硕士研究生
开题报告
PTTG 在鼻咽癌中的表达及其与细胞周期的关系
研究生 : 欧小波 导 师 : 陈小毅教授
副 导:赵颖海
广东医学院病理教研室
一、立题依据鼻咽癌 :遗传因素 EB 病毒感染 环境化学致癌物 1997 年 Pei 等分离出垂体瘤转化基因 (PTTG)
在鼻咽癌中的表达 ? 在鼻咽癌发生发展 ? 国内外还未见报道
(一)有关 PTTG 基因
1.PTTG 基因的结构 位于染色体 5q33, 全长超过 10k
b 含六个外显子和五个内含子 hPTTG cDNA 序列由 787bp 组成 其作用依赖于表达水平异常
2. PTTG 基因的表达和分布
垂体肿瘤、食管癌、肺癌等高表达 ,主要位于胞质 ,部分位于胞核正常组织如脾、结肠等有弱表达甚至检测不到鼻咽癌的表达情况未见报道
(二)、 PTTG 基因与细胞周期
1.PTTG 的细胞周期依赖性表达 Yu R 等发现胎盘 JEG-3 细胞中 P
TTG mRNA 及蛋白的表达 G1/S 期极低 S 期开始升高 G2/M 期达高峰
2. 与姐妹染色单体分离的关系( 1)姐妹染色单体的分离姐妹染色单体被粘合素粘着 ESP1 与安全子蛋白结合有丝分裂中后期 , APC 将安全子蛋白泛素化而降解使 ESP1 活化 ,清除粘合素 ,姐妹染色单体得以分离
安全子样蛋白
ESP1
图、 PTTG 与姐妹染色单体分离的关系
粘和素后期促进复合物
pttg安全子安全子蛋白
(2)ESP1 基因
ESP1 基因定位于Ⅷ号染色体 ,全长 6662bp, 蛋白质的 N端和 hPTTG高度亲和
罗勇军等证明了在 G2/M 期 ESP1活化使姐妹染色单体分离
(3) PTTG 致瘤作用
PTTG 与安全子有同源性 ,过量表达突变型的安全子样蛋白 ,在有丝分裂中期不能降解
突变型的安全子样蛋白与 ESP1结合 ,阻止 ESP1 清除粘合素 ,抑制姐妹染色单体分离 ,促非整倍体形成 ,导致肿瘤发生
安全子样蛋白
ESP1
图、 PTTG 与姐妹染色单体分离的关系
粘和素后期促进复合物
pttg安全子安全子蛋白
?鼻咽癌
PTTG 有否抑制姐妹染色单体分离 ?
与 ESP1 关系如何 ?是否形成非整倍体 ?
3. 有丝分裂检测点
研究表明大多数肿瘤表现出有丝分裂检测点功能缺陷
染色体未能与纺垂体正确结合时 ,纺垂体装配检测点系统被激活将有丝分裂阻断于中后期
? PTTG 抑制姐妹染色单体分离 ,子代细胞非整倍体形成进一步发展为肿瘤的过程中是否涉及检测点功能缺陷 ?
(三 )PTTG 的调控因子
Heaney等发现 ,予雌激素 ,PTTG表达呈时间、剂量依赖方式增高
雌激素通过旁分泌诱导 PTTG 表达诱发成瘤作用
抑制雌激素则阻止肿瘤的生成 ,减少肿瘤细胞中 PTTG 的表达
安全子样蛋白
ESP1
图、 PTTG 与姐妹染色单体分离的关系
粘和素后期促进复合物
pttg安全子安全子蛋白
研究目的
研究 PTTG 在鼻咽癌中的表达及其与细胞周期的关系 ,从细胞周期角度探讨鼻咽癌的发生的机制
研究影响 PTTG 表达和活性的调 控因子
拟解决问题
PTTG 、 ESP1 基因的 mRNA 和蛋白在鼻咽癌中的表达情况及其相关性
PTTG 对鼻咽癌细胞 DNA 含量、倍体和有丝分裂检测点功能的影响
二、研究内容
( 一 ) 慢性鼻咽炎 鼻咽癌原发灶 淋巴结转移灶 PTTG 、 ESP1 的表达 DNA 含量和倍体分析
( 二 ) 鼻咽癌细胞系中 PTTG 、 ESP1 的表达情况
DNA 含量和倍体分析
有丝分裂检测点功能测定
(三 ) 体外培养细胞应用乙烯雌酚 观察其对 PTTG 、 ESP1 的影响
三、技术路线
分组技术路线图检测方法
(一) 分 组1.临床标本: 分慢性鼻咽炎 低分化鼻咽癌 鼻咽癌淋巴结转移灶 每组各 30例
2. 鼻咽癌细胞系: CNE1 CNE-2Z CNE-2Z-H53.乙烯雌酚体外实验: CNE1 CNE2Z CNE2Z-H5 给予乙烯雌酚 10-8M
( 二 )技术路线图
临床标本实验 : 体外实验 :
慢性炎 原发灶 转移灶 CNE-2Z CNE-2Z-H5 CNE1
PTTG
mRNA和蛋白
ESP1
mRNA和蛋白
图象分析 : DNA 含量和倍体分析
乙烯雌酚(+)
乙烯雌酚 (-)
PTTG
mRNA和蛋白的表达情况
ESP1
mRNA和蛋白的表达情况
图象分析 :
DNA 含量和倍体分析
周期阻断、有丝分裂检测点功能测定
综合分析结果
(三 ) 检测方法
PTTG检测 ◆ RT-PCR
◆ 原位杂交 ◆ 免疫组织化学
◆ Western blot
ESP1 检测 ◆ 原位杂交 ◆ 免疫组织化学
DNA 含量和倍体分析 : 图象分析技术
四、预期结果
(1)临床标本中 PTTG 高表达,与 ESP1 有相关性;鼻咽癌存在非整倍体 , 与 PTTG 有相关性
(2) 在鼻咽癌细胞系中
☉ pttg和 esp1 的表达均呈细胞周期依赖 ,两者存在相关性;鼻咽癌各细胞株 PTTG 的表达有差异
低分化的鼻咽癌细胞有非整倍体 , 有丝分裂检测点存在一定程度的缺陷 ,都与 PTTG 有相关性☉ 雌激素作用下 ,PTTG 表达增加
五、进度安排2005.07---2005.08 收集资料、写开题报告 和综述2006.01---2006.03 收集标本 ,培养细胞 2006.04---2006.10 完成临床和体外实验 检测相关指标2006.11---2006.12 处理和统计数据2007.01---2007.04 撰写论文、答辩
六、经费预算 ◈ 细胞培养 2000 ◈ 免疫组化 3000 ◈ 原位杂交 3000 ◈ Western blot 3000 ◈ RT-PCR 4000 ◈ 其他预算 3000 ◈ 合计 18000