Preinformes Bioqiomica 1 2 3 4

8/10/2019 Preinformes Bioqiomica 1 2 3 4

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UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

UNAD

PREINFORMES DE LABORATORIO

BIOQUIMICA

PRESENTADO POR

ELIZABETH PEZ

CODIGO: 10135960

10 DE SEPTIEMBRE DE !01"


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PRCTICA N#$ 1

METODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACION DE

AMINOACIDOS Y PROTEINAS

OB%ETIVOS

Que el estudiante reconozca los aminocidos como unidades estructurales de lasprotenas.

Que el estudiante analice, mediante reacciones cualitativas coloreadas la presencia deaminocidos y enlaces peptdicos en las muestras.

Que el estudiante establezca la relacin entre la estructura y la funcin de las protenasy prdida de esta al variar su pH y solubilidad (precipitacin y desnaturalizacin).

INTRODUCCION

Se realiza este pre informe relacionado con la prctica numero correspondiente alpro!rama de "io#umica, llamada METODOS CUALITATIVOS PARA LAIDENTIFICACION DE AMINOACIDOS Y PROTEINAS, con la intensin de abordar laprctica con conocimientos previos, enterados de los procedimientos #ue vamos a llevar acabo en el laboratorio y de esta manera a!ilizar y $acer ms fcil el desarrollo de la misma.%e i!ual manera tambin se $a consultado con anterioridad las normas de laboratorio ybiose!uridad.

Se espera #ue sea de a!rado al lector y #ue el documento cumpla con las e&pectativas yre#uisitos.

MARCO TEORICO

AMINOACIDOS: Son unidades de compuestos or!nicos #ue al unirse entre s forman lasprotenas necesarias para la e&istencia, funcionamiento y mantenimiento de nuestroor!anismo. Se pueden clasificar se!'n sus propiedades #umicas, minocidos con !rupo no polar (alifticos y aromticos), aminocidos con !rupo polar sin car!a, aminocidoscon !rupo con car!a positiva o aminocidos con !rupo con car!a ne!ativa.


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CLASIFICACIN NOMBRE AA ESECIAL / NO ESENCIAL

Aminocidos con grupo R no polar

Alifticos

Glicina Aminocido no esencial

Alanina Aminocido no esencialValina Aminocido esencial

Leucina Aminocido esencial

Isoleucina Aminocido esencial

Aminocidos con grupo R no polar

Aromticos

Fenilalanina Aminocido esencial

Triptfano Aminocido esencial

Metionina Aminocido esencial

Prolina Aminocido no esencial

Aminocidos con grupo R polar sin

carga

Serina Aminocido no esencial

Treonina Aminocido esencial

Asparagina Aminocido esencial

Glutamina Aminocido no esencial

Cistena Aminocido no esencial

Tirosina Aminocido no esencial

Aminocidos con grupo R con

carga negativa

Acido asprtico Aminocido no esencial

Acido glutmico Aminocido no esencial

Aminocidos con grupo R con

carga positiva.

istidina Aminocido esencial

Lisina Aminocido esencial

Arginina Aminocido no esencial ! esencial"

depende de la edad" es esencial

para los #$enes en crecimiento"

pero no lo es para los adultos%

R&'(()*+ ,& -' +)+.),/)+': *s positiva para aminocidos y protenas #ue ten!an un !rupo+H- libre. uando el !rupo +H- reacciona con nin$idrina, se forma un comple/o azul+violeta.

R&'(()*+ '+#2/#&)(': 0os anillos fenilo #ue conten!an un !rupo activante pueden sernitrados produciendo un compuesto marillo

R&'(()*+ ,& )--#+: *s un *nsayo #umico #ue sirve para saber si e&iste tirosina en la

solucin, si esto es as se !enera un co!ulo blanco #ue por calentamiento pasa al ro/ocarne.

R&'(()*+ ,&- 4(),# -)#-)(# # R&'(()*+ ,& H#27)+8 C#-&1 *l anillo indlico presente enla cadena lateral de los alfa+aminocidos libres o $aciendo parte de pptidos y protenas sepuede reconocer mediante reaccin con el cido !lio&lico a pH cido, puesto #ue formacomple/os de coloracin violeta o amarillo violeta, permitiendo as identificar al triptfano.


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P/&' ,& P'-;: *sta prueba es especfica para detectar !rupos imidazoles, fenoles yaminas de ciertos aminocidos. *n esta prueba el cido sulfanilico disuelto en cidoclor$drico se mezcla con el nitrito de sodio se produce cido nitroso, el cual reacciona conla sal produciendo sal de diazonio. *n la se!unda etapa de esta prueba se le incorpora uncompuesto fenlico, imidazol o amina y un cido o base dbil para #ue la sal de diazonio se

asocie con el compuesto !enerando un compuesto azo de color ro/o.P/&' ,&- N)/# 2/8)'#: *n esta reaccin los aminocidos #ue presentan !rupossulf$dricos libres como en la cistena los cuales reaccionan con el nitro prusiato de sodioen presencia de un $idro&ico de amonio concentrado produciendo una reaccin concoloracin ro/iza.

R&'(()*+ ,& S'7'(.): *l !rupo !uanidinio presente en la cadena lateral de la r!ininareacciona con soluciones de alfa naftol en presencia de bromo en medio alcalino formandocomple/os coloreados rosados o ro/os.

P/&' ,& B)/&: *s una prueba !eneral para protenas, no especifica. uando una

protena reacciona con sulfato de cobre (22) (color azul) se forma como respuesta positivaun comple/o color violeta.

PROCEDIMIENTOS

P/&'8 C'-)')


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P'/' -' 8#-()*+ ,& (-'/' ,& .& !

FRACCIONAMIENTO DE PROTE?NAS EN SEMILAS DE LEGUMINOSAS YCEREALES POR SOLUBILIDAD

OB%ETIVOS

Haga un pequeo orifcio en uno de losetremos del !uevo y vierta por l a

clara en un vaso precipitado, dejando

Agregue a la clara 10 ml de aguadestilada y agite con el fn de

"ecoja los fltrados en vaso deprecipitado previamentemarcados# $esec!e los


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Que el estudiante compruebe la teora con la prctica en relacin al comportamientose!'n la solubilidad de protenas.

Que el estudiante obten!a las fracciones de alb'minas, !lobulinas, pro lminas y!lutelinas a partir de te/idos biol!icos.

Que el estudiante calcule mediante espectrofotometra, la concentracin de protenas encada una de las fracciones anteriores

INTRODUCCION

Se realiza este pre informe relacionado con la prctica numero - correspondiente alpro!rama de "io#umica, llamada FRACCIONAMIENTO DE PROTENAS EN SEMILASDE LEGUMINOSAS Y CEREALES POR SOLUBILIDAD, con la intensin de abordar laprctica con conocimientos previos, enterados de los procedimientos #ue vamos a llevar acabo en el laboratorio y de esta manera a!ilizar y $acer ms fcil el desarrollo de la misma.

%e i!ual manera tambin se $a consultado con anterioridad las normas de laboratorio ybiose!uridad.

Se espera #ue sea de a!rado al lector y #ue el documento cumpla con las e&pectativas yre#uisitos.

MARCO TEORICO

SOLUBILIDAD DE LAS PROTEINAS: 0as protenas son solubles en a!ua cuandoadoptan una conformacin !lobular. 0a solubilidad es debida a los radicales (+) libres delos aminocidos #ue, al ionizarse, establecen enlaces dbiles (puentes de $idr!eno) con lasmolculas de a!ua. s, cuando una protena se solubiliza #ueda recubierta de una capa demolculas de a!ua (capa de solvatacin) #ue impide #ue se pueda unir a otras protenas locual provocara su precipitacin (insolubilizacin). *sta propiedad es la #ue $ace posible la$idratacin de los te/idos de los seres vivos.

DESNATURALIZACION DE LAS PROTEINAS: Se refiere a la ruptura de los enlaces#ue mantenan sus estructuras cuaternaria, terciaria y secundaria, conservndose solamentela primaria. *n estos casos las protenas se transforman en filamentos lineales y del!ados

#ue se entrelazan $asta formar compuestos fibrosos e insolubles en a!ua. 0os a!entes #uepueden desnaturalizar a una protena pueden ser1 calor e&cesivo3 sustancias #ue modificanel pH3 alteraciones en la concentracin3 alta salinidad3 a!itacin molecular3 etc.

CLASIFCACI@N DE OSBORNE DE LAS PROTE?NA 1 Se!'n 4sborne, las protenasve!etales pueden clasificarse se!'n su solubilidad en1 alb'minas, !lobulinas y !lutelinas.0as alb'minas corresponden al !rupo de protenas #ue son solubles en a!ua destilada y ensoluciones salinas diluidas. 0as !lobulinas son insolubles o muy li!eramente solubles en


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a!ua destilada pero son solubles en soluciones salinas diluidas. on base en las propiedadesde solubilidad no es posible distin!uir entre alb'minas y seudo!lobulinas. Si se aplican losconceptos de precipitacin por salado, se observa #ue las !lobulinas precipitan ensoluciones de sulfato de amonio del 567 de saturacin, mientras #ue las alb'minas lo$acen a concentraciones mayores del 857 de saturacin. *stas precipitaciones son me/ores

si se $acen a pHs cercanos a sus puntos isoelctricos. 0as prolaminas son insolubles ena!ua pero se disuelven en soluciones acuosas de alco$oles de ba/o peso molecular, enconcentraciones entre el 56 y el 967. 0as !lutelinas son insolubles en los solventesanteriores pero se solubilizan en soluciones diluidas de cido o bases. *stos dos 'ltimos!rupos solo se encuentran en mate riales ve!etales, mientras #ue las protenas animalesestn constituidas bsicamente por alb'minas y !lobulinas.

MTODOS CUANTIATIVOS PARA LA DETERMINACI@N DE PROTE?NAS

METODO BIURET: Se basa en la formacin de un comple/o coloreado entre el u-: ylos !rupos H de los enlaces peptdicos en medio bsico. u-: se acomple/a con ; H.

0a intensidad de coloracin es directamente proporcional a la cantidad de protenas y lareaccin es bastante especfica, de manera #ue pocas sustancias interfieren. 0a sensibilidaddel mtodo es muy ba/a y slo se recomienda para la cuantificacin de protenas enpreparados muy concentrados por e/emplo en suero.

METODO FOLIN=LORY:


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M#,# ,& B)/&

Centri*ugar la suspensin a&0 rpm por 3 minutos

2aciar el sorenadante a un alna*orado de & ml# Al residuo agregarde nuevo otros 10 ml de H&.

desminerali/ada y repetir

$espus de centri*ugar, elsorenadante de esta segunda

etraccin se adiciona al aln que

e completa su volumen a & mlcon H&. desminerali/ada !asta el

enrase# As+ se tiene separada la

ore el residuo que queda de laseparacin de las al4minas, se

repite a!ora todo el proceso

$espus de centri*ugar, lossorenadantes de la primera y

segunda etraccin con 5aCl al 16,se llevan a otro aln a*orado de &ml y se completa !asta el enrase con

el mismo 5aC7 al 16# 8sta es la

ore el residuo anterior se etrae enidntica *orma la *raccin de las

prolaminas, usando esta ve/ alco!olet+lico al 96 y una temperatura de

;

%or 4ltimo sore el mismo residuo,con la adicin de solucin de 5a.H

0#1 5 y aplicando el mismoprocedimiento general, se separa la

ore cada uno de los etractos quecontienen las di*erentes *racciones

cada grupo proceder( a ladeterminacin de prote+nas, aplicando

=a curva de caliracin se !ar(utili/ando como patrn una

solucin de al4mina de !uevo


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M#,# ,& F#-+= -#/;

PRACTICA > 3

ENSAYOS ENZIMATICOS CUALITATIVOS

OB%ETIVOS

Que el estudiante entienda el papel de las enzimas como catalizadores de los diferentesprocesos bio#umicos y su importancia en los diferentes procesos metablicos.

%ara las muestras de soya, arveja y *r+jol, dlas *racciones de al4minas y glutelinas

deer( tomarse para cada una y por apartuna al+cuota de 0, ml y levarse a un

volumen de ml 'dilucin 1 a 10- con agudesminerali/ada para las al4minas y con

5a.H 0,1 5 para las glutelinas# 8stas

Me/clar ien y dejar en reposo por

30 minutos a temperaturaamiente o introducir los tuos enun ao de agua a 30;C durante 10minutos para desarrollo del color

=eer en cada tuo porcentaje detransmitancia a >0 nm usando el

tuo < para ajustar el 106 de

A 1 ml de muestra agregue ml de

una solucin alcalina 'me/clar 0 mlde la solucin alcalina de caronatode sodio m(s 1 ml de solucin de

Me/cle vigorosamente y deje reposar

a temperatura amiente por 10 min om(s# Agregue 0# ml del reactivo de@olin en *orma r(pida y me/clando

8n 1 tuos de ensayorotulados pipetear encu las cantidades de

$espus de 30 minutos lea laAsorancia a 90 nm# Btilice un

$etermine la concentracin deprote+nas de una solucin prolema

despus de preparar una curva


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Que el estudiante analice mediante reacciones cualitativas la actividad enzimtica de lasacarasa y alfa+amilasa.

Que el estudiante establezca relaciones entre la estructura y la funcin de las enzimas yprdida de esta al variar al variar su temperatura ptima de traba/o.

INTRODUCCION

Se realiza este pre informe relacionado con la prctica numero B correspondiente alpro!rama de "io#umica, llamada *S>4S *C2DE24S


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PROCEDIMIENTOS

E2&/)&+# N#$ 1 S'('/'8' E/'(()*+ ,& -' &+)'

E2&/)&+# N#$ !: =')-'8' O&+()*+ ,& -' &+)':

ome 19 gramosde levadura

granulada en un

Bna ve/ reducida apolvo, transfrala a

un vaso de precipitadoque contenga 100 mlde agua destilada y

2ierta el fltrado en un vaso de

precipitado y agregue 0 ml deacetona# Me/cle ien y deje la

$ecante parte del l+quido cuidandode no perder el precipitado porque

es donde est( la en/ima sucrasa,colquela en !ielo para evitar ladesnaturali/acin# Marque elreci iente como .=BC7D5 $8

@iltre a travsde tela y luego

a travs depapel de fltroen un emudo#

e dee recolectaruna muestra de

saliva paraotener una

%ara ello enju(guesevarias veces con aguade olsa y proceda a

recoger en un eaEer de0 ml aproimadamente

10 ml de saliva#

Adicione a lasaliva 10 ml deagua destiladay me/cle ien


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P/&2'/'()*+ ,& -' 8#-()*+ ,& &+)' ; E&(# ,& -' (#+(&+/'()*+ ,& -' &+)' 8#/&-' "

ESTUDIO CINTICO DE LA UREASA

OB%ETIVOS

Que el estudiante entienda el papel de las enzimas como catalizadores de los diferentesprocesos bio#umicos y su importancia en los diferentes procesos metablicos.

@iltre la solucin de saliva y rotule el

erlenmeyer como .=BC7D5 $8 85F7MAG AM7=AA, mantngala incuada a 39 3IC

e dee recolectaruna muestra de

saliva paraotener una

%ara ello enju(guesevarias veces con aguade olsa y proceda a

recoger en un eaEer de0 ml aproimadamente

10 ml de saliva#

@iltre la solucin de saliva y rotule elerlenmeyer como .=BC7D5 $8 85F7MA

Adicione a lasaliva 10 ml deagua destilada

y me/cle ien


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Que el estudiante eval'e la capacidad enzimtica de la ureasa frente a cambios de pH,concentracin de enzima y temperatura.

Que el estudiante compare mediante dos mtodos (espectrofotomtrico y volumtrico),la capacidad enzimtica de la ureasa frente a cambios de pH, concentracin de enzima ytemperatura.

INTRODUCCION

Se realiza este pre informe relacionado con la prctica numero B correspondiente alpro!rama de "io#umica, llamada *SE


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D&&/)+'()*+ ,& -' '()

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