7/25/2019 Poster Orrina
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IDENTIFICACIN TAXONMICA Y MOLECULAR DEL NEMATODO AGALLADOR
FOLIAROrr ina phyllobiaAFECTANDO Solanum elaeagnif oliumEN
GUANAJUATO, MXICO. [Taxonomicand molecular identification of
foliar-gall nematode Orr ina phyllobiaaffecting Solanum elaeagnif
oliumin Guanajuato, Mexico]
Edgar Medina-Gmez1, ngel Ramrez-Surez2, Juventino Cuevas-Ojeda3
y Daniel Martnez-Gmez4. 1 Departamento deProduccin Agrcola y
Animal, Universidad Autnoma Metropolitana. 2CNRF-Direccin General
de Sanidad Vegetal,SENASICA-SAGARPA. 3 Departamento de Parasitologa
Agrcola, Universidad Autnoma Chapingo. 4Laboratorio deMicrobiologa,
Universidad Autnoma Metropolitana. E-mail:
[email protected]
ANTECEDENTESEl trompilloSolanum elaeagnifolium es una planta
perene originariadel noreste de Mxico y el suroeste de EE.UU,
considerada como una
planta invasora y distribuida en casi todo el mundo. Entre los
enemigosnaturales de esta especie destaca Orrina phyllobia
(=Ditylenchus
phyllobius), un nematodo formador de agallas foliares estudiado
comoalternativa de control de esta maleza (Nickle, 1991). Sntomas
dedeformaciones y agallas foliares en esta planta supone la
presencia deesta especie en nuestro pas. El objetivo de este
trabajo fue delimitar laidentidad taxonmica del nematodo afectando
a S. elaeagnifolium atravs de sus caractersticas morfotaxonmicas y
moleculares.
MATERIALES Y MTODOSSe realiz un muestreo dirigido en campo a
plantas con sntomas deagallas en la parte foliar (Fig. 1), en el
municipio de San Luis de la Paz,Guanajuato, Mxico a una altura de
2018 msnm .
Fig. 1 Sntomas foliares producidos por anguinidos en plantas de
S. elaeagnifolium.
La extraccin de J2, hembras y machos se realiz por incubacin
ydiseccin directa de hojas que presentaron distorsin y
agallamiento,montados en agua-agar 2% para el anlisis taxonmico
tradicional. Seamplificaron por PCR y secuenciaron las regiones
ITS1-5.8S-ITS2 y lossegmentos de expansin D2-D3 del gen 28S. Se
realiz BLASTING
para determinar homologa con secuencias depositadas en el
GenbanK yse determin la inferencia filogentica con MrBayes para
ambosmarcadores.
RESULTADOS Y DISCUSIN.Las caractersticas morfologas (Fig 2 y 3)
y valores morfomtricos seencuentran en el rango de valores
reportados para Ditylenchus
phyllobiusNickle (1991) y Brzeski (1991).
Fig. 2 Adultos de Orrin a phyllobiadetectados en agallas de S.
elaeagnifoli um.A) Hembra; B) Macho.
La amplificacin de ITS1-5.8S-ITS2 fue un producto de 700 pb
(Fig. 4) y paralos segmentos de expansin D2-D3 fue de 900 pb (Fig.
5). El BLASTINGconfirmo la identidad de las secuencias, obteniendo
homologas del 99% con D.
phyllobiusen la regin ITS1-5.8S-ITS2.
La inferencia filogentica de ambos marcadores moleculares con
secuencias degneros y especies de anguinidos depositados en el
GenBank, indican que existeuna clara afinidad de agrupamiento conD.
phyllobius con la regin de ITS1-5.8S-ITS2 (Fig. 6), sin embargo en
los segmentos de expansin se separa en unsubclade distinto (Fig.
7).
.
CONCLUSIONES.La combinacin de la morfotaxonoma junto con
marcadores moleculares de losnematodos afectando la maleza S.
elaeagnifolium confirma la presencia enMxico del nematodo agallador
foliar O. phyllobia. La estrategia deidentificacin utilizada ofrece
una metodologa para la caracterizacinmorfolgica y molecular para la
identificacin de esta especie.
M 1 2 3 4 5 6 7 8 M M 1 2 3 4 5 6 7 8 M
Fig. 4. Productos de PCR de DNA de Orrynaen S. elaeagnifol
ium,
utilizando los primers (AB28 & TW81). 1-2; Control (+) Di ty
lechus
dipsac i. 3-4; Control (-) Agua destilada estril. 5-8; Juvenil
(J2).
Fig. 5. Productos de PCR de DNA de Orryna en S. elaeagnifol
ium,
utilizando los primers (D2A & D3B). 1-2; Control (+) Di ty
lechus dipsac i.
3-4; Control (-) Agua destilada estril. 5-8; Juvenil (J2).
REFERENCIAS: 1.Brzeski, M. W. (1991) Review of the
genusDitylenchusFilipjev, 1936 (Nematoda: Anguinidae).Revue de
Nematologie 14, 959; 2.Nickle WR. 1991. Manual of Agricultural
Nematology.Dekker, Inc. 757p.
Fig. 6. Construccin filogentica (MrBayes) a partir desecuencias
de ITS1-5.8S-ITS2 del rDNA deOrrina phyllobiadetectados enS.
elaeagnifoli um.
Fig. 7. Inferencia filogentica bayesiana (MrBayes) a partir
desecuencias de D2-D3 LSU del rDNA de especmenes de
Orrinaphyllobiadetectados en S. elaeagnifoli um.
0.1
Anguina funesta.AF396347
Anguina funesta.AF396349
Anguina funesta.AF396348
Anguina graminis.AF396351
Anguina agrostis.AF396339
Anguina agrostis.AF396341
Anguina agrostis.AF396340
Anguina tritici.AF396353
Anguina tritici.AF396354
Anguina australis.AF396334
Anguina australis.AF396335
Anguina woodii.AY307122
Anguina microlaenae.AF396333
Mesoanguina millefolii.AF396313
Mesoanguina millefolii.AF396312
Mesoanguina moxae.AF396314
Subanguina radicicola.AF396365
Subanguina radicicola.AF396366
Mesoanguina picridis.AF396326
Mesoanguina picridis.AF396329
Mesoanguina pharangii.AF396330
Mesoanguina mobilis.AF396331
Ditylenchus gigas.HQ219231
Ditylenchus gigas.HQ219233
Ditylenchus oncogenus.KF612016
Ditylenchus oncogenus.AY574302
Ditylenchus sp.AY574287
Ditylenchus sp.AY574288
Ditylenchus dipsaci.AF396319
Ditylenchus dipsaci.AF396320
Ditylenchus gallaeformans.JQ429778
Ditylenchus gallaeformans.JQ429779
Orrina phyllobia ITS.186
Orrina phyllobia ITS.188
Ditylenchus phyllobius.AF363112
Aphelenchoides ritzemabosi.EU186067
0.1
Ditylenchus dipsaci.FJ707361
Ditylenchus dipsaci.FJ707362
Ditylenchus dipsaci.FJ707360
Ditylenchus gigas.HQ219215
Ditylenchus gigas.HQ219216
Ditylenchus oncogenus.KF612015
Subanguina radicicola.DQ328721
Litylenchus coprosma.GU727547
Anguina tritici.DQ328723
Heteroanguina graminophila.DQ328720
Mesoanguina millefolii.DQ328722
Subanguina chilensis.DQ328724
Ditylenchus gallaeformans.JQ429770
Ditylenchus gallaeformans.JQ429769
Ditylenchus gallaeformans.KF494346
Orrina phillob ia 28S 191
Orrina phyllob ia 28S 192
Ditylenchus destructor.EU400640
Ditylenchus destructor.EU400630
Ditylenchus destructor.EU400625
Ditylenchus halictus.AY589364
Aphelenchoides fragaria.DQ328683
100
100
100
100
100
100
100100
100
100
100
10099.1170.37
99.99
98.82
100
100
100
100
100
100
85.37
88.93100
100
100
91.54
100
100
100
100
99.98
100100100
100
100
100100
93.68100
100
100
10099.99
96.08
57.53
50.8999.94
100
100
10010098.86
100
100
100100
99.96
82.51
99.58
97.82
100
100
99.99
100
100
10099.99
100100
100100
100100
99.86
100
10099.98
100
100
100
100
100
100
59.86
A B
Fig. 3 Caractersticas morfolgicas de Orrina phyllobia.A) Capsula
ceflica de hembra; B) Espcula y bursa ; C) Campos laterales; D
Estilete y ndulos pequeos; E) Cola de Macho; F) Saco
post-uterino.
A B C
D EF
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