Vysoko selektívny 2,4-diaminopyrimidín-5-karboxyamidový

inhibítor Tyro3 kinázy

Matúš Hlaváč

N.A.Powell, J.K. Hoffman, F.L. Ciske, M.D. Kaufmann, J.T. Kohrt, J.Quin III, D.J.Sheehan, A.Delaney, S.M.Baxi, C.Catana, P. McConnell, J.Ohren, L.A.Perrin,J.J Edmund, Bioorgan. Med. Chem, 2013, 23, 1046-1050

Trombóza

• Dej, pri ktorom dochádza k zrážaniu (koagulácii) krvi za vzniku trombu

• V tepnách má za následok nedokrvnosť (ischémiu) postihnutých oblastí, v žilách môže zhoršiť odtok krvi

Rizikové faktory : dlhodobá nečinnosť dolných končatín, obezita, tehotenstvo, stavy po veľkých chirurgických zákrokoch

Alena Broulíková, Interni Med., 2007, 9, 548-551http://www.kxlaser.cz/pouziti/tromboza

Clopidogrel (Plavix) - používa sa na liečbu arteriálnej trombózy - ireverzibilne sa viaže na krvné doštičky a

zabraňuje ich zhlukovaniu - neaktívna forma clopidorelu je metabolizovaná pečeňovými enzýmami za vzniku aktívneho lieku

- 1/3 až 1/4 pacientov nie je dostatočne schopná Metabolizovať metabolizovať clopidorel

Gas6 ( growth arrest specific 6) - protein patriaci do rodiny proteínov vit. K, ktorý hrá dôležitú úlohu v procese trombózy a hemostázy

- Inhibícia Gas6 spôsobuje disfunkciu zrážania krvi a prevenciu proti trombóze

- ligand pre tyrozín kinázové receptory Tyro3, Axl a Mer

Tyro3: - inhibícia špecif. protilátkami zabraňuje zhlukovaniu krvných doštičiek - výsledný efekt je porovnateľný s liečbou pomocou clopidogrelu - nebol zaznamenaný zvýšený prietokový čas krvi (bleeding time)

Dôkaz využitia Tyro3 ako spôsob liečby trombózy bez vedlajších účinkov na prietok krvi

N

NHNN NH

O

HN N

O

Tyro3 IC50 = 1.9 µMDofetilide binding = 6 % 10 µM

Dofetilide binding assay: určuje aktivitu lieku k hERG

N

NMeS Cl

Cl

O

Et3N, DMAP, CH2Cl2

N

NMeS Cl

O

HN N

O

R1 NH2

Et3N, CH3CN, 80°C,

N

NMeS NH

O

HN N

O

R1

1. mCPBA / CH2Cl2, 0°C

2. R2NH2 / Et3N, 1,4-dioxán,reflux

N

NHN NH

O

HN N

O

R1R2

35 36

37 38

H2N N

O

R1-NH R2- NH Sky IC50 (µM)

HN

N

HN

N

HNHN

1.9

1.1

HNHN0.81

HN HN OMe

HN

OH

HN

OH

OMe

HN

HN

0.037

0.068

0.035

N

NHN NH

O

HN N

O

R1R2

1

2

3

4

5

6

Aktivita

N

N

HN

HNO

HN

N

N

O

2

HN

OMe

4

HNOH

5

HN

OMe

OH

6

Selektivita

Ala571 vrecko hrá dôležitú úlohu v selektivite inhibítora

Skrátenie 2-pyrimidínového vedlajšieho reťazca a konformačné zmeny by mali zlepšiť zaplnenie Ala571 vrecka a tým zlepšiť selektivitu.

N

N

HN

HNO

HN

N

N

O

N

N

HN

HNO

HN

NX

O

R

N

N

HN

HNO

HN

NX

O

R

R X Sky IC50 (µM) HLM t1/2 (min)

29 2-OCH3 CH2 0.400 1430 2-OCH2CH3 CH2 0.215 6 31 2,5-Cl2 CH2 0.355 632 2,5-Cl2 O 0.07 2

N

N

HN

HNO

HN

N

O

OMe

OMe

18

Skrátený vedlajší reťazec vypĺňa Ala571 vrecko a zlúčeniny 29 a 31 preukazujúvýbornú selektivitu k Tyro3 voči ostatným kinázam

N

N

HN

HNO

HN

N

O

OCH3

29

N

N

HN

HNO

HN

N

O

Cl

31

Cl

Záver

- Bolo objavených niekoľko Tyro3 inhibítorov s 2,4-diaminopyrimidín-5-karboxyamidovým skeletom

-Zlúčeniny s 2-fenyletylamino vedlajším reťazcom preukazovali vysokú inhibíciu Tyro3 -ale slabú selektivitu

N

N

HN

HNO

HN

N

N

O

-Zlúčeniny s 2-benzylamino vedlajším reťazcom s orto- alebo meta- substituentami preukázali dobrú aktivitu, vynikájúcu selektivitu a slabú HML stabilitu

N

N

HN

HNO

HN

N

O

OCH3

29

- Zlepšenie HML stability bude predmetom skúmania v najbližšej dobe

OBr

Br2

CHCl3, 25 - 35 °C

2 h

OBr

Br

1.00 mol ekv 1.00

Mw: 310.07 Mw: 159.81 Mw: 388.96

10 11

HN

OF

F

F

HN

OF

F

F

SO O

ONH

NH2

OOBr

BrHN

OF

F

F

+

S OO

ONH

O

N

Br

NH

FF

F

O

1.00 mol ekv 1.00

11 13 14

Mw: 388.96 Mw: 258.29 Mw: 548.33

Cl-CH2-CH2-Cl, 85 °C , 4 d

SO O

ONH

NH2

OOBr

Br

HN

OF

F

F

+

S OO

ONH

O

N

Br

NH

FF

F

O

1.00 mol ekv 1.00 1.3

11 13 14

Mw: 467.86 Mw: 258.29 Mw: 548.33

Cl-CH2-CH2-Cl, 100 °C, 7 dBr

LiCl

OBr

Br2

CHCl3, 25 - 35 °C 24 h

OBr

1.00 mol ekv 2.50

Mw: 310.07 Mw:159.81 Mw: 467,86

10 12

HN

OF

F

F

HN

OF

F

F BrBr

SO O

ONH

NH2

OOBr

Br

HN

OF

F

F

+

S OO

ONH

O

N

Br

NH

FF

F

O

1.00 mol ekv 1.00 1.3

11 13 14

Mw: 467.86 Mw: 258.29 Mw: 548.33

Cl-CH2-CH2-Cl, 100 °C, 7 dBr

LiCl

OBr

HN

OF

F

FBr

Br

OBr

NCBr

Br-M

+M

OBr

O2NBr

Br-M

Ďakujem za pozornosť