Studi hadiah, hanya benih dari kategori terakhir digunakan. Selama saparation biji ke dalam kematangan kelas, mereka kehilangan beberapa air mereka. Diputuskan, oleh karena itu, untuk hidrat benih untuk tingkat moisture perwakilan negara segar sebelum inisiasi percobaan. Hal ini dicapai dengan menempatkan gelas dilapisi dengan kertas menara dan sebagian terisi air dalam wadah dengan benih sampai kadar air benih seluruh syarat telah mencapai.

Dehidrasi benihBenih segar yang dibagi menjadi enam sampel. Setiap dari lima contoh ini berada di atas jenuh larutan MgCl2 (33 1% RH). Setiap dari desiccators sebuah kipas angin listrik dipasang untuk mengalirkan air terus-menerus di sekitar bibit. Desiccators ditempatkan di inkubator (1) di 10C, (2) terus-menerus suhu kamar di 20 atau 25C atau (3) inkubator 29 atau 37C. Larutan garam dalam desiccators yang diisi ulang yang diperlukan untuk mempertahankan kondisi saturasi penuh sebagai air diserap dari biji. Contoh terakhir tenggelam dalam air pada 20C, suatu kondisi penyimpanan yang mempertahankan kelangsungan hidup tetapi tidak boleh patah dorman. Sampel ini bertindak sebagai bahan kontrol hidrat. Setelah kering, biji disimpan dalam keadaan kering di 6 C sampai diperlukan.

Rehidrasi stratifikasi benihDehidrasi benih dari setiap sampel percobaan yang terserap dalam air di 20C selama lima minggu. Benih kemudian diadakan secara di bawah air 6C (bertingkat) selama lima bulan. Bahan kontrol tetap dipertahankan pada angka 20C seluruh.

Penentuan konten airSeluruh biji dipotong embrio sumbu air isi (WCs) yang ditentukan oleh oven pengeringan di 80C untuk 48 h. berarti untuk seluruh biji dan dipotong embrio sumbu air isi didasarkan pada lima individu mereplikasi bibit atau kapak, masing-masing. Air isi bertekad mingguan selama dehidrasi dan imbibition, dan bulanan selama stratifikasi.

Konduktivitas tesElektrolit kebocoran individu benih diukur menggunakan multi-sel konduktivitas mater (CM100, Reid dan Associates, Durban, Afrika Selatan) selama 24 jam untuk Ulangan 5. Untuk bahan-bahan segar dan kering, benih ditempatkan dalam air suling dan konduktivitas diukur segera. Untuk secara dan kemudian berlapis benih, konduktivitas air di mana mereka telah menyerap dan bertingkat dengan biji diukur.Tes tetrazolium (TZ)Jelas viabilitas benih ditentukan oleh TZ tes. Dua puluh benih yang telah pra-dibasahi untuk 18 h longitudinal memotong embrio, direndam dalam larutan 0,5% (w/v) 2,3.5-triphenyltetrazolium klorida selama 24 jam pada 20C dalam gelap, dan dinilai berdasarkan intensitas dan lokasi pewarnaan menggunakan kriteria seperti diuraikan dalam aturan untuk benih pengujian Internasional

Pengecambahan tes tesPengecambahan tes tes dilakukan selama 20 hari dengan biji yang tenggelam di bawah air di 20C di bawah cahaya konstan. Biji yang dicetak sebagai berkecambah ketika mereka menunjukkan penonjolan mesocotyl atau telah menembak hijau normal dan akar mani

Gula ekstraksi dan analisis] \Untuk setiap sampel, satu gram sumbu embrio yang telah ditumbuk dalam nitrogen cair rehydrated dengan 5 ml air suling mendidih selama 10 menit. Sampel yang disentrifugasi dan supernatant dikumpulkan dan disaring melalui filter 0.45-m nilon. Sample yang dianalisa dengan menggunakan kromatografi pertukaran anion kinerja tinggi (HPAEC) dan berdenyut amperometric deteksi (PAD). Identifikasi adalah dengan menggunakan waktu retensi hanya.

Diferensial pemindaian kalorimetri (DSC)Termal transisi secara bersamaan diukur untuk tiga sampai empat embrio sumbu memisahkan diri dari biji yang telah disimpan kering di 6c selama 9 bulan setelah tretments pengeringan, dan kembali. Thermograms itu direkam menggunakan Perkin-Elmer Diferensial pemindaian kalorimeter DSC-7. Pengukuran dilakukan suhu antara -120 dan 50C. helium digunakan sebagai purge gas. Perilaku termal sampel dipelajari selama pemanasan dan pendinginan suku itu ditetapkan pada 10 dan 20C min-1, masing-masing. Instrumen telah dikalibrasi antara keramah-95 dan 156.6C

Lipid ekstraksiLipid yang diekstrak menggunakan diklorometana/metanol (2:1 v/v) mengandung butylated hidroksi-toluena (50 mg 1-1) dari bubuk biji yang telah disimpan selama 9 bulan. Contoh dari kontrol yang telah disimpan terhidrasi juga diambil.

Lipid fraksinasiLipid yang fractionated oleh Kromatografi kolom asam silisik. Ekstrak total lipid, disiapkan seperti disebutkan di atas, dilarutkan dalam 1 ml diklorometana dan diterapkan untuk Bondelut jarum suntik kolom yang berisi 0,5 gram silika gel. Alam lipid dan wity glycolipids yang eluted berturut-turut dengan setiap 4 ml diklorometana dan aseton.

Penentuan hidroperoksidaDua puluh L 0.014 M besi klorida (menjadi FeCl2 adalah) ditambahkan ke 5 ml ekstrak lipid di diklorometana/metanol (2:1 v/v) dan terguncang. Absorbansi dibacakan dengan menggunakan spectrophotometer di 505 nm terhadap kosong yang mengandung Bupati dan pelarut hanya.

Analisis esterifikasi dan asam lemak lemakMetil ester asam lemak yang diperoleh dengan menggunakan teknik dasar-katalis Metcalfe dan Wang (1981). Ekstrak kering lipid resuspended dalam 1.5 ml dietil eter, dan 200 L 1 M tetramethyl-amonium hidroksida dalam metanol ditambahkan. Campuran terguncang dan memungkinkan untuk berdiri selama 1 menit sebelum penambahan 2 ml air suling.

Analisis VR38DETTSatu-dan-a-setengah gram biji utuh ditempatkan dalam serum 14-ml botol, disegel dengan septa berlapis Teflon dan dipanaskan di tempat pasir di 80C untuk 100 menit. 250-L sampel VR38DETT gas diambil dengan jarum suntik gas-ketat, pra-dipanaskan untuk 80C.

Resolusi tinggi pemindaian elektron microcopy (HRSEM)Embrio sumbu Z. palustris benih yang telah dehidrasi di 10, 25 0r 37C atau disimpan di air di 20C adalah sampel untuk potongan-potongan kecil jaringan (c.1x1x1x1 mm). lima kapak adalah sampel per pengobatan ini pra-tetap dalam larutan osmic 1% (OsO4) buffered di PH 7.2 larutan buffer, spesimen yang cryoprotected dengan pencelupan berturut-turut dalam 5, 30 50% dimetil sulfoxide (DMSO) selama 30menit setiap solusi.

HidroperoksidaHidroperoksida jumlah positif yang berkorelasi dengan dehidrasi suhu (r = 0.89. P = 0,10). perbandingan perawatan individu mengungkapkan perbedaan marginal signifikan dalam jumlah hidroperoksida antara pengobatan. Ada, bagaimanapun, perbedaan yang sangat signifikan dalam jumlah hidroperoksida disimpan dehidrasi di 20C dan mereka mengeringkan di 37C.

Tabel 1. Germination of Zizania Palustris seeds dried at different temperature.Dehydration Temperature(C)Germination(%)

100

2020

255

290

370

Stored hydrated at 20C32

Asam lemakAda tidak ada perbedaan yang terlihat dalam jumlah masing-masing fatty acid metil ester, mengekspresikan sebagai persentase daerah, dalam pecahan netral dan glycolipid antara perawatan yang berbeda. Pemeriksaan dari asam lemak dari fraksi netral dan glycolipid mengungkapkan bahwa linoleate (18:2) adalah asam lemak dominan di c 38%

Table 2. Sugar contents (mg g-1) of embryonic axes of zizania palustris dried at different temperatures or stoned in water at 20CTreamentSugar

GlukosaFruktosaSukrosaRaffinose

Stored hydrate at 20C2.092.094.180

Dried at 10C1.751.46201.0313.69

Dried at 25C3.033.0348.513.03

Dried at 37C1.411.4148.5116.7

AldehidaLima Aldehida diidentifikasi berdasarkan kromatografi bersama sebagai propanal, pentanal, methylbutanal, hexanal dan butanal dan ada foir volatil tidak diketahui. Perbandingan perawatan individu yang biji kering di 37C diproduksi Aldehida kurang daripada biji kering pada 10 atau 25C.

HRSEMSetelah persiapan untuk HRSEM, sample menunjukkan partikel ukuran dan bentuk yang terkait dengan membran permukaan.