Upload
others
View
2
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
Una nova visió de l’oligomerització de receptors
acoblats a proteïna G
Jorge GandíaGrup de Neurofarmacologia i Dolor
Facultat de Medicina-BellvitgeUniversitat de Barcelona
Els GPCR oligomeritzen
Més llocs al·lostèrics per modulació
GPCRoligomer
Modulació de les cascades de senyalització
G protein arrestin
+
Moldulació en la selectivitat de proteïnes G
++
Oligòmer específic de malaltia
Desequilibri oligomèric en malaltia
PatologiaCondicions normals
PatologiaCondicions normals
Paper patofisiològic
+
Modulació de l’activació de proteïnes G
X
+
Els oligòmers de GPCR formen una gran xarxa de proteïnes
Sorgeix un nou repte: identificar nous oligòmers de GPCR i altres proteïnes que hi interactuin
GPR37
GPCR orfe, pertany a la família I
També conegut com Pael-R (Parkin associated endothelin-like receptor): relacionat amb una forma juvenil de la malaltia de Parkinson
Involucrat en el metabolisme de la dopamina:
GPR37
1: A2A2: GPR37yfp
3: A2A + GPR37yfp
Mr(kDa)
80 -
Crude anti-GFP1 2 3 1 2 3
40 -
anti-A2AR1 2 3
IP:
IB: anti-A2AR
IB: anti-GPR37
100 -
GPR37YFP
A2AR
L’oligòmer A2AR/GPR37Co-immunoprecipitació
Rluc
Coelenterazine H 530
< 100 Ǻ
530513Coelenterazine H 480
Rluc> 100 Ǻ
YFPYFP
L’oligòmer A2AR/GPR37Interacció in vivo: BRET
GPR37-Rluc
0 25 50 75 100 125 1500
1
2A2A-YFPA1-YFP
YFP/RLuc
BR
ET u
nits
A2A-RLuc
0 10 20 300
1
2
3 GPR37-YFPCD4-YFP
YFP/RLuc
BR
ET u
nits
L’oligòmer A2AR/GPR37Rellevància funcional (I)
Expressió en superfície
80 -
Whole cell Cell surface
1 2 3 1 2 3
40 -
IB: anti-A2AR
IB: anti-GPR37GPR37YFP
A2AR1: A2A2: GPR373: A2A + GPR37
Mr (kDa)
L’oligòmer A2AR/GPR37Rellevància funcional (II)
Producció d’AMPc
A2A 2A2A/1GPR0
100
200
300
400 -CGSHA+CGS
%
- CGS
+ CGS
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
Arb
itrar
y U
nits
+GPR37
+GPR37
L’oligòmer A2AR/GPR37Anàlisi estructural de GPR37
1-no transf.2-wt3-delta5634-delta5715-delta6136-delta563-8
Sup. cel·lular
Total
1 2 3 4 5 6
L’oligòmer A2AR/GPR37Condicions oxidatives/reductores
Activació de canals de calci (FLUO4)
Bateria de pèptids anàlegs a HA
- OX RD - OX RD
wt Delta 563-8
Cell surface
Whole cell
0 50000 100000 1500000.0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.733nM100nMIONO
ms
L’oligòmer A2AR/GPR37Generació de ratolins gpr37 -/-
Animals hemiparkinsonians vs individus control en presència/absència d’un antagonista del receptor A2A