RENAL TRANSPLANT ALICILARINDAC5aR 450 C/T GEN POLİMORFİZMİ:

GREFT ÖMRÜ İLE T ALLELİ ARASINDAKİ İLİŞKİ

Ramazan GÜNEŞAÇAR1, Gerhard OPELZ2, Eren ERKEN3, Steffen PELZL2, Ramazan GÜNEŞAÇAR1, Gerhard OPELZ2, Eren ERKEN3, Steffen PELZL2, Bernd DOHLER2, Andrea RUHENSTROTH2, Caner SÜSAL2

1Mustafa Kemal Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Biyoloji ve Genetik Anabilim Dalı, Hatay- Türkiye

2Heidelberg Üniversitesi Tıp Fakültesi Transplantasyon İmmünolojisi Bölümü, Heidelberg- Almanya

3Çukurova Üniversitesi Tıp Fakültesi İmmünoloji- Romatoloji Bilim Dalı, Adana- Türkiye

GİRİŞ VE AMAÇ

• Anafilatoksin C5a, kompleman sisteminin 5.komponentinin kesilmesi sonucu oluşan 74amino asitlik bir proteindir.

• C5a; inflamatuvar hücrelerin kemotaksisi,mast hücreleri, nötrofil ve makrofajlarınmast hücreleri, nötrofil ve makrofajlarındegranülasyonu ve immün sistemhücrelerinden sitokin üretimi de dahil olmaküzere birçok biyolojik aktiviteye sahiptir.

• Bu fonksiyonlarından başka, vasküler endotelyal hücreleri uyararak vasküler permeabilitede artışı ve adezyon moleküllerinin ekspresyonunu sağlamaktadır.

• C5a’nın üriner sekresyonunun, akut renal • C5a’nın üriner sekresyonunun, akut renal allograft rejeksiyonunun erken tanısında önemli bir marker olabileceği ileri sürülmüştür.

Giriş ve Amaç

• C5a, inflamatuvar fonksiyonlarını C5areseptörüne (C5aR, CD88) bağlanarakdüzenlemektedir.

• C5aR 350 amino asitten ibaret olup; nötrofil,eozinofil, bazofil, mast hücreleri, dentritikeozinofil, bazofil, mast hücreleri, dentritikhücreler, active T ve B hücreleri ile böbrektübüler epitelyal ve mezengial hücrelertarafından eksprese edilmektedir.

Giriş ve Amaç

• C5aR geni 19. kromozomun kısa kolunda lokalizedirve bu gende günümüze kadar en az yedi adetgenetik varyasyon saptanmıştır.

• Çalıştığımız C5aR 450 C/T transisyonunda C yerineT geçmekte fakat bu değişim proteinin amino asitdizilişinde değişikliğe neden olmamaktadırdizilişinde değişikliğe neden olmamaktadır(GCC>GCT, Ala>Ala).

• Bununla birlikte Manceau ve ark., amino asitdeğişikliğine yol açmayan bu genetik varyantın C5aRmRNA’sını stabilize ederek etkili olabileceğiniönermişlerdir.

Giriş ve Amaç

• Son yıllarda C5aR inhibisyonunun dokuhasarını önleyerek renal allograftrejeksiyonundan koruyucu ve C5aR’nin önemlibir terapötik hedef olabileceğini gösterençalışmalar mevcuttur.

• C5aR blokajının IL-10, IL-12 ve TNF alfa gibisitokinlerin üretimini baskıladığı gösterilmişolup, C5aR inhisyonunun inflamasyonuönlediği bildirilmiştir.

Giriş ve Amaç

• C5a anafilatoksin inflamatuvar fonksiyonlarını aktive T ve B hücreleri ile granülositlerin yüzeyindeki C5aR’üne bağlanarak düzenlemektedir.

• C5a-C5aR bağlanması bu hücrelerdeproliferasyona ve inflamatuvar ve sitotoksikmadiatörlerin salınımına, sonuç olarak ta allografthasarına neden olabilir.

Giriş ve Amaç

• Bu bulgulardan yola çıkarak;

• C5aR gen varyasyonlarının graft ömrünüetkileyebileceği düşüncesiyle, çalışmamızdarenal transplant alıcılarında C5aR 450 C/Trenal transplant alıcılarında C5aR 450 C/Tpolimorfizminin rejeksiyonla ilişkisini ve greftyaşamındaki rolünü araştırmayı amaçladık.

Giriş ve Amaç

MATERYAL VE METOT

• Çalışmada Collaborative Transplant Study(CTS, Heidelberg, Almanya) DNAbankasından sağlanan 742 bireye ait genomikDNA örneği kullanıldı.

• Bu örneklerin 187 adedi sağlıklı kontrolgrubuna, 555 adedi ise renal transplantalıcılarına aitti.

Transplant grubuna dahil edilen 555 DNAörneğinin 290’ı transplantasyon sonrası ilk biryıl içerisinde rejeksiyon tedavisi almamışfonksiyonel grefte sahip kadaverik böbrekalıcılarına (non-rejektör)

• 265’i ise transplantasyon sonrası ilk bir yıl• 265’i ise transplantasyon sonrası ilk bir yıliçerisinde immünolojik nedenlerle greftinikaybetmiş kadaverik böbrek alıcılarına(rejektör) aitti.

Materyal ve Metot

• Sağlıklı kontrol ve transplant gruplarının C5aR450 C/T genotipleri PCR-RFLP tekniğikullanılarak belirlendi.

Materyal ve Metot

BULGULAR

Tablo 1: Transplant alıcılarının demografik özellikleri

Non-Rejektörler Rejektörler

Hasta sayısı (555)Cinsiyet

Erkek Kadın

Hasta yaşı (Mean ± SE)Donör yaşı (Mean ± SE)Soğuk iskemi zamanı (h) (Mean ±SE)PRA

< %5

290

163 (%56.2)127 (%43.8)45.2 ± 0.732.8 ± 0.519.8 ± 0.5

247 (%85.2)

265

149 (%56.3)116 (%43.8)34.2 ± 0.7 35.5 ± 0.520.8 ± 0.6

220 (%83.0)< %5≥ %5

HLA-A+B+DR mismatch< 3≥ 3

İmmünosupresyonCyclosporine ATacrolimusMycophenolate mofetilAzathioprineSteroidler

247 (%85.2)43 (%14.8)

107 (%36.9)183 (%63.1)

259 (%89.3) 13 (%4.5)29 (%10.0)161 (%55.5)278 (%95.9)

220 (%83.0)45 (%17.0)

89 (%33.6)176 (%66.4)

232 (%87.5)8 (%3.0)23 (%8.7)

168 (%63.4)249 (%94.0)

Tablo 2. Kontrol grubu ve rejektörler arasında C5aR 450 C/T genotip ve allel frekansları

Genotip/Allel Kontrol(n=187)

Rejektör(n=265)

X2 OR P

CC 171 (%91.44) 247 (%93.20) 0.490 0.779 (0.386-1.570) Ref.

CT 16 (%.8.56) 18 (%6.80) 0.490 1.284 (0.637-2.588) 0.588CT 16 (%.8.56) 18 (%6.80) 0.490 1.284 (0.637-2.588) 0.588

C 358 (%95.72) 512 (%96.60) 0.471 0.787 (0.396-1.563) Ref.

T 16 (% 4.28) 18 (%3.40) 0.471 1.271 (0.640-2.527) 0.485

BulgularBulgular

Tablo 3. Kontrol grubu ve non-rejektörler arasında C5aR 450 C/T

genotip ve allel frekansları

Genotip/Allel Kontrol (n=187)

Non-rejektör(n=290)

X2 OR P

CC 171 (%91.44) 282 (%97.24) 7.997 0.303 (0.127-0.723) Ref.

CT 16 (%.8.56) 8 (%2.76) 7.997 3.298 (1.382-7.870) 0.009

C 358 (%95.72) 572 (%98.62) 7.791 0.313 (0.133-0.739) Ref.

T 16 (% 4.28) 8 (%1.38) 7.791 3.196 (1.354-7.543) 0.009

BulgularBulgular

Tablo 4. Rejektör ve non-rejektör gruplar arasında C5aR 450 C/T genotip ve allel dağılımları

GENOTiP/ALLEL REJEKTÖR(n=265)

NON-REJEKTÖR(n=290)

X2 OR P

CC 247 (%93.20) 282 (%97.24) 5.046 0.389 (0.166-0.911) Ref.

CT 18 (%6.80) 8 (%2.76) 5.046 2.569 (1.098-6.011) 0.027

C 512 (%96.60) 572 (%98.62) 4.925 0.398 (0.172-0.923) Ref.

T 18 (%3.40) 8 (%1.38) 4.925 2.514 (1.084-5.830) 0.029

BulgularBulgular

TARTIŞMA• C5aR’ü immün sistem hücreleri, renalglomerüler mezengial hücreler ve tübülerepitelyal hücrelerde eksprese edilmektedir.

• Akut rejeksiyonda, renal dokuya infiltre olmuşhücrelerde C5aR ekspresyonunun arttığıgösterilmiştir.

Çalışmamızda non-rejektör grupta C5aR 450 CTgenotipi ve T alleli frekansları hem kontrolgrubuna hem de rejektör gruba göre anlamlıderecede düşük bulunmuştur.derecede düşük bulunmuştur.

TartışmaTartışma

Rejektörler ve kontrol grupları arasındapolimorfik T alleli sıklığı yönünden farkolmaması, non-rejektörlerde hem kontrol grubuhem de rejektör gruba göre polimorfikallelin anlamlı olarak daha düşük sıklıktagörülmesi, polimorfik T allelinin immünosupresifgörülmesi, polimorfik T allelinin immünosupresiftedaviye rağmen rejeksiyon gelişenlerde dahagüçlü ve etkin bir immün yanıta katkısıolabileceğini düşündürmektedir.

TartışmaTartışma

• Non-rejektörlerin immünosupresif tedavi ile dahaetkin bir şekilde kontrol altına alınmasında isepolimorfik T allelinin dahaaz oranda bulunmasının katkısı olabilir.

• Polimorfik T alleli taşıyanlarda rejeksiyonuönlemek için daha etkin immünosupresiftedaviye gereksinim duyulabilir.

TartışmaTartışma

• Burada polimorfik T alleli, mRNA stabilitesini sağlayıp, C5aR ekspresyonunu artırarak etkili olabilir.

• Bunun kanıtlanması için T alleli taşıyıcılarında • Bunun kanıtlanması için T alleli taşıyıcılarında C5aR ekspresyonu araştırılmalıdır.

• Bulgularımız, CT genotipi ve T allelinin C5aRekspresyonunu artırıp artırmadığını gösterendiğer çalışmalarla desteklendiği takdirderejeksiyon riski düşük olan böbrek alıcılarınıntransplantasyon öncesi seçimine yardımcıtransplantasyon öncesi seçimine yardımcıolabilir.

TartışmaTartışma

TEŞEKKÜR

• Türkiye Bilimsel ve Teknolojik Araştırma Kurumu (TÜBİTAK)Kurumu (TÜBİTAK)

• German Research Foundation (DFG)

• Collaborative Transplant Study (CTS)