SINTEZASINTEZA DE DE PEPTIDE PEPTIDE ÎÎN N FAZ FAZĂ SOLIDĂĂ SOLIDĂ

La începutul anilor 1900, Emil Fischer a introdus noţiunLa începutul anilor 1900, Emil Fischer a introdus noţiunileile de de peptidă şi polipeptidă şi a prezentat peptidă şi polipeptidă şi a prezentat modul de lucrumodul de lucru pentru pentru sinteza acestora. sinteza acestora.

AA stabilit tipul legăturii care ar lega aminoacizii în lanţ, numind-o stabilit tipul legăturii care ar lega aminoacizii în lanţ, numind-o legătură peptidică.legătură peptidică.

În 1901În 1901,, a sintetizat o dipeptidă şi anume, glicil-glicina. a sintetizat o dipeptidă şi anume, glicil-glicina.

Munca lui a condus la o mai bună înţelegere a proteinelor şi Munca lui a condus la o mai bună înţelegere a proteinelor şi peptidelor şi a stat la baza studiilor ulterioare ale acestora. peptidelor şi a stat la baza studiilor ulterioare ale acestora.

Sinteza de peptide Sinteza de peptide în fază lichidă în fază lichidă

presupune următoarele etape:presupune următoarele etape:

pproterotejarjareeaa, activare, activareaa, cuplare, cuplareaa şi şi

deprotejaredeprotejareaa selectivă selectivă

- se foloseşte pentru sinteza unor - se foloseşte pentru sinteza unor

secvenţe mici şi în sinteza pe secvenţe mici şi în sinteza pe

scară largă.scară largă.

Dezavantaje:Dezavantaje:

LaLa sinteza unor secvenţe mai mari sinteza unor secvenţe mai mari

apar probleme legate de:apar probleme legate de:

- solubilitate: - solubilitate: peptidele mai lungi peptidele mai lungi

nu sunt foarte solubile în solvenţi nu sunt foarte solubile în solvenţi

organiciorganici

- - sinteza şi purificarea sunt sinteza şi purificarea sunt

laborioase şi de laborioase şi de lunglungă durată.ă durată.

H2N

R2

OH

O

NH

R2

OH

O

P2H2N

R2

OH

O

Protejarea gruparii carboxil

NH

R2

L

O

P2 H2N

R2

O

O

P1

NH

R2 HN

O

P2

R1

O

O

P1

Deprotejare slectiva a gruparii aminice

NH

R3

L

O

P3 H2N

R2 HN

O R1

O

O

P1

Cuplare

NH

R3 HN

O

P3

R2

NH

O P1

O

O R1Urmatoarea extensie

Cuplare

Activarecarboxil

Protejarea gruparii aminice

Sinteza Sinteza în fază lichidăîn fază lichidă

Sinteza în fază solidă, pe o răşină - scurtă descriereSinteza în fază solidă, pe o răşină - scurtă descriere

- - Pentru această tehnică Pentru această tehnică utilizatutilizată începând cu 1965, ă începând cu 1965, Bruce Bruce

Merrifield a obţinut Premiul Nobel pentru chimie în 1984.Merrifield a obţinut Premiul Nobel pentru chimie în 1984.

- - Aminoacizii pot fi legaţi într-o peptidă în orice secvenţă se Aminoacizii pot fi legaţi într-o peptidă în orice secvenţă se

doreşte, numai dacă unul din capetele lanţului este doreşte, numai dacă unul din capetele lanţului este fixfixat at ppe e

un suportun suport solid solid insolubilinsolubil..  

Etapele sintezei de peptide Etapele sintezei de peptide în fazîn fază solidăă solidă sunt :sunt :

◘◘ Protejarea grupei –NHProtejarea grupei –NH22 a aminoacidul a aminoaciduluiui N-terminal şi a N-terminal şi a

grupei –COOH a aminoacidulgrupei –COOH a aminoaciduluiui C-terminal. C-terminal.

◘◘ Cuplarea celor 2 aminoacizi protejaţi, cu formarea Cuplarea celor 2 aminoacizi protejaţi, cu formarea uneiunei legături legături

amidiceamidice..

◘◘ Deprotejarea grupelor terminale ale peptideDeprotejarea grupelor terminale ale peptideii..

Avantajele sintezei în fază solidăAvantajele sintezei în fază solidă

• Toate reacţiile se realizează într-un singur vasToate reacţiile se realizează într-un singur vas,, ceea ce simplifică ceea ce simplifică şi accelerează sinteza ;şi accelerează sinteza ;

• SSe evită pierderile mari e evită pierderile mari de produde produşi de reacţie şi de reacţie care, în mod normal care, în mod normal se înregistrează pe parcursul izolării şi purificării intermediarilor se înregistrează pe parcursul izolării şi purificării intermediarilor  la la sinteza sinteza în fază lichidăîn fază lichidă;;

• Se pot folosiSe pot folosi reactivireactivii i înîn excesexces pentru obţinepentru obţinerea unorrea unor randamente randamente mari în produs finitmari în produs finit,, forţ forţândând fiecare reacţie în parte să se fiecare reacţie în parte să se desfăşoare complet ;desfăşoare complet ;

• Favorizează dizolvarea şi împiedică agregarea intermediarilor.Favorizează dizolvarea şi împiedică agregarea intermediarilor.

• În funcţie de grupele protectoare există două strategii de lucru: În funcţie de grupele protectoare există două strategii de lucru: Boc şi Fmoc.Boc şi Fmoc.

Grupări aminoprotectoareGrupări aminoprotectoare

CompuCompuşşii rezultaii rezultaţiţi

auau bazicitate bazicitate redus redusăă şi şi

nu participă la reacţia nu participă la reacţia

de cuplare. de cuplare.

1. Benziloxicarbonil, Z1. Benziloxicarbonil, Z

O

O

O N

O

O

H2N

R1

O

O

R+ O

O

HN

R1

O

O R

22. terţ-. terţ-Butoxicarbonil, BOCButoxicarbonil, BOC

O

O

O

O

O H2N

R1

O

O

R+O

O

HN

R1

O

O R

3. Fluorenil-3. Fluorenil-metil-metil-oxicarbonil, Fmocoxicarbonil, Fmoc

O O

O

N

O

O

H2N

R1

O

O

R+O NH

O R1

O

O

R

GGrupruparea area aminicaminică este reactivă este reactivă şi ă şi trebuie trebuie protejaprotejattă ă sub formsub formă de ă de carbamacarbamatt..

Sinteza de peptide Sinteza de peptide în fază solidăîn fază solidă – metoda Fmoc – metoda Fmoc

Primul aminoacid Primul aminoacid care este legat de care este legat de rrăşină este deprotejat ăşină este deprotejat cu piperidină de cu piperidină de gruparea Fmocgruparea Fmoc, iar al , iar al doilea aminoacid este doilea aminoacid este activat cu activat cu PyBOP sau PyBOP sau alt agent de cuplare alt agent de cuplare cum ar fi DCCD-cum ar fi DCCD-diciclohexilcarbodiimina diciclohexilcarbodiimina sau sau diizopropilcarbodiimina. diizopropilcarbodiimina. Ciclul de deprotejare şi Ciclul de deprotejare şi cuplare se repetă pânăcuplare se repetă până se obse obţine secvenţa ţine secvenţa dorită, apoi se dorită, apoi se realizează deprotecţia realizează deprotecţia finală şi clivarea de pe finală şi clivarea de pe răşină cu acid răşină cu acid trifluoracetic-TFA.trifluoracetic-TFA.

+ Activator Piperidina +

Activare Deprotectie

CuplarepH bazic

Fmoc NHHC COOH

R2

Y

Aminoacidul de plecarecu catena laterala protejata cu Y

Rasina preincarcata cu primul aminoacida carui catena laterala este protejata cu X

Fmoc NHHC C

R1

X

O

O Rasina

Fmoc NHHC C

R2

Y

O

Act

H2NHC C

R1

X

O

O Rasina

Fmoc NHHC C

R2

Y

O

NHHC C

R1

O

O Rasina

X

Se repeta deprotectia si ciclul de cuplare Rn+1

Deprotectie finala

(dupa ultimul ciclu)

H2NHC C

R2

Y

O

NHHC C

R1

O

O Rasina

X

Clivare (TFA + un reactiv de curatare)

HN

HC C

R2

O

NHHC C

R1

O

OHC

OHC

Rn

H2N

Peptida finala

Protecţia Fmoc este acum Protecţia Fmoc este acum

în mare măsură folosită, în mare măsură folosită,

dar reactivul Fmoc este dar reactivul Fmoc este

încă foarte scump în încă foarte scump în

comparaţie cu Boc.comparaţie cu Boc.

• pentru pentru prevenirea formării DKPprevenirea formării DKP este folosit este folosită răşina ClTrtă răşina ClTrt;;

• Avantaj: este mai bunAvantaj: este mai bună pentru peptidele sensibile la mediu acid ă pentru peptidele sensibile la mediu acid

(Trp, Met), iar oxidările şi alchilările pot fi evitate. (Trp, Met), iar oxidările şi alchilările pot fi evitate.

• deoarece deoarece catena laterală protejată este perpendiculară pe catena laterală protejată este perpendiculară pe

planul CO-Nplanul CO-Nαα, se pot sintetiza secvenţe total protejate., se pot sintetiza secvenţe total protejate.

• Dezavantaj: Dezavantaj: deprotecdeprotecţia Fmoc este incompletă în cazul ţia Fmoc este incompletă în cazul

peptidelor care se agregăpeptidelor care se agregă;;

H H2C O C

O

HN C

HC

O

NH

piperidina

N-9-fluorenilmetiloxicarbonil- (Fmoc)

CH2

C

O

O

C

CH3

H3C CH3

TFA

t-butil

Metoda Metoda FmFmoc/oc/tButBu

P

Rasina 2-clorotritilclorura (ClTrt)

Cl

Cl

Metoda Metoda Boc/BzlBoc/Bzl

Metoda Boc a fost aproape abandonată Metoda Boc a fost aproape abandonată

în ultimii ani, deoarece HF este extrem în ultimii ani, deoarece HF este extrem

de toxic şi necesită echipament de de toxic şi necesită echipament de

laborator foarte scump, iar laborator foarte scump, iar

tratamentele repetate cu TFA pe tratamentele repetate cu TFA pe

parcursul deprotecţiei pot conduce la parcursul deprotecţiei pot conduce la

alterarea legăturilor peptidice, care alterarea legăturilor peptidice, care

sunt foarte sensibile, precum şi la sunt foarte sensibile, precum şi la

reacţii catalizate de acizi.reacţii catalizate de acizi.

• AvantajAvantaj: : evitarea formării de dicetopiperazine (DKP)evitarea formării de dicetopiperazine (DKP);;• metoda este recomandată în cazul peptidelor care se agregă uşor, metoda este recomandată în cazul peptidelor care se agregă uşor,

deoarece agregatele sunt distruse după fiecare etapă cu TFAdeoarece agregatele sunt distruse după fiecare etapă cu TFA;;• clivarea grupclivarea grupării ării BocBoc este ueste uşoarşoară ;ă ;• răşina pentru metoda Boc se poate folosi şi pentru metoda Fmoc. Procedura cu 2 etape răşina pentru metoda Boc se poate folosi şi pentru metoda Fmoc. Procedura cu 2 etape

de clivare poate conduce la un produs brut mai bun. Se poate realiza în prima fază de clivare poate conduce la un produs brut mai bun. Se poate realiza în prima fază

clivarea cu TFA, apoi cu HF (leg. peptidă-răşină). Este o metodă potrivită pentru clivarea cu TFA, apoi cu HF (leg. peptidă-răşină). Este o metodă potrivită pentru

prepararea peptidelor ramificate.prepararea peptidelor ramificate.• DezavantajDezavantaj: datorită etapei de neutralizare completă, ciclul de sinteză ia mult : datorită etapei de neutralizare completă, ciclul de sinteză ia mult

timp.timp.

H3C C

CH3

O

CH3

C

O

HN C

H

CH2

C

O

NH

C O

O

CH2HF

TFA

Benzil

N-t-butoxicarbonyl- (Boc)

Protejarea permanentă a grupelor Protejarea permanentă a grupelor lateralelaterale

- - este necesară este necesară pentru a pentru a preveni form preveni formaarreaea de lanţuri secundare complicate de lanţuri secundare complicate;;

- - grupările blocante trebuie să rămână ataşate pe tot parcursul sintezei şi să grupările blocante trebuie să rămână ataşate pe tot parcursul sintezei şi să

poată fi înlăturate după realizarea acesteiapoată fi înlăturate după realizarea acesteia;;

- - ccând se alege gruparea blocantă stabilăând se alege gruparea blocantă stabilă,, trebuie să se ţină seama şi de trebuie să se ţină seama şi de

labilitatea gruplabilitatea grupăriărilor protectoare şi de procesul de clivarelor protectoare şi de procesul de clivare a acestora a acestora..

O NH

COOH

O

N

N

Fmoc-His(Trt)-OH

O NH

O

Fmoc-Arg(Pbf)-OH

COOH

NH

HN NHS

OO

OH3C

CH3

CH3

CH3

H3C

Schema de clivare Schema de clivare FmocFmoc

Folosire amestec clivareFolosire amestec clivare BB

Peptida este protejata cu Peptida este protejata cu gruparea Fmoc la N-terminal gruparea Fmoc la N-terminal ??

dadannuu

înlăturareînlăturare Fmoc Fmoc Peptida conţinePeptida conţine Arg, Met, Trp Arg, Met, Trp sausau Trt Trt??

dada nnuu

Peptida conţinePeptida conţine Arg, Met?Arg, Met? Folosire amestec clivareFolosire amestec clivare A A

dada nnuu

Peptida continePeptida contine Trp or TrtTrp or Trt??

nnuudada

Folosire amestec clivareFolosire amestec clivare CC

A: 0.5 mL d.i. A: 0.5 mL d.i. apăapă 9.5 mL TFA9.5 mL TFA

C: 0.25 mL EDTC: 0.25 mL EDT 0.25 mL d.i. 0.25 mL d.i. apăapă 9.50 mL TFA9.50 mL TFA

B: 0.75 g B: 0.75 g ffenol crenol criist. st. 0.25 mL EDT0.25 mL EDT 0.50 mL tioanisole0.50 mL tioanisole 0.50 mL d.i. 0.50 mL d.i. apăapă 10 mL TFA 10 mL TFA

d.i.d.i.-deionizat-deionizatăă

Exemplu practicExemplu practic

SSă seă se sintetizeze şi caracterizeze o nonapeptidă cu următoarea sintetizeze şi caracterizeze o nonapeptidă cu următoarea secvenţă de resturi de aminoacizi :secvenţă de resturi de aminoacizi :

CHQYHHNRE CHQYHHNRE

Cys-His-Gln-Tyr-His-His-Asn-Arg-Glu Cys-His-Gln-Tyr-His-His-Asn-Arg-Glu

Peptida este utilă pentru investigarea capacităţii de legare a ionilor de Peptida este utilă pentru investigarea capacităţii de legare a ionilor de cupru a peptidelor şi proteinelor ce conţin histidină. Puritatea peptidei se cupru a peptidelor şi proteinelor ce conţin histidină. Puritatea peptidei se verifică cu ajutorul RP HPLC şi MALDI-TOF MS. Programul GPMAW 6.11 verifică cu ajutorul RP HPLC şi MALDI-TOF MS. Programul GPMAW 6.11 este foarte util pentru caracterizarea peptidei.este foarte util pentru caracterizarea peptidei.

R e a c t i v iR e a c t i v i

RRăşăşina Fmoc-Glu(O-tBu)-NovaSyn TGA, 0,22 mmol aminoacid/g rina Fmoc-Glu(O-tBu)-NovaSyn TGA, 0,22 mmol aminoacid/g răşăşininăă, , (Novabiochem), PyBOP (benzotriazoliloxitripirolidinfosfiniu hexafluorofosfat). (Novabiochem), PyBOP (benzotriazoliloxitripirolidinfosfiniu hexafluorofosfat).

H CH2

O NCH

COH

O

H O

CH2

N

NHFmoc-His

Fmoc (9-fluorenilmetiloxicarbonil) aminoacizi (GL Biochem Ltd, Shanghai), Fmoc (9-fluorenilmetiloxicarbonil) aminoacizi (GL Biochem Ltd, Shanghai), dimetilformamiddimetilformamidăă (DMF), piperidin (DMF), piperidinăă, 4-metilmorfolin, 4-metilmorfolinăă (Sigma), albastru de (Sigma), albastru de bromfenol, ninhidrinbromfenol, ninhidrinăă, acetonitril , acetonitril şi acidşi acid trifluoracetic de la Merck. trifluoracetic de la Merck.

AparaturaAparatura

Analiza MALDI-TOF MS a fost realizată cu un Analiza MALDI-TOF MS a fost realizată cu un spectrometru de masă tip Bruker Biflex TOF liniar spectrometru de masă tip Bruker Biflex TOF liniar (Bruker Daltonik, Bremen, Germany) echipat cu un (Bruker Daltonik, Bremen, Germany) echipat cu un laser UV cu nitrogen (λmax = 337 nm) şi sistem laser UV cu nitrogen (λmax = 337 nm) şi sistem întârziat de extracţie, cu sistem video si program întârziat de extracţie, cu sistem video si program XMASS pentru prelucrarea spectrelor.XMASS pentru prelucrarea spectrelor.

Un aparat pentru cromatografia Un aparat pentru cromatografia de lichid de înaltă performanţă cu de lichid de înaltă performanţă cu fază inversă BioRad HRLC fază inversă BioRad HRLC System 2700. Aparatul HRLC a System 2700. Aparatul HRLC a fost folosit pentru separarea fost folosit pentru separarea preparativă a peptidei şi a preparativă a peptidei şi a produşilor de clivare, cu o produşilor de clivare, cu o coloană Vydac-C18 cu viteză de coloană Vydac-C18 cu viteză de migrare de 1 ml/min.migrare de 1 ml/min.

Mod de lucruMod de lucru

Peptida este sintetizatPeptida este sintetizatăă manual prin manual prin metoda/strategia Fmoc pe o rmetoda/strategia Fmoc pe o răşăşininăă NovaSyn TGA NovaSyn TGA (341 mg răşină, calculat(341 mg răşină, calculată pentruă pentru 75 75 mol de mol de peptidpeptidăă) folosind metoda Fmoc. Reactivii de ) folosind metoda Fmoc. Reactivii de cuplare cuplare şşi aminoacizii sunt luai aminoacizii sunt luaţiţi îîn exces pentru a n exces pentru a se obse obţţine un randament maxim; excesul de ine un randament maxim; excesul de reactivi reactivi şişi aminoacizi este aminoacizi este îîndepndepăărtat prin sprtat prin spăălare lare cu DMF, iar cu DMF, iar îîn final, produsul este n final, produsul este clivat/clivat/îndepărtatîndepărtat de pe suportul solid. de pe suportul solid.

Pentru sintezPentru sinteză, se procedează astfelă, se procedează astfel: : spspăălare cu DMF urmatlare cu DMF urmatăă de deprotec de deprotecţţie ie cu 20 % piperidincu 20 % piperidinăă îîn DMF, 2, 2, 5, 10, 2 n DMF, 2, 2, 5, 10, 2 şi, respectiv,şi, respectiv, 2 min. 2 min.

UrmUrmăătorul pas este sptorul pas este spăălarea rlarea răşăşinii cu DMF inii cu DMF şşi verificarea i verificarea îîndepndepăărtrtăării rii totale a grupei protectotale a grupei protectoartoare Fmoc, cu o solue Fmoc, cu o soluţţie de albastru de bromfenol ie de albastru de bromfenol 1 % 1 % îîn DMF. Solun DMF. Soluţţia ia îşîşi schimbi schimbăă culoarea din galben culoarea din galben îîn albastru n albastru în în prezenţaprezenţa grup grupărilorărilor aminice libere. aminice libere.

Cuplarea se poate realiza Cuplarea se poate realiza într-o soluţie ce conţine un amestec deîntr-o soluţie ce conţine un amestec de PyBOP (Benzotriazol-1-yl-N-oxy-tri-pirolidinfosfoniu-hexafuorofosfat), PyBOP (Benzotriazol-1-yl-N-oxy-tri-pirolidinfosfoniu-hexafuorofosfat), NMM (N-Metil-morfolinNMM (N-Metil-morfolinăă) ) îîn DMF. Dupn DMF. După terminarea sintezei,ă terminarea sintezei, peptida peptida este clivateste clivată de pe răşină folosind TFA, trietilsilan şi apăă de pe răşină folosind TFA, trietilsilan şi apă (4.5:0.25:0.25) (4.5:0.25:0.25) timp de 2.5 ore, la temperatura camerei.timp de 2.5 ore, la temperatura camerei.

RO NH

O R1

OH

ORO NH

O R1

O

O

N

N

N

O P(NR2)3

RO NH

O R1

O

O

P(NR2)3

N

N

N

O

RO NH

O R1

O

O

N

N

N

OBt ester

+O P(NR2)3

fosfonamida

N

N

N

O PN

N

NH

N

N

N

O PN

N

N

DupDupă clivareă clivare, peptida brut, peptida brută este precipitatăă este precipitată cu 45 mL t-butilmetil- cu 45 mL t-butilmetil-eter, speter, spălată cu dietil-eterălată cu dietil-eter şi dizolvatăşi dizolvată îîn acid acetic 5 % n acid acetic 5 % înainte de înainte de liofilizare (uscarea prin îngheţare)liofilizare (uscarea prin îngheţare). Peptida brut. Peptida brută este apoi purificatăă este apoi purificată prin RP-HPLC folosind o coloanprin RP-HPLC folosind o coloanăă Vydac C18. Vydac C18.

Faza mobilă Faza mobilă esteeste în ambele cazuri formată prin amestecarea a în ambele cazuri formată prin amestecarea a două soluţii: A) 1000 mL apă bidistilată cu 0,1 mL acid trifluoracetic; B) două soluţii: A) 1000 mL apă bidistilată cu 0,1 mL acid trifluoracetic; B) 800 mL acetonitril, 200 mL apă bidistilată şi 0,1 mL acid trifluoracetic. 800 mL acetonitril, 200 mL apă bidistilată şi 0,1 mL acid trifluoracetic. Soluţiile Soluţiile sunt sunt sonicate sub vacuum pentru îndepartarea gazelor. sonicate sub vacuum pentru îndepartarea gazelor. Compoziţia fazei mobile Compoziţia fazei mobile esteeste următoarea: 95% A şi 5% B, timp de 0-5 următoarea: 95% A şi 5% B, timp de 0-5 min, crescând la 55% A şi 45% B la min 45. Peptida min, crescând la 55% A şi 45% B la min 45. Peptida esteeste dizolvată în dizolvată în solventul A şi introdusă apoi pe coloana cromatografică.solventul A şi introdusă apoi pe coloana cromatografică.

Rezultate şi discuţiiRezultate şi discuţii (exemplu) (exemplu)

Peptida legatPeptida legată de răşina brutăă de răşina brută a fost sp a fost spălată cuălată cu DMF, DCM DMF, DCM şi etanol şi etanol absolutabsolut, uscat, uscată laă la vacuum vacuum şi cântărităşi cântărită (487 mg). (487 mg).

Folosind programul GPMAW 6.11, a fost calculatFolosind programul GPMAW 6.11, a fost calculată masaă masa molecular moleculară a ă a peptideipeptidei = 1223,2968. Prin spectrometrie de mas = 1223,2968. Prin spectrometrie de masă s-a obţinută s-a obţinut M = M = 1223,6308. S-a observat astfel o rezolu1223,6308. S-a observat astfel o rezoluţieţie foarte bun foarte bunăă m/ m/m = m = 3703,7.3703,7.

HPLC preparativ aratHPLC preparativ arată un pic mareă un pic mare îîn n cromatogramcromatogramăă la cca. 20 min. Peptida a fost la cca. 20 min. Peptida a fost colectatcolectatăă, liofilizat, liofilizatăă şişi m măăsuratsuratăă prin prin spectrometrie de masspectrometrie de masăă..

Spectrul MALDI-TOF Spectrul MALDI-TOF aratarată căă că masa peptidei masa peptidei este 1224,6308 Da este 1224,6308 Da şi şi micimici cantit cantităţiăţi de Na- de Na-peptidpeptidăă şişi K-peptid K-peptidăă..10 20 30 40

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

(220

nm

)

10 20 30 400,0

0,2

0,4

0,6

0,8

(220

nm

)

(min)10 20 30 40

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

(220

nm

)

10 20 30 400,0

0,2

0,4

0,6

0,8

Abs

orba

nta

(220

nm

)

Timp(min)

Spectrul HPLC al peptidei

Spectrul MALDI-TOF al peptidei

1000 1200 1400 1600 1800 2000 m/z1000 1200 1400 1600 1800 2000 m/z1000 1200 1400 1600 1800 2000 m/z1000 1200 1400 1600 1800 2000 m/z

Spectrul MALDI-TOF al peptidei

1000 1200 1400 1600 1800 2000 m/z1000 1200 1400 1600 1800 2000 m/z1000 1200 1400 1600 1800 2000 m/z1000 1200 1400 1600 1800 2000 m/z

Concluzii (exemplu)Concluzii (exemplu)

S-au studiat metodele de sinteză a peptidelor S-au studiat metodele de sinteză a peptidelor îîn fază solidă n fază solidă şşi s-a i s-a stabilit cel mai eficient procedeu de sintezstabilit cel mai eficient procedeu de sintezăă a unor oligopeptide bazat a unor oligopeptide bazat pe tehnica Fmoc.pe tehnica Fmoc.

S-a sintetizat o nonapeptidă specifică, capabilă să fixeze ionii de S-a sintetizat o nonapeptidă specifică, capabilă să fixeze ionii de cupru.cupru.

Folosind programul GPMAW 6.11, a fost caracterizată peptida, iar Folosind programul GPMAW 6.11, a fost caracterizată peptida, iar resultatele s-au comparat cu datele experimentale. Sinteza poate fi resultatele s-au comparat cu datele experimentale. Sinteza poate fi realizată manual în laboratoare cu dotare relativ modestă.realizată manual în laboratoare cu dotare relativ modestă.

VVă mulţumesc pentru atenţie !ă mulţumesc pentru atenţie !

VVă mulţumesc pentru atenţie !ă mulţumesc pentru atenţie !