcepat (Rapid method) (Rapid method) dalamdalam analisisanalisismikrobiologimikrobiologiKeamananKeamanan dandan KeselamatanKeselamatan KerjaKerja

DaftarDaftar PustakaPustakaFarmakopeFarmakope Indonesia Indonesia edisiedisi IV, 1995IV, 1995USP USP edisiedisi 30, 200730, 2007TGA Australia, 2002TGA Australia, 2002Baird RM., et al. (Eds.), Baird RM., et al. (Eds.), Handbook of Microbiological Handbook of Microbiological Quality Control : Pharmaceutical and Medical Quality Control : Pharmaceutical and Medical DevicesDevices, CRC Press, Boca Raton, 2000., CRC Press, Boca Raton, 2000.AszalosAszalos, A., , A., Modern Analysis of AntibioticsModern Analysis of Antibiotics, Marcel , Marcel DekkerDekker Inc., New York, 1986 Inc., New York, 1986 DenyerDenyer SP, Baird RM, SP, Baird RM, Guide to Microbiological Guide to Microbiological Control in PharmaceuticalsControl in Pharmaceuticals, Ellis , Ellis HorwoodHorwood, New , New York, 1990York, 1990Barnett, Barnett, Microbiology Laboratory ExerciseMicrobiology Laboratory Exercise, , WmC.BrownWmC.Brown PublPubl., Dubuque, 1992., Dubuque, 1992

Fleming, et al., editor: Diane O., Fleming, et al., editor: Diane O., Laboratory Laboratory Safety, 2Safety, 2ndnd ed. : Principles and Practicesed. : Principles and Practices, 1995, 1995Crosby C,T., Patel I., Crosby C,T., Patel I., General Principles of General Principles of

Good Sampling PracticeGood Sampling Practice, Cambridge, 1995, Cambridge, 1995The Laboratory Biosafety GuidelinesThe Laboratory Biosafety Guidelines, 3, 3rdrd ed., ed., Public Health Agency of Canada, Ministry of Public Health Agency of Canada, Ministry of Health, Canada, 2004Health, Canada, 2004

PENDAHULUANPENDAHULUAN

Streptococcus mutanspenyebab karies gigi

MikrobaMikroba sebagaisebagai senjatasenjata biologisbiologis

PenyebabPenyebab penyakitpenyakit padapada hewanhewanyang yang menginfeksimenginfeksi manusiamanusia

KontaminasiKontaminasi mikrobamikroba padapadamakananmakanan

Habitat Habitat mikroorganismemikroorganisme

EnterobacterEnterobacter sakazakiisakazakii on DFI agaron DFI agar

• Revolusi Industri

• Produksi berbagai produk

• Tingkat kontaminasi tinggi

• Syarat kualitas semakin tinggi

• Kemajuan Iptek

BidangBidang terkaitterkait

MikrobiologiMikrobiologi IndustriIndustri (Industrial Microbiology)(Industrial Microbiology)MikrobiologiMikrobiologi AnalisisAnalisis (Analytical Microbiology)(Analytical Microbiology)MikrobiologiMikrobiologi MedikMedik (Medical Microbiology)(Medical Microbiology)MikrobiologiMikrobiologi LingkunganLingkungan (Environmental (Environmental Microbiology)Microbiology)

MengapaMengapa diperlukandiperlukankualitaskualitas mikrobiologimikrobiologi dalamdalam

produkproduk farmasifarmasi??

ProdukProduk farmasifarmasi : : obatobat, , kosmetikkosmetik, , alatalat kesehatankesehatan, , PKRT, PKRT, suplemensuplemen makananmakanan, , dandan lainlain--lainlainProdukProduk harusharus bermanfaatbermanfaat dandan amanamanMikroorganismeMikroorganisme patogenpatogen → → BagaimanaBagaimanamikroorganismemikroorganisme patogenpatogen dapatdapat mengmeng--kontaminasikontaminasi produkprodukBagaimanaBagaimana mendeteksimendeteksi mikroorganismemikroorganismepatogenpatogen dandan bagaimanabagaimana menghitungmenghitung jumlahnyajumlahnyaAnalisisAnalisis kualitatifkualitatif dandan kuantitatifkuantitatif

MikrobiologiMikrobiologi AnalisisAnalisisMikrobaMikroba sebagaisebagai bahanbahan ujiuji((mikrobamikroba ujiuji) : ) : untukuntukpengujianpengujian berdasarkanberdasarkanresponsrespons mikrobamikroba terhadapterhadapsampelsampelMikrobaMikroba sebagaisebagaikontaminankontaminan ((didi dalamdalamprodukproduk farmasifarmasi, , makananmakananatauatau kosmetikakosmetika))

TahapanTahapan analisisanalisis mikrobiologimikrobiologiPenyiapanPenyiapan metodemetode, , alatalat dandan bahanbahan pereaksipereaksi

↓↓IdentifikasiIdentifikasi sampelsampel

↓↓SamplingSampling

↓↓AnalisisAnalisis kualitatifkualitatif

↓↓AnalisisAnalisis kuantitatifkuantitatif

↓↓KesimpulanKesimpulan

SAFE MICROBIOLOGICAL SAFE MICROBIOLOGICAL PRACTICESPRACTICES

Safe Microbiological Practices (SMP)Safe Microbiological Practices (SMP)

AturanAturan terkiniterkini yang yang berhubunganberhubungan dgndgn penangananpenangananmikroorganismemikroorganisme dandan penjaminanpenjaminan kualitaskualitasmikrobiologimikrobiologiRancanganRancangan fasilitasfasilitasPersonnel Personnel dandan trainingtrainingValidasiValidasi dandan monitoring monitoring prosedurprosedur

DefinisiDefinisi zatzat biologisbiologis : : mikroorganismemikroorganisme, , kulturkultur selsel atauatau human, human, endoparasitendoparasit, , termasuktermasuk apaapa sajasaja yang yang dimodifikasidimodifikasi secarasecara genetikgenetik, , yang yang dapatdapat menyebabkanmenyebabkan terjadinyaterjadinya infeksiinfeksi, , alergialergi, , toksisitastoksisitas, , atauatau menimbulkanmenimbulkan hazardhazard

BeberapaBeberapa istilahistilah pentingpenting dalamdalammikrobiologimikrobiologi analisisanalisis

HAZARDHAZARDRISKRISKRISK RANKINGRISK RANKINGRISK LEVELRISK LEVELINFECTIONINFECTIONLABORATORY CONTAINMENTLABORATORY CONTAINMENT

BeberapaBeberapa acuanacuan peraturanperaturanpenangananpenanganan mikroorganismemikroorganisme

Health and Safety at Work Act, 1974Health and Safety at Work Act, 1974COSHH, 1994COSHH, 1994GMO Regulation , 1992 GMO Regulation , 1992 DiDi Indonesia : Indonesia : PermenkesPermenkes RI, RI, peraturanperaturanBPOMBPOM

ACDPACDP

The Advisory Committee on Dangerous The Advisory Committee on Dangerous PathogensPathogensMengkajiMengkaji semuasemua aspekaspek HAZARD HAZARD dandanRISK yang RISK yang dihasilkandihasilkan oleholeh patogenpatogenHAZARD : HAZARD : diidentifikasidiidentifikasiRISK : RISK : dievaluasidievaluasi

KlasifikasiKlasifikasi “Hazard”“Hazard”Hazard 1Hazard 1 : : ZatZat biologisbiologis yang yang tidaktidak mungkinmungkin menyebabkanmenyebabkanpenyakitpenyakit padapada manusiamanusiaHazard 2Hazard 2 : : ZatZat biologisbiologis yang yang dapatdapat menyebabkanmenyebabkan penyakitpenyakitpadapada manusiamanusia namunnamun tidaktidak menyebarmenyebar kekemasyarakat/lingkunganmasyarakat/lingkungan. . BiasanyaBiasanya tersediatersedia caracarapenangananpenanganan yang yang efektifefektifHazard 3Hazard 3 : : ZatZat biologisbiologis yang yang dapatdapat menyebabkanmenyebabkan penyakitpenyakitberatberat padapada manusiamanusia dandan beresikoberesiko menyebarmenyebar kekemasyarakat/lingkunganmasyarakat/lingkungan. . TersediaTersedia caracara penangananpenanganan yang yang efektifefektifHazard 4Hazard 4 : : ZatZat biologisbiologis yang yang dapatdapat menyebabkanmenyebabkan penyakitpenyakitberatberat padapada manusiamanusia dandan dapatdapat segerasegera menyebarmenyebar kekemasyarakat/lingkunganmasyarakat/lingkungan, , tidaktidak adaada penangananpenanganan yang yang dapatdapatmengatasimengatasi penyebaranpenyebaran tersebuttersebut. . TidakTidak adaada caracarapenangananpenanganan yang yang efektifefektif

KlasifikasiKlasifikasi organismeorganisme

BerdasarkanBerdasarkan patogenitaspatogenitasDosisDosis infeksiinfeksiCara Cara transmisitransmisiTempatTempat tumbuhtumbuh (host)(host)KetersediaanKetersediaan caracara preventifpreventif yang yang efektifefektifKetersediaanKetersediaan penangananpenanganan yang yang efektifefektif

Zat/bahanZat/bahan biologisbiologis yang yang patogenpatogen

AdalahAdalah semuasemua mikroorganismemikroorganisme, , termasuktermasukbakteribakteri, virus, fungi , virus, fungi dandan parasitparasit yang yang termasuktermasukgroup 2,3 group 2,3 dandan 4.4.ContohContoh : (: (mikrobamikroba ygyg digunakandigunakan padapada EP 1997 EP 1997 utkutk ujiuji pengawetpengawet antimikrobaantimikroba))

Pseudomonas Pseudomonas aeruginosaaeruginosa (2)(2)Staphylococcus Staphylococcus aureusaureus (2)(2)Candida Candida albicansalbicans (2)(2)AspergillusAspergillus nigerniger (1)(1)Escherichia coliEscherichia coli (1)(1)ZygosaccharomycesZygosaccharomyces rouxiirouxii (1)(1)

Containment Level Containment Level untukuntukLaboratoriumLaboratorium MikrobiologiMikrobiologi

Containment Level 1 : Containment Level 1 : sesuaisesuai untukuntukpekerjaanpekerjaan dengandengan mikrobamikroba group 1 group 1 dandanharusharus memenuhimemenuhi persyaratanpersyaratan GLP (Good GLP (Good Laboratory Practice)Laboratory Practice)Containment Level 2 : Containment Level 2 : sesuaisesuai untukuntukpekerjaanpekerjaan dgndgn mikrobamikroba group 2, group 2, ditambahditambahbeberapabeberapa halhal lebihlebih ketatketat dibandingkandibandingkanCL1CL1

COSHH COSHH Control of Substances Hazardous to Health Control of Substances Hazardous to Health Regulations 1994Regulations 1994DelapanDelapan langkahlangkah dalamdalam mengkajimengkaji resikoresiko ::

MendefinisikanMendefinisikan aktivitasaktivitas pekerjaanpekerjaanIdentifikasiIdentifikasi hazardhazard

IdentifikasiIdentifikasi kontrolkontrol yang yang digunakandigunakanEvaluasiEvaluasi resikoresiko

MemeliharaMemelihara kontrolkontrolMenarikMenarik kesimpulankesimpulan

MencatatMencatat kajiankajianMenilaiMenilai kajiankajian

Route of InfectionRoute of Infection

MelaluiMelalui mulutmulut : : makanmakan, , minumminum, , merokokmerokok, , penggunaanpenggunaan kosmetikakosmetikaMelaluiMelalui kulitkulit : : melaluimelalui lukaluka dandan abrasiabrasiMelaluiMelalui matamata : direct transfer, aerosol: direct transfer, aerosolMelaluiMelalui paruparu--paruparu : : terhirupterhirup, aerosol, aerosol

Route of InfectionRoute of Infection

Risk ranking Risk ranking

Risk level = probability of occurrence x Risk level = probability of occurrence x severity of occurrenceseverity of occurrenceDerajatDerajat probabilitasprobabilitas ::5 : 5 : PastiPasti atauatau akanakan terjaditerjadi sewaktusewaktu--waktuwaktu4 : 4 : SangatSangat mungkinmungkin terjaditerjadi3 : 3 : MungkinMungkin terjaditerjadi2 : 2 : JarangJarang terjaditerjadi1 : 1 : TidakTidak mungkinmungkin terjaditerjadi

DerajatDerajat keparahankeparahan5 : Fatal5 : Fatal4 : 4 : KecelakaanKecelakaan seriusserius ((perluperlu perawatanperawatan RS)RS)3 : 3 : KecelakaanKecelakaan biasabiasa (> 3 (> 3 harihari istirahatistirahat))2 : 2 : kecelakaankecelakaan kecilkecil ((hanyahanya perluperlu P3K)P3K)1 : 1 : TidakTidak terjaditerjadi kecelakaankecelakaanKombinasiKombinasi derajatderajat probabilitasprobabilitas dandan keparahankeparahan

menyatakanmenyatakan risk level (risk level (tingkattingkat resikoresiko) ) dalamdalammenanganimenangani mikroorganismemikroorganisme

Risk LevelRisk Level

Risk level 20 Risk level 20 –– 25 : Catastrophic (25 : Catastrophic (dilarangdilarangdikerjakandikerjakan))Risk level 15 Risk level 15 –– 19 : 19 : SeriusSerius ((perluperlu kajiankajian khususkhusus))Risk level 10 Risk level 10 –– 14 : 14 : SignifikanSignifikan ((perluperlu kajiankajianumumumum))Risk level 4 Risk level 4 –– 9 : Minor (9 : Minor (perluperlu kajiankajian umumumum))Risk level 1 Risk level 1 –– 3 : Trivial (3 : Trivial (tidaktidak perluperlu kajiankajiantertulistertulis))

RancanganRancangan laboratoriumlaboratoriummikrobiologimikrobiologi

AliranAliran kerjakerja (work flow)(work flow)UkuranUkuran dandan bentukbentuk ruangruang laboratoriumlaboratoriumMejaMeja kerjakerjaLantaiLantai, , dindingdinding dandan atapatapAliranAliran udaraudara didi dalamdalam dandan didi luarluar ruangruanglaboratoriumlaboratoriumPeneranganPenerangan dandan SuhuSuhu ruangruang

BeberapaBeberapa halhal umumumum yang yang dilarangdilarangdalamdalam melakukanmelakukan pekerjaanpekerjaan didi

LaboratoriumLaboratorium mikrobiologimikrobiologi

MakanMakan, , minumminum, , mengunyahmengunyah permenpermen karetkaret, , minumminum obatobat, , merokokmerokok, , MengaplikasiMengaplikasi kosmetikkosmetik ((memakaimemakai bedakbedak, , lipstiklipstik, , dlldll))MemipetMemipet dengandengan mulutmulutMembiarkanMembiarkan anggotaanggota tubuhtubuh dengandengan lukaluka terbukaterbukaMembuangMembuang sampahsampah tidaktidak padapada tempatnyatempatnyaMembiarkanMembiarkan biakanbiakan mikrobamikroba terbukaterbuka

Hal lain Hal lain dalamdalam SMPSMP

GMO (Genetically Modified Organisms)GMO (Genetically Modified Organisms)ProsesProses sterilisasisterilisasi, , desinfeksidesinfeksi dandandekontaminasidekontaminasiTraining Training pekerjapekerja laboratoriumlaboratoriumDokumentasiDokumentasi : SOP : SOP dandan Quality SystemQuality System

RegulasiRegulasi tentangtentang GMOGMO--GMMGMM

GMO = Genetically Modified OrganismsGMO = Genetically Modified OrganismsGMM = Genetically Modified MicroorganismsGMM = Genetically Modified MicroorganismsManipulasiManipulasi genetikgenetikKemungkinanKemungkinan menyebabkanmenyebabkan penyakitpenyakit padapadamanusiamanusia, , hewanhewan dandan tanamantanaman, , sertasertapencemaranpencemaran lingkunganlingkunganTujuanTujuan penggunaanpenggunaan : : akademikakademik atauataukomersialkomersial

IndustriIndustri KoleksiKoleksi KulturKultur MikrobaMikroba

ATCC (American Type Culture Collection), USAATCC (American Type Culture Collection), USAIMI (Imperial Mycological Institute) IMI (Imperial Mycological Institute) →→CABI Bioscience, UKCABI Bioscience, UKCIP (Collection of The Institute Pasteur), FranceCIP (Collection of The Institute Pasteur), France

NCTC (National Collection of Type Culture), UKNCTC (National Collection of Type Culture), UKNCIMB (National Collection of Industrial and Marine NCIMB (National Collection of Industrial and Marine Bacteria)Bacteria)NCYC (National Collection of Yeast Cultures)NCYC (National Collection of Yeast Cultures)