TARJETAS FTA

Diana Puerto Anderson Morales

Qu son las tarjetas FTA?Papel filtro que permite obtener, transportar, purificar DNA a partir de fluidos corporales, tejidos vegetales, microorganismos, entre otros. Impregnado de componentes qumicos patentados, que provocan la lisis celular, inactivacin enzimtica, bacteriana y vrica y otros que brindan proteccin al material gentico

Cmo aslan el DNA o el RNA? Lisan la membrana celular y nuclear al

contacto y la lisis de organelos Denaturacion de protenas Atrapa fisicamente al DNA o RNA Los cidos nucleicos libres quedan inmovilizados y son estabilizados en las fibras de la matriz Asla los cidos nucleicos de una mezcla de poblaciones celulares Proteccin del dao enzimtico (nucleasas), por luz UV y por microorganismos

Beneficios que ofrecen? Tecnologa simple para aislar cidos nucleicos

que en menos de 30 min estn listos para posteriores anlisis. ADN estable durante aos a temperatura ambiente Adecuadas para prcticamente cualquier tipo de clula y/o microorganismo Tarjetas FTA indicadoras: facilitan manipulacin de muestras incoloras permite realizar la PCR sin ninguna purificacin o limpieza adicional. Las tarjetas FTA se presentan en diversas configuraciones para una gran variedad de aplicaciones Tambin disponible formatos personalizados a solicitud del cliente

Desventajas?

Clulas que pueden ser aplicadas:Sangre

PlsmidosCultivos celulares Microorganismos Clulas bucales tejido slido Tejidos de plantas Partculas virales Placas de M13

Usoso Forenses o Identificacin de transgnicos o Seleccin de plsmidos o Anlisis alimentarios y agrcolas o Genmica o Anlisis STR (Short Tandems Repeats) o Analisis de ADN de humanos, plantas, insectos, virus y

bacterias. o Identificacin gentica o Almacenamiento clones bacterianos. o Seguridad Biotecnolgica, seguridad alimentaria y anlisis del medio ambiente. o Tipificacin de Antgenos Leucocitarios Humanos HLA o estudios de reproduccin animal o La identificacin molecular.

Tipos de tarjetas FTACLSICA: 4 reas de aplicacin de hasta 500 l de sangre o 100 l de homogeneizado de planta por tarjeta. mltiples aplicaciones de la misma muestra u obtencin de mltiples muestras animales o vegetales en una tarjeta. Se pueden procesar diferentes muestras por separado.

Mini Microscpic a FTA Gen

2 reas de aplicacin para la hasta 250 l de sangre o 50 l de homogeneizado de planta por tarjeta 1 rea de muestra para la aplicacin de hasta 125 l de sangre o 25 l de homogeneizado de planta por tarjeta. Recomendada cuando solo se necesita una muestra. A encuadrada en un marco rgido. Tres reas de muestra para la aplicacin de hasta 225 l de sangre o 30 l de homogeneizado de planta por tarjeta. Puede utilizarse en muchos sistemas de dosificacin o pipeteo automticos,

Costos Kit : 1 tarjeta FTA con indicador de 4 Circulos para celulas bucales/saliva) 4 Hisopos esteriles Bolsa grande multi barrera PRECIO $ 6.50 dlares (Michael L. Hbert)

Protocolo de usoAplicar muestra y dejar secar Perforar una porcin de 1mm colocar en Tubo eppendorf

Lavar 3 veces con reactivo de purificacin FTA descartando los lavadosLavar dos veces con 200 uL de buffer 10mM Tris pH8. Esperar 30-60 min a T amb Lavar 2 veces con agua destilada (200 micro litros), esperar 5 min el primer lavado y 3 el segundo.

Retirar el agua y dejar secar a T amb en lugar cerrado

Algunas aplicaciones La deteccin de genes de plantas, la expresin gnica y ARN viral de los

tejidos estampados en las tarjetas FTA.

YVETTE ROY and ANNETTE NASSUTH* Depannu'iil of Molecular and Cellular Biology. University of Gnelph. Guclph. ON NIG 2Wl,Canad. plant Molecular Biology Reporter 23: 383-395. December 2005.

La deteccin de cidos nucleicos a partir de tejidos de la planta, pueden plantear dificultades debido a los complejos mtodos actualmente utilizados para obtener, almacenar y purificar las muestras. Las tarjetas FTA proporcionan un mtodo alternativo. Al colocar una muestra de tejido sobre el papel, el cual se impregna y se deja sobre la tarjeta una muestra de exudado de tejido que se puede almacenar y archivar hasta su uso posterior. Las tarjeta est impregnado con quelantes, desnaturalizantes y trampas de radicales libres, que inhiben las enzimas, los microbios y los productos qumicos que pueden degradar el ADN o el ARN en la muestra (Rogers y Burgoyne 1997.) Por lo tanto, los cidos nucleicos en tarjetas FTA se pueden almacenar durante largos perodos de tiempo a temperatura ambiente, en contraste con el almacenamiento tradicional en lquido que es entre 20 y 80 C.

La tarjeta FTA fue desarrollada inicialmente para detectar el exceso de fenilalanina en la sangre, como un mtodo para examinar a los bebs recin nacidos para fenilcetonuria (PKU) {Guthrie ySusi. 1963). La membrana se utiliz posteriormente para la deteccin de ADN por PCR. en la ciencia forense. Recientemente se ha visto que la obtencin de cidos nuclicos por medio del uso de tarjetas FTA ha salido menos costoso , debido a su fcil manejo.

Partimos de la toma de las muestras, se coloca el tejido de la hoja o el corte de la fruta

sobre la tarjeta. Si es hoja se presiona hasta que salga el exudado y si es corte de fruta se pasa suavemente. Se deja secar la muestra por una hora, y sacar el exceso de material vegetal con un papel seda suavemente. Guardar en un lugar seco. Preparacin de las muestras para anlisis por RT- PCR, detencion de genes limpiar suavemente la tarjeta con un trapo humedecido con etanol a 70%, luego retire los discos de cada tarjeta con la muestra y adicionar al tubo de PCR, para muestras con mucho tejido impreso hacer el retiro adicionando etanol varias veces con la micro pipeta, dejando secar por treinta minutos para repetir la adiccin y retiro de materia se hace el proceso de PCR , el producto final se somete a electroforesis en un gel de agarosa a 1,5% . Se puede hacer re amplificacin de los discos. Retira excesos y se permite secar el disco durante una hora y se vuelve a hacer RT PCR Resultados: Detencin de ADN por medio de discos de fruta y exudados de hojas: genes y transgenes (especialmente en virus incorporados en plantas). Detencin RNA de la planta, del virus y presencia o ausencia de protenas usando primers para evaluar la presencia o ausencia.

Un mtodo mejorado para la extraccin y purificacin de B- 1,4 glucanasa en termitas. Department of Plant Pathology, Fort Lauderdale Research andEducation Center, University of Florida, Institute of Food and Agricultural Sciences, 3205 College Avenue, Fort Lauderdale, FL 33314-7719, USA

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Bibliografa FTA Cards: Collect, archive, transport, and purify

nucleic acids all at room temperature. GE General Electric Company All rights reserved. Publicado en Marzo del 2003. McPHEETERS. R, Unique formats for Collection, Shipment, Archiving and processing of forensic DNA samples. HumID 200.