Phương pháp DPPH

1.Giới thiệu phương pháp 2.Tiến hành phương pháp 3.Ưu điểm , hạn chế và tính

ổn định của phương pháp

1. Giới Thiệu Phương Pháp1.1. DPPH là gì ?

DPPH (1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) là phương pháp nhặt rác gốc tự do cung cấp các phương pháp tiếp cận đầu tiên để đánh giá khả năng chống oxy hóa của một hợp chất, trích lục hoặc các nguồn sinh học khác.

1. Giới Thiệu Phương Pháp1.2. Nguồn gốc của phương pháp Phương pháp này được phát triển bởi Blois (1958) Với quan điểm để xác định các hoạt động chống

oxy hóa một cách như bằng cách sử dụng một ổn định α gốc tự do, α-diphenyl-β-picrylhydrazyl (DPPH; C18H12N5O6, M = 394,33). Xét nghiệm này được dựa trên việc đo lường khả năng nhặt rác của các chất chống oxy hóa đối với nó. Các electron lẻ của nguyên tử nitơ trong DPPH được giảm bằng cách nhận một nguyên tử hydro từ chất chống oxy hóa với hydrazine tương ứng.

2. Tiến hành phương pháp 2.1. Nguyên tắc Các chất có khả năng kháng oxy hoá sẽ

trung hoà gốc DPPH bằng cách cho hydrogen, làm giảm độ hấp thụ tại bước sóng cự đại và màu của dung dịnh phản ứng sẽ nhạt dần, chuyển từ tím sang vàng nhạt.

Phương trình :

2. Tiến hành phương pháp2.2. Chuẩn bị hóa chất Hóa chất : Dung dịnh DPPH (1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ),

C18H12N5O6.

Mẫu : Được xử lý qua quá trình chiết lỏng –

rắn, hệ dung môi là nước , quá trình chiết này

được thực hiện trên một lượng mẫu nhỏ và thực

hiện phân tích dịch chiết từ 2 – 3 lần .

2. Tiến hành phương phápCách tiến hành Khoảng 20µlđến

140µl dịch chiết trộn với nước cất để đạt thể tích tổng cộng 3ml.

Sau đó thêm 1ml dung dịch DPPH 0,2mM, lắc đều và để yên trong bóng tối 30 phút. Độ hấp thu quang học được đo ở bước sóng 517nm

Xử lý kết quả Khả năng khử gốc tự do DPPH được xác định theo công thức sau :

DPPH (%) = 100 × (ACT - ASP)/ACT

Trong đó: ACT: Độ hấp thu quang học của mẫu trắng không chứa dịch chiết.ASP: Độ hấp thu quang học của mẫu có chứa dịch chiết. Kết quả báo cáo bởi giá trị IC50 là nồng độ của dịch chiết khử được 50% gốc tự do DPPH ở điều kiện xác định. Giá trị IC50 càng thấp thì hoạt tính khử gốc tự do DPPH càng cao.

2. Tiến hành phương pháp

3. Ưu điểm, hạn chế của phương pháp Ưu điểm- DPPH có thể được sử dụng trong các dung môi hữu cơ và dung dịch nước không phân cực và có thể được sử dụng để kiểm tra cả hai chất chống oxy hóa ưa nước và ưa mỡ.- Có độ chính xác cao , dễ dàng thực hiện và giá trị kinh tế cao.- DPPH được phép phản ứng với toàn bộ mẫu và đủ thời gian nhất định trong phương pháp này.

3. Ưu điểm, hạn chế của phương phápHạn chế

- DPPH chỉ có thể được hòa tan trong dung môi hữu cơ và sự can thiệp của hấp thụ từ các hợp chất mẫu có thể là một vấn đề đối với các phân tích định lượng .- Độ hấp thụ của DPPH trong methanol và acetone giảm dưới ánh sáng - Hạn chế trong việc phản ánh các phân vùng của chất chống oxy hóa trong các hệ thống nhũ tương và không phải là hữu ích để đo lường các hoạt động chống oxy hóa của huyết tương.