Provas_Bioquimicas

8/3/2019 Provas_Bioquimicas

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Hidratos de Carbono

ProvasFermentativas Actividade da -galactosidase(P. ONPG)

P. de Kligler Iron Agar oude Triple Sugar Iron Agar Hidrlise doamido

Objectivo Identificar microrg. anaeriosfacultativos.

Fermentao r. bioqumicaprodutora de energiua, em q as

molculas orgnicas soaceitadores finais de e-.Hidrato de

carbonoComp.Org. cido +H2O/CO2

Identifica microrg. q podemusar a lactose c/o fonte de

carbono

Identificar s gneros deEnterobacteriaceae e p/ distinguir esta

famlia de outros Bacilos Gram -.Avalia fermentao de hidratos de

carbono e produoi de H2S.

Amido = amilose +amilopectina, porhidrlise forma

dextrinas, glicose e

maltose

Enzima - -galactosidase + enzima detransporte p/ interior

- -amilase

Meio

utilizado

Meio lquido c/ nutrientesHidrato de carbono especfico

Indicador de pHTubo de Durham detectar

produo de gs.

Meio c/ gua destiladaLactoseONPG

-

ReagenteouIndicador

Vermelho de FenolPrpura de Bromocresol

ONPG o-nitrofenil--D-galactopiranosdeo, c/osubstracto p/ a enzima

(incolor)

Iodo (complexo azulaqd contacto c/ o amido)

R.Positiva

Rosa/Amarelo e produo degsFermentao alcolica

produo de gs, s/ mudanade cor

ONPG (hidrlise)

o-nitrofenol Amarelo, em meioalcalino

Iodo+ meioc/amido+crescimentobacteriano zona

clara

R.Negativa

S/ mudana de corS/ produo de gs.

Incolor

TSI: [glicose]= 1%, [lactose] >1%,vermelho de fenol (presena de cidos),tiossulfato de NA (substrato p/ formar

H2S), sulfato de Fe (detectar H2S).Kligler: igual ao TSI + [sacarose]> 1%.

(meio em rampa)Cilindro amarelo (cido) e Rampavermelha (Base) - Glicose fermentada;Cilindro amarelo (cido) e rampa Amarela(cida) fermentao da lactose/sacarose

e glicose.Cilindro vermelho (base) e rampa amarela(cida) no fermentou os hidratos decarbono;Produo de gs fracturas no meio decultura;Produo de H2S enegrecimento (o H2Sliga-se ao Ferro originando sulfureto de

ferro q precipita.

Iodo+ meioc/amido+crescimento

bacterianopermanece azul.


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Protenas, Aminocidos e enzimas

P. do Sulfureto deHidrognio

Hidrlise da Gelatina Hidrlise da Casena

Objectivo Capacidade de produo de H2Sa partir de a.a. sulfurados ou

compostos sulfuradosinorgnicos.

Capacidade do microrg. excretar umaenzima capaz de degradar a gelatina.

Esta resulta da degradao do colagnio.Usada p/ diferenciar microrg e p/

determinar a sua patogenicidade.

Capacidade do microrg. excretar umaenzima capaz de degradar a casena.

Esta a prot. Mais importante do leite

Enzima Cistena dessulfaraseTiossulfato reductase

Gelatinase Protease

Meio utilizado Agar SIM (q tem cistena), c/Tissulfato de sdio (substrato

sulfurado).( um meio semi-sliodo, q permite

avaliar a mobilidade e a produo deindol)

Inoculao p/ picada em meio nutritivo emtubo, c/ 12% de gelatina.

Incubao 37C durante 24-48 h; 4Cdurante 30min ou em gelo durante 3-5min.

Agar Milk agar nutritivo suplementadoc/ leite, um meio opaco.

Reagente ou

Indicador

Sulfato ferroso amoniacal(Fe(NH4)2SO4) indicador da

presena de H2S.

- -

R. PositivaPrecipitado negro insolvel (o

H2S-incolor- ao combinar-se c/ oFe precipita.

Gelatinase + meio lquido apsrefrigerao

Perda da opacidade, devido hidrlise eformao de a.a. solveis e n coloidais.

R. Negativa S/ alterao. Gelatinase - meio resolidifica Manuteno da opacidade do meio.


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Provas IMViC ( Indole, Methyl-red, Voges-Proskauer,Citrate)

P. Indol P. do Vermelhode Metilo

P. de Voges-Proskauers

P. do Citrato

Objectivo Capacidade de degradar o a.a.triptofano

Oxidao da glicose e

manuteno de

concentraes elevadas de

produtos finais cidos.

Capacidade de produo de

produtos finais n cidos, ex.

acetilmetilcarbinol (acetona)

Capacidade de usar o citrato

como nica fonte de carbono

Enzima Triptofanase (marcadorbioqumico)

- - Citrato Permease (transporte do

citrato para o interior do micror.)

Citrase

(citrato c. Oxaloactico +

acetato c. Pirvico + CO2)

Meio utilizado Meio c/ triptofano, ex. guaPeptonada

MR-VP (methyl-red,

proskauers)

MR-VP Meio Citrato ou de Simmons

(tubo em rampa)*

Reagente ou

Indicador

R. de Kovacs coloca-se nas

paredes do tubo para n se

misturar c/ o meio.

Indicador vermelho de

metilo (pto de viragem a

pH=4, p/ vermelho)

R.de Barritts (40% KOH e

sol de -aftol em etanol abs)

Indicador Azul de Bomotimol

R. Positiva Anel vermelho na superfcie Vermelho (pH< 4) Rosa/Vermelho (dps de15min)

Crescimento na rampa + cor azul

R. Negativa Amarelo Amarelo (pH >4) Ausncia de cor (ex.Enterococcus)

Ausncia de Crescimento + cor

verde

* meio em rampa, pq o O2 necessrio p/ utilizao do citrato. Qd este utilizado o micror. produz CO 2, q se combina c/ o Na, formandocarbonato de sdio, o q faz aumentar o pH e virar o indicador p/ azul.


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*A cultura no muda de cor: o microrg pode ter enzimas q reduzem os nitritos a azoto ou amnia e a reaco d negativa, ou ento os nitratos nforam reduzidos. Assim, adiciona-se ao meio zinco, que reduz os nitratos e muda o meio p/ vermelho, logo se no ocorreu reduo o meio torna-

se vermelho c/ o Zn (reaco negativa), porm se os nitritos forma reduzidos, a adio de Zn n altera o meio e considera-se reaco positiva.

Descarboxilao da Lisina Desaminao da

Fenilalanina

Reduo de Nitratos

Objectivo Remoo do grupo carboxilo de 1molcula org. e utilizao destas aminasp/ sntese de outras molculas ; reaco

favorecida em meio cido e anaerbio, pqna remoo do grupo cido aumentam o

pH do meio.

Remoo do grupo amina dafenilalanina, c/ produo dec.orgnicos (q podem ser

usados em reaces de sntese),gua e NH4

+.

Distinguir bactrias qdesaminam a fenilalanina c/produo de c. fenilpirvico

Ocorre na ausncia de O2.Os microrg. usam os nitratos (NO3

-) ou ossulfatos (SO4

2-) p fornecer O2 e funcionarc/o aceitadores finais de e-, na formao deenergia: os nitratos so reduzidos a nitritos

(NO2-

). Alguns ainda podem actuar nosnitritos c/ produo de NH4+ ou N2.

Enzima Descarboxilase da lisina Desaminase da fenilalanina

Meio utilizado Lisina + Glicose+ Iindicador+ leomineral (p/ impedir q o O2 atinja as

bactrias)

- Caldos de nitratos:0,5% de Nitrato de potssio0,1% de Agar (impede a difuso de O2-ambiente anaerbio)

Reagente ou

Indicador

Prpura de Bromocresol Cloreto de Ferro Soluo A c. SulanlicoSoluo B -naftilamina

R. Positiva 1) Fermentao da glicose meio cido:PrpuraAmarelo,

2) Activa enzimas pH sobe:AmareloPrpura.

Composto verde (cloreto de ferro+ c.fenilpirvico)

R. Negativa N h mudana de cor N h mudana de cor.

Vermelho Reaco +Ausncia de mudana de cor -2 hipteses

*:1) nitratos-nitritos- azoto ou amnia:adicionar Zn n ocorre mudana Reaco +

2) adicionar Zn vermelho Reao -


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Prova da Urease Prova daOxidase Prova da Catlase Prova da Coagulase

Objectivo Capacidade de degradar aureia.

Identificar espcies de Proteusrelativamente a bact entricas

lactose negativas.

Identificar microrg c/ basena actividade da enzimas

citocromo oxidase.Identifica bact aerbias,anaerbias facultativas e

microaerfilas.

Distinguir grupos deBacilos Gram negativopatognicos.

Avaliar a degradao doperxido de hidrognio, qleva morte das clulas.

Microrg aerbios, anaerbiosfacultativos ou

microaerfilos, que usam o

oxignio c/o aceitador finalde electres.

Capacidade de coagulao doplasma sanguneo.

Distinguir espcies patognicasde Staphylococcus de espcie n

patognicas. um bomindicador da patogenicidade do

S. Aureus.

Enzima Urease Citocromo oxidase: O2, p/reduo, forma H2O ecitocromo oxidado.

Catlase: H2O2/O2- H2O +

O2Coagulase

Meio utilizado Meio de Ureia de Christensen. - Meio em rampa c/ H2O2. Plasma + anticoagulante (oxalato, citrato ou heparina)

Reagente ouIndicador

Indicador Vermelho de Fenol(amarelo). Reagente das oxdases (dihidrocloreto de tetrametilp-fenilenodiamina)

- -

R. Positiva Rosa (ureia origina amnia q alcalina).

Rosa CastanhoNegro(na superfcie das colnias)

Libertao de bolhas de gs. Cogulo ( 2/6/24 h dps)

R. Negativa Amarelo. S/ mudana de cor ou rosaligeiro.

Ausncia de bolhas de gs.Nos microrg catlse -, a

enzima q degrada osuperxido a superxido

dismutase.

N forma cogulo.

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