Upload
others
View
38
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
Vežba br. 2
Ispitivanje uslova za aktivaciju i delovanje pepsinaIspitivanje uslova za aktivaciju i delovanje tripsina
Ispitivanje uslova za aktivaciju i delovanje pankreasne amilaze
UNIVERZITET U BEOGRADUFAKULTET VETERINARSKE MEDICINE
KATEDRA ZA FIZIOLOGIJU I BIOHEMIJU
II vežba- ključna pitanja i zadaciFermenti želudačnog soka?
Pepsin-aktivacija?
Pepsin-način delovanja?
Pepsin-optimalni uslovi za delovanje, otpornost?
Fermenti pankreasa?
Tripsin-optimalni uslovi za delovanje
Tripsin aktivacija?
Pankreasna amilaza
II vežba- ključna pitanja i zadaciFermenti želudačnog soka?
Pepsin-aktivacija?
Pepsin-način delovanja?
Pepsin-optimalni uslovi za delovanje, otpornost?
Fermenti pankreasa
Tripsin-optimalni uslovi za delovanje
Tripsin aktivacija?
Pankreasna amilaza
Zadaci: 1.Ispitivanje delovanja pepsina
Zaključak (objašnjenje reakcija u epruvetama)Obavezan rezultat u svesci!
2. Ispitivanje delovanja tripsina
Zaključak (objašnjenje reakcija u epruvetama)Obavezan rezultat u svesci!3. Ispitivanje delovanja pankreasne amilaze
Zaključak (objašnjenje reakcija u epruvetama)Obavezan rezultat u svesci!
FERMENTI ŽELUDAČNOG SOKA
- pepsin, lab ferment, želudačna lipaza -
Lab ferment (himozin)
• stvara se u sirištu preživara kod mladih jedinki
Kazein mleka parakazeinCa ⁺⁺
Ca parakazeinat (sir)
• optimalan pH je 5-6
Želudačna lipaza
• razlaže emulgovane masti mleka kod mladih životinja• manje značajna od pankreasne lipaze
FERMENTI ŽELUDAČNOG SOKA
- pepsin, lab ferment, želudačna lipaza -
Lab ferment (himozin)
• stvara se u sirištu preživara kod mladih jedinki
Kazein mleka parakazeinCa ⁺⁺
Ca parakazeinat (sir)
• optimalan pH je 5-6
Želudačna lipaza
• razlaže emulgovane masti mleka kod mladih životinja• manje značajna od pankreasne lipaze
neaktivni oblik (proferment) pepsina je pepsinogen
pepsinogenH⁺ (HCl)
pepsin
• spada u grupu hidrolaza• endopeptidaza (prema mestu delovanja na peptide)
Pepsin
• razlaže potporne belančevine vezivno tkivnih opni (kolagene i elastine)
Pepsin
• optimalan pH je 1,5 – 2 (2,5)
• pepsin se denaturiše u baznoj sredini
PRIPREMA EKSTRAKTA
Kiseli ekstrakt
• isitnjena sluzokoža želuca svinje se homogenizuje u rastvoru HCl P
Neutralisani ekstrakt
• kiselom ekstraktu se dodaje Na₂CO₃ do pH - 7 P
Alkalizovani ekstrakt
• kiselom ekstraktu se dodaje Na₂CO₃ u višku dok pH ne postane bazan P
Bazni ekstrakt
• isitnjena sluzokoža želuca svinje se homogenizuje u rastvoru Na₂CO₃ PG
Supstrat
• koagulisano belance
proteini su nerastvorljivi nema peptida u rastvoru
delovanjem enzima peptidi u rastvoru
5ml HCl
KE 3, 4 kapi
2- 3 kockicekoag.belance
5ml
NE
HCl
3, 4 kapi
2- 3 kockicekoag.belance
2- 3 kockicekoag.belance
2- 3 kockicekoag.belance
BEAE
5ml5ml
3, 4 kapi3, 4 kapi
HClHCl
• Vodeno kupatilo na 37 stepeni C, 20 min• Biuretskom reakcijom dokazati prisustvo slobodnih peptida u rastvoru
Biuret
5ml2ml
parkapi
rastvora1,25 M NaOH
0,01 M CuSO₄
(+) (+) (+)(-)
P P P PG
P
PANKREASNI SOK
•bezbojna, prozirna, sluzava tečnost alkalne elektrohemijske reakcije (pH 8)
Glavni proteolitički enzimi pankreasa su tripsin i himotripsin
•proizvod lučenja egzokrinog dela pankreasa
•neorganski sastojci (voda, NaHCO₃) i organski (fermenti)
tripsinogen
crevni enzim enterokinaza
tripsinduodenumpankreasni sok
• tripsin razlaže belančevine do nižih peptida• optimalan pH je 7,5 do 9
Tripsin
5ml Na₂CO₃
4 kapi PE i CE
belance
5ml5ml 5ml 5mlNa₂CO₃ Na₂CO₃ Na₂CO₃ HCl
4 kapi 4 kapi 4 kapi 4 kapiCE p.PE i CE PE i CEPE
belance belance belance belance
• Vodeno kupatilo na 37 stepeni C, 20 min• Biuretskom reakcijom dokazati prisustvo slobodnih peptida u rastvoru
PE – ekstrakt pankreasa CE – ekstrakt crevne sluzokožep.PE – prokuvani ekstrakt pankreasa
(+) (-) (-) (-) (-)
• Spada u grupu enzima hidrolaza, razlaže skrob i glikogen do disaharida maltoze• Optimalan pH je 5,5 do 6,7
PANKREASNA AMILAZA
PANKREASNA AMILAZA
skrob4ml 4ml skrob
4kapi 4kapiPE p.PE
PE – ekstrakt pankreasa p.PE – prokuvani ekstrakt pankreasa
• Vodeno kupatilo na 37 stepeni C, 20 min• Felingova proba
(+) (-)
Hvala na pažnjiHvala na pažnji