RESUMEN

Los productos valorados fueron GLUTFAR Y GLUFAR plus (Glutaraldehido 2%). Se utilizaron ratas Wistar suministradas por el I.N.S (Ins-tituto Nacional de Salud), que recibieron una dosis de 2000 mg/kg una vez oralmente y con sonda gástrica a un grupo de 5 hembras y 5 machos, luego de un período de ayuno de 12 horas.

La observación de los animales posterior a la dosifi cación fue realizada en forma permanente durante el primer día de la administración y luego dos ve ces por día para control y evidenciar alteraciones comportamentales, fi siológicas u orgánicas, muerte, con el fi n de deter-minar la duración y reversibilidad de los efectos y momentos de la muerte.

Terminado el estudio (14 días) se realizó sacrifi cio de todos los animales y necropsia, para establecer anormalidades macroscópicas de los órganos, comparando con los animales control.

Con lo anterior se estableció que bajo las condiciones del ensayo, la DL50 del producto GLUTFAR desinfectante es superior a 2000 mg/Kg. de peso corporal.

Palabras clave: TOXICIDAD AGUDA GLUTARALDEHIDO

ABSTRACT

The evaluated products were GLUTFAR and GLUTFAR Plus (2% Glutaraldehyde). Wistar rats supplied by the I.N.S Health National Institute were used, receiving the dose of 2000 mg/kg which were dosed once orally and with a gastric probe to a group of 5 females and 5 male, after a fasting perrod of 12 hours.

The observation of the animals on the fi rst day after the dose was taken was permanent, then it was done twice a day for control and to show behavioral changes, physiologic or organic, death, to determine the duration and reversibility of the effects and death moments.

After 14 days all animals were sacrifi ced, and the necropsy was done to establish macroscopic abnormalities of the organs, compared with control animals.

Under the established test conditions, the DL 50 of the product GLUTFAR Y GLUFAR Plus disinfectant is superior to 2000 mg/kg of body weight.

Key words: ACUTE TOXICITY. GLUTARALDEHYDE.

TOXICIDAD AGUDA DE GLUTARALDEHIDO

Recibido Julio 12 de 2007Aceptado Agosto 6 de 2007

Carlos Manuel BustosQuímico FarmacéuticoUniversidad Nacional

ESTUDIO DE TOXICIDAD ORAL AGUDA DEL PRODUCTO GLUTFAR Y GLUFAR PLUS (GLUTARALDEHIDO 2%)

Estudio de Toxicidad Oral Aguda del producto GLUTFAR y GLUFAR Plus (Glutaraldehído 2%)

15Toxicidad Aguda de Glutaraldehído

INTRODUCCIÓN

1. Objetivo:

El objetivo del estudio es evaluar la Toxicidad Oral Aguda de la mues tra GLUTFAR Y GLUTFAR plus, luego de una adminis tra-ción por vía oral una única dosis (2000 mg/kg).

El diseño experimental está basado en las guías de la EPA y OPPTS.

Test Toxicidad Aguda Convencional:

La sustancia a valorar es ad mi nistrada oral mente de una dosis determi nada a diferentes grupos de ani -males de experimentación, una dosis igual por gru po. La dosis se halla por me-dio de prueba de determinación del rango.

Luego a los animales que mueren se les practica la necropsia. Terminada la prueba a los sobrevivientes se les practica la eutanasia y luego necropsia.

Determinación de Toxicidad Aguda — Aproximaciones:

La agencia de protección ambiental de los EE.UU. (EPA) sugiere reducir el número de animales utili za dos para evaluar los efectos agudos de una expo si ción química, pero preservando la idoneidad de los estudios, para emitir un concepto acertado del ensayo.

Prueba Límite:

Una prueba límite puede ser considerada cuando los datos de químicos relacionados estructuralmente son inadecuados.

Si se utilizan roedores, una dosis límite de al menos 2000 mg/Kg. de peso corporal, puede ser administrada a un grupo de 5 hembras y 5 machos. Si no hay muerte de ninguno, no se realiza evaluación adicional para, toxicidad aguda. Sí hay mortalidad relacionada al compuesto en la prueba límite, se pueden considerar estudios adicionales.

MÉTODO

1. Muestra Recibida:

La sustancia a valorar fue recibida de la compañía LABORATORIOS EUFAR S.A. el día 17/OCTIO6, en su forma de producto terminado que es un pro-ducto líquido y envasado en un recipiente plástico x 500 mL. de color trans-parente y con olor característico.

• Composición: - Glutaraldehido 2%.- Auxiliares de Formulación c.s.p. 100%. (Composición suministrada por la compa-

ñía EUFAR S.A.).

2. Preparación de la Muestra:

La muestra se suministra sin dilución alguna y como control negativo se suministra Suero Fisiológico Estéril al 0.9%.

3. Procedimiento Experimental:

El estudio fue realizado en un grupo de 10 ratas Wistar (5 Hembras y 5 Machos). El producto GLUTFARI fue administrado oralmente por sonda.

Los animales se observaron permanentemente du-rante las primeras 6 horas luego de la dosifi cación

Estudio de Toxicidad Oral Aguda del producto GLUTFAR y GLUFAR Plus (Glutaraldehído 2%)

16 Toxicidad Aguda de Glutaraldehído

se les comenzó a suministrar comida (Purina — Rodentina®).

La comida y el agua durante todo el estudio se administró ad libitum.

7. Niveles de Dosifi cación:

Se tomó un nivel de dosifi cación de 2000 mg/Kg. de peso corporal para la cual no se evidenció muerte. (Aplicación del test límite de las guías), por lo tanto, la dosis letal 50 (DL50) es mayor a 2000 mg/Kg.

8. Periodo de Observación:

La observación luego de la administración es de 14 días, prestando especial atención el día de la do sifi cación (Cada hora durante 6 horas), para ob-servar el momento de aparición de signos de toxi-cidad, duración, intensidad y si se presenta muerte. 9. Examen Clínico:

Se realizó un examen cada día. Las observaciones son realizadas y anotadas, usando escalas de: Mo vi mientos, pérdida de peso, convulsiones, pos-tra ción, reactividad a la manipulación, cambios en la piel, cambios en los ojos, cambios en las mem-branas ocu lares, alteración del sistema respira torio, alte ra cio nes en el sistema nervioso, salivación y muerte.

Se registró el peso corporal de cada animal antes de la administración de la sustancia y antes de la eutanasia. También se registró el peso a los días 3, 7, 10 y 14. La variación del peso corporal es un parámetro muy importante como marcador de toxicidad.

10. Examen Macroscópico:

Luego del sacrifi cio de los animales (14 días) y ha bién dolos pesado previamente, se realiza la

y luego se realizaron observaciones diarias durante 14 días seguidos. Al fi nal a todas las ratas se les practicó eutanasia y necropsia.

4. Modelo Animal:

La especie de experimentación utilizada para la prue ba fue la rata Wistar Albina, proveniente del I.N.S (Instituto Nacional de Salud). Antes del ensa-yo los animales fueron valorados clínicamente. Los animales son adultos jóvenes sanos, con un peso entre 200 y 230 y un peso promedio de 218,1 g, los cuales, se seleccionaron de forma aleatoria. Se usan (10) animales correctamente identifi cados por dosis de prueba.

La prueba también se realiza con un grupo de ani males de control negativo, aplicando Solución Salina USP al 0.9% por vía oral, para evaluar los aspectos externos a la manipulación del animal.

5. Condiciones Ambientales:

Los animales fueron aco mo -dados en grupos de cin co por cada jaula de vidrio, de tal forma que no se interfi riera la ob ser va ción individual. Se mar có cada animal y cada gru po fue identifi cado me diante tarjetas donde se lleva el registro del nú me ro de animales, sexo, fecha de tratamiento y observaciones.

Los animales se mantuvieron a una temperatura de 20± 2°C, humedad relativa 55% ± 5% y un foto-periodo de 12 horas luz y 12 horas oscuridad, para mantener el ciclo circadiano.

6. Periodo de Exposición:

12 horas antes del estudio se les retira la comida y luego de 6 horas de administrarle el producto,

Estudio de Toxicidad Oral Aguda del producto GLUTFAR y GLUFAR Plus (Glutaraldehído 2%)

17Toxicidad Aguda de Glutaraldehído

ne crop sia para observar los cambios patológicos macroscópicos.

RESULTADOS

• Ningún animal después de recibir la dosis, pre-sentó temblor ó convulsión generalizada.

• Los animales NO presentaron signos de movi-mientos involuntarios, intranquilidad durante las primeras 6 horas. A partir de las 24 horas no se encontraron signos clínicos.

• Los pesos de los animales se encuentran tabu-lados (Ver Anexo 1 TAO). El comportamiento de cada animal (Observación diana) se encuentra tabulado (Ver Anexo 2 TOA).

• Las observaciones macroscópicas luego de la necropsia se encuentran tabuladas (Anexo 3 TAO). No se encontraron signos de infl amación, necrosis, hemorragia, ulceraciones, cambios mor fológicos en hígado, riñones, pulmones, co-ra zón, bazo, intestino, estómago, tráquea.

• De acuerdo con lo anterior se determina que la sustancia NO alteró los signos motores y comportamentales en las primeras 6 horas y su observación se realizó durante 14 días. Por lo anterior se determina que hubo ausencia de sintomatología clínica y como consecuencia

hay un funcionamiento orgánico y fi siológico normal.

• Se observó un aumento del peso de cada animal durante el tiempo del estudio. Ver Anexo 1 (Tabla TAO — Pesos Animales).

CONCLUSIONES

De acuerdo a lo descrito anteriormente se concluye que la Dosis Letal 50 (DL50) Oral del producto GLUTFAR de la compañía EUFAR S.A es mayor de 2000 mg/Kg. de peso corporal.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

• Organization for Economic Cooperation and Development.QECD Test of chemical. Guidelines 401: Acute Oral Toxicity. Adopted 24 Feb 1987.

• United States Environmental Protection Agency Prevention, Pesticides and toxic substances (7101) EPA —C-96-189 June 1996.

• The offi ce of prevention, pesticides and Toxic Substances Qpp 870.1100. Acute Oral Toxicity. June 1996.

• Federal Insecticide, Fungicide and Rodenticide Act. FIFRA.7 U.S.C 136 and Toxic Substances Control Act. TSCA. 15 U.S.C 2601.

• Offi ce of prevention, pesticides and toxic substances. OPPTS. Guidelines 870.1100. Environmental Protection Agency. EPA.71 2-C-96-1 90 June 1996 Test Toxicity Acute Oral.

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REVISTA

Estudio de Toxicidad Oral Aguda del producto GLUTFAR y GLUFAR Plus (Glutaraldehído 2%)

18 Toxicidad Aguda de Glutaraldehído

TOXICIDAD ORAL AGUDA

ANEXO 1

TABLA DE PESO CORPORAL

Análisis No: 06 J 09 56 Lote No: 60 80 38

Producto: GLUTFAR Dosis: 2000 mg/kg peso corporal

Cliente: EUFAR S.A. Fecha: 23/OCT/06

Animal Sexo Identifi cación Día 0 Día 3 Día 7 Día 10 Día 141 H Pata 215 215 245 248 2602 H Cabeza 218 222 245 253 2603 H Cola 225 225 245 253 2654 H Espalda 223 233 240 250 2705 H Mano 220 225 238 250 260

Animal Sexo Identifi cación Día 0 Día 3 Día 7 Día 10 Día 141 M Pata 215 217 245 252 2602 M Cabeza 205 210 220 245 2553 M Cola 220 230 240 250 2604 M Espalda 220 228 240 245 2555 M Mano 220 225 238 245 250

Nota:

• Peso de cada animal en gramos.• Todos los animales (Hembras y Machos) presentaron aumento de peso.• % de variación de peso entre los animales en el día cero(0): 5,54%.• Peso promedio ganado durante la prueba: 41,4 gramos.

Estudio de Toxicidad Oral Aguda del producto GLUTFAR y GLUFAR Plus (Glutaraldehído 2%)

19Toxicidad Aguda de Glutaraldehído

TOXICIDAD ORAL AGUDA

ANEXO 2

TABLA OBSERVACIÓN DIARIA DE LOS ANIMALES

Análisis No: 06 J 09 56 Lote No: 60 80 38

Producto: GLUTFAR Dosis: 2000 mg/kg peso corporal

Cliente: EUFAR S.A. Fecha: 23/OCT/06

M: MachoH: Hembrac: Cambio del comportamientosc: Sin cambio del comportamientom: Muerte del animal.

Nota:

• Se observan cambios de comportamiento durante el primer día.• Del día 2 al 14 no hubo cambio en el comportamiento de los animales.

AnimalesPeríodo de Observación

DíaNúmero Sexo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

1 M c sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc2 M c sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc3 M c sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc4 M c sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc5 M c sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc1 H c sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc2 H c sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc3 H c sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc4 H c sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc5 H c sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc sc

Estudio de Toxicidad Oral Aguda del producto GLUTFAR y GLUFAR Plus (Glutaraldehído 2%)

20 Toxicidad Aguda de Glutaraldehído

TOXICIDAD ORAL AGUDA

ANEXO 3

TABLA OBSERVACIÓN MACROSCÓPICA EN LA NECROPSIA

Análisis No: 06 J 09 56 Lote No: 60 80 38

Producto: GLUTFAR Dosis: 2000 mg/kg peso corporal

Cliente: EUFAR S.A. Fecha: 23/OCT/06

M: MachoH: Hembracm: Cambio macroscópicoscm: Sin cambio macroscópicom: Muerte del animal.

Nota:

• Se observan cambios de comportamiento durante el primer día.• Del día 2 al 14 no hubo cambio en el comportamiento de los animales.

AnimalesObservación Macroscópica

Necropsia (Órgano Examinado)Número Sexo Pulmones Tráquea Corazón Hígado Bazo Riñón Estómago Intestino

1 M scm scm scm scm scm scm scm scm2 M scm scm scm scm scm scm scm scm3 M scm scm scm scm scm scm scm scm4 M scm scm scm scm scm scm scm scm5 M scm scm scm scm scm scm scm scm1 H scm scm scm scm scm scm scm scm2 H scm scm scm scm scm scm scm scm3 H scm scm scm scm scm scm scm scm4 H scm scm scm scm scm scm scm scm5 H scm scm scm scm scm scm scm scm