RADIOIMMUNOLOGIA

COMPONENTI REAZIONI

ESECUZIONE DOSAGGI R.I.A.

Radioimmunologia

Inserita nel contesto della Medicina Nucleare

La storia

Il RIA

nasce dalla combinazione di tecniche mutuatedall’immunochimica e dalla radio chimica

(R.S.Yalow e S.A. Berson 1959): è un metodo di misura della

concentrazione

Requisiti essenziali delleMetodiche Radioimmunologiche

Specificitàcapacità di distinguere le sostanze di interesse da altre a struttura simile (eventualmente presenti anche a livelli più elevati) nei fluidi biologici

Sensibilitàcapacità di rilevare la sostanza di interesse anche a concentrazioni molto basse

Operatori in Radioimmunologia

Equipe formata daTecnico sanitario di radiologia medicaInfermiereMedico Nucleare

Logistica in Radioimmunologia

AccettazioneAmbulatorio prelievi

(dentro la provetta(dentro la provetta……un paziente)un paziente)Laboratorio radioimmunologico

Struttura ed accessori di un laboratorio

RIA

o Paretio Pavimentio Banconio Vetreriao Strumentazione

Frigorifero e Kit

Banconi

La Strumentazione

ELEMENTI CHE COMPONGONO KIT PER DOSAGGIO RADIOIMMUNOLOGICO

•STANDARS•ANTIGENE (caldo, marcato o tracciante-freddo•ATISIERO (liquido, solido)•SEPARATORE•TAMPONE•PROVETTE O BIGLIE SENSIBILIZZATE

Sostanze di reazione

Antigene (Ag) sostanza presa in esame (Analita) e sostanza di riferimento (Standard)

Antigene (Ag*) introduzione di un isotopo nella sua struttura molecolare (R.I.A.)

Anticorpo (Ab) proteina sierica, appartenente alleimmunoglob.,reagisce con Ag

Anticorpo (Ab*) Introduzione di un isotopo nella suastruttura molecolare (IRMA)

Proprietà dell’antisiero

• Titolo Indica la diluizione finale dell’antisiero, che deve essere tale da legare in assenza di Ag inattivo il 50% dell’Ag*.

• Affinità Avidità con cui l’Ag lega l’Ab

Proprietà dell’antigene marcato

• Purezza radiochimica è la percentuale di attività totale dovuta al radionuclidepresente nella forma chimica desiderata.

• Attività specifica è il numero di atomi radioattivi introdotti nella molecola.

• Immunoreattività è la capacità di interazione anticorpale.

ANTIGENE(Ag*)ANTICORPO(Ab*)

L’Antigene o l’Anticorpo possono essere marcati con diversi isotopi radioattivi, i più usati sono:

Isotopo T ½ Emiss. KeV

125 J 60 gg γ 28,353 H 12,26 anni β 18 57 Co 267 gg γ 122

TERMINOLOGIA

• ANTIGENE sostanza capace di indurre la produzione di anticorpi

• ANTISIERO miscela di anticorpi in grado di legare specificatamente la molecola da da dosare

• TRACCIANTE di solito Ag reso radioattivo mediante l’introduzione di un radioisotopo nella struttura molecolare

• INCUBAZIONE tempo necessario affinchè avvenga la reazione

• COMPETIZIONE l’Ag non marcato e l’Ag* competono per i siti leganti di un Ab specifico ( RIA )

TERMINOLOGIA

• IMMUNOCOMPLESSO complesso antigene – anticorpo ( legato B bound )

• SEPARAZIONE si separa il libero ( F ) dal legato ( B )

• NSB o Bianco, quota di legame aspecifico• CONTEGGIO contatore Y multipozzetto a

scintillazione solida, contatore ß a scintillazione liquida

Fattori che concorrono allabuona riuscita dell’esame

•• AccettazioneAccettazione•• ModalitModalitàà di prelievodi prelievo•• SeparazioneSeparazione•• Stoccaggio Stoccaggio •• ScongelamentoScongelamento•• Stoccaggio Stoccaggio KitsKits•• Giusta ricostituzione dei reagenti ed Giusta ricostituzione dei reagenti ed

esecuzione dellesecuzione dell’’esameesame

Tecnica di dosaggio

• A- Ricostituzione dei reagenti• B- Addizione dei reattivi• C- Incubazione 1) temperatura2) tempo • D- Separazione dell’Ag libero (free) dal

complesso Ag/ Ab (Bound)• E- Conteggio (scintill. solida, scintill.

liquida)• F- Calcolo dei risultati

Componenti dosaggi R.I.A.

• Antigene (Ag) freddo• Antigene (Ag*) caldo, marcato, tracciante• Antisiero (Ab) specifico (liquido o solido)• Precipitante o Separatore

Reazione R.I.A.Dosaggio per competizione

Ag Ag Ab Ag*Ab

Ag* (Ag Ab)*

Bound FreeNB:Inversamente proporzionale

Analita da dosare

DOSE

Cpm

(Bound)

Risposta

Componenti dosaggi IRMA

• Antigene (Ag) freddo• Anticorpo (Ab) freddo• Anticorpo (Ab*) marcato. Tracciante• Provette sensibilizzate, biglie sensibilizzate

Reazione IRMA (Ab*)Metodo Sandwich

Ag è in grado di legarsi con due molecole anticorpali

Fase 1Immuno estrazione

in fase solida

Ag

Ab

Rimozionedel

Sovranatante

incubaz

Ab*

AbAg

Rimozionedel

Sovranatante

Fase 2

Bound direttamente proporzionale alla concentrazione dell’analita

incubaz

Diversificazionedei rifiuti

• Rifiuti radioattivi : Liquidi o solidi• Rifiuti biologici• Rifiuti cartacei