Univerzitet u Beogradu

Fakultet veterinarske medicine

Katedra za fiziologiju i biohemiju

Vežba II

Ispitivanje uslova za aktivaciju i delovanje pepsina

Ispitivanje uslova za aktivaciju i delovanje tripsina

Ispitivanje uslova za aktivaciju i delovanje pankreasne amilaze

Ključna pitanja i zadaci

Fermenti želudačnog soka Fermenti pankreasa

Tripsin – aktivacija?Pepsin - aktivacija?

Pepsin – način delovanja?

Pepsin – optimalni uslovi za

delovanje, otpornost?

Tripsin – optimalni uslovi za

delovanje?

Pankreasna amilaza?

Ključna pitanja i zadaci

Fermenti želudačnog soka Fermenti pankreasa

Tripsin – aktivacija?Pepsin - aktivacija?

Pepsin – način delovanja?

Pepsin – optimalni uslovi za

delovanje, otpornost?

Tripsin – optimalni uslovi za

delovanje?

Pankreasna amilaza?

Zadaci

1. Ispitivanje delovanja pepsina

Zaključak (objašnjenje reakcija u epruvetama)

Obavezan rezultat u svesci!

2. Ispitivanje delovanja tripsina

Zaključak (objašnjenje reakcija u epruvetama)

Obavezan rezultat u svesci!

3. Ispitivanje delovanja pankreasne amilaze

Zaključak (objašnjenje reakcija u epruvetama)

Obavezan rezultat u svesci!

Fermenti želudačnog soka

Pepsin Lab ferment Želudačna lipaza

Lab ferment (himozin)

Stvara se u sirištu preživara kod mladih jedinki

Optimalan pH je 5 – 6

Kazein mlekaLab ferment

Parakazein Ca-parakazeinat (sir)

Ca++

Želudačna lipaza

Razlaže emulgovane masti mleka kod mladih životinja

Manje značajna od pankreasne lipaze

Pepsin

Neaktivan oblik (proferment) pepsina je pepsinogen

Pepsinogen PepsinH⁺(HCl)

Spada u grupu hidrolaza

Endopeptidaza (prema mestu delovanja na peptide)

Razlaže potporne belančevine vezivno-tkivnih opni (kolagene i elastine)

Pepsinogen

Peptid

Pepsin

Peptid

Cepa peptidni

lanac po sredini

Pepsin

0

1

2

3

4

5

6

7

8

10

11

9

12

13

14

Kiselo

Bazno

Neutralno

Optimalan pH je 1,5 – 2 (2,5)

Pepsin se denaturiše u baznoj sredini

Kiseli ekstrakt

• isitnjena sluzokoža želuca svinje se homogenizuje u rastvoru HClP

Neutralisani ekstrakt

• kiselom ekstraktu se dodaje Na₂CO₃ do pH - 7 P

Alkalizovani ekstrakt

• kiselom ekstraktu se dodaje Na₂CO₃ u višku dok pH ne postane bazan P

Bazni ekstrakt

• isitnjena sluzokoža želuca svinje se homogenizuje u rastvoru Na₂CO₃ PG

Priprema ekstrakta

Supstrat

• koagulisano belance

proteini su nerastvorljivi nema peptida u rastvoru

delovanjem enzima peptidi u rastvoru

5ml HCl

KE 3, 4 kapi

2- 3 kockicekoag.belance

5ml

NE

HCl

3, 4 kapi

2- 3 kockicekoag.belance

2- 3 kockicekoag.belance

2- 3 kockicekoag.belance

BEAE

5ml5ml

3, 4 kapi3, 4 kapi

HClHCl

• Vodeno kupatilo na 37 stepeni C, 20 min• Biuretskom reakcijom dokazati prisustvo slobodnih peptida u rastvoru

Biuret

5ml

2ml

parkapi

rastvora

1,25 M NaOH

0,01 M CuSO₄

(+) (+) (+)(-)

P P P PG

P

Pankreasni sok

Glavni proteolitički enzimi pankreasa su tripsin i himotripsin

Proizvod lučenja egzokrinog dela pankreasa

Neorganski sastojci (voda, NaHCO3)

Organski sastojci (fermenti)

Bezbojna, prozirna, sluzava tečnost alkalne elektrohemijske reakcije (pH 8)

Tripsin

Pankreas

Duodenum

Tripsinogen

Tripsin

Crevni enzim

enterokinaza aktivira

neaktivni tripsinogen

u tripsin!

Razlaže belančevine do nižih peptida

Optimalan pH od 7,5 – 9,0

5ml Na₂CO₃

4 kapi PE i CE

belance

5ml5ml 5ml 5mlNa₂CO₃ Na₂CO₃ Na₂CO₃ HCl

4 kapi 4 kapi 4 kapi 4 kapiCE p.PE i CE PE i CEPE

belance belance belance belance

• Vodeno kupatilo na 37 stepeni C, 20 min• Biuretskom reakcijom dokazati prisustvo slobodnih peptida u rastvoru

PE – ekstrakt pankreasa CE – ekstrakt crevne sluzokožep.PE – prokuvani ekstrakt pankreasa

(+) (-) (-) (-) (-)

Spada u grupu enzima hidrolaza, razlaže skrob i glikogen do disaharida maltoze

Optimalan pH je 5,5 – 6,7

Pankreasna amilaza

skrob4ml 4ml skrob

4kapi 4kapiPE p.PE

PE – ekstrakt pankreasa p.PE – prokuvani ekstrakt pankreasa

• Vodeno kupatilo na 37 stepeni C, 20 min• Felingova proba

(+) (-)

Pankreasna amilaza

Klinički značaj

Sindrom maldigestije i malapsorpcije

Ključna pitanja i zadaci

Fermenti želudačnog soka Fermenti pankreasa

Tripsin – aktivacija?Pepsin - aktivacija?

Pepsin – način delovanja?

Pepsin – optimalni uslovi za

delovanje, otpornost?

Tripsin – optimalni uslovi za

delovanje?

Pankreasna amilaza?

Zadaci

1. Ispitivanje delovanja pepsina

Zaključak (objašnjenje reakcija u epruvetama)

Obavezan rezultat u svesci!

2. Ispitivanje delovanja tripsina

Zaključak (objašnjenje reakcija u epruvetama)

Obavezan rezultat u svesci!

3. Ispitivanje delovanja pankreasne amilaze

Zaključak (objašnjenje reakcija u epruvetama)

Obavezan rezultat u svesci!

Hvala na pažnjiHvala na pažnji!