Upload
others
View
41
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
Stimulacija limfocitov B z
oligodeoksinukleotidi in določanje
preureditev gena IGH pri kronični
limfatični levkemiji
Helena Podgornik, Jasmina Farič, Katarina
Zorko, Doplihar Kebe Ana
Vsebina
} Standardna citogenetska preiskava proganih kromosomov pri kronični limfatični levkemiji } Težave
} Zakaj sploh?
} Vpliv novega načina gojenja na izsledke citogenetskih preiskav
} Preureditve gena IGH
} Pomen
} Pojavnost
} Glede na imunološke značilnosti
} Glede na potek
Citogenetske preiskave pri KLL
} Zakaj?
} Napovedni pomen & izbira terapije
} Diferencialno diagnostično: limfom plaščnih celic (LPC)
} Kako?
} FISH
} ~80% bolnikov s preureditvami
} Standardna citogenetska preiskava
} Kdaj? Zakaj?
Težave standardne citogenetske preiskave
} Slaba proliferacija limfocitov B v gojišču
} Majhni mitotski indeksi
} Slaba zaznavnost preureditev } Le ~40% bolnikov
} Uporaba mitogenov: } klasičnih
} pokeweed mitogen (PWM),
} lipopolisaharid (LPS),
} protein A,
} 12-O-tetradekanoil-forbol-13-acetat (TPA)
} novih
} CpG-oligodeoksinukleotidi (CpG-ODN) v kombinaciji z interlevkinom 2 (IL-2)
CpG-oligodeoksinukleotidi (CpG-ODN)
} Kratke enoverižne DNA molekule, } 19 do 25 baznih parov } Z nemetiliranimi otočki CpG
} Značilnosti bakterijske DNA } Arhaični vzorci } Prepoznavanje imunskega sistema
} 20x pogostejši kot pri sesalcih
Uvajanje gojenja v rutinsko uporabo
} 24 vzorcev bolnikov s KLL: } 17 vzorcev kostnega mozga
} 7 vzorcev venske krvi
} Gojeni z dodatkom CpG-ODN + IL2
} Gojeni na standardnem gojišču
} Vrednotenje
} Primerjava mitotskih indeksov (‰)
} Primerjava izsledkov
} FISH
} Kariotipizacije
Mitotski indeksi
Vsi vzorci
Venska kri
Vpliv spremenjenega gojenja na izsledek
preiskave
} 110 vzorcev poslanih z napotno diagnozo KLL } 55 (l. 2012) gojenih 24 h brez dodatka CpG-ODN ter IL-2.
} FISH preiskava pri vseh
} Kariotipizacija: 36
} 55 (l. 2013) gojenih 24 – 72 h z dodatkom CpG-ODN ter IL-2. } FISH preiskava pri vseh
} Kariotipizacija: 36
FISH:
DELEŽ BOLNIKOV
Brez CpG-ODN
CpG-ODN
neuspešna kariotipizacija
22% 2,7%
normalni rezultat kariotipizacije, FISH analiza pozitivna
(del (11q), trisomija 12, IGH preureditve) 19,4% 3%
odkrite dodatne kromosomske preureditve, ki jih s FISH
analizo nismo odkrili 13,8% 33,3%
Vpliv gojenja na izsledke standardne
citogenetske preiskave
Bolniki s kompleksnim kariotipom
4/36 = 11%
KARIOTIP del(13q) +12 del(11q) del(17p) FISH
47,XX,t(2;18)(p11,q21),+12[6]
/47,idem,t(8;14)(q24;q11)[4]/47,idem,del(13)(q14)[2]/47
idem,-4,add(8)(q24), +mar[1]/
46,XX[2]
6 75 Vmesen
46,XY,del(13)(q12q14)[9]/46~47,XY,-3,t(4;11)(q25;p15),
add(4)(p16),+1~2mar[cp3]/46,XY[8] 37 Ugoden
45,XY,del(11)(q21),dup(11)(q21q23),der
(18;20)(q10;q10),der(22)add(22)(p13)ins(11;?)(q21q23;?)[5] 95 Ugoden
47,XY,+12[14]/47-48,idem,t(2;9)(q33;q22),t(2;10)(q21;q26),-
4,del(6)(q14),add(7)(q36),+10,der(12)add(12)(p13)+1-
3mar[cp3]/46,XY[4]
87 Vmesen
Zakaj IGH (14q32)?
Diferencialna diagnostika
Napovedni pomen
} Ponavljajoče
} Redke: < 5% bolnikov
} Neugoden napovedni pomen:
} Vmes med del(17p) ter trisomijo kromosoma 12
Naša raziskava
} Diferencialno diagnostični pomen
} Pojavnost
} Med vsemi bolniki s KLL
} Glede na imunofenotip
} Glede na potek bolezni
Diferencialno diagnostični pomen določanja
t(11;14)
} Bolniki, pri katerih so bile opravljene citogenetske preiskave
} Preverili imunofenotip
} Izločili vse bolnike, pri katerih nismo imeli podatka o imunofenotipu
} 157 bolnikov (januar 2013 – avgust 2014) in napotno diagnozo
} KLL,
} Maligni limfom (ML)
} Limfom plaščnih celic (LPC)
Diagnostična vloga preureditev IGH
t(11;14) kot pomoč pri ločevanju LPC od aKLL
Napotna diagnoza
Označevalci t(11;14)
KLL
N=137 KLL
KLL
N=114
ML
N=13
aKLL N=32
aKLL
LPC
N=7
LPC N=26
LPC
N=11
114 114
17
6 17
13
7
6+3+6=15
4 + 7=11
Preureditve gena IGH
} Preverili imunofenotip, če ustreza KLL } Izločili vse bolnike, pri katerih nismo imeli podatka o
imunofenotipu/diagnozi ali nismo določili značilnih kromosomskih sprememb (januar 2013 – december 2014)
} 162 bolnikov s KLL
} 146 bolnikov z znanim imunofenotipom } Značilna KLL: CD5+/CD19+/CD20š/CD23+/FMC7-
} Atipična KLL (aKLL): CD5-, CD20+m, CD23-, FMC7+, restrikcija lahkih verig
} Povezava preureditev IGH s potekom KLL } 22 bolnikov z neugodnim potekom bolezni
} Bolniki zdravljeni po letu 2006
} <2 leti do začetka zdravljenja
del (13) 46%
trisomija 12 17%
del(11q) 18%
del(17p) 15%
preureditve IGH 4%
vsi bolniki s KLL (N=162)
del (13) 58%
trisomija 12 13%
del(11q) 15%
del(17p) 12%
preureditve IGH 2%
značilna KLL (N=114)
del (13) 37%
trisomija 12 12% del(11q)
9%
del(17p) 36%
preureditve IGH 6%
aKLL (N=32)
del(13q) 35%
trisomija 12 20%
del(11q) 15%
del(17p) 20%
preureditev IGH 10%
neugodni potek (N=22)
ID diagnoza +12
(%)
del(13q)
(%)
del (11q)
(%)
del (17p)
(%)
kariotip
KD KLL - 39 98 32
46,XY,
t(2;14)(p23;q32),del(11)(q23)[11]/45,sl,add(9)(q3
4),-17[2]/44,sdl1,-8[2]/45,sdl2,+6[5]
SI KLL - 94 77 10
46,XY,del(6)(q13q23),t(8;14)(q24;q32),del(11)(q2
2),del(13)(q12q21)[5]/46,idem,der(2)dup(2)(p32p
36)[6]
FJ KLL 57 - - 51 46,XX,t(2;14)(p13;q32),der(17)t(12;17)(q10;p10)
del(12)(q13)[10]
ŠC aKLL 75 - - - 47,XX,+12,t(14;19)(q32;q13)[10]
CB aKLL 54 - - -
47,XX,t(2;14)(p13;q32),+12,
t(14;19)(q32;q13),t(18;22)
(q21;q11)[10]
GI aKLL 83 10 - - 47,XY,+12,t(14;18)(q32;q21)[10]
KJ KLL 41 - - - 47,XY,+12,t(14;18)(q32;q21)[10]
MJ KLL - - - - /
GI KLL - - - - /
Značilnosti KLL s preureditvijo gena IGH
} Nismo je našli pri napovedno ugodnih bolnikih
} izolirana del(13)
} Povezava s trisomijo 12
} 5/9 bolnikov (55,6%)
} statistično značilna razlika glede na druge skupine bolnikov s KLL (p=0,021)
} 6/9 bolnikov napovedno vmesnih – FISH
} 2: brez sprememb
} 4: trisomija 12
Zaključki } Gojenja z dodatkom CpG-ODN + IL2 selektivno stimulira maligne
limfocite B } Venska kri ustrezen vzorec } Analiza proganih kromosomov je tako uspešna kot preiskava FISH
} domala pri vseh bolnikih s KLL (>95%) uspešno izvedemo standardno citogenetsko preiskavo
} Kariotipizacija razkrije skoraj pri tretjini bolnikov dodatne preureditve } Ustreznejša opredelitev napovednega pomena pri ~10% bolnikov
} Vključitev sonde za gen IGH je nujna diferencialno diagnostično } >50% bolnikov, pri katerih so označevalci skladni z LPC izključujemo
t(11;14) } ~5% bolnikov s KLL ima preureditve gena IGH, ki so napovedno
pomembne; } Pogostejše pri bolnikih z aKLL oziroma neugodnim potekom bolezni
} Standardna citogenetika omogoča razreševanje preureditev gena IGH
Zahvala } Skupine bolnikov
} Matevž Škerget, dr.med.
} Imunofenotipizacija } Darja Žontar } Tadej Furlan } Ivana Nerad } Alenka Babnik
} Citogenetika } Elza Osterman } Lidija Pušnik } Hermina Čibej } Karmen Dežman } Špela Orešnik