Pada pratikum kali ini dilakukan pemeriksaan Salmonella dan
Shigella. Dalam melakukan uji tersebut, dilakukan tahapan-tahapan
untuk pemeriksaan ini , yaitu :
1.1 Preparasi Sampel
Pada praktikum kali ini, digunakan dua macam sampel, yaitu
sampel padat dan sampel cair. Sampel padat yang digunakan adalah
kue lapis, kue lapis, ote-ote, bika ambon, dan dadar, Sedangkan
sampel cairnya adalah urine.
Untuk sampel padat, harus digerus terlebih dahulu dengan mortal
dan pestle steril. Digunakan mortal dan pestle yang steril agar
bakteri dari mortal atau pestle tidak menempel pada sampel, yang
dapat menyebabkan hasil yang diperoleh tidak sesuai dengan keadaan
sampel yang sebenarnya. Sampel kue basah harus digerus dengan baik
agar konsistensinya bisa berubah menjadi suspensi (butiran-butiran
kecil) ketika dilarutkan dengan aquades. Sampel yang digerus harus
ditimbang 10 g yang kemudian dilarutkan dengan 90 ml aquades. Untuk
sampel cair tidak perlu digerus, cukup dengan dipipet 10 ml sampel
yang kemudian dilarutkan dalam 90 ml aquades.
1.2 Homogenisasi
Homogenisasi atau pemerataan sangat penting dilakukan untuk
memperoleh hasil pengamatan yang baik. Homogenisasi dilakukan
dengan cara menggoyang-goyangkan sampel pada erlenmeyer hingga
merata. Penghomogenan yang baik akan didapatkan penyebaran bakteri
secara merata dan maksimal. Homogenisasi dilakukan dalam setiap
tahap dalam praktikum pemeriksaan Pemeriksaan Salmonella dan
Shigella.
1.3 Inokulasi (Penanaman pada media SCB)
Penanaman sampel pada media SCB dilakukan dengan cara pemipetan
dari sampel ke media SCB. Hal yang perlu diperhatikan dalam
melakukan penanaman sampel pada media adalah:
Semua alat dan bahan yang akan digunakan harus dalam keadaan
steril, agar semua alat tidak terkotaminasi oleh bakteri yang ada
di luar alat misalnya udara, sehingga dapat mempengaruhi hasil
pengamatan pemeriksaan Salmonella dan Shigella.
Dalam memipet dan memindahkan sampel seharusnya diperhatikan
:
Sebelum dan sesudah memipet, pipet difiksasi terlebih dahulu
untuk menghindari adanya kontaminasi dari bakteri yang menempel
pada pipet.
Ketika akan memindahkan hasil pengenceran sampel ke dalam
tabung, pipet tidak boleh menyentuh media yang ada di dalam tabung.
Sampel dipindahkan dari pipet dengan cara melewati dinding
tabung.
Pipet tidak boleh menyentuh atau terlalu dekat dengan api
bunsen, hal ini disebabkan karena kuman pada makanan dan minuman
akan mati jika terlalu dekat dengan sumber api.
Pipet diusahakan agar tidak menyentuh meja atau terkontaminasi
sebelum maupun setelah digunakan (terutama ujung pipet).
Pipet yang masih steril sebaiknya dibuka dari kertas
pembungkusnya saat akan digunakan, untuk mengindari kontaminasi
dari kuman-kuman di dalam ruangan tempat praktikum.
Semua kegiatan dalam melakukan inokulasi harus selalu dilakukan
secara aseptis atau harus berada dalam daerah steril yaitu di dekat
api bunsen (dengan catatan tidak terlalu dekat dan tidak terlalu
jauh).
Setelah sampel di masukkan ke dalam media, tabung
digoyang-goyangkan agar sampel tersebar merata pada media.
1.4 Inkubasi
Setelah penanaman bakteri pada media, kemudian diinkubasi pada
inkubator pada suhu 37oC selama 24-48 jam untuk memberikan
kesempatan kepada bakteri memanfaatkan media untuk pertumbuhannya.
1.5 Inokulasi (Penanaman Pada Media SSA dan MCA)Teknik inokulasi
atau penanaman bakteri merupakan kegiatan memindahkan bakteri dari
medium yang lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang
sangat tinggi. Media yang baru harus mengandung nutrisi agar
bakteri dapat tumbuh dengan baik.
Pada uji ini dilakukan penanaman pada media MCA dan SSA . Media
SCB diambil 1 2 ose jarum, lalu digoreskan pada media MCA dan
SSA.
Hal-hal yang perlu diperhatikan dalam melakukan penanaman
bakteri ini adalah:
Ose yang digunakan harus dalam keadaan steril, ose dibakar
terlebih dahulu pada api bunsen.
Ose yang dimasukkan ke dalam media tidak dalam keadaan masih
panas karena jika osenya masih panas dapat membunuh bakteri yang
ada dalam sampel.
Semua kegiatan dalam melakukan inokulasi harus selalu dilakukan
secara aseptis atau harus berada dalam daerah steril yaitu di dekat
api bunsen (dengan catatan tiidak terlalu dekat dan tidak terlalu
jauh.
Setelah sampel di masukkan ke dalam media, tabung
digoyang-goyangkan agar sampel tersebar merata pada media.
2.2. Inkubasi
Setelah bakteri dipidahkan pada media MCA dan SSA diinkubasi
pada suhu 37oC untuk mentukan adannya bakteri Salmonella dan
Shigella selama 24 - 48 jam.
Pemeriksaan Salmonella Pada Sampel Kue Lapis, Kue Lapis,
Ote-Ote, Bika Ambon, Dadar Dan Urine
Pemeriksaan dan identifikasi bakteri Salmonella dapat dilakukan
dengan mengisolasi dari bahan makanan. Bahan makanan yang umum
diisolasi adalah daging dan telur yang tidak diolah dengan baik.
Pada praktikum ini sampel yang digunakan adalah urine dan sampel
makanan kue lapis, kue dadar, ote-ote dab bika ambon.
Isolasi Salmonella pada praktikum ini, digunakan dua macam
sampel, yaitu sampel padat dan sampel cair. Sampel padat yang
digunakan adalah kue lapis, kue lapis, ote-ote, bika ambon, dan
dadar, Sedangkan sampel cairnya adalah urine. Untuk sampel padat,
harus digerus terlebih dahulu dengan mortal dan pestle steril.
Digunakan mortal dan pestle yang steril agar bakteri dari mortal
atau pestle tidak menempel pada sampel, yang dapat menyebabkan
hasil yang diperoleh tidak sesuai dengan keadaan sampel yang
sebenarnya. Sampel kue basah harus digerus dengan baik agar
konsistensinya bisa berubah menjadi suspensi (butiran-butiran
kecil) ketika dilarutkan dengan aquades. Sampel yang digerus harus
ditimbang 10 g yang kemudian dilarutkan dengan 90 ml aquades. Untuk
sampel cair tidak perlu digerus, cukup dengan dipipet 10 ml sampel
yang kemudian dilarutkan dalam 90 ml aquades. Pengenceran yang
dilakukan pada pada setiap sampel hanya sampai pengenceran
10-1.Dalam isolasi ini, sampel padat dan cair dituang pada media
Selenite Cystine Broth. Media Selenite Cystine Broth ini merupakan
salah satu media yang berdasarkan fungsinya merupakan media
encrichment yaitu media yang dapat menunjang pertumbuhan bakteri
yang tidak dapat tumbuh pada media biasa karena memerlukan beberapa
nutrisi pengaya yang dapat menyokong pertumbuhannya. Media ini
tergolong enrichment eksklusif media yaitu media penyubur eksklusif
untuk bakteri gram negatif seperti Salmonella sp. Kemudian
diinokulasi kembali pada media Salmonella Shigella Agar (SSA) dan
Mac Conkey Agar (MCA). Media Mac Conkey Agar (MCA) merupakan media
selektif deferensial bagi mikroba. Media ini menghambat pertumbuhan
bakteri gram positif dengan adanya garam empedu yang akan membentuk
kristal violet. Bakteri gram negatif yang tumbuh dapat dibedakan
dalam kemampuannya memfermentasikan laktosa. Pertumbuhan koloni
bakteri Salmonella pada Mac Conkey Agar (MCA) adalah serupa dengan
media yaitu berwarna merah bata. Sedangkan media Salmonella
Shigella Agar (SSA) adalah media yang digunakan untuk tumbuh
kembang bakteri Salmonella dan Shigella.
Media ini tergolong media selektif untuk pengisolasian bakteri
Salmonella dan Shigella. Media ini mengandung bile salt, brilliant
green, sitrat, dan thiosulfate yang bersifat selektif untuk
mencegah pertumbuhan bakteri gram positif, beberapa gram negatif
lainnya, dan bakteri coliformsehingga diharapkan bakteri yang
tumbuh hanya Salmonella dan Shigella. Pertumbuhan bakteri
Salmonella pada media ini muncul sebagai koloni tidak berwarna
(bening) dan jika terjadi produksi H2S oleh spesies Salmonella
mengubah pusat koloni menjadi berwarna hitam.
Hasil Identifikasi Salmonella Dan Shigella Pada Sampel Kue
Lapis, Kue Lapis, Ote-Ote, Bika Ambon, Dan Dadar, Dan
UrinePengujian terhadap bakteri Salmonella dengan sampel kue lapis,
kue lapis, ote-ote, bika ambon, dan dadar, dan urine pada praktikum
ini dilakukan dengan metode konvensional. Metode ini dilakukan
melalui serangkaian tahapan. Tahapan pertama pada prakikum ini
yaitu penanaman sampel kue lapis, kue lapis, ote-ote, bika ambon,
dan dadar, dan urine pada media Selenite Cystine Broth. Kemudian
media diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37C. Kemudian
diinokulasikan pada media Mac Conkey Agar dan media Salmonella
Shigella Agar dengan metode cawan gores. Setelah inokulasi
dilakukan, media diinkubasi pada inkubator selama 3 24 jam dengan
suhu inkubasi sebesar 37C. Pada sampel urine diinokulasika hanya
pada media Mac Conkey Agar. Dan pada sampel makanan diinokulasikan
pada media SSA dan MCA. Pengamatan media sangat sulit
diidentifikasi karena waktu inkubasi sangat melebihi batas yaitu 3
24 jam. Pada median MCA dan SSA ditemukan hasil negative terhadap
bakteri Salmonella Dan Shigella . Media MCA dan SSA ditumbuhi oleh
koloni bakteri non Salmonella maupun Shigella.
Ini menunjukkan bahwa pasien yang memberikan urinnya tidak
terkena ISK atau infeksi saluran kencing. Karena apabila ditemukan
bakteri pada urin menandakan adanya infeksi yang diderita oleh
pasien. Sedangkan pada sampel makanan seluruhnya memberikan hasil
yang negative terhadap bakteri Salmonella dan Shigella. Ini
mendakan bahwa sempel makan ini sesuai standar batas maksimum
adanya bakteri Salmonella dan Shigella. Karena menurut Keputusan
Badan POM No. HK.00.06.1.52.4011 Tahun 2009 batas maksimum jumlah
Salmonella dan Shigella adalah 0/25 gram sampel.
