Riktig bruk av bakteriologiske laboratorieprøver – med mer… · microbes to non -lethal quantities of the drug make them resistant. Here is a hypothetical illustration. Mr. X

Riktig bruk av bakteriologiske laboratorieprøver – med mer…

Klinisk emnekurs i laboratoriemedisin Karianne Wiger Gammelsrud, kst overlege, førsteamanuensis

Avd. for mikrobiologi, OUS, Ullevål

Disposisjon

• Grunnprinsipper innen bakteriologi • Rekvisisjonen • Mikrobiologiske metoder

– Bakteriologiske – Serologiske/molekylære

• Prøvetakning • Huskelapper

KW Gammelsrud 2015

Grunnprinsipper innen bakteriologi:

- Hovedinndeling av bakteriene - Resistenstesting og MIC-verdier - PK/PD prinsipper

KW Gammelsrud 2015

Hovedinndeling av bakterier

KW Gammelsrud 2015

Stafylokokker = haugkokker: (gule (S. aureus) og hvite stafylokokker (S. epidermidis m/m)

Streptokokker = kjedekokker: β-hemolytiske, α-hemolytiske (grønne), Enterokokker

Diplokokker = kjedekokker som ligger 2&2: pneumokokker, meningokokker, gonokokker

Staver (basiller): Gram-neg: Enterobacteriaceae (E. coli m/m), Pseudomonas, Haemophilus Gram-pos::Listeria, Bacillus, Difteroider, Propionebakterier, Clostridier…

Karianne W. Gammelsrud 2015

Aerobe vs.

Anaerobe

KW Gammelsrud 2015

Normalflora • 10 x flere bakterier enn celler i kroppen! • Reelle funn vs. kontaminasjon • Svært viktig med god klinisk informasjon og

korrekt angivelse av prøvematerialet

KW Gammelsrud 2015

Antibiotikafølsomhet: metoder

KW Gammelsrud 2015

• Antibiotikaresistens / ”nedsatt følsomhet”

• Hvordan måler vi dette in vitro?

Lappediffusjon


35oC, 18-24 t.

Sonediameter (mm)

S

R

KW Gammelsrud 2015

• Gradienttester (eks: Etest) • Automatisert testing

MIC 0.125 mg/L = S

MIC 32 mg/L = R


MIC-verdi: Minimum Inhibitory Concentration (minste inhibitoriske konsentrasjon)

KW Gammelsrud 2015

Lånt av Truls Leegaard, AHUS

MIC vs. dosering: PK/PD-prinsipper

Karianne W. Gammelsrud 2015

KW Gammelsrud 2015

FLEMING: But I would like to sound one note of warning. Penicillin is to all intents and purposes non-poisonous so there is no need to

worry about giving anoverdose and poisoning the patient. There may be a danger, though, in underdosage. It is not difficult to make microbes resistant to penicillin in the laboratory by exposing them to concentrations not sufficient to kill them, and the same thing has occasionally happened in the body. The time may come when penicillin can be bought by anyone in the shops. Then there is the danger that the ignorant man may easily underdose himself and by exposing his microbes to non-lethal quantities of the drug make them resistant. Here is a hypothetical illustration. Mr. X. has a sore throat. He buys some penicillin and gives himself, not enough to kill the streptococci but enough to educate them to resist penicillin. He then infects his wife. Mrs. X gets pneumonia and is treated with penicillin. As the streptococci are now resistant to penicillin the treatment fails. Mrs. X dies. Who is primarily responsible for Mrs. X’s death? Why Mr. X whose negligent use of penicillin changed the nature of the microbe.

Moral: If you use penicillin, use enough.

http://www.nobelprize.org/nobel_prizes/medicine/laureates/ KW Gammelsrud 2015

Utfylling av rekvisisjonen

KW Gammelsrud 2015

Kliniske opplysninger:

Prøvetakningstidspunkt: • Dato • Klokkeslett

• Lege (-kontor) • Evt kopi rekv. • Evt. telefonr.

KW Gammelsrud 2015

• JA!!!! • Prøvene blir behandlet ulikt avhengig av klinisk bakgrunn –

både det vi ser etter og hva vi vurderer som relevant • MINIMUM av klinisk informasjon:

• IMMUNSTATUS – er pasienten immunsupprimert? • Hovedsymptomer – og VARIGHET • Jo mer nøyaktig beskrivelse av prøvematerialet (fra HVOR og HVA),

jo bedre behandling på laben • All ANTIMIKROBIELL behandling som pas får m/dato for oppstart

• ”Kliniske opplysninger mangler” kan faktisk føre til manglende mikrobiologisk diagnose og dermed suboptimal behandling!

Er kliniske opplysninger så viktige da?

KW Gammelsrud 2015

Kliniske opplysninger: • Aktuelt, varighet • Mistenkt agens? • Grunnlidelse? LEGEJOBB!

Antibiotika? • Hvilken type? • Når og hvor lenge?

Prøvetakningstidspunkt: • Dato • Klokkeslett

Prøvemateriale: • HUSK å krysse av! • Nøyaktig (puss≠sårsekret) • Flere parallelle prøver: husk å merke nøyaktig!

• Aerob/anaerob dyrkning • Flere aktuelle agens? - Bakt/virus/sopp/tb…

Forsendelse: Skru korken godt på – unngå søl! KW Gammelsrud 2015

• Lege (kontor) • Evt kopi rekv. • Evt. telefonr.

• Aktuell sykdom eller immunstatus?

Bakteriologisk avd: 22118830 Virologisk avd: 22118845 Serologisk avd: 22118857

Vi er glade i å prate med og hjelpe

klinikere!

KW Gammelsrud 2015

KW Gammelsrud 2015

KW Gammelsrud 2015

KW Gammelsrud 2015

Mikrobiologiske metoder (bakt)

• Mikroskopi • Aerob dyrkning • Anaerob dyrkning • Sopp-dyrkning (muggsopp, gjærsopp)

• Antigen (Pneumokokker, Legionella i urin m/m)

• Serologi (Kikhoste, Francicella, div parasitter m/m)

• PCR

KW Gammelsrud 2015

Mikrobiologiske metoder (bakt)

• Mikroskopi • Aerob dyrkning • Anaerob dyrkning • Sopp-dyrkning (muggsopp, gjærsopp)

• Antigen (Pneumokokker, Legionella i urin m/m)

• Serologi (Kikhoste, Francicella, div parasitter m/m)

• PCR

KW Gammelsrud 2015

Mikroskopi

KW Gammelsrud 2015

Mikroskopi

• Acridin og Gram-farging • Akutte tilstander (normalt sterile materialer)

– Meningitt – Positive blodkulturer – Septisk artritt – Hjerneabscess, etmoiditt m/m

• Andre: Pneumocystis, muggsopp, tbc, parasitter mm.

KW Gammelsrud 2015

Dyrkning

• Aerob dyrkning: – Rike medier samt selektive skåler – ”Vanlige” prøver: 2 døgn – Sterile væsker: 3 døgn (m/anrikningsbuljong) – Biopsier: 5-7+ døgn (m/anrikningsbuljong)

• Anaerob dyrkning: – Vanligvis 3 døgn

KW Gammelsrud 2015

PCR (OUS) • Generelle

– 16sRNA (bakterier), ITS (sopp)

• Spesifikke (mer sensitive) – Pneumokokk, meningokokk, Haemophilus (meningitt) – GBS, Listeria, E. coli (meningitt nyfødte m/m) – S. aureus, Tbc, Aspergillus, parasitter, dermatofytter m/m – Veneria (Chlamydia, Mycoplasma, gonokokker)

• I tillegg mulighet for å sende til andre laber, f.eks. tularemi (St. Olav)

KW Gammelsrud 2015

Mikrobiologiske metoder (virus)

• Serologi – Aktuell sykdom eller

immunstatus? – Symptomer? – Varighet?

• Antigen – Eks: Rota-/adenovirus

i avføring

KW Gammelsrud 2015

• PCR – Luftveier (egen forelesn.)

– Spinalvæske (OBS! Tidsaspektet avgjørende)

– Blod (spes. indikasjoner)

– Sterile væsker, biopsier – Vesikkel, sårsekret – Avføring

Ad underlivsprøver • Vi undersøker SOS:

– Lite forskjell på selvtester (vaginalprøve med swab) vs. GU – Flytende amies: PCR Chlamydia, Mycoplasma, gonokokk +

gonokokkdyrkn. Evt andre ved spesielle problemstillinger.

• SÅR (=sårprøve): Kjønnslepper, penis, post op., post partum: Dette er ENESTE indikasjon for allmen-bakt. (Unntak: alder < 15 år)

• SOPP: Dyrkning kun ved komplisert sopp-vaginitt (dvs. residiverende x4/ett år) & immunsuppr (Candida +/-). For øvrig våtpreparat på legekontoret (eller klinisk diagnose).

• Bakteriell vaginose: IKKE SEND TIL LAB – gjør det selv! (Amsels kriterier - mikroskopi). Avvises alltid.

• Evt. Trichomonas pcr (evt mikroskopi). Lite i norsk befolkning.

KW Gammelsrud 2015

Mikrobiologisk prøvetakning

• Hva slags materiale? • Hva skal undersøkes? • Hvilken type transportmedium?

KW Gammelsrud 2015


• Egnede prøveglass og transportmedier

KW Gammelsrud 2015


• Husk å merke prøven med både fullstendig pasientidentifikasjon og prøvemateriale!

KW Gammelsrud 2015

? ? ?


• Skru korken godt igjen – unngå søl!

KW Gammelsrud 2015


Penselprøver: •Overfladiske prøver:

– Aerob dyrkning – Anaerob dyrkning

•Ikke egnet: – Mikroskopi – PCR

KW Gammelsrud 2015


Penselprøver: •VIRUS/PCR

KW Gammelsrud 2015


Penselprøver: BAKT/VIRUS/PCR

KW Gammelsrud 2015

På vei ut: sjekk med ditt laboratorie! Flytende amies

?

• Væsker – Sterile væsker (leddvæske) – Purulente væsker – Abscessmateriale


KW Gammelsrud 2015

• Biopsier – Saltvann (minst mulig) – Ikke alt for store biter – Unngå klin!


KW Gammelsrud 2015

Huskelapper

KW Gammelsrud 2015

• Vær nøye med klinisk informasjon! – Aktuelt, varighet, antibiotikabruk, immunstatus

• Vær nøye med prøvetakning! – Egnet materiale og egnet prøveglass/transp.medie

• Vær nøye med merking av prøve og rekvisisjon! – Fullstendig pasientidentifikasjon – Nøyaktig prøvemateriale

KW Gammelsrud 2015

Documents

Riktig bruk av bakteriologiske laboratorieprøver – med mer… · microbes to non -lethal quantities of the drug make them resistant. Here is a hypothetical illustration. Mr. X