Purificación de exo inulinasa. Del caldo de cultivo se centrifuga a 4000 rpm durante 10 min a 4°C, se recolecta el sobrenadante. La inulinasa en bruto, se fracciona y se deja durante la noche con sulfato de amonio saturado al 80%. El sedimento se recolecta después de una segunda centrifugación a 50.000 rpm x g durante 20 min a 4°C y se realiza una diálisis con buffer de acetato de sodio 0,1 M a pH 5,0 a una temperatura de 10 ℃ mediante el uso de una membrana de ultrafiltración (Amicon YM-10). (Zhang et al., 2005) ZHANG, L., ZHAO, C., OHTA, W. Y. & WANG, Y. 2005. Inhibition of glucose on an exoinulinase from Kluyveromyces marxianus expressed in Pichia pastoris. Process Biochemistry, 40, 1541-1545. Preparación de buffers Buffer de acetato de sodio 0.1M (pH 5,0) 1,15g de acetato de sodio anhidro disuelto en 140ml de agua destilada (solución 0.1M), luego se añaden 60ml de ácido acético y se ajusta a pH 5,0. Solución buffer de fosfatos 0.05M. Se disuelve 3.403g de fosfato de potasio monobásico (KH 2 PO 4 ) en 100ml de agua destilada recién hervida. Se disuelve 4.355g de fosfato de potasio dibásico (K 2 HPO 4 ) en 100ml de agua destilada. Se combinan ambas soluciones y se afora a 1000ml con agua destilada. Se ajusta el pH a 7.0 con un ácido o base fuerte antes de usarse.
Purificacin de exo inulinasa.Del caldo de cultivo se centrifuga
a 4000 rpm durante 10 min a 4C, se recolecta el sobrenadante. La
inulinasa en bruto, se fracciona y se deja durante la noche con
sulfato de amonio saturado al 80%. El sedimento se recolecta despus
de una segunda centrifugacin a 50.000 rpm x g durante 20 min a 4C y
se realiza una dilisis con buffer de acetato de sodio 0,1 M a pH
5,0 a una temperatura de 10 mediante el uso de una membrana de
ultrafiltracin (Amicon YM-10). (Zhang et al., 2005)
ZHANG, L., ZHAO, C., OHTA, W. Y. & WANG, Y. 2005. Inhibition
of glucose on an exoinulinase from Kluyveromyces marxianus
expressed in Pichia pastoris. Process Biochemistry, 40,
1541-1545.Preparacin de buffers Buffer de acetato de sodio 0.1M (pH
5,0) 1,15g de acetato de sodio anhidro disuelto en 140ml de agua
destilada (solucin 0.1M), luego se aaden 60ml de cido actico y se
ajusta a pH 5,0.Solucin buffer de fosfatos 0.05M. Se disuelve
3.403g de fosfato de potasio monobsico (KH2PO4) en 100ml de agua
destilada recin hervida. Se disuelve 4.355g de fosfato de potasio
dibsico (K2HPO4) en 100ml de agua destilada. Se combinan ambas
soluciones y se afora a 1000ml con agua destilada. Se ajusta el pH
a 7.0 con un cido o base fuerte antes de usarse.
