Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)

8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)

1/23

1

PENGECATAN MIKROORGANISME

BAB I

Pendahuluan

A. Latar Belakang

Menurut Cohn, yang disebut cat bakteri atau mikroorganisme

adalah suatu senyawa organik yang mengandung gugus chromofor

dengan gugus auxochrom yang terkait didalam satu cincin benzene(Djide, 2015 !

"akteri atau mikroorganisme lainnya da#at dilihat dengan

mikrosko# biasa tan#a #engecatan yaitu dengan cara$cara khusus,

misalnya dengan handing dro#!

%engenalan bebera#a metode #engecatan, meru#akan hal yang

sangat #enting khususnya dalam mengidenti&ikasi bentuk mor&ologi #ada

mikroba! %ada mikroba tertentu, %engecatatan mikroba menjadi sangat

#enting bukan hanya untuk mengatahui bentuk mor&ologi tumbuhan

namun juga untuk mengetahui #erbedaan$#erbedaan bentuk mor&ologi

mikroba itu berdasarkan karakteristiknya dalam berikatan dengan zat

warna!

%engecatan 'ram meru#akan salah satu teknik #engecatan yang

dikerjakan di laboratorium mikrobiologi untuk ke#entingan identi&ikasi

mikroorganisme! Mor&ologi mikrosko#ik mikroorganisme yang di#eriksa

dan si&atnya yang khas terhada# #engecatan tertentu (#engecatan 'ram

da#at digunakan untuk identi&ikasi awal!

ISTI APRILYANIE .R RAHMA150 2014 0113


2/23

2


%ada #raktikum #engecatan dilakukan tiga metode #engecatan

yaitu #engecatan sederhana, #engecatan gram dan #engecatan negati&

dimana untuk membandingkan #engamatan struktur sel bakteri gram

negati e dengan bakteri gram #ositi&

B. Rumusan Masalah

)da#un rumusan masalah dalam #raktikum ini adalah sebagai

berikut *

1! )#a #erbedaan dari #engecatan sederhana, #engecatan 'ram, dan

#engecatan negati&+

2! "agaimana metode dan langkah$langkah dalam melakukan

#engecatan sederhana, #engecatan 'ram, dan #engecatan negati&+

! -enis #ewarna a#a saja yang digunakan dalam #engecatan

sederhana, #engecatan 'ram, dan #engecatan negati&+

C. Maksud Praktikum

)da#un maksud dari #ercobaan ini adalah mengetahui dan

memahami cara$cara #engecatan suatu bakteri atau mikroorganisme!

D. Tujuan Praktikum

1! Mengamati mor&ologi bakteri dengan mengggunakan metode

#engecatan sederhana, #engecatan negati& dan #engecatan 'ram

(#ositi& dan negati& !

2! Menentukan de&erensiasi bakteri dengan metode mengggunakan

#engecatan 'ram!



3/23


4/23

4


BAB II

Kajian Pustaka

A. Teori Umum

%ewarna (stain meru#akan garam$garam yang tersusun atas ion

#ositi& dan negati e yang salah satunya berwarna dan disebut kromo&or!

"ila kromo&or berada #ada ion #ositi&, disebut sebagai #ewarna basa

(basic dye dan bila kromo&or berada #ada ion negati e disebut sebagai

#ewarna asam ( acidic dye (#ratiwi, 200/ !

Menurut Cohn, yang disebut cat bakteri atau mikroorganisme adalah

suatu senyawa organik yang mengandung gugus chromofor dengan

gugus auxochrom yang terkait didalam satu cincin benzene (Djide, 2015 !

arena sebagian besar mikroorganisme tidak berwarna, maka

untuk da#at melakukan #engamatan di bawah mikrosko# cahaya

di#erlukan #ewarnaan mikroorganisme dengan menggunakan #ewarna!

%ewarnaan mikroorganisme #ada dasarnya adalah #rosedur mewarnai

mikroorganisme dengan menggunakan zat warna yang da#at

menonjolkan struktur tertentu dari mikroorganisme yang ingin kita amati!

ebelum mikroorganisme da#at diwarnai, mikroorganisme tersebut harus

terlebih dahulu di&iksasi agar terikat (menem#el #ada kaca objek

(microsco#e slide ! an#a adanya &iksasi, maka #emberian zat warna

#ada mikroorganisme yang dilanjutkan dengan #rosedur #encucuian zat



5/23

5


warna dengan air mengalir da#at menyebabkan mikroorganisme ikut

tercuci (%ratiwi, 200/ !

)da tiga macam #rosedur #ewarnaan yaitu #ewarnaan sederhana

(simple stain , #ewarnaan di&erensial ( differential stain , dan #ewarnaan

khusus ( special stain ! %ada #ewarnaan sederhana hanya digunakan satu

macam #ewarna dan bertujuan mewarnai seluruh sel mikroorganisme

sehingga bentuk seluler dan struktur dasarnya da#at terlihat (#ratiwi,

200/ !

%ewarnaan sederhana! %emberian warna #ada bakteri atau jasad$

jasad renik lain dengan menggunakan larutan tunggal suatu #ewarna

#ada la#isan ti#is, atau olesan, yang sudah di&iksasi, dinamakan

#ewarnaan sederhana! 3a#isan tadi digenangi dengan larutan #ewarna

selama jangka waktu tertentu, kemudian larutan itu dicuci dengan air dan

kaca objeknya dikeringkan dengan kertas #engisa# (Michael, 201 !

%ewarnaan di&erensial, #rosedur #ewarnaan yang menam#ilkan

#erbedaan diantara sel$sel mikroba atau bagian$bagian sel mikroba

disebut teknik #ewarnaan di&erensial! %ewarnaan gram, salah satu teknik

#ewarnaan di&ernsial yang #aling #enting dan #aling luas digunakan untuk

bakteri ialah #ewarnaan gram (Michael, 201 !

ediaan yang diwarnai 4 #ewarnaan #re#arat * digunakan berbagai

metode 4 teknik #embuatan #re#arat (ha#us, smear dan metode

#ewarnaan yang sesuai dengan jenis dan si&at cat biologis dan materi

yang diwarnai, selain #ewarnaan umum, terda#at metode #ewarnaan



6/23

6


khusus yang ber&ungsi untuk mengamati struktur 4 bagian mor&ologi dari

mikroba, misal #ewarnaan ka#sul, s#ora, &lagel, granula, inti dan lain$lain

( arti, 2015 !

6ntuk mengetahui adanya gerakan bakteri ( bacterial motility yang

da#at membantu identi&ikasi bakteri da#at dilakukan* perwarnaan flagel,

adanya &lagella menunjukkan adanya si&at motil bakteri, medium uji

motilitas, dengan menggunakan semisolid yang diinokulasi bakteri dengan

jarum membentuk garis lurus, jika terlihat ada gerakan bakteri #ada

medium, #emeriksaan bakteri sediaan basah dibawah mikrosko# da#at

menunjukkan gerakan berenang bakteri, misalnya Rhodospirilum rubrum

dengan #embesaran 15007 ( oedarto, 2008 !

Pengaruh substrat se#erti telah disebutkan terdahulu bahwa tia#

cat basa atau cat asam da#at bereaksi dengan konstituen$konstien sel

tertentu! 9leh karena itu substrat organic se#erti li#ida$li#ida, #rotein$

#rotein, asam$asam nuklein dan karbohidrat, juga akan mem#engaruhi

#engecatan biologis (Djide, 2015 !

Intensi!ikasi "enge#atan untuk mengintensi&ikasi cat da#at

dilakukan bebera#a cara se#erti mem#ertinggi kadar cat, mem#ertinggi

suhu #engecatan(:0 o $;0 o C atau menambah suatu mordant! Mordant

adalah suatu substansi kimia yang da#at menyebabkan sel$sel bakteri

atau mikroorganisme da#at dicat lebih intensi& atau menyebabkan cat

terikat lebih kuat #ada jaringan sel dibandingkan a#abila #ada cara

#engecatan tidak diberikan mordant (Djide, 2015 !



7/23

7


B. Uraian Bahan

1! )lkohol (Dirjen %9M ! 1;8;


8/23

8



9/23

9


elarutan * ukar larut dalam air, agak sukar larut dalam

etanol (;5 % dan dalam asam asetat glasial

%, larutannya warna lembayung tua!

%enyim#anan * Dalam wadah tertutu# baik

egunaan * ebagai cat utama atau 'ram )

dalam#engecatan 'ram!

6. a&ranin (Ditjen %9M, 1;8;


10/23

10


KA$IA% PRAKTIKUM

A. Alat

)da#un alat F alat yang digunakan dalam #raktikum ini adalah

"otol sem#rot, 'ege# kayu, Mikrosko#, 9bjek dan deck glass, 9se bulat,

9se lurus, %i#et tetes, #iritus!

B. Bahan

)da#un bahan yang digunakan adalah )lkohol asam, )?uadest,

sam#el bakteri air 3ejja, "iakan bakteri Pseudomonas aeruginosa, ristal

iolet, 3arutan Mordan, 3arutan


11/23

11


2! Diambil secara ase#tis 1 ose sus#ense bakteri dan diratakan di

atas gelas obyek! Dibiarkan #re#arat tersebut kering di udara

>! etelah kering #re#arat di&iksasi dengan cara di#anaskan di atas

lam#u s#iritus5! etelah dingin, noda #ada gelas obyek ditetesi dengan cat

sederhana 1 atau 2 tetes dan dibiarkan 1 atau 2 menit:! Dicuci dengan air mengalir sam#ai sisa$sisa cat tercuci seluruhnya8! Dikeringkan di udara dan diamati di bawah mikrosko#

C! %engecatan 'ram

1! Disia#kan #re#arat olesan bakteri

2! Dikeringkan di udara, setelah kering di&iksasi di atas lam#u s#iritus

! etelah dingin, diteteskan cat '=)M ) sebanayak 2$ tetes,

dibiarkan 1 menit

>! Dicuci dengan air mengalir, dikeringkan di udara atau kertas isa#

5! Diteteskan larautan '=)M ", di biarkan selama 1 menit

:! Dicuci dengan air mengalir dan dikeringkan

8! Ditetskan larutan '=)M C selama 0 detik

/! Dicuci dengan air mengalr dan dikeringkan

;! Diteteskan larutan '=)M C selama 2 menit

10!Dicuci dengan air mengalir dan dikeringkan

11! Diamati dengan mikrosko# dengan #erbesaran kuat dan

menggunakan minyak imersi

12!Digambar hasil$hasil #engecatan tersebut!



12/23

12


BAB I&

KA$IA% 'A(IL PRAKTIKUM

A. 'asil Praktikum

). Penge#atan (ederhana

%o Bakteri Bentuk %ama #at Pengamata

n

) Pseudomonas

aeruginosa

"atang

(bacillus

Metilen

blue

"akteri

berwarna

biru

*. Penge#atan %egati!



13/23

13


%o Bakteri Bentuk %ama #at Pengamatan

) Pseudomonasaeruginosa

"atang(bacillus


14/23

14


"! %embahasan

%ada #ercobaan ini dilakukan #engecatan #ada bakteri

Pseudomonas aeruginosa dengan metode #engecatan sederhana,

#engecatan negati&, dan #engecatan gram! ujuan dilakukannya

#engecatan untuk memudahkan melihat struktur bakteri yang tidak

berwarna!

%ada metode #engecatan sederhana menggunakan metilen blue

yang meru#akan cat warna basa! Metode ini sangat sederhana dan ce#at!

"erdasarkan #engamatan bakteri Pseudomonas aeruginosa terlihat

bentuk "atang (bacillus dan "akteri berwarna biru

%ada metode #engecatan negati& menggunakan cat nigrosin yang

bersi&at asam yang bermuatan negati& yang menyebabkan cat ini tidakakan mewarnai #ermukaan yang bermuatan negati&! al ini dimaksudkan

untuk memberi latar belakang untuk bakteri yang akan diamati!

"erdasarkan #engamatan bakteri Pseudomonas aeruginosa berbentuk

"atang (bacillus

%ada #engecatan gram menggunakan em#at jenis cat yaitu gram

) berisi kristal iolet, gram " berisi mordan, gram C berisi alkohol asam,

dan gram D berisi sa&ranin! )lasan #enggunaan kristal iolet untuk

memberikan warna ungu #ada sel bakteri dan didiamkan selama 1 menit

agar melekat sem#urna di dinding se bakteri! %enggunaan mordan

dimaksudkan untuk mem&iksasi #ewarna #rimer yang disera#

mikroorganisme dan untuk mem#erkuat #engikatan warna oleh bakteri!



15/23

15


)lasan #enambahan alkohol yaitu untuk mencuci atau menghilangkan

kelebihan zat warna #ada sel bakteri! emudian digunakan sa&ranin

dengan tujuan mewarnai kembali sel$sel yang telah kehilangan #ewarna

utama setelah #erlakuan dengan alkohol! %ewarna sa&ranin masuk

kedalam sel dan menyebabkan sel menjadi berwarna merah #ada bakteri

gram negati& sedangkan #ada bakteri gram #ositi& dinding selnya terhidrasi

dengan #erlakuan alkohol, #ori$#ori mengkerut, daya rembes dinding sel

dan membran menurun sehingga #ewarna sa&ranin tidak da#at masuk

sehingga sel berwarna ungu!

%emberian #ewarna yang bergantian dengan waktu tertentu

disebabkan karena zat$zat warna tersebut da#at berikatan dengan

kom#onen dinding sel bakteri dalam waktu singkat!

6ntuk #engecatan sederhana dilakukan dengan cara disia#kan alat

dan bahan yang akan digunakan, kemudian diambil satu ose sus#ensi

bakteri secara ase#tis! atu ose sus#ensi bakteri tersebut diratakan di

atas gelas objek, lalu di&iksasi! elanjutnya ditetesi dengan Methylen "lue

sebanyak 1 F 2 tetes! )lasan #enambahan Methylen "lue yaitu untuk

memberikan warna #ada sel bakteri agar mudah diamati, dimana zat

warna yang bersi&at basa (Methylen "lue akan bereaksi dengan struktur

sel yang bersi&at asam membentuk kom#leks warna! emudian didiamkan

selama 15 detik, kemudian dicuci dengan air mengalir dan sisa air disera#

dengan tissue! erakhir diamati dibawah mikrosko#!6ntuk #engecatan negati& disia#kan alat dan bahan yang akan

digunakan! emudian diteteskan dengan 1 tetes nigrosin di#inggir objek



16/23

16


gelas, lalu diambil satu ose biakan murni dan dicam#ur dengan


17/23

17


termasuk bakteri 'ram #ositi& maka akan teta# berwarna ungu karena

kom#leks #ersenyawaan kristal iolet$iodium teta# terikat #ada dinding

sel! edangkan jika termasuk bakteri 'ram negati& berwarna #ucat atau

tidak berwarna karena larutan #emucat melarutkan li#id dan

menyebabkan #ori$#ori dinding sel membesar, sehingga meningkatkan

daya larut #ersenyawaan kristal iolet$iodium #ada dinding sel!

elanjutnya ditambahkan dengan a&ranin ('ram D , yang digunakan

sebagai cat #enutu#, sebanyak 1 tetes selama 1 menit lalu dicuci dengan

air mengalir dan sisa airnya disera# dengan tissue! erakhir ditutu#

dengan dek gelas lalu diamati di bawah mikrosko#! )lasan dilakukannya &iksasi #ada #engecatan sederhana dan

#engecatan 'ram yaitu melekatkan sel #ada objek glas, mencegah

mengkerutnya globula #rotein sel, membunuh mikroba karena sel dalamkeadaan mati lebih mudah diwarnai dari#ada sel dalam keadaan hidu#,

mele#askan glanular #rotein menjadi gugus reakti&, mencegah terjadinya

otolisis sel, yaitu #roses #ecahnya sel yang disebabkan oleh enzim yang

ada didalamnya, dan merubah daya ikat warna!"akteri$'ram #ositi& berwarna ungu disebabkan kom#leks zat warna

kristal iolet$yodium teta# di#ertahankan meski#un diberi larutan #emucat,

sedangkan bakteri 'ram$negati& berwarna merah karena kom#leks

tersebut larut sewaktu #emberian larutan #emucat dan kemudian

mengambil zat warna kedua yang berwarna merah!



18/23

18


BAB &

K-(IMPULA% DA% (ARA%

A. Kesim"ulan

"erdasarkan #raktikum yang telah dilakukan maka da#at

disim#ulkan bahwa *

1! %ada #engecatan sederhana dengan menggunakan cat Metilen blue

diamati bakteri Pseudomonas aeruginosa memiliki bentuk mor&ologi

batang ("acilus dengan warna biru!2! %ada #engecatan negati& dengan menggunakan cat


19/23

19


>! %ada #engecatan 'ram diamati bakteri #ada sam#el air #ermandian

3ejja memiliki bentuk mor&ologi bulat (coccus dan berwarna merah

menandakan bakteri tersebut masuk golongan 'ram negati&!

B. (aran

ebaiknya asisten lebih te#at waktu hadir #ada saat #raktikum

agar #raktikum berjalan lebih ce#at dan lebih meluangkan waktu untuk

berdiskusi ke#ada asisten mengenai materi tersebut!

DA TAR PU(TAKA

Djide,

arti, )!, !,2015, Mikrobiologi esehatan , )


20/23

20


LAMPIRA% ). (kema Kerja

a. %engecatan ederhana

sia#kan gelas objek

ratakan 1 ose bakteri diatas gelas objek secara ti#is

&iksasi

tetesi metilen blue 1$2 tetes

biarkan selama 1$2 menit

cuci dengan air mengalir dan dikeringkan



21/23

21


amati dibawah mikrosko#



22/23

22


b. %engecatan


23/23

23


c. %engecatan 'ram

sia#kan gelas objek

oleskan bakteri

&iksasi

tambahkan 2$ tetes larutan ristal iolet, dibiarkan selama 1 menit

cuci dengan air mengalir, dikeringkan

tetesi larutan mordan, dibiarakan selama 1 menit

cuci dan keringkan

tetesi larutan alkohol asam, dibiarkan selama 0 detik

cuci dan keringkan

tetesi larutan sa&rinin, dibiarkan selama 0 detik

cuci dan keringkan

amati dibawah mikrosko#


Documents

Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)