5
The Gene for Naegeli±Franceschetti±Jadassohn Syndrome Maps to 17q21 Neil V. Whittock, Carrie M. Coleman,² W.H. Irwin McLean,² Gabrielle H.S. Ashton, K.M. Acland,* Robin A.J. Eady, and John A. McGrath Department of Cell and Molecular Pathology, and *Department of Dermatological Surgery, St John's Institute of Dermatology, The Guy's, King's College, and St Thomas' Hospitals' Medical School, London, U.K.; ²Epithelial Genetics Group, Human Genetics Unit, University of Dundee, Ninewells Hospital and Medical School, Dundee, U.K. Naegeli±Franceschetti±Jadassohn syndrome is a rare autosomal dominant form of ectodermal dysplasia affecting sweat glands, nails, teeth, and skin. We have studied a multigeneration family of Anglo- Saxon British descent using microsatellite markers to screen candidate loci, including the epidermal differ- entiation complex on 1q, the keratin gene clusters on chromosomes 12q and 17q and the desmosomal cad- herin gene cluster on chromosome 18q. Signi®cant genetic linkage to chromosome 17q was observed using marker D17S1787, with a maximum two-point LOD score of 4.166 at a recombination fraction of q = 0. Recombination events in the family place the gene in a 26.97 cM interval between markers D17S798 and D17S957, a region known to contain the type I keratin gene cluster and other genes expressed in epithelia. Keratins K15, K19, and K20, plakoglobin, and MEOX1 were excluded as candi- dates by direct sequencing of genomic polymerase chain reaction products. Key words: ectodermal dyspla- sia/®ngerprints/skin. J Invest Dermatol 115:694±698, 2000 T he Naegeli±Franceschetti±Jadassohn (NFJ) syndrome (MIM 161000) is a rare autosomal dominant form of ectodermal dysplasia affecting the sweat glands, skin, nails, and teeth with a population incidence of approximately 1 in 2,000,000. The syndrome was ®rst described in a Swiss family by Naegeli in 1927 (Naegeli, 1927) with further analysis by Franceschetti and Jadassohn in 1954 (Franceschetti and Jadassohn, 1954), and Itin and colleagues in 1993 (Itin et al, 1993). The main symptom in affected individuals is heat intolerance caused by diminished sweating, which can lead to collapse after mild exercise. NFJ syndrome is also characterized by a lack of dermatoglyphics (®ngerprint lines) and by a brown reticulate pigmentation of the neck, chest, and abdomen that begins in early childhood (3 mo±6 y) and decreases after puberty, often remitting completely after 60±80 y of age. In addition, spotty pigmentation may be present around the eyes and mouth. Affected individuals also display mild palmoplantar hyperkeratosis, brittle ®ngernails, and defective dentition with yellow spots on the enamel (Naegeli, 1927; Franceschetti and Jadassohn, 1954; Sparrow et al, 1976). In some cases there is also malalignment of the great toenails. A number of other NFJ families have been described that differ slightly in clinical phenotype (Levi et al, 1971; Papini, 1978) and intrafamilial variability has also been reported (Itin et al, 1993). To date, the gene for the NFJ syndrome is not known and no genetic linkage studies have been reported; however, several recent mutation analyses have demonstrated the relevance of a number of structural skin proteins to other ectodermal dysplasias and related disorders. For example, mutations in the genes encoding differentiation-speci®c keratins K6a, K6b, K16, and K17 underlie autosomal dominant forms of pachyonychia congenita (Bowden et al, 1995; McLean et al, 1995; Shamsher et al, 1995; Smith et al, 1998) and mutations in the desmosomal plaque protein, plakophilin 1, lead to an autosomal recessive form of hypohidrotic ectodermal dysplasia (McGrath et al, 1997). Therefore, several genes encoding keratins and structural components of desmosomes are plausible candidates for the NFJ syndrome. In this study we present linkage analysis of the British family originally reported by Sparrow et al (1976) in order to identify the chromosomal region containing the NFJ locus. We report the mapping of the NFJ syndrome to 17q21 and exclude the type I keratins K15, K19, and K20, plakoglobin, and the MEOX1 gene by direct sequencing. PATIENTS AND METHODS Clinical ®ndings A single family of British origin with 25 individuals affected by the NFJ syndrome was studied. Members of the kindred were examined by one of the authors (JAM). The inheritance pattern of NFJ syndrome in the family was consistent with autosomal dominant mode of inheritance, exhibiting male-to-male transmission, as seen in Fig 1. Affected family members presented with reticulate pigmentation of the neck, brittle nails, heat intolerance, lack of dermatoglyphics (Fig 2), and focal acral hyperkeratosis. Blood samples were available from 13 affected and ®ve unaffected family members. Genomic DNA was extracted from peripheral blood lymphocytes using standard methods. Genotyping and linkage analysis Microsatellite markers were chosen from the Ge Âne Âthon and Marsh®eld Genetic linkage maps (Dib et al, 1996; Broman et al, 1998). Markers D1S305 and D1S498 were used for the epidermal differentiation complex on 1q, markers D12S90 and D12S96 were used for the type II keratin gene cluster on chromosome 12q, markers 0022-202X/00/$15.00 ´ Copyright # 2000 by The Society for Investigative Dermatology, Inc. 694 Manuscript received April 6, 2000; revised June 27, 2000; accepted for publication June 28, 2000. Reprint requests to: Mr N. V. Whittock, Department of Cell and Molecular Pathology, St John's Institute of Dermatology, St Thomas' Hospital, Lambeth Palace Road, London, SE1 7EH, U.K. Email: neil.2. [email protected] Abbreviation: NFJ, Naegeli±Franceschetti±Jadassohn.

The Gene for Naegeli-Franceschetti-Jadassohn Syndrome Maps to 17q21

  • Upload
    john-a

  • View
    213

  • Download
    1

Embed Size (px)

Citation preview

��� ���� ��� ���� ������������ �������� ����������� �� �����

���� �� ����� ������ �� ������ � ���� ����� ������ � ��������� ���� ���� ���� ������ ����� �� � !��" ��� �� �� ������#�$����� % ���� ��� ����&��� '���(" ��� �#�$����� % #�����(���� �&�(��" � ��)� ����&� % #�����(" *�� �&")� ���()�

����(� ��� � *����) ��$����) ������� ���� ���� +���, �!$������� ������� ��&$ �&��� ������� +�� +��-����" % #&����

��������� ��$��� ��� ������� ���� #&���� +���

���� ������������ �������� �������� � ���������� ��� ��� ���� �� ��������� ������ ����� �� ���� ����� � �� ����� �� �! �" #��$� ���� �� ���� ������ �� �� �� �� %����&�'�� (� � �� ������� �� �� � �������� �� ��!��� �������� ��� ��� ��� ����� �� ��� �� ����� � ����&��� � �� ������' �� �� ��� !��� � ���� �������� ������������� ��� �� ��� �� ��� ��������� ��&��� � ���� ������� �� ���������� �)�" � �� *�������� � � �!�� �� ���������� ��� �� �+���$���� �� ��!�� ,�����)� � �� �' ��� ���&�� ��

-., ����� �� /"�00 � �����+ �� �� ���� �� ���1 2" 3����+ �� �� �$���� � ��� �� �� ���� ������� � �0"4� �� ����$� +������ ��!���,����4) �� ,���45� ��� �� !���� �� ���� ���� ���� 6 !��� � ���� ������� �� ����� ������'������� � �� ���� " 7��� �� 7�5 7�4 �� 7�2 ��!����+ � �� �8.9� ���� �'������ � ��� &���� +� � ���� ������� �� �� ����� � ����������� � ���� �� ��������" ��� ����� ������� � ����� ��� ������������������ � ������ ���� ��� ����� !��"# $%%%

*�� ���(���./����������. ������� 0�/ 1 �"�����0��� 2324441 �� � ���� �&���� ������ %�� %�������� �"�$����� �%%����( �� ���� (����� ���� ����� ��� ��� ��� � $$&���� ��������� %�$$�5�����" 2 �� 6 444 444� *�� �"����� ���

7�� ��������� �� � ����� %����" �" ���(��� �� 2869 0���(��� 28691��� %&���� ����"��� �" /���������� ��� ������� �� 28:;0/���������� ��� ������� 28:;1 ��� ��� ��� �����(&�� �� 288<0��� �� �� 288<1� *�� ���� �"�$� �� �%%���� ����-��&��� �� ������������ ��&��� �" ���������� ������( ����� ��� ���� ����$�� �%�� ���� �5������� �/ �"����� �� ��� ���������=�� �" ����� % �����(�"$���� 07�(��$��� �����1 ��� �" � ���� ����&���$�(������ % �� ���� ���� ��� ������ �� ��(��� �� ����"������� 0< �.3 "1 ��� ��������� �%�� $&���" %�� ������(��$����" �%�� 34.>4 " % �(�� �� ������ �$" $�(��������" �� $����� ��&�� �� �"�� ��� �&�� �%%���� ����-��&������ ���$��" ���� $���$����� �"$��������� ����� 7�(������� ��� ��%���-� ������ ��� "���� �$� � �� ������ 0���(��� 2869, /���������� ��� ������� 28:;, �$���� �� �� 28931� ����� ����� ���� �� ��� ������(���� % �� (��� ������� ��&���� % ��� �/ %������� ��-� ���� ��������� �� ��%%�����(��" �� �������� $���"$� 0��-� �� �� 2892, '�$��� 289>1 �������%������� -��������" ��� ��� ���� ��$��� 0��� �� �� 288<1�

* ��� �� (��� %� �� �/ �"����� �� � ���� ��� �(����� �����(� �&���� ��-� ���� ��$���, ���-�� ��-���� ������&��� ����"��� ��-� ��������� �� ����-���� % � �&���� %

��&�&��� ���� $����� ��� �������� �"�$������ ��� ��������������� /� �5��$�� �&���� �� �� (���� ������(��%%��������?�$���7� ������� �3� �3� �23 ��� �29 &��������&���� ������ %��� % $���"�"���� ��(���� 0@������ �� 288:, ������ �� �� 288:, �������� �� �� 288:, ���� �� �� 288>1 ��� �&���� �� �� �������� $��A&� $���� $���$�����2 ���� �� �&���� �������-� %�� % �"$������ ���������"�$����� 0������ �� �� 28891� *����%�� ��-���� (���� ������(������� ��� ��&�&��� ��$���� % �������� ��� $��&�������������� %� �� �/ �"������

�� ��� �&�" �� $����� �����(� ����"��� % �� @����� %����"��(�����" ��$��� �" �$���� �� �� 028931 �� ���� �����%" ���������� ��(�� �������( �� �/ ��&�� �� ��$� ����$$��( % �� �/ �"����� 29A62 ��� �5��&�� �� "$� �������� �2: �28 ��� �64 $���(���� ��� �� �!BC2 (����" ����� ��A&�����(�

'�*�!�*� ��# �!*�B#�

:� � �� *�� ��� � ���(�� %����" % @����� ��(�� ��� 6: ����-��&����%%���� �" �� �/ �"����� ��� �&����� ������� % �� ������� �����5������ �" �� % �� �&��� 0 ��1� *�� ���������� $���� % �/ �"����� �� �� %����" ��� ������� ��� �&���� ������ ��� %���������� �5������( ����??���� ���������� �� ���� �� � � ���%%���� %����" ������� $������� ��� ����&��� $�(������ % ������ ����� ����� ��� ��������� ���� % �����(�"$���� 0� � �1 ���%��� ����� �"$���������� @�� ���$��� ���� �-������� %�� 2< �%%������� 7-� &��%%���� %����" �������� ������ #�� ��� �5����� %��$���$����� ��� �"�$��"�� &���( ������� ������

������� �� �� � �!�� ���� � ����������� ������� ���� �����%�� �� ��D��D�� ��� �����7��� ������ �����(� ��$� 0#�� �� �� 2883,@���� �� �� 288>1� ������� #2�<4: ��� #2�;8> ���� &��� %� ���$������� ��%%�������� ��$��5 � 2A ������� #26�84 ��� #26�83���� &��� %� �� "$� �� ������ (��� ��&��� � ������� 26A �������

4466?646CE44EF2:�44 G �$"��(� � 6444 �" *�� ����" %� ��-���(��-� #�����(" ����

04/

���&����$ �����-�� �$��� 3 6444, ��-���� &�� 69 6444, ����$�� %�$&������� &�� 6> 6444�

��$��� ��A&��� H �� �� �� ����� #�$����� % ���� �������&��� '���(" � ��)� ����&� % #�����(" � *����)��$��� ������ '����� ��� ���� �!2 9!� +��� !����H �����6������I�������&�

�����-����H �/ ���(���./����������. ��������

#29�>44 ��� #29�29>9 ���� &��� %� �� "$� � ������ (��� ��&��� �������� 29A ��� ������� #2>�;3< ��� #2>�:<3 ���� &��� %� ���������� �������� (��� ��&��� � ������� 2>A� '�"������ ����������� 0'��1 ������� ���� $��%���� �� 9�:�� �������( 244 �( %��$��� #�� 2� ������$ '�� �&%%�� �� 0'�����?!���� /��� ��" ��1 <<4 �� % ���� $����� 6:4�� ��*'� 6�: �� �(��6 ���4�<4 &��� % ��$���A ��� #�� $�"������ 0'�����?!����1 �� �*&����� *�����"���� 0�"���� ���%�� +���1� B�� % �� �$������ ��� ������� � �� :� ��� ��� J&������ /�� �!C � �!#�"�� 0'�����?!����1� ����������� #�� ������ ����"��� ��� $��%����� ����� �� �@�<99 � �@�<24 �&���� #�� ��A&����� �&����(�������� �%���� 0'�����?!����1� *�?$�� �B# ����� ������$&�� &���( �"������ -����� 6�2�< 0�������� ������7� '&���������� B5%�� +���1 �&����( �� ����� ��(���� % ������! -�����:�2� *�� �&�� ������ %��A&���" ��� ���&��� �� 4�442 ��� 244K$��������� ������ %��A&������ ���� ���&��� �� �A&�� �� �� $$&�����������&���� % �� ��� %� �� �� ��(��7����" ������ ������� #29�29>9 ��� #29�2>3> (�-��( �� ������ ������ �� ���� ���� � %��A&���"% :4K "������ �� ���� �B# ������

:�� ��� ���� ���� � '������ ��� ������� &��� ��$��%" ���2: ��� �28 (���� �� $���(���� (��� ��� �� �!BC2 (��� ���� ��$��-�&��" ��������� 0/&���� �� �� 288;, ����� �� �� 6444� �1� '������ ��$��%" �64 ���� ����� � �� $&������� (��� ��A&���� 0���@����������� �� C9<:421� /� '�� 644 �( % $���� � ���� (�����#�� ��� ����� � $����5 �������( '�� �&%%�� L39 �� *���.���$� >�> 23�3 �� 0��;16�B; 2�: �� �(��6 4�29 �( $�� �� �-������&� ���&��� 0��(�� '�� +���1 ��� 24 �� 6?�����$�����M 24 ��� % ���� ��*' ��� 64 $�� % ���� $����� �� � �� -�&�� %:4��� �%�� �� ������ ����&���� � 8:�� %� 6 ��� 6�: &��� % *�A$�"������ 0'���(� ������ ��1 ��� ����� %����� �" <: �"���� %8;�� %� 24 � ��������( %� 24 � 96�� %� <4 � ��� � 7��� ���&���� %96�� %� : ���� *�� '�� $��&�� ���� �5������ �" <K �(���� (�������$������ $&��7�� &���( �$�� ��&��� 0N��(�� ������" +���1 ���������" ��A&����� &���( @�( #"� �������� � �� �@� <24 (���������"=�� 0'�����?!����1�

8������� � ��+�� ������ �� �������� �&����� ��� +��� %���� �� ��� ������ ��� %&�� �� �+�� 6�

�!�+�*�

��� �� �������� ���� � ������ �� ����� #�� ���$��$���� %�� 2> %����" ������� ����&���( 2< �%%��������-��&��� ��� ���� %� (����� �����(� &���( � $���� %����������� ������� ����� ���� �������� (���� ��-�-�� ���� ��&�&�� ���E� ��-��$��� % �$������� ���&��� ������������ � �������� 2A 26A ��� 2>A ���� �5��&��� %������(� �� ������� �����" ��������( �� �� (��� %� �/ �"����� ��� � ����� �� �� �$������� ��%%�������� ��$��5 �� "$� �� ������ ��&��� � �� �������� �������� ��&��� ���$���-��" 0��� � ����1� �� ����� ��(��" ��(��7��� �����(���� ���� ��� � �&���� % ������� ����� �� �� -�����" % ��"$� � ������ (��� ��&��� � ������� 29A62 �� ���� ���+�� 66� ��5��&� �?$�� �B# ����� % ;�233 ��� <�929 ��O 4 ���� ������ %� �� ������� #29�29>9 ��� #29�2>3> ���$���-��" 0�+�� 661� ������� ���������� �-��� �� �� %����"

�5��&��� �� �/ �"����� (��� %�� �� ��(�� ��������� #29�98> ��� ������� #29�8:9� ����� �� (����� ��%�� ����� %����" �� ����� ������ �� ����������� ������� #29�98>��� #29�8:9 ����� ��� ��$����� �" �$$�5�����" 63�89 �� ����� � �� �&���� �����7��� ��$�������-� ������ ��$0� � ;1�

� ���� �" <�� ���� �� ��� �� �� � �� �����&�� ��� ��� �� �������� ���=�� � �� ������� *���� ��� 6: �%%���� ����-��&��� ��� <9&��%%���� ����-��&���� /����" ������� ����&����� ��� �&�" ��� �������� �" �� ������� 0�1�

� ���� �" ��� ���� ��� ! �� �� � �� ������ � �� �������� � �������� ���� �� ����������� �� >*������ �� � ���?" >�1 *�� 7�(���$� % �� �%%���� ����-��&�� 0��%1 ����� ��� �� &��%%���� ����0��(�1� 0�1 ������ ��� ������( % �� 7�(��$��� ����� ���� ����� �������� �$����� �� �� ���� 0��(�1 �& ��" ����� ����(&������� �� ���%%���� ����-��&�� 0��%1 �����$����( ���� % ���� �������� 7��&���( 0������ �� � ��%1�

�B�� 22: �B� ; B�*B@!� 6444 �/ �P�#�B�! �!�! B� 29N62 045

8'���� �� �� ����!��� �� ��!����+ � �� �8.9� � ����� �������� �������( �� �&���� ������� �"���� ��$% �� �&��� (���� ���� ��� ��-���� $����� �������� (��������� ������ #29�98> ��� #29�8:9 �����" �� "$� � ������(��� ��&��� $���(���� ��� �� �!BC2 (��� 0/������ �� �� 28881� *�� $����� ������ �" ���� (���� ��� ��-�-�� �� ����&�&�� ���E� ��-��$��� % �$������� ���&��� ��� �& ���� %�� ���� "$� � �"������ (���� � ��� ��&� ��-� ���� ����(��� ��� (����� �������� �� �5��$��� ����( ������� �2: �28 ��� �64� +���( '�� ��$��7���� % #�� %����� �" �������A&�����( �� �������� �� �5�� ��� �$���� ���� % �� 7-��������� (����� � $��(���� �&���� ���� ����-���� �&��-���� $�"��$����� ���� %&�� �� ��7���� �����(� �����(�� 0��� � ����1�

#���+���B�

�/ �"����� �� � ���� %�� % �&���� ������ ���������"�$������ �� ��� ��$� �� ���������=�� � ���(� @����� %����"�%%���� �" ��� ������� ��� �����=�� �� ��&���-� ��%�� �63�89 �� ��(�� � ������� 29A62 0�+�� 661� ��������������� �� �� ��(�� ���� &���%����-� %� �� ���������� ���� %����" ��� ����%�� �������� %������� �&� �� �&(� ���$���� ��� ���� ����-��� *�� 29A62 ��(�� �� ���� ����� ��"$� � ������ (��� ��&��� % ����� ������� �2: �28 ��� �64��-� � ���� ����(��� � �������� *����%�� ���� (���� ���(��� �� (��� ������( �� ����&�-� ������� ��� ��������Q&���� $���� $���(���� ��� �� ���2 (��� ������������� ��������� ��������� �� �� ������ %� �� (�������%�� &�����"��( �� �/ �"����� �� &� %����"� *���� (���� ���-�� ��-� ���� �5��&��� �� � $��(���� �&���� �&�� ��%&�� %�����( ����� ��A&�����( % ��� ����( ��(��� ��������� �$���� �����

����������� ��-����� ��-� ���� ���� �� &����������( ������&��� ����� % ��� %��� % �������� �"�$������ /��� �� ��C?������ �������-� %�� % �"$������ �������� �"�$����� �&���� ���� �����7�� �� �� !#2 (��� ������( ���"�$��?���?� 0���� �� �� 28831� ��� ������" ��-���� �&���� ��������� �&���� �������-� ����� % �������� �"�$����� ��-� �������� ���&� %�� �&���� �� �� �&��� #� ���(

�+�� 6" %����� �� ���+��� �� @3- ��� �� � �� � �����

�!'�?��D��D�� ������ �����(� ��$ �$HEE����(������%��(�����R���������@��� !���= @����� �$HEE�������������(-E!���=E�&���������������7��� ��$�������-� ������ ��$ �$HEE��������������(E(������EB����� ��������� ���������� �� ��� 0B���1 �$HEE���<��������������(-EB���E��@� ���� ��$� �$HEE�����������������(-E(�����$E

�+�� 66" ��� �� �� �A ���&�� �� -., ������ � �� ��� ��!���

������ #������ S��5�O 4 4�4: 4�24 4�2: 4�64 4�6: 4�<4 4�<: 4�;4 4�;: 4�:4

#29�2>6; ;8�39 �� .4�3<6 6�<<6 6�6>< 6�489 2�>;3 2�::3 2�6<8 4�848 4�:>6 4�69: 4�444#29�98> :<�;2 �� .2�>2< 2�66< 2�6:> 2�2:3 4�88> 4�>4; 4�:8< 4�<9> 4�2>< 4�4;: 4�444#29�268< :3�;> �� 6�62< 2�83> 2�928 2�;33 2�62< 4�83; 4�962 4�;84 4�6>2 4�248 4�444#29�29>9 36�42 �� ;�233 <�93< <�<:2 6�8<4 6�:46 6�438 2�3<< 2�289 4�938 4�<3; 4�444#29�2>3> 3;�23 �� <�929 <�<9: <�466 6�3:8 6�6>3 2�84: 2�:2; 2�22> 4�966 4�<;2 4�444#29�298: 3>�;; �� 6�8;2 6�3<> 6�<68 6�42; 2�38> 2�<>4 2�433 4�9:> 4�;3; 4�646 4�444#29�2>64 92�8< �� 6�6;: 6�4<< 2�>2> 2�342 2�<>6 2�23< 4�8;< 4�928 4�;82 4�6:< 4�444#29�8:9 >4�<> �� .4�>>8 6�2<8 6�26; 2�896 2�9:: 2�;89 2�648 4�>88 4�:>6 4�69: 4�444

���5?�-���(�� (����� �������� %�� 29$�� �� ������(��� %�� �� �����7��� ������ ��$�

� ���� ;" <�� �� ��� � �������� �� � �!�� �� ��� ������������� ��� ������� ��� �� �������� �����" ���������� $����� ���/ �"����� (��� ����� ������� #29�98> ��� #29�8:9 0�1� *��$����� % �� �������� (���� �5��&��� �� ��� �&�" ��� ��������� ��5?�-���(�� (����� �������� ������ ��Q���� ������� �� ������(��� %���� �����7��� ������ ��$�

040 ���**B�� � �� *�! B+���� B/ ���!�*���*��! #!���*B�B�P

0������ �� �� 28881� *�� $���� ������ �" ��� (��� ��������� ���(" �� &�� ������� %��� ����$� %����" ���� ��" ��-� � ����$�.��(��� �������� ��� ���"�$�����?����-�������� ���� �&���� ��-� ���� �� �� ��-���� ���������"�$����� $����� �� &�����"��( (��� $���(" ��-�-�� ������ �� "� &������7��� *�� (��� %� �� �&��� #� ���(��$� 6A22.2< 0� �� �� 288>1 ������ %�� &� $&��-� �/ ��&��

*� % �� �� ������( %��&��� % ����-��&��� ��� �� �/ �"����� �� �� %����" ��������� ���� ��� �� ���� % �����?(�"$���� ��� �� �"$�������� *�� ���� % �����(�"$���� ������� ��������� �� ��� �/ %������� ��$��� ��� ��� ������%�� �� �� ������� �������� %��&�� % �� �"������#����(�"$���� ��$���� -������� $����� % �$������� ���(�� �$���$����� ���� 0����- 28941� *���� ���(�� %�� �&���( %�����-��$��� �� �� 7�� ������� 0'����� ��� B)���� 289<,B��Q��� 289:1 ���&(� ���� ��-��$��� �� $������� �" ��%����� % -��� $��� ���(� �������(� % �������"��� ���&� ��� -����� �$���� ��(�� % �� ��(�� �� ���� �� � �� ������(��� ����� ��� �"$����� ��(��� % �� $���� ��� ���� � ��& 3.> �� (����� 0@����� 28821� !$������� ���(�� 7�� �$$��� �24 �� �� �����=�� ���� $���%������ �� �� ����� ��"�� % ���$������� �� %�� ������ $�����" ���(�� �� $�Q�� �� ���&$��7���� ������ 0@����� 28821� *�� ����� ���(� ��7(&����� %�� -��� ���� �&�%���� ��-��$ � �� ������.�$������� Q&������� � � �� ���� �&�%���� ���� (����E�&� $���&���� ��� �$$��� � &��%�� ����-��� ���( �� ���(�� �%�� 2; �� ��� �"29 �� ��� �� �$$������� % �� ���&� ����&� ����7(&���� % �� �$������� ���(�� ��������� ��� % $����������

*�� $�����" ��%�� �� &�������� �� ���� % �����(�"$���� ���/ �"����� �� &������, ���-�� �� �����(�"$���� ���$�����-�� �� ��� $���$����� ���������� � ����� �����" ����� �� �&� � ��-��$����� �����" ����� ��� �&���A&����&���� �" �"$���������� *����%�� �� $�&��� �� ����%���-� $���� �� �� �/ �"����� �� ��� �����" �� ��-�-���� �$������� ��-��$��� ���E� �$�������.�������"��� ������?�� ��� �� $����$� ���� �����" �� � $&���" ��&�&��� ����&��� ��&���� % �������� (���� % ��� "$� ��$ �� �/ �"������������ ��(�� ����&���( �� (���&��� (��� 0 ��, ������( �$���� ��-�-�� �� �$������� (��� ��� ��%%��������1 0@���������� @����� 2886, @������� �� �� 28861, %��==��� ���( 60���6, � ����&�� ��-�-�� �� �$������� ���� ��(�����( $����"�10S�� �� �� 288:, ���( �� �� 28831, �#��22 0� $������$������ �� ����?���� ��� ����.����5 ���������1 0!�� �� �� 288<1, ��� ��@9 0� �������� �&�� (��� %��� ����$� %&������� %&����1 0���(��� �� �� 2886, *����� �� �� 288>1��&��� ����"��� % ���� (���� �� �� %����" �� �(��( �� ��������"� �� ������ � ���(��� (���� � �6� ��� � �<� ��$ �� ��&�� ���&(� ���(���� ��� ��-�-�� �� ���� ���������� ��%%�������� ���� $����&��� (���� ��� �5$������ �$���7����"�� $������ ��� ��� ����%�� � (� ���������� ���"&����������=�� �������$� ��� ��$ �� ����-���

�"$������� �� �� �� ���������( ��$�� % �� �/ �"������� � ��� ���� ����$�� �%�� ���� �5������� ���� �&���� � �$����� %�� �� ��(���� ����� �/ %����" ��������� � (����"���&��� ��������� % %&������ ������� ���� (����� �& ���$����� ���� ���� ����� ����� ������(&���� 0��-��� �� �� 288<1� � �� � ����� ���-�� %�� �� �&�" ������ �����&��� �� %&������ ���� (����� ��� �&� � (������ ���&����� (����� � ������ � ����� �&���� % (����� ��� $����� %����� ��� ���� ��%&������� ��(� ��� ������ ������$���&���� % �� ������ % ���� $����� ����� �����.��"�����$��� ��&�� ��� ���� (����� ��� ���$ ������ ���� �&�� ��%�����( �� ���� ��&�&��� ��� &����(�� ��(������� �����"�����&��( �� �"$������� 0/���� �� �� 288<1� *�� �����������(&���� % ���� $����� ��� �� ����� ��� $������� �� ���� %����" �� ���� &����� ���� 0��� �� �� 288<1 �&�������" ���������( �� -������ �� �������� $���"$� ����� �

���(�� $���(���� ���� ��$���� %�� � �%%���� ����-��&��� �� &�%����" ��� � ��� �-������ % � ���&��� �&���� % ���� (�������� � �����.��"��� ��$��� ��Q���� ���� (����� � �&������ �����7�� 0��� � ����1�

B-����� ���� ����-���� % � ��$��� ���� % �����?(�"$���� ��� -������� ���� (���� $���(" $�-��� �-������ %� ���(��7��� ��� %� �� �/ (��� �� ����" %��� ���� ��-��$����*�� (���� ������( ��&�&��� ���� $����� ��� �� �!BC2(��� �� �� �������� ��� ��A&����� �� ��� �&�" ��� ��� �5$�������� ����" (����� �& ��-� ���� �5��&��� �� �������� (���� %� ���/ �"������ *�� %&&�� �����7���� % �� �/ (��� �� �����" $�-��� %&���� ����(�� �� �� ��(&���� % %��� ������-��$��� �� ���� �� ���� ��� � $�"���("�

�� ������� ����� ��� ������ ��� ����� �!�"�������# ��� ���$� %�� ��""����$ �� ���

&"� ��� ������� �� &� �����' (��"����) ��� ������"�� �"�$��������� �������

������ � ���� ������ *�����) +#,#- ��$ � ���� ������ �# .(�� �� ��""����$

�� � .��� ��� ���� &����� ������ � �����%���" �� ���� �����$� �� & ��� ��#

�!/!�!��!�

@����� � H ��������/� ��0���"���� �� �"�$����� ��$/�� ��$ ���� 1��2/�������� ��������� ��� B��(���� ������ ������� ��� P��H ����� % #���� @��� #�%���/&����� 69H 2882, $$ 8:.226

@������� � @����� �H ��&�&�� ��� �������� ����� % �� �&��� (���&���(���� ��� ��� ���"��� ��� 1����� 2>>H:9.3< 2886

@������� � '��%��� �� @����� �H ������ ��� ��A&���� % �� (���&���$���&��� �#�� %�� �&��� ��� ����� ��-���� ����� �"�����?����(���&��� ������� 3�� ���� � �$ & � +&� >8H292:.2928 2886

@���� '! ����" � �����" � ����(�� � ��� #B *&���� � H �&��� %� "$� �� ������ (��� 0�3�1 �� $���"�"���� ��(����� ��� ���� 24H<3<.<3: 288:

@���� �� �&���" � ���%7��� �� ���� �� ����� �H ��$�������-��&��� (����� ��$�H ����-��&�� ��� ��5?�$���7� -������ �� ������������� 4 (�� ���� 3<H>32.>38 288>

#�� � /�&�� � /�=���� � �� ��H � ��$�������-� (����� ��$ % �� �&���(���� ����� � : 63; ������������� ������ <>4H2:6.2:; 2883

!�� � ���(��� * ������ P �� ��H � �-�� �����$�����E������(���?���� (��� �29A62�< �� ��������" �������(�� �� � $�����" ����� �������� ��� ����:H2:2.2:9 288<

/���������� '� ������� �H � $�$� �� �)���������� $�(���� ��������� ����&5 �"������ ��%%����� 7(&��� �&� �� ���� ����� ���������/� � 24>H2.6> 28:;

/���� ! ��-��� @ ��� #H *�� ��T(���./����������. ������� �"�����H ���������" �������� ��%�� ������( �����?��"��� %����� �� ��������� ���������/� 2>9H238.29< 288<

/������ � �&���� � ��==& ' �� ��H ����&��� % � ������� $�"����� ����������$ ��$ % �� /*#'?29 �������� ��(�� � ������� 29A62� ����� � 34H268.2<3 2888

/&���� '� ������ � ������� �� ��H ������ % � ��-��(�� ����5 (��� �BC2 %�� �� @���2 ��(�� � 29A62 �" ��&�� �"���� ��$&��� (����� ���� <H2<:8.2<3; 288;

� � �������� �� �$��= ��H � (��� %� �&���� ������ �"$�������������� �"�$����� 0!#�<1 ��$� ������� 6A22?A2<� �� 4 (�� ����36H2246.2243 288>

��� '� ��&�������(�� � ��"�� � ��-��� @ �&J� *H ��&��� ����" % �����(���./����������. ������� �"����� ��� %&���� ��������� % ���������� ����%������� 4 �� � �$ �������� 6>H8;6.8:4 288<

���� ���-���-� �� ����� B �� ��H C?������ �������� 0�"$������1�������� �"�$����� �� ��&��� �" �&��� �� � �-�� ������������ $�������� ���� 2<H;48.;23 2883

��-� � ������� � �������=�� �H �� ������� $�(������� �������� ������� ��/����������? �������H ����-�=��� �& �� &� ���� ���� �������� �����0��������� ;3H<28.<66 2892

���(��� @ ���-������� B ��(�� / ��$��$&� � ������ ! +������ � ���������(�� H ��(�?�%7�����" �5$������E�����( % �$������� (��� %���?����$�? ������( $����� ��� ��� ���(" 6 ������� 3�� ���� � �$ & �+&� >8H>>8;.>>8> 2886

������ � �������� � ������� �� �� ��H �&���� �� �� $���$����� 2 (������&� �� �������� �"�$�����E���� %��(���" �"������ ��� ���� 29H6;4.6;; 2889

������ �� �&(( !� �&��" #' �� ��H ������ 23 ��� ������ 29 �&���� ��&��$���"�"���� ��(����� ��� ���� 8H69<.69> 288:

��-��� @ /������� ' �������� ! #����� H ���� �&���� &���� ������� %������ ��� ����� �� � $����� ��� �� ��T(���./����������. ��������"������ ���������/� 2>9H29;.299 288<

������ �� /��(&�� @� ����� # ���� �� B-������ '� S���� H�&���� �� �� �&��� ���(&� % �&�� �� ��&�� �&���� �������-� ��������� �"$������ �������� �"�$������ ��� ���� 66H<33.<38 2888

���(��� BH /������T��� �����$������T-&�� & �%��5 ��$ .� ���� �� >H;> 2869

�B�� 22: �B� ; B�*B@!� 6444 �/ �P�#�B�! �!�! B� 29N62 04�

B��Q��� �H #�-��$��� % ������ ���(�� �� �� %�&�� 4 ��$ ���� 26H6;<.6:4 289:

'�$��� �H ������� �� ���(���?/����������? �������� ��� ���� �������� 1��� &"��<6H6>2.686 289>

'����� �� B)���� '*H *�� ��-��$��� % �$������� ���(��� 4 ��$ ���� 24H642.64> 289<

�������� �� ��-����� �� ��-��� �' �� ��H �-�� �&���� �� ������ 23 (���&�����" %��� ��?�$������"�� $���$����� ��������� 0�!''�1 �� �%�������� (�� ��� ���� ;H2>9:.2>>2 288:

���� / -�� ����� �/ �� � ������ �� �-��� �' +� ��������H � �&��� �� �&��� ������ �3� $��&��� � $����$" % �� �29������� $���"�"���� ��(���� "$� 6� (�� ��� ���� 9H22;<.22;> 288>

�$���� �' ������ '# ����� ��H �"$��$�(������ ��� �"$������� 0*�����(���./����������. ������� �"�����1H ��$� % � %����" ��� ��-��� %�� �����&��� 1��� �6" �������� 2H269.2;4 2893

*����� � ��� � ���"��� * *����� P ��%&�� � ����� � �&(������ �H �

�-�� -����� % �&��� ���9 �� �������� ��� ��-���-� ��$��(��� ���������4 1��� ��0��� 246H>62.>69 288>

����- H �������� ��(��7����� ��� (������ % �$������� ���(��?� ��-��� %�����(�"$����� 4 ��0��� �������� :;H632.692 2894

���( P ����� ' ������ @� �� ��H � ���(� %����" % $&��-� ����������������$�� ���(&� �� $��&� % �� �����"���� ���&� $����" (���%��==���� 4 ���� 1��� 692H;;3>.;;93 2883

����� �� !��" �� ������ �H ������ �(���=��� ��� ��$��7���� %�� �&��� ������ 2: ��� ������ 28 (����� ��� ��� ���"��� ��� 1�����639H;36.;3: 6444�

����� �� !��" �� ������ �H ������ �(���=��� ��� ��$��7���� %�� �&��� $���(���� (���� �6" �������� 8H<6<.<63 6444�

S�� S ��� �� @������ � �����" �*H � �&��� ���(&� % �� �����"����$����" (��� %��==��� ��� ���� �����7�� ��� ��$$�� 29A62�2� ����� �69H<94.<9< 288:

04) ���**B�� � �� *�! B+���� B/ ���!�*���*��! #!���*B�B�P