Protocolo de investigación:

CORRELACIÓN DE OBESIDAD CON INFECCIÓN POR ADENOVIRUS SEROTIPO 36, Y

EXPRESIÓN DE GENES ADIPOGÉNICOS: PPAR-G, CEBP-B. EN ADULTOS OBESOS DEL

ESTADO DE COLIMA.

Introducción: La obesidad es una enfermedad metabólica crónica, se define como un

exceso de grasa corporal, es perjudicial para la salud, es acompañada de un peso

superior al considerado como normal para una persona con la misma talla, edad y sexo.

Clásicamente diversos estudios han demostrado los riesgos para desarrollar obesidad al

ser asociado con el comportamiento alimentario, el sedentarismo, factores ambientales

etc. Si la obesidad no es causada sólo por el exceso de la dieta junto con la disminución

de la actividad, entonces es necesario identificar otros factores etiológicos. Nuevas

pruebas apoyan al AD-36 como una posible causa de la obesidad humana. El efecto

adipogénico del AD-36 en animales, provee un estímulo para realizar investigaciones en

los seres humanos. Con base en lo anterior se platea la siguiente pregunta: ¿La carga

viral del AD-36 esta correlacionada con obesidad y una sobre expresión de los genes

PPARg y ADIPOQ en sujetos con obesidad del Estado de Colima?. Justificación.

Recientes estudios han demostrado que sujetos de los EE.UU, se encontró una

frecuencia del AD-36 del 30% en sujetos obesos y el 11% en no obesos. Posiblemente el

AD-36 puede ser un factor que contribuye a la creciente problema de la obesidad en todo

el mundo (2) en México desconocemos la frecuencia del AD-36 y si este esta

correlacionada con la obesidad y más aún se desconoce si la infección de este AD-36 se

correlacionada con la expresión de genes adipogénicos, PPAR- γ, ADIPOQ, el presente

trabajo contribuirá a un mayor conocimiento de la obesidad, esta investigación pueda

servir de base como estrategia para la identificación del AD-36 y convertirse en un

pequeño paso que pretende ayudar a resolver el problema concreto de la obesidad.

OBJETIVO GENERAL: Analizar la correlación entre la carga viral del Ad-36 y la

expresión de los genes PPAR-g y ADIPOQ en adultos obesos y no obesos del estado de

Colima. OBJETIVOS ESPECÍFICOS: Describir la frecuencia de Ad-36 en sujetos obesos

y no obesos. Conocer la expresión de los genes PPAR-G y ADIPOQ en sujetos obesos y

no obesos. Correlacionar el IMC de obesos y no obesos con la carga viral del Ad-36.

Correlacionar las variables, expresión de los genes PPAR-G y ADIPOQ con la presencia

de Ad-36, en sujetos obesos y no obesos.

MÉTODOS: Mediante un estudio de casos y controles, se analizaron sujetos Adultos con

IMC normal y obesos del estado de Colima que fuesen intervenidos quirúrgicamente, en

el HGZ No 1 de Colima del Instituto Mexicano del seguro Social del estado de Colima u

otras instituciones de salud del estado de Colima. Donde los casos fueron obesos con

IMC superior a 30 y los controles son adultos con un IMC de 18.5 a 24.9 la Antropometría

se tomó según el manual de antropometría del SLAN, a los sujetos se les dio a leer una

carta de consentimiento informado y las personas que decidan participar se les tomó

mediciones antropométricas acompañada de un cuestionario y se tomo una muestra de

0.15g de tejido adiposo y 10 ml de sangre periférica, las muestras de tejido adiposo fueron

depositadas en tubos con RNAlater, posteriormente congeladas y almacenadas a –80ºC

lo mas rápido posible después de la extracción, la extracción de ADN fue con la técnica

Fenol-Cloroformo y la extracción de RNA se realizo con el reactivo TRIZol y de acuerdo

con las especificaciones del proveedor, para la RT-PCR se utilizó el kit SuperScript ® III

First-Strand Synthesis System for RT-PCR de acuerdo con las especificaciones del

proveedor, para determinar la expresión de los genes y la carga viral se utilizó la técnica

qPCR, La cual consistió en: un volumen total de 10 μl, conteniendo: 1X de Master Mix

(FastStar Taq DNA polimerasa, buffer de reacción, MgCl2 y una mezcla de los dNTPs),

0.5 μM de cada primer, 2 μl de DNA genómico y la cantidad de H20 inyectable necesaria

para completar 10 μl de mezcla total. La amplificación y detección fue desarrollada

utilizando el termociclador Lightcycler versión 1.5 de Roche Diagnostics con el siguiente

programa: pre-incubación 1 ciclo a 95 °C , 10 min; amplificación y cuantificación 35 ciclos

a 95 °C, 10 seg., según la temperatura de los primers para (ADIPOQ, PPAR-g y

Adenovirus 36 ), 20 seg., 72 °C, 1 seg.; Enfriamiento 1 ciclo 40 °C, 30 seg. El análisis de

los datos de qPCR en Tiempo Real: Se empleo el software Lightcycler versión 1.5. Para el

análisis estadístico se empleara promedios, desviación estándar y porcentajes. La

comparación de promedios entre grupos se analizara con t de Student o U de Mann-

Whitney. La comparación de porcentajes se utilizara la prueba X2 o exacta de Fisher. Para

determinar el factor de riesgo utilizamos la razón de momios (OR), fracción atribuible y

fracción prevenible. El intervalo de confianza (IC) será del 95 % y se considerara

significancia estadística cuando p < 0,05, donde se aplicarán los paquete estadístico

EPIINFO 2000 y SPSS V20.

Resultados. Se captaron 48 sujetos de estudio, la edad promedio fue de 44 años (∓) 10.3

años el 34,5% fueron hombres y el 63,5% fueron mujeres, el 36,4% fueron no obesos y

63,6% obesos en la tabla 1 se muestran los datos antropometricos, sin embargo 44

cuentan con historia clínica completa, de ellos, al 70% se ha extarido ADN y 20% RNA.

Las muestras de DNA y RNA se ha empezado a estandarizar, para la amplificación de los

genes deseados. Se procedió a estandarizar el E4 orf-1 a 66 grados centígrados, donde

se observa un amplificado a 212 pb, detectando el E4 orf-1, del adenovirus 36 y se

continua la estandarización de las técnicas para: carga viral y qPCR. Por el momento no

se tienen mas resultados debido a la falta de muestras, por lo cual se ha implementado

ajustes para lograr la n necesaria para el estudio entre esas correcciones están la

captación de pacientes en otras clínicas de salud del estado de Colima.

Cuadro 1. Estadísticos descriptivos de la antropometría población de estudio.

N Media Desv. típ.

Porcentaje de Grasa 44 30,7750 9,66254

Circunferencia de cintura 44 99,0455 12,37769

Circunferencia de cadera 44 107,4773 18,94237

Peso 44 75,5477 13,23720

Talla 44 1,6141 ,10573

N válido (según lista) 44