Terje Mahan

Embed Size (px)

DESCRIPTION

uojljl

Citation preview

Abstrak-Limfosit adalah pemain utama dalam pengembangandari respon imun bawaan dan adaptif tetapi merekaperilaku pada pasien dengan stroke akut telah menerima sedikitperhatian.Eksperimental prosedur: Menggunakan flow cytometry kami mengidentifikasiTotal limfosit, sel-sel T, T helper (Th) sel, sitotoksikT limfosit (CTL), natural killer (NK) sel, sel B, danT peraturan (Treg) sel pada 46 pasien berturut-turut dengan akutstroke dalam rata-rata 180 menit dari onset klinis, dan padahari 2, 7, dan 90. Harian neurologis skor (National InstitutesSkala Kesehatan Stroke), difusi-tertimbang pencitraan pada otakmagnetic resonance imaging, gangguan fungsional, danstroke-terkait infeksi (SAI) pada hari ke 7 dinilai.Apoptosis pada subset limfosit, tumor necrosis factor(TNF) -? / Interleukin (IL) -4 produksi di Th dirangsang danCTL, cluster diferensiasi 86 (CD86) (B7-2) ekspresi dalamB sel, kortisol dan metanephrine dalam serum diukur.Analisis multivariat digunakan untuk mengevaluasi SAI, dan strokehasilnya.Hasil: Peningkatan apoptosis dan jatuhnya T, Th, CTL, B,dan sel-sel Treg diamati setelah stroke. Severer stroke padamasuk dan SAI diungkapkan penurunan lebih besar dari T, Th, danCTL sel. Peningkatan kortisol dan metanephrine dikaitkandengan stroke parah dan SAI, dan berkorelasi terbalik denganT, dan CTL. Sel T, dan CTL yang berkorelasi dengan infarkpertumbuhan. Stroke tapi tidak SAI mengakibatkan rendah TNF-? produksidalam sel Th. SAI menunjukkan kejatuhan terbesar limfosit,T, Th, dan CTL, tetapi tidak sel B, atau Treg. Hasil yang buruk adalahterkait dengan menurunnya tingkat sel B, dan meningkatekspresi CD86 pada sel B, tapi tidak dengan SAI.Kesimpulan: limfopenia dan peningkatan apoptosis T,Th, CTL, Treg dan sel B adalah tanda tangan awal setelah manusiastroke. Sebuah respon seluler menurun setelah stroke adalah penandadari kerusakan otak yang sedang berlangsung, respon stres, dan lebih tinggirisiko infeksi. Sebuah respon humoral yang lebih rendah adalah prediktormiskin hasil jangka panjang. 2009 IBRO. Diterbitkan olehElsevier Ltd All rights reserved.Kata kunci: stroke, limfosit, stroke-terkait infeksi,hasilnya.Studi tentang jalur dua arah yang berkomunikasiSSP dan sistem kekebalan tubuh berdiri sebagai waktu-dihormatifokus penelitian bagi para ilmuwan dasar dan dokter(Hadden et al, 1970;. Besedovsky et al, 1983, 1986;. Kelleret al, 1983.), dan hari ini secara luas diakui bahwadi antara banyak fungsi penting SSP kontribusi untukpengaturan respon imun dalam kesehatan dan penyakit(Turnbull dan Rivier, 1999;. Elenkov et al, 2000). Memang, sebuahsebagian besar informasi penting adalah mengumpulkan dan konsep barumuncul seperti penggunaan potensi imunomodulatorterapi pada stroke akut (Hallenbeck et al.,2006).Stroke iskemik dan hemoragik adalah penyebab pertamapenurunan nilai permanen pada orang dewasa, penyebab keduakematian, dan kontributor utama terhadap beban globalpenyakit di negara-negara Barat. Dampak stroke jugaberkembang pesat di negara-negara berkembang meskipun signifikanperbaikan dalam identifikasi utamanya berkontribusifaktor. Terlepas dari angka-angka yang memilukanarmamentarium terapi untuk stroke akut sangat terbataskarena hanya rekombinan aktivator plasminogen jaringan (rtPA)telah disetujui. Namun, karena jendela waktu yang terbatasadministrasi (3 jam), kurang dari 4% dari strokePopulasi menerima terapi ini. Oleh karena itu, sangat menarikbahwa pemahaman lebih sehat dari relevansi klinisdari interaksi otak-kekebalan bisa berasal didesain strategi berlaku untuk segmen yang lebih luas dariStroke populasi.Sebagian besar informasi klinis yang tersedia mengenaiotak-kekebalan interaksi diperoleh pada pasien dengancedera otak traumatis (Hoyt et al, 1990;. Quattrocchi et al,.1992), atau tumor otak (Woiciechowsky et al., 1998).Oleh karena itu, ekstrapolasi temuan kepada pasiendengan stroke harus dilakukan dengan hati-hati untuk imunologiciri-ciri dan faktor kerentanan pasien dengan neoplasma,trauma, atau stroke mungkin memiliki perbedaan penting. Meskipunpelopor studi di akhir 1970-an menggambarkan beberapaimunologi perubahan pada pasien dengan stroke akut(Czonkowska et al., 1979), hanya baru-baru bahwaimunologi stroke telah menarik perhatian strokedokter dan ilmuwan (Woiciechowsky et al, 1999.;Meisel et al, 2005;. Chamorro et al, 2007b).. Namun demikian,data yang dikumpulkan dalam kondisi eksperimental dan klinisbervariasi dalam banyak hal di luar pengaruh yang berbedaspesies. Berbeda dengan situasi yang terkendali dengan baik di laboratorium,studi tentang imunologi stroke di samping tempat tidurharus membayar bonus tambahan heterogenitas manusia.Keterbatasan etis untuk mendapatkan jaringan otak pada penderita strokeatau kesulitan untuk mendapatkan jaringan limfoid adalah pembatasan lainyang menghambat kemajuan lebih cepat. Oleh karena itu, disamping tempat tidur sebagian besar data imunologi diperolehbelajar darah perifer dengan sitometri. Beberapatemuan ini akan ditinjau di bawah ini dan kemudian kita akanmelaporkan data asli kita sendiri.Limfosit subpopulasiMeskipun limfosit adalah pemain utama dalam pengembangan penuhdari respon imun bawaan dan adaptif merekatelah mendapat sedikit perhatian pada pasien dengan stroke akut.Limfosit adalah morfologis sangat mirip dalam penampilantetapi mereka terdiri dari subpopulasi yang berbeda dengan beragamfungsi. Limfosit B adalah jenis sel hanya mampumemproduksi antibodi dan merupakan komponen utamadari kekebalan humoral. Limfosit B berkembang disumsum tulang dan sel B matang ditemukan terutama dilimfoid folikel dalam organ limfoid sekunder, tulangsumsum, dan darah. Limfosit T adalah mediatorimunitas seluler, matang di timus, beredar dalam darahdan mengisi organ limfoid sekunder. Natural killer(NK) sel juga turun dari sel induk yang sama dan merekadiklasifikasikan sebagai limfosit, namun NK sel memiliki dekatkemiripan dengan sel-sel kekebalan bawaan seperti makrofag(Di Santo, 2006). Dua utama subset sel Tadalah T helper (Th) limfosit yang mengaktifkan makrofagdan mempromosikan produksi sel B antibodi, dan T sitotoksiklimfosit (CTL), fungsi utamanya adalah untuk mengenalidan membunuh sel inang terinfeksi dengan mikroba intraseluler.Selain itu, sel-sel Th terdiri dari subpopulasi yang berbeda termasukTh1, sel T Th2 dan peraturan (Treg), juga denganfungsi berbagai macam. Sementara sel Th1 terlibat dalam cellmediatedkekebalan dan mensekresi sitokin pro-inflamasi,Sel Th2 meningkatkan kekebalan humoral dan rahasiaanti-inflamasi sitokin (Liew, 2002). Sel Treg memilikiumum menekan efek lebih dari limfosit lainnyadan mensekresi sitokin anti-inflamasi seperti mengubahfaktor pertumbuhan-? (TGF-?) Dan interleukin (IL) -10(Scheffold et al., 2007).Limfosit pada stroke eksperimentalBeberapa jalur dukungan bukti eksperimental yang akutstroke mungkin memicu respon kekebalan yang kuat bawaanterhadap molekul SSP endogen yang terlibat dalamkerusakan otak dan gangguan fungsional. Beberapa studijuga mendukung bahwa limfosit memediasi antigen-spesifikinflamasi respon (Becker et al., 2001). Namun akutstroke juga dapat mengganggu penghalang darah-otak dan memfasilitasiakses ke SSP dari limfosit yang bisaberinteraksi dengan antigen serumpun jika tepat co-dirangsang(Schroeter et al., 1994). Menariknya, kekebalanrespon menimbulkan di pinggiran oleh cedera otak tampaknyaakan condong ke arah jenis humoral respon. Dalam beberapahewan model cedera otak akut (domba, tikus, tikus,kelinci), respon imun perifer ke SSP yang diturunkanantigen pada kelenjar getah bening leher rahim ditandai dengan (1)respon yang kuat antibodi penetapan non-komplemenisotypes, (2) tidak ada hipersensitivitas tertunda-jenis (yangTh1 tipe respon), dan (3) kurangnya CTL dengan efektorKegiatan (Harling-Berg et al., 1999). Temuan ini tidakdiamati pada limpa dan ini dihubungkan dengan faktabahwa hanya limfatik serviks dapat memberikan signifikandaerah drainase untuk cairan cerebrospinal (CSF) dan interstisialfluida (Bradbury dan Cole, 1980). Sebagai hasil dari inianatomi, limfatik serviks akan menerima antigen SSPpada konsentrasi tinggi, dan mereka juga bisa menerima dengan curahAliran SSP yang diturunkan imunomodulator molekul yang akanbertanggung jawab untuk respon humoral (Th2 pergeseran). Namun,sifat dari Immunomodulators tidak diselesaikandan untuk yang terbaik dari pengetahuan kita, keberadaanjalur yang sama komunikasi tetap tidak terbukti dalammanusia.Konsekuensi ke otak dari imun adaptifrespon berada di bawah pengawasan hati-hati, karena keduanya menguntungkan danHasil yang berbahaya telah mengemukakan tergantung pada jenisTh respon imun digerakkan oleh aktivasilimfosit (Hallenbeck, 2007; Schwartz dan Kipnis,2002; Gee et al, 2007).. Efek menguntungkan diharapkan jikaaktivasi limfosit dicegah dengan induksidari respon imun terhadap antigen peraturan otak sepertimielin dasar protein (MBP) (Becker et al., 2003). Pada tikus,kerugian genetik ditentukan dari B-limfosit dan Tsecara signifikan meningkatkan kerusakan histologis awal setelah transieniskemia otak fokal berkaitan dengan penindasanmediator inflamasi di otak (Hurn et al.,2007). Limfosit-kekurangan RAG1 /?? tikus juga menunjukkaninfark kecil dan fungsi neurologis yang lebih baik setelah iskemiadibandingkan tipe liar hewan, dan ini tanggapan pelindungterbalik di RAG1? /? tikus dilarutkandengan baik tipe liar atau, pada tingkat lebih rendah, interferon(IFN) -? /?? splenocytes (Yilmaz et al., 2006). Sebaliknya,Tikus sel B kekurangan gagal menunjukkan peningkatan terhadapstroke iskemik cedera, menunjukkan bahwa sel-sel T dan tidakSel B yang terlibat dalam cedera otak iskemik awal(Yilmaz et al., 2006).Studi Pioneer menggambarkan penurunan transien dalamjumlah CTL limpa setelah iskemia otak fokal pada tikus(Gendron et al., 2002). Pada tikus, iskemia otak meningkatkerentanan terhadap infeksi yang didahului olehmencolok penurunan limfosit dalam darah, limpa, dantimus (Prass et al, 2003., 2006). Setelah otak transieniskemia concanavalin A-dirangsang kultur darah diproduksilebih anti-inflamasi IL-4 dan kurang pro-inflamasiIFN-?, Dan administrasi rekombinan IFN-? berkurangbakteri diseminasi dalam darah perifer danparu-paru (Prass et al., 2003). Angkat transfer splenocytesdari tikus wild type tapi tidak IFN-? tikus kekurangan dihindaripertumbuhan bakteri, dan T dan sel NK juga diperlukanuntuk melawan stroke-terkait infeksi (SAI) (Prass et al.,2003). Selain itu, memblokir sistem saraf simpatismenurunkan persentase splenocytes apoptosis, menormalkan produksi sitokin, mencegah jatuhnyalimfosit dan risiko infeksi, dan meningkatkanStroke survival (Prass et al., 2003).Penelitian terbaru pada tikus juga menunjukkan mengejutkancepat aktivasi kekebalan perifer setelah eksperimentalstroke (Offner et al., 2006a). Pada awal 6 jam setelah tengahoklusi arteri serebri, korteks ipsilateral dan striatummenunjukkan peningkatan ekspresi diucapkan proinflamasisitokin dan kemokin, dan diaktifkansplenocytes disekresikan tingkat signifikan disempurnakanpro-inflamasi faktor tumor necrosis factor (TNF) -?,IFN-?, IL-6, monosit chemotactic protein-1, dan IL-2,dan juga anti-inflamasi IL-10 (Offner et al., 2006a).Respon inflamasi yang cepat pascaiskemi dalamlimpa dan penyebaran limfosit diaktifkan untuk getah beningnode dan darah yang dikaitkan dengan saraf simpatisstimulasi dimulai setelah kerusakan jaringan otak (Offner etal, 2006a.). Menariknya, para peneliti menemukan bahwa96 jam setelah stroke ada ungkapan yang sangat rendah sebagian besaryang pro-inflamasi sitokin dan kemokin danpeningkatan ekspresi sitokin anti-inflamasi,bersamaan dengan pengurangan ukuran limpa dan jumlahsel T, dan meningkat tiga kali lipat dari sel Treg (Offneret al, 2006b.).Limfosit dan stroke manusiaRespon inflamasi yang mengikuti berkorelasi stroke akutbaik dengan risiko klinis et memburuk (Vila al.,2000, 2003, Castellanos et al, 2002;. Chamorro, 2004), danpendek dan hasil fungsional jangka panjang pada pasien (Vila etal, 1999;. Chamorro dan Planas, 2004). Peran putihsel-sel darah dalam respon inflamasi telah banyakdianalisis meskipun kebanyakan studi terutama ditujukankontribusi neutrofil (Coller, 2005), sementara peranmonosit (Chamorro et al., 2006), dan limfosit(Haeusler et al, 2008;.. Vogelgesang et al, 2008) memilikikurang mendapat perhatian. Studi yang lebih tua menggambarkan rendahrespon limfosit (Czonkowska et al., 1979),perubahan dari respon kulit (Tarkowski et al., 1995)dan menonjol intratekal B-tanggapan sel (Rostrm danLink, 1981). Baru-baru ini stroke, dan stroke berulangKematian juga telah dikaitkan dengan peningkatan jumlahsirkulasi cluster diferensiasi (CD) 4? CD28?limfosit, populasi dengan kuat pro-inflamasidan jaringan-merusak potensial (Nadareishvili et al., 2004).Studi tentang SAI adalah model klinis yang sangat baik untuk menilaiimunologi studi stroke dan terakhir telahdijelaskan bahwa SAI terjadi dalam hubungan dengan rendah TNF-/ IL-10? Ratio (pergeseran Th2) (Chamorro et al., 2006), lebih rendahTNF-? produksi dan antigen rendah menyajikan HLA-DR dimonosit (Haeusler et al., 2008) peningkatan produksikatekolamin oleh medula adrenal (Chamorro et al.,2007), penurunan limfosit Th (Haeusler et al.,2008, Vogelgesang et al, 2008), dan produksi yang lebih rendah.IFN-? setelah stimulasi ex vivo (Haeusler et al., 2008).Namun, studi ini relatif kecil dalam ukuran, dantelah menggunakan metode yang bervariasi, definisi dan jendela waktu untukmendeteksi SAI. Oleh karena itu, tidak ditetapkan apakah adatemuan ini dapat digunakan di samping tempat tidur sebagai laboratoriumpenanda infeksi yang akan datang setelah stroke.Pertanyaan lain yang penting dan belum terselesaikan adalah apakahSAI adalah kontributor atau penanda sederhana kerusakan otak padaStroke akut penderita. Jika SAI memberi sumbangan pada stroke memburukitu akan menjadi pusat untuk mengungkap mekanisme yang bertanggung jawab.Secara teoritis, SAI dapat mengganggu kelangsungan hidup neurondalam penumbra iskemik akibat elektrolitikunbalance, hipoksia, dan demam (Ginsberg dan Busto,1998), tetapi efek ini bisa dikacaukan oleh awalkeparahan stroke (Vargas et al., 2006). Memang, pasiendengan stroke besar mengembangkan lebih sering SAI (Vargas etal, 2006;. Haeusler et al, 2008) dan ini bisa terjadi akibat.beberapa penyebab seperti drive pernapasan menurun, dikurangikewaspadaan, manuver invasif, kateter berdiamnya,imobilisasi, atau komorbiditas yang lebih besar. Sayangnya,tidak ada studi klinis sebelumnya ditangani secara khususkontribusi limfosit dengan prognosis stroke. Dikondisi eksperimental (LPS administrasi), SAI bisamendukung suatu Th1 sistemik pro-inflamasi respon melalui promosidan aktivasi co-stimulasi sinyal dan fasilitasirespon autoimun merusak (Gee et al.,2007). Tapi catatan hati-hati diperlukan sebelum ekstrapolasitemuan di samping tempat tidur. Pada manusia yang menderita stroke, SAI mungkin"Decode" keadaan imunologi sebelumnya, itu tidak terjadisecara acak. Sebagian besar data saat ini menunjukkan bahwa SAI adalahdidiagnosis pada pasien dengan peningkatan anti-inflamasidrive (Chamorro et al, 2007b,.. Woiciechowsky et al,1999), dan efek berbahaya teoritis infeksiharus diimbangi dengan salutatory potensialperlindungan disampaikan oleh respon ini. Jelas, lanjut klinisstudi diperlukan untuk menjelaskan masalah penting ini.Mengingat kontroversi ini kami berusaha untuk menilaihubungan antara program dan perilaku yang berbedalimfosit subpopulasi dengan risiko SAI dan fungsionalhasil setelah stroke. Untuk meminimalkan efekpembaur kami mendirikan inklusi ketat dan eksklusiKriteria, standar optimal pelayanan, operasional yang ketatkriteria penilaian, akurat dan mencetak gol dari penurunan klinisdan neuroimaging, dan interpretasi multivariathasil. Temuan utama dari studi ini menegaskancepat penurunan sirkulasi sel T dan sel B pada manusiastroke, yang paling menonjol pada pasien rentan untuk mengembangkaninfeksi. Jatuhnya limfosit T tidak terkait denganklinis pemulihan sementara penurunan yang lebih besar dari limfosit Bdiprediksi lebih kerusakan otak parah jangka panjang. Akhirnya, parapenelitian sebelumnya pengamatan menegaskan bahwa membantah independenhubungan antara SAI dan hasil stoke.Sebaliknya, SAI terutama menunjukkan bahwa kerusakan parah padaboard dan bahwa Penekanan kekebalan yang kuat dikemukakanuntuk meminimalkan respon imun inflamasi.EKSPERIMENTAL PROSEDURSubjekKami mempelajari prospektif 46 pasien berturut-turut dengan akutStroke yang memiliki pra-stroke Rankin Scale (mRS) skor2, dan Skala Stroke National Institutes of Health (NIHSS)?skor pada masuk? 3. Secara keseluruhan, 51% dan 72% dari pasienpertama kali dievaluasi dalam waktu 3 atau 4 jam masing-masing, dan semua peserta- celana dinilai dalam waktu kurang dari 12 jam. Kriteria eksklusitermasuk riwayat infeksi, infeksi yang sedang berlangsung, dan penggunaan antibiotik,imunosupresan, atau steroid dalam 3 sebelumnyabulan. Studi ini disetujui oleh komite etika lokaldan semua peserta menandatangani informed consent tertulis. Pasienmemiliki otak CT scan dan / atau Magnetic Resonance Imaging (MRI)sebelum masuk ke dalam Unit Stroke di mana mereka berhasilsesuai dengan pedoman Eropa Initiative Stroke (Hacke etal, 2003.). Sekelompok 18 pasien menerima rtPA dalam waktu 3 jam darigejala onset. Pasien dengan stroke iskemik memiliki tindak lanjutMRI menggunakan difusi-tertimbang pencitraan (DWI) urutan dalam31 h (S.D. 8,8) dari onset stroke. Volume lesi dihitungDWI di-MRI menggunakan MRIcro software (Chris Roden; UniversitasNottingham, Nottingham, Inggris). Kerusakan neurologisdinilai setiap hari dengan menggunakan NIHSS sampai dikeluarkan dari rumah sakit dan kemudiandiulang pada hari 90. Gangguan fungsional dinilai denganmRS pada hari 90 oleh satu penyidik dibutakan (AC) untuk menghindari interratervariabilitas. Hasil yang baik mendefinisikan MRS dari 0-2 danNIHSS dari 0 atau 1. SAI mendefinisikan semua peristiwa yang terjadi dalam 7 pertamahari stroke dengan suhu tubuh? 37,8 C, sugestifgejala (yaitu batuk, dyspnea, nyeri pleuritik, gejala saluran kemih),atau sel darah putih jumlah 11.000 /? mL atau? 4000/mL, parumenyusup di dada x-ray, atau budaya positif untuk patogen.Semua SAI didiagnosis oleh ahli saraf stroke dan divalidasioleh spesialis senior pada penyakit menular eksternal untuk penyelidikan.Dua belas bebas dari gangguan SSP gejala subyekmenjabat sebagai kontrol.Arus cytometryLimfosit subpopulasi dan apoptosis. Darah sampeldikumpulkan dalam rata-rata 180 menit (IQR 120-350) setelahonset stroke sebelum obat apapun yang diberikan, dan antara 08:30dan 9:00 am di hari 2, 7, dan 90 setelah masuk untuk studilimfosit subpopulasi dan imunofenotipe. Limfositsubset dianalisis menggunakan cytometry aliran permukaan standarsegera setelah ekstraksi darah oleh peneliti dibutakan untuk klinismengakhiri poin. Antibodi monoklonal berikut digunakan:CD25 dan CD19 konjugasi isothiocyanate fluorescein, CD3,CD4 dan CD86 konjugasi phycoerythrin,, CD45 CD8 dan CD4terkonjugasi untuk klorofil peridinin, dan CD3 konjugasi allophycocyanin(BD Biosciences, San Jose, CA, USA). Berikutkombinasi antibodi yang digunakan untuk mengidentifikasi subset limfosit:CD45? untuk limfosit, CD3? untuk limfosit T (sel T),CD3? CD4? untuk limfosit Th (sel Th), CD3? CD8? untuk CTL,CD3-CD56? untuk sel NK (NK) dan CD19? untuk limfosit B (Bsel). Untuk Treg kuantifikasi sel, sel mononuklear pertama adalahdiisolasi menggunakan Ficoll-Hypaque gradien dan pewarnaan yang dilakukansetelah kit yang tersedia secara komersial (eBiosciences, SanDiego, CA, USA). CD4? CD25? Foxp3? sel dianggapTreg. Jumlah absolut dari bagian masing-masing ditentukan olehmengalikan persentase (dinyatakan sebagai fraksi limfosit total)dengan jumlah absolut limfosit. Permukaan molekulekspresi CD86 (B7-2) dalam limfosit B dihitung denganmengkonversi intensitas median neon (LKM) nilai-nilai ke molekulekuivalen larut (MESF) unit fluorochrome menggunakan standarneon manik (Quantum PE Tingkat Menengah,BangsLabs, USA). Unit MESF diberikan setelah pengurangan dariisotipe kontrol MESF unit. Akuisisi sel dilakukan padaFACSCalibur aliran cytometer (BD Biosciences) dan CellQuest software (BD Biosciences) telah digunakan untuk analisis.Limfosit apoptosis diidentifikasi menggunakan VFITC Annexinkit (Bender MedSystems, Wina, Austria) setelah mononuklearsel isolasi dengan Ficoll-Hypaque gradien. Setiap limfositbagian diakui menggunakan CD3, CD4, CD8, CD19 dan CD56terkonjugasi untuk PE (semua dari BD Biosciences) antibodi. ProporsiAnnexin V-sel positif dihitung untuk setiap limfositsubset.Intraseluler sitokin. Setelah menipiskan 500? L darah utuh01:02 di RPMI 1640 (Gibco BRL, Breda, Belanda) itudirangsang dengan asetat miristat phorbol (PMA) (25 ng / mL) danionomycin (10 g / mL?) di hadapan Brefeldin A selama 4 jam (semuadari Sigma, St Louis, MO, USA). Sel Th yang diakui olehpermukaan ekspresi mereka CD3 dan CD4, dan CTL diakuidengan CD3 dan CD8. Pewarnaan intraseluler dilakukansesuai dengan protokol produsen (BD Biosciences) menggunakanFITC terkonjugasi TNF-? dan PE terkonjugasi IL-4 dan isotipekontrol. Aktivasi limfosit dikonfirmasi oleh ekspresidari CD69.Kortisol dan metanephrine (MN)Antara 8:30-09:00 dari hari 1, kadar kortisol serum (g / dL?)diukur menggunakan immunoassay enzim, dan unconjugatedtingkat MN diukur dengan enzimatik kompetitifimmunoassay, seperti yang dilaporkan sebelumnya (Chamorro et al., 2007a).Analisis statistikPerbedaan antara pasien dan kontrol dan kelompok yang berbedapasien dihitung dengan Student t-test atau Mann-Whitney U test yang sesuai. Kursus waktu limfositdinilai dengan uji t-berpasangan, dan korelasi dihitung denganyang Spearman rank koefisien korelasi. Pengamatan terakhirmetode forward dilakukan digunakan untuk menganalisis data klinis hilang.Independen efek SAI dan subset limfosit (dalamkuartil) pada hasil stroke dinilai menggunakan regresi logistikModel disesuaikan dengan usia, dan keparahan awal stroke (NIHSSscore). Semua tes yang dilakukan menggunakan versi software SPSS14,0 (SPSS Inc, Chicago, IL, USA). Nilai P? 0,05 dianggapsignifikan secara statistik.HASILPasienFaktor demografi dan risiko vaskular penelitianPopulasi diringkas dalam Tabel 1. SAI terjadi pada 14(30%) pasien pada penundaan rata-rata 2,5 hari setelah gejalaonset (n? 1 pada hari ke 0, 3 pada hari 1, 5 pada hari 2, 2 pada hari 3, 1pada hari ke 4 dan 2 pada hari 6) dan pneumonia termasuk (n? 5),tracheobronchitis (n? 5), infeksi saluran kemih (n 2?), danInfeksi lainnya (n? 2). Sepuluh pasien meninggal pada tindak lanjut.Subset limfositKursus waktu sel T, sel Th, CTL, sel B, dan Tregmenunjukkan variasi yang signifikan pada pasien, dan jumlah merekasecara signifikan lebih rendah daripada kelompok kontrol (Gambar 1A-E). Ituwaktu kursus sel NK menunjukkan penurunan yang tidak signifikansetelah jumlah sel stroke, dan NK memiliki non-signifikanmenurun dibandingkan dengan kontrol (Gambar 1F). Sel B adalahberkurang pada masuk, dan pada hari ke 90, namun jumlah peningkatanantara hari 2 dan 7 (Gambar 1G). Limfosit tidakmenunjukkan perbedaan yang signifikan antara pasien denganiskemik atau hemoragik stroke (data tidak ditampilkan). ItuEfek potensial dari terapi tidak dinilai untuk dayaketerbatasan penelitian dan karena perawatan tidakacak untuk alasan etis.Korelasi antara stres awal stroke, keparahanrespon, dan respon imunPenerimaan skor NIHSS berbanding terbalik berkorelasi dengan Tsel (r? .48?, P? 0,01), Th sel (r? .47?, P 0,01?), danSAI, respons stres, dan hasilPasien dengan SAI memiliki skor NIHSS lebih tinggi dibandingkan pada awalnon-SAI pasien [median (IQR) 19 (13-20) dibandingkan sembilan(6 -15), P 0,001],? Dan tingkat yang lebih tinggi dari MN [21,19 (10,75)vs 14.00 (15.26), P? 0,005], dan kortisol [28,82 (8,04) vs21.02 (4.50) P 0,0001]?. Namun, SAI tidak meningkatkankemungkinan hasil yang buruk pada 3 bulan setelah penyesuaian untukpengaruh skor NIHSS dan usia [OR (95% CI) 1,08(0,07-15,66), P 0,95]?.Infark VolumeVolume infark pada DWI-MR pada hari 1 berkorelasidengan skor dasar NIHSS (r .58,? P? 0,001), danberkorelasi terbalik dengan sel T pada masuk (r? .44,P 0,01)?, Dan CTL pada masuk (r? .47, P 0,01)?, Dan pada2 hari (r? .39?, P 0,05?).Apoptosis pada limfositDengan pengecualian dari limfosit bagian NK lainnyatelah meningkat apoptosis dalam korespondensi dengan penurunantingkat sirkulasi (Gambar 2). Apoptosis tertinggidalam sel CTL, dan terpanjang abadi dalam sel Th. Apoptosis Tsel (r .38,? P? 0,03), dan sel Th (r .38,? P? 0,03) berkorelasidengan kortisol lebih tinggi.Sitokin produksi limfosit dirangsangPada pasien, TNF-? produksi sel Th tetapi tidak dalam CTLmengalami penurunan (Gambar 3A-B), IL-4 produksi di Th dan CTLadalah serupa pada pasien dan kontrol (Gambar 3C-D).Limfosit dan infeksiPasien SAI telah jatuh lebih besar dari limfosit, sel T, Thsel, dan CTL dibandingkan non-SAI pasien, namun jumlah yang samaB sel, dan sel-sel Treg (Gbr. 4). Produksi TNF-?dan IL-4 di Th dan sel CTL, dan molekul permukaanekspresi CD86 (B7-2) dalam limfosit B tidak berhubungandengan kejadian SAI (data tidak ditampilkan).Limfosit dan hasil StrokeHasil yang buruk pada 3 bulan dikaitkan dengan rendahtingkat sirkulasi sel B (Gambar 5), dan tidak dengan yang lainlimfosit subset (data tidak ditampilkan). Dalam regresi logistik(NIHSS dan usia disesuaikan), ada kecenderungan statistik dalamhubungan antara hasil yang buruk dan penurunan Bsel pada masuk (OR 0,40, 95% CI 0,15-1,05, P? 0,06),dan pada hari ke 2 (OR 0,41, 95% CI 0,16-1,06, P? 0,06). Tidakbagian limfosit lainnya menunjukkan sebuah asosiasi denganStroke hasilnya.Pasien dengan hasil yang buruk memiliki meningkat secara signifikanpermukaan molekul ekspresi CD86 pada limfosit Bpada hari ke 2, 35.34 (31.03) vs 1,14 (15,02)? MESFunit, P? 0,006. Dalam regresi logistik (NIHSS dan usiadisesuaikan), peningkatan ekspresi CD86 (B7-2) adalah independenterkait dengan hasil yang buruk (OR 6,85, 95% CI1,42-33,04, P 0,01)?.PEMBAHASANPenelitian ini menegaskan limfopenia sebagai signature awalpasien dengan stroke akut (Vogelgesang et al, 2008.;Haeusler et al, 2008.) Dan wawasan lebih lanjut diberikan tentangperan himpunan bagian yang berbeda dari limfosit dalamstroke akibat sindrom Penekanan kekebalan. Sementara baru-baru inipengamatan menggambarkan penurunan sel T, sel Th, danCTL setelah stroke akut (Vogelgesang et al, 2008;. Haeusleret al, 2008.) penelitian kami diperpanjang temuan ini juga untukB sel, dan sel-sel Treg. Jatuhnya sel B terutamamencolok hari masuk stroke ketika sel Tregmenurun lebih signifikan pada hari 2. Penelitian ini menguatkannormal jumlah sel NK setelah stroke pada manusia(Vogelgesang et al, 2008;.. Haeusler et al, 2008), danmenunjukkan bahwa penurunan subpopulasi limfositsangat berkorelasi dengan peningkatan apoptosis. Temuan baru dari penelitian ini adalah bahwa pasien dengan rendahtingkat sirkulasi sel B menunjukkan tren untuk miskin keluar- datang pada tindak lanjut. Dalam kondisi eksperimental, kurangnya Tsel mengakibatkan infark yang lebih kecil dan mengurangi neurologisDefisit setelah iskemia otak, sedangkan B-sel hewan kekurangangagal untuk menunjukkan perbaikan ini setelah stroke (Yilmaz et al.,2006). Sifat menguntungkan potensi sel B adalahjuga didukung oleh pengamatan bahwa antigen menyajikansel (APC) yang mencapai kelenjar getah bening leher dariCSF menargetkan wilayah yang kaya sel B, daripada daerah sel T yang kaya (Hatterer et al., 2006). Konsekuensi keseluruhan inidialog dalam kelenjar getah bening leher rahim adalah dominasihumoral dan Th2-jenis anti-inflamasi tanggapan(Harling-Berg et al, 1999.). Kami berspekulasi bahwa penurunansel B yang kami amati terkait dengan hasil yang burukadalah indikasi dari pengurangan anti-inflamasi (saraf)sinyal dimediasi oleh sel B ke terlukaotak. Namun demikian, kita tidak bisa sepenuhnya mengesampingkan efekkebetulan atau beberapa efek pengganggu belum teruji. Oleh karena itu,penelitian yang lebih besar harus memvalidasi temuan ini.Hasil stroke yang miskin juga independen terkaitdengan ekspresi permukaan peningkatan costimulatorymolekul CD86 (B7-2) pada sel B. CD86 diekspresikan padaAPC diaktifkan, termasuk sel dendritik, makrofag,dan B sel sementara itu tidak hadir atau diekspresikan pada sangat rendahtingkat di APC beristirahat. Ekspresi CD86 meningkatjika toll-like receptors (TLRs) dirangsang, baikoleh produk dari patogen, atau oleh sitokin yang diproduksi selamabawaan kekebalan reaksi (Massari et al., 2002). Hal ini diterimabahwa stroke akut memicu respon bawaan yang kuat(Kariko et al., 2004) dan juga semakin diakuibahwa beberapa komponen yang secara independen terkaitdengan hasil yang buruk pada pasien fungsional (Chamorro et al.,1995, 2000). Kami berpendapat bahwa hubungan tersebut ditemukan antarasuatu peningkatan ekspresi CD86 pada sel B dan hasil yang burukadalah bukti tidak langsung dari bawaan meningkatrespon. Memang, respon bawaan diamati dalampasien dan hubungan dengan sel darah beredar adalahsubyek publikasi independen.Hasil prediktor kuat independen pada strokeadalah keparahan awal penyakit dan efek ini selaluharus dipertimbangkan dalam penelitian prognostik. Dalam studi ini,keparahan awal stroke secara langsung berhubungan denganperubahan yang diamati dalam subset limfosit, dalam korespondensidengan studi klinis sebelumnya pencocokan besarnyaPenekanan kekebalan dari dengan keparahan klinis danStroke ukuran (Chamorro et al., 2007a). Pengaruh strokekeparahan berpengaruh pada penurunan sel T dan Tsubtipe, tetapi tidak sel B, sel Treg, dan sel NK. DiSelain itu, awal musim gugur dari sel T dan CTL diprediksi lebih besarinfark pada DWI-MR di follow-up, menunjukkan potensi merekanilai sebagai penanda awal pematangan infark iskemik.Sebuah penjelasan yang mungkin untuk temuan ini adalah bahwakeparahan awal stroke paralel respon stres yang lebih kuatdari sumbu hipotalamus-hipofisis-adrenal (kortisoltingkat), dan jalur adrenomedullary-simpatik(MN tingkat). Dengan demikian, tingkat yang lebih tinggi kortisol dan MN adalahdiamati pada pasien dengan stroke yang lebih berat, dalam perjanjiandengan penelitian sebelumnya (Olsson et al, 1992;. Schwarzet al, 2003; Chamorro et al, 2007a)... Namun, semakin kuatrespon hormonal diterjemahkan ke dalam tanda-tanda lebih ditandaiPenekanan kekebalan tapi itu tidak mempengaruhi sama limfosit semuasubset, dalam perjanjian dengan dogma bahwa subkelompoklimfosit yang sangat dipengaruhi oleh glukokortikoid,dan katekolamin (Van Tits et al, 1990.). Dipenelitian ini, respon stres berkorelasi dengan peningkatanapoptosis sel T, dan sel Th, dan lebih besarpenurunan CTL, sel T, dan sel Th, masing-masing. Atau,kami tidak melihat korelasi yang baik antararespon hormonal dan sel B.Tidak seperti laporan terbaru pada tikus (Offner et al., 2006b),Sel Treg menurun setelah stroke. Namun, sel-sel Treg melakukantidak menunjukkan hubungan yang relevan dengan perkembanganinfeksi atau hasil stroke. Produksi TNF-? adalahjuga berkurang pada sel Th pasien stroke dibandingkan dengankontrol tapi profil ini tidak terkait dengan besarrisiko infeksi atau hasil klinis yang berbeda. Juga,pro-inflamasi dan anti-inflamasi kapasitas CTLtidak berhubungan dengan fenotip klinis stroke akut.Potensi keterbatasan penelitian ini adalah relatifukuran kecil, efek terapi pada fungsi kekebalan tubuh,pengaruh faktor risiko, atau yang iskemik dan hemoragikpasien stroke dimasukkan. Namun, kami tidak menemukansetiap perbedaan yang signifikan dalam perilaku kekebalan tubuh pada pasiendengan stroke iskemik atau hemoragik, atau sesuai dengan individufaktor risiko, namun penelitian yang lebih besar akan diminta untukmengkonfirmasi temuan ini.Temuan yang paling konsisten terkait dengan risikoInfeksi adalah penurunan global subpopulasi sel Ttanpa keterlibatan sel B, seperti yang dilaporkan sebelumnya(Vogelgesang et al, 2008;.. Haeusler et al, 2008). Itustudi juga diberikan dengan pengamatan sebelumnya (Dziewaset al, 2004;. Vargas et al, 2006;. Haeusler et al, 2008).melaporkan bahwa SAI tidak berkontribusi secara independen untukburuk klinis hasil. Sedangkan infeksi secara teoritis bisamemiliki efek merusak terhadap jalannya akut stroke dengan meningkatkan reaksi inflamasi autoimundalam otak (Gee et al, 2007.), data klinis sejauhtersedia menunjukkan bahwa SAI terutama menerjemahkan keadaankuat anti-inflamasi drive. Oleh karena itu, deteksi diniSAI dan tepat waktu pelaksanaan yang sesuairejimen antibiotik sangat penting untuk menghindari sistemikkomplikasi dari SAI. Menurut temuan kami, prognosisstroke terutama tergantung pada besarnyakerusakan awal sedangkan SAI (diobati) tidaktampaknya berkontribusi terhadap kerusakan lebih lanjut.Dalam kesimpulan, limfopenia dan peningkatan apoptosisT, Th, CTL, Treg dan sel B adalah tanda tangan awal setelahmanusia stroke. Sebuah respon seluler menurun adalah penandadari kerusakan otak yang lebih besar sedang berlangsung, sebuah hormon yang lebih kuatstres respon, dan berisiko tinggi mengalami stroke-terkaitinfeksi. Sebuah respon humoral yang lebih rendah adalah prediktor miskinhasil jangka panjang. Secara keseluruhan, penelitian ini menegaskan kembali klinisrelevansi dari respon kekebalan tubuh pada pasien denganakut stroke dan mendorong studi lebih lanjut bertujuan untuk mengidentifikasiimunomodulator terapi untuk menghancurkanKondisi.Ucapan Terima Kasih Kami berterima kasih kepada-Drs. V. Obach, S. Amaro dan M. J.Gmez-Choco untuk perawatan klinis pasien, dan FranciscaRuiz dan Dr Martha Vargas untuk bantuan teknis yang sangat baik.Dr J. Mensa diakui untuk validasi dari semua endpoint menular.Kami berterima kasih kepada pasien dari penelitian ini karena tanpa merekapenelitian ini akan tidak mungkin terjadi. Penelitian inididukung oleh Fondo de Investigaciones Sanitarias (FIS) dariSpanyol Departemen Kesehatan (grant FS 06/0909). Drs. X. Urra dan. Cervera didukung oleh FIS.