UNIVERSIDADE FEDERAL DO MARANHÃOCENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE

DEPARTAMENTO DE FARMÁCIACURSO DE FARMÁCIA

DISCIPLINA: TOXICOLOGIA CLÍNICA IIProfª. Dra. Camila Guimarães

Elton Santos Sousa

DETERMINAÇÃO ESPECTROFOTOMÉTRICA DE CARXIHEMOGLOBINA

São Luis-MA

2010

Introdução:

O chumbo é um elemento especialmente importante em saúde

ocupacional, devido a sua ampla utilização em processos industriais e

sua toxicidade aguda e crônica. Por ser altamente resistente a

corrosão atmosférica e à ação de ácidos, especialmente o sulfúrico,

este metal é muito utilizado em construções, na fabricação de baterias

chumbo-ácidas, na fabricação de produtos químicos, tubos, conexões

e como envoltório de cabos telefônicos e outros.

A toxicidade do chumbo se manifesta principalmente em quatro

sistemas: gastrointestinal, renal, nervoso e hematopoiético, sendo

este último de grande importância no monitoramento biológico à

exposição a este metal. O principal efeito do chumbo neste sistema é

a redução dos níveis do grupo prostético heme, causado pela inibição

de algumas enzimas utilizadas na síntese da hemoglobina, devido a

ligação do metal à enzima ácido -aminolevulínico desidratase (ALA-

D), causando o acúmulo do ácido delta aminolevulínico (ALA) no

sangue e na urina (Alessio & Foá, 1983; ATSDR, 1990; Landrigan,

1989; Paolielo et al., 1993). Deste modo, a determinação da

concentração do ácido -aminolevulínico urinário (ALA-U) tem sido

proposta para o monitoramento da exposição ocupacional ao chumbo,

paralelamente aos níveis do metal no sangue (Pb-S).

O chumbo elementar é um metal de aparência acinzentada, classificado no

grupo IV-B da tabela periódica,cujo o principal minério é a galena (pbS).A via

respiratória é tida como a de maior importância na exposição ocupacional ao

chumbo inorgânico.A meia-vida do chumbo no sangue e nos tecidos moles é

similar,da ordem de 30 a 35 dias, e no osso é estimado em 30 anos.A

eliminação do chumbo é feito prepoderantimente pela via renal(cerca de 70%)

e fecal (cerca de 10%).Para o chumbo inorgânico existe vários indicadores

biológicos sendo dois de dose interna:chumbo sanguineo (pb-S) e chumbo

urinário(pb-U) A determinação de chumbo no sangue (pb-S) é referida como o

melhor indicador e o mais aceito para avaliação biológica das exposições ao

metal,mais como esta querendo determinar ácido delta animo levulénico na

urina(ALA-U) o fluido biológico de escolha é a urina pois na síntese do heme o

ALA-U é o metabólito do cumbo que é excretado na urina.

Matérias, Reagentes e Solventes:1.Material biológico:urina2.Solventes e Reagentes:Acetato de etilaAcetoacetato de etilaTampão acetato 1 M(82g/L),pH 4,6Reativo de Erlich modificado-preparar no momento do uso

p-amino dimetil benzaldeido 2gÁcido acetrico glacial 60mlÁcido perclórico 8,5mlÁgua destilada 10mlAcido acético glacial qsp... 100ml

3.Solução-padrão:Solução estoque(1600 mg/L) preparada em tampão acetato 1M pH 4,5

(estável indefinidamente se armazenada em freezer,ao abrigo da luz).Curva de calibração:1.28/2,56/5,12/12,8mg/L(preparado em tampão

acetato 1M pH 4,6)-estável por um mês se armazenado em geladeira, ao abrigo da luz.

PROCEDIMENTO (ALA-U)

Utilisou-se sete tubos de extração com tampa esmerilhada;

No primeiro tudo,que é da amostra, adiciona-se 1mL de urina, 1mL de

tampão e 200µL de acetato de etila;

No segundo tubo, o brando da amostra, contém 1mL de urina e 1mL de

tampão;

Nos tubos da curva de calibração, que são o 3,4,5 e 6 com

concentrações 1,28; 2,56; 5,12 e 12,8 respectivamente deve-se adicionar

1mL de água, 1mL de padrão e 200µL de acetato de etila, em cada hum

dos tubo;

E no sétimo tubo, que é o branco da curva, deve-se adicionar 1mL de

água e 1mL de tampão.

Em seguida vedar todos os tubos com fita teflon e agitar em mixer 5s;

em banho Maria deixa ferver durante 10 minutos, o banho Maria serve

para ´promover a interação do ALA-U com o acetato de etila,

em seguida deixe esfriar e logo após deve-se adicionar 3mL de acetato de

etila e vedar com fita teflon cada um dos tubos.O acetato de etila é o

agente extrator,ele extrai o grupo pirrou da urina;

Agitar durante 10 minutos;

Desprezar a fase aquosa de todos os tubos;

Transferir 2mL, de cada tubo, da fase orgânica para um tubo de ensaio e

adicionar 2mL do Reativo de Erlich, esse reativo tem a função de reagir

com o ALA-pirroul formando o ALA-pirrol-Erlich que é a substancia colorida

e essa substancia colorida é quantificada no aparelho.

Agitar em mixer durante 5 segundos;

Aguardar 10 minutos

Ler em 553nm contra o respectivo branco.

Matérias, Reagentes e Solventes(creatinina)

Material biológico:

Urina

Solventes e reagentes:

Solução saturada de ácido pícrico: 2g/l

NaOH 10%

Solução de picrato alcalino;3ml de NaOH 10% +15ml da solução de ácido

pícrico. Preparar imediatamente antes do uso.

Soluçao padrão:

Solução padrão estoque(1,0mg/l): 50mg de creatinina/ 50ml de HCL 0,1 N.

Adicionar 2 gotas de tolueno. Concervar em freezer.

Curva de calibração :0,002/ 0,005/ 0,01 e 0,02g/L(preparadas em água)

PROCEDIMENTO (CREATININA)

Usam-se seis tubos de ensaio onde serão adicionado o branco a

amostra e a curva de calibraçao;

No primeiro tubo, o branco, adiciona-se 5mL de água e 1mL de padrão;

No segundo tubo, o da amostra, coloca-se 25µL de urina, 5mL de água

e 200µL de acetato de etila;

Nos quatro últimos tubos, que são o da curva de calibração, com

concentrações 0,02; 0,01; 0,005 e 0,002 mg/mL respectivamente deve-se

adicionar 5mL da solução padrão em cada tubo;

Adicionar 2,5mL de picrato alcalino em todos os tubos;

Agitá-los em mixer durante 5 segundos;

Repouso de 15 minutos;

Ler em espectrofotômetro 525nm.

Resultados:

Calcular a concentração da amostra com base na curva de calibração

A amostra de urina do trabalhador exposto ao chumbo tem Absorbança = 0,41

Y= 0,0636x + 0,0154

0,41 = 0,0636x + 0,0154

X = 0,41 - 0,0154 = 6,20 mg/L

0,0636

Determinação do Kmédio

K1 = 0,093 → 0,0726 K2 = 0,185 → 0,0723

1,28 2,56

K3 = 0,338 → 0,0660 K4 = 0,83 → 0,0648

1,28 12,8

Kmédio = 0,0689

ALA-U mg/urina = 0,41 = 5,9507 mg/urina

0,0689

ALA-U mg/urina = 0,41 = 5,9507 mg/urina

0,0689

Calcular a concentração da amostra com base na curva de calibração

A amostra de urina do trabalhador exposto ao chumbo tem Absorbança = 0,032

Y= 33,874x + 0,0047

0,032 = 33,874x – 0,0047

X = 0,032 - 0,0047 → 0,000805x200 = 0,16 mg/L

33,874

Determinação do Kmédio

K1 = 0,071 = 35,5 K2 = 0,176 = 35,2

0,002 0,005

K3 = 0,343 = 34,3 K4 = 0,682 = 34,1

0,01 0,02

CONC ABS

0,002 0,071

0,005 0,176

0,01 0,343

0,02 0,682

Kmédio = 34,775

CREATININA mg/urina = 0,032 x 200 = 0,1840 mg/urina

34,775

VALORES DE ALA-U/CREATININA Pela curva

ALA-U mg/g creatinina = 6,20 → 38,75 mg/g creatinina

0,16

Pelo Kmédio

.

ALA-U mg/g creatinina = 5,9507 → 32,34 mg/g creatinina

0,1840

DISCUSSÃO E CONCLUSÃO

Índice biológico máximo permitido :

ALA-U – 10 mg/g creatinina (NR-7).

Chumbo urinário - 100µg/g creatinina (NR-7)

Chumbo no sangue: 60-µg/ 100 ml (NR-7)

ZnPP – 100 µg/ 100 ml (NR-7).

De acordo com o indice IBMP estabelecido pelo Ministério do Trabalho e Emprego (MTE) os valores encontrados estão acima do permitido, demostrando assim que o trabalhador estar exposto ao toxicante correndo vários risco de saúde, com isso esse paciente deve ser acompanhada e o MTE tem que intervir.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

MOREAU,REGINA LÚCIA DE MORAIS.toxicologia analítica/Regina Lúcia de Morais, Maria Elisa Pereira Basto de Siqueira.-Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2008.il.-(ciências farmacêuticas) CAD. SAUDE PÚBLICA vol.16 Rio de Janeiro/Mar. 2000