07
Chapter
ARTICLE REVIEW
์ธํ๋ฐ ๊ฐ์๋ถํด๋ฌผ์ ํญ์ผ์์ฉ๊ณผ ์งํตํจ๊ณผ์๊ฒฝ๋ฌต ๊ต์ (์ค์์๋)
article review
๋ณธ ๋ด์ฉ์ (์ฃผ)๋ฉ๋์นผ๋ฆฌ๋ทฐ ํํ์ด์ง(www.MDzone.co.kr)์์๋ ํ์ธ ๊ฐ๋ฅํฉ๋๋ค.
Article Review
์ธํ๋ฐ ๊ฐ์๋ถํด๋ฌผ์ ํญ์ผ์์ฉ๊ณผ ์งํตํจ๊ณผ
Anti-inflammatory and Analgesic Effects of Human Placenta Extract
Lee KH, Kim TH, Lee WH et alNatural Product Research 2011;11: 1090-1100
112
์ ๊ฒฝ ๋ฌต ๊ต์์ค์์๋ ์ฌํ์ํ๊ณผ
EXPERT OPINION
+ ํญ์ผ์ฆ์ ๋ ์ผ์ฆ๋ฐ์ ๊ด๋ จ ๋ณ๋ฆฌ์๋ฆฌ ์น๋ฃ์ ๋์์ด ๋์ง๋ง ํ์ฌ ๊ฐ์ฉํ ํญ์ผ์ฆ์ ๋ค์ ์ด์๋ฐ์
์ผ๋ก์ธํ๋ถ์์ฉ์๋ํ๋ด๊ณ ์๋ค. ๋ฐ๋ผ์๋ถ์์ฉ์ด์ ์ํญ์ผ์ฆ์ ์๊ฐ๋ฐ์ดํ์ํํ์ํฉ์์์ฒ์ฐ๋ฌผ,
ํนํ์ธํ๋ฐ๊ฐ์๋ถํด๋ฌผ์ํญ์ผ์์ฉ๊ณผ์งํตํจ๊ณผ๋ฅผ์ดํ๋ณธ์ฐ๊ตฌ๋์์์ ์ ํ๋คํ ์์๋ค.
+ ๋ณธ์ฐ๊ตฌ์์ํ๋ฉด์ธํ๋ฐ๊ฐ์๋ถํด๋ฌผ์์ฅ์๋์์ธํฌ์์์ธํฌ๋ ์ฑ์๋ณด์ด์ง์์๊ณ , LPS๋ก์
๋๋์ฐํ์ง์, ์ข ์๊ดด์ฌ์ธ์, COX-2 ๋ฑ์์์ฑ์์ต์ ํจ์ผ๋ก์จ์ด์๊ด๋ จ๋ํญ์ผ์์ฉ์๊ฐ์ง๊ณ ์๋ค๋
๊ฒ์๋ณด์ฌ์ฃผ์๋ค.
+ ์ธํ๋ฐ๊ฐ์๋ถํด๋ฌผ์๋ง์ฑ์ผ์ฆ์ฑ์ง๋ณ๋ชจ๋ธ์์๋๋ง์ฑ๊ด์ ๋ถ์ข ๋ฐ์์์ ์ํ๊ฒ์ต์ ํ๋์ค
ํ๊ฒฐ๊ณผ๋ฅผ ๋ณด์์ผ๋ก์จ, ์ธํ๋ฐ ๊ฐ์๋ถํด๋ฌผ์ด ๊ธ์ฑ ์ผ์ฆ๋ฟ ์๋๋ผ ๋ง์ฑ ์ผ์ฆ์ ์น๋ฃ์์๋ ํจ๊ณผ์ ์ผ ์ ์
๋๊ฐ๋ฅ์ฑ์์์ฌํ๋ค.
Vol.9 No.6 June 2012 โท113
Ar
ti
cl
e
Re
vi
ew
์ธํ๋ฐ ๊ฐ์๋ถํด๋ฌผ์ ํญ์ผ์์ฉ๊ณผ ์งํตํจ๊ณผ
+ ์ธํ๋ฐ ๊ฐ์๋ถํด๋ฌผ์ ๋ณต๋ถ ์์ถ, hot-plate, Randall-Selitto, tail-flick ๋ฑ์ ์คํ์ ํตํด ์ง
ํต์์ฉ์๋ํ๋๋ค.
+ ์ธํ๋ฐ๊ฐ์๋ถํด๋ฌผ์ํญ์ผ์ฆํจ๊ณผ์๋ํ์์ฉ๊ธฐ์ ๋ฐ์น๋ฃํจ๊ณผ์๋ํ์ ๋ณด๊ฐ์ ํ์ ์ธ์ํฉ์
์์คํ๋ชจ๋ธ์ ์ด์ฉํด ํญ์ผ์์ฉ๊ณผ ์งํตํจ๊ณผ๋ฅผ ์ดํ์ผ๋ก์จ ํฅํ ์ฝ๋ฌผ ๊ฐ๋ฐ๊ณผ ์น๋ฃ ์ ๋ต์ ๋ง์ ๋์์ด ๋
๊ฒ์ผ๋ก๊ธฐ๋๋๋ค.
ABSTRACT
๋ณธ ์ฐ๊ตฌ๋ Lipopolysaccharide (LPS)๋ก ์ผ์ฆ์ ์ ๋ํ์ฌ ํ์ฑํ๋ RAW264.7 ๋์์ธํฌ์์ ๋ถ๋น๋๋ ์
์ผ์ฆ์ฑ ์ฌ์ดํ ์นด์ธ๊ณผ ๋งค๊ฐ๋ฌผ์ง์ ๋ฏธ์น๋ ์ธํ๋ฐ ๊ฐ์๋ถํด๋ฌผ(human placenta extract; HPE, ๋ผ์ด๋ฅ)์ ํจ
๊ณผ๋ฅผ ์กฐ์ฌํ ๊ฒ์ด๋ค. ์ด ์ฐ๊ตฌ๋ฅผ ํตํด ๋ผ์ด๋ฅ(HPE)์ด ์ฐํ์ง์(nitric oxide, NO), ์ข ์๊ดด์ฌ์ธ์(TNF-ฮฑ)์
COX-2 (cyclooxygenase-2)์์์ฑ์์ ์ํ๊ฒ์ต์ ํ๋ค๋๊ฒ์๋ฐํ๋ด์๋ค.
๋ผ์ด๋ฅ์ ํญ์ผ์์ฉ ๋ฐ ์งํตํจ๊ณผ์ ๋ํ ๊ฐ๋ฅ์ฑ์ ์์๋ณด๊ธฐ ์ํด ์ฅ๋ฅผ ๋ชจ๋ธ๋ก ํ์ฌ ์ฐ๊ตฌํ ๋ค. ์ฅ๋ค์ 6๊ฐ
๊ตฐ์ผ๋ก ๋ฐฐ๋นํ์ฌ ์๋ฆฌ์์ผ์ ๋๋ ๋ผ์ด๋ฅ(0.33, 1, 3, 6 mL/kg)์ ๋ณต๋ง ๋ด๋ก ํฌ์ฌํ ๊ณ , ํ์ฑ ๋์กฐ๊ตฐ์ผ๋ก
๋diclofenac์์ฌ์ฉํ ๋ค.
์ฐ๊ตฌ ๊ฒฐ๊ณผ HPE๋ ์ฅ ๋ท๋ฐ์ ๋ถ์ข ์ ๊ฐ์์์ผฐ์ผ๋ฉฐ, ์์ธํธ์ฐ์ผ๋ก ์ ๋๋ ํ๊ด ํฌ๊ณผ์ฑ์ด HPE์ ์ํด ์ ์
ํ๊ฒ ๊ฐ์๋์๋ค. HPE๋ carrageenan air pouch ๋ชจ๋ธ์์ ์ก์์ข ํ์ฑ์ ๊ฐ์์ํค๊ณ , ์์ ํ Freundโ
adjuvant๋ก ์ ๋๋ ๋ง์ฑ ๊ด์ ์ผ ์ฅ์์ ๋ท๋ฐ ๋ถ์ข ์ ๊ฐ์์์ผฐ์ผ๋ฉฐ, ๊ทน์ฌํ ๊ณ ํต์ผ๋ก ์จ๋ชธ์ ๋นํธ๋ ํ์
(writhing episode)๋ฅผ๊ฐ์์์ผฐ๋ค.
HPE๋ฅผ ํฌ์ฌ๋ฐ์ ์ฅ๋ hot-plate์ ๊ฒฌ๋๋ ์๊ฐ์ด ์ฆ๊ฐํ ๋ค. ๋ํ HPE๋ Randall Selitto test์์ ํต์ฆ
์ญ์น๋ฅผ ์ฆ๊ฐ์์ผฐ๊ณ , Tail flick assay์์ ์ฅ์ ๋ฐฉ์ฌ์ด ์๊ทน์ ๋ํ ๋ฐ์์๊ฐ์ ์ฐ์ฅ์์ผฐ๋ค. ์ด๋ฌํ ๊ฒฐ๊ณผ๋ค
์HPE๊ฐ๊ฐ๋ ฅํํญ์ผ์์ฉ๋ฐ์งํตํจ๊ณผ๊ฐ์์์๋งํด์ฃผ๊ณ ์๋ค.
114
Article Review
์ฐ๊ตฌ ๋ฐฐ๊ฒฝ
์ผ์ฆ์๋ค์ํ์๊ทน๊ณผ๊ตญ์์ ์์์๋ํด์ธ์ฒด๊ฐ
๋ํ๋ด๋ ์ ์ตํ ๋ฐ์์ด๋ค. ์ผ์ฆ๋ฐ์์ ๋ฌผ๋ฆฌ์ ๋
๋ ํํ์ ์ธ ์ธ์, ์ฅ๊ธฐ์ ์นจ๋ฒ๊ณผ ํญ์ํญ์ฒด๋ฐ์์
์ํด ์ด๋ฐ๋ ์ ์์ผ๋ฉฐ, ๊ทธ ๊ฒฐ๊ณผ ์กฐ์ง์ ๋ถ์ข ๊ณผ ํต
์ฆ, ์ฌํ ๊ฒฝ์ฐ ์ธํฌ์ ์์๊น์ง ์ด๋ฅด๊ฒ ํ๋ค. ๋ฐ๋ผ
์ํญ์ผ์ฆ์ ๋ฅผ์ฌ์ฉํ๋ฉด์ผ์ฆ๋ฐ์๊ณผ๊ด๋ จ๋๋ณ๋ฆฌ์
๋ฆฌ๋ฅผ ์น๋ฃํ๋ ๋ฐ ๋์์ด ๋ ์ ์๋ค. ๊ทธ๋ฌ๋ ํ์ฌ
๊ฐ์ฉํํญ์ผ์ฆ์ ๋ค์์ด์๋ฐ์์ผ๋ก์ธํด์ค์ ์์
์์์ฌ์ฉ์์ค์ํํฉ๋ณ์ฆ์๋ํ๋ด๊ณ ์๋ค. ์๋ฅผ
๋ค์ด, ์ผ๋ถ ๋น์คํ ๋ก์ด๋์ฑ ์์ผ์งํต์ (non-
steroidal anti-inflammatory drug, NSAID)๋
์๊ถค์๊ณผ ์ ์ฅ์ ๋ฅผ ์ผ์ผํฌ ์ ์๋ค. ๊ทธ๋ฌ๋ฏ๋ก ๋ถ์
์ฉ์ด๋ํํญ์ผ์ฆ์ ๊ฐ๊ฐ๋ฐ๋ ํ์๊ฐ์๋ค. ์ต๊ทผ์ฒ
์ฐ๋ฌผ์ ์ ์๋ํ๊ด์ฌ์ด์ฆ๊ฐํ๊ณ ์๊ณ , ์๋ก์ด์ฝ
๋ฌผ๊ฐ๋ฐ์์ํ์์ฒ๋ฌผ์ง๋ก์๋๊ธธ์๋๊ณ ์๋ค.
์ฐ๊ตฌ ๋ชฉ์
์ธํ๋ฐ ๊ฐ์๋ถํด๋ฌผ(HPE)์ ๋ง์ ์์์ ๊ตญ๊ฐ๋ค
์์ ์ง๋ณ์ ์น๋ฃ์ ํ๋ ฅ์ฆ์ง์ ๋ณด์ถฉ์ ์ํ ์ ํต
์ ์ธ์น๋ฃ์ ๋ก์ฌ์ฉ๋์ด์๋ค. HPE๋๋ง์ฑ๊ฐ์งํ
๊ณผ ๊ฑด์ ๊ฐ์ํผ๋ถ์ผ์ฆ์ ์น๋ฃ์ ํจ๊ณผ๊ฐ ์๋ค๊ณ ๋ณด
๊ณ ๋์๋ค. ์ต๊ทผ์HPE๋์ค๋ ์ฌ์ฑ์์๊ฐฑ๋ ๊ธฐ์ฆ
์๊ณผ ํผ๋ก๋ฅผ ๊ฐ์ ์ํจ ๊ฒ์ผ๋ก ๋ํ๋ฌ์ผ๋ฉฐ, ๋ณด์กฐ์
๋ก ์ ๋๋ ๊ด์ ์ผ์ ๊ฐ์ง ์ฅ์์ ๊ด์ ์ผ์ ๊ฐ์ ์
ํค๋ ๊ฒ์ผ๋ก ๋ํ๋ฌ๋ค. ๋๋ถ์ด HPE๋ ๋จ๋ฐฑ์งยท์ง
์งยทDNA ๋ฑ์ ํฌํจํ ์๋ฌผํ์ ๋ถ์๋ค์ด ์์๋จ
์ผ๋ก์จ ์ ์ ์ ์ง๋์ฌ์ ์๋ฆฌ์ ๊ท ํ์ ํด์น๊ฒ ๋
๋ ์ฐํ ์คํธ๋ ์ค์ ๋ถ์ ์ ์ธ ๊ฒฐ๊ณผ์ ๋์ํ๋ ํญ
์ฐํ์์ฉ์ ๊ฐ์ง๊ณ ์๋ค๊ณ ๋ณด์ฌ์ง๋ค. HPE๋ ์ฌ๋
์ ๋จํต๊ตฌ ์ธํฌ์ฃผ(human monocytic cell line)์
์ JNK/SAPK์ ์ ์ฌ์ธ์(transcription factor)
์ธ NK-ฮบB, AP-1์ ํ์ฑํ๋ฅผ ํตํด IL-8์ ๋ฐํ
์์ด์ง์ํจ๋ค. HPE๊ฐ๋ค์ํ์์์ ์ํฉ์์ํญ
๋๊ฒ ์ฌ์ฉ๋์ด ์๋ค๊ณ ๋ ํ์ง๋ง ํญ์ผ์ฆ ํจ๊ณผ์ ์
์ธํ ์์ฉ๊ธฐ์ ๋ฐ ๊ทธ์ ๊ด๋ จ๋ ์น๋ฃํจ๊ณผ์ ๋ํด์
๋์๋ ค์ง์ ๋ณด๊ฐ๋งค์ฐ์ ํ์ ์ด๋ค. ๋ฐ๋ผ์๋ณธ์ฐ๊ตฌ
์์๋ ์ฌ๋ฌ ์คํ๋ชจ๋ธ์์ HPL์ ํญ์ผ์์ฉ๊ณผ ์ง
ํตํจ๊ณผ์๋ํด์์๋ณด์๋ค.
์ฐ๊ตฌ ๋ฐฉ๋ฒ
1. ํํ์ฝํDulbeccoโs modified Eagleโs medium
(DMEM), Dulbeccoโs phosphate buffer
saline(PBS), penicillin/streptomycin (1000
U/mL, 1000 ฮผg/mL, respectively) ๊ทธ๋ฆฌ๊ณ fetal
bovine serum (FBS)์ Gibco BRL, Life
Technologies (Grand Island, NY, USA)๋ก๋ถํฐ
์ ์ํ ๋ค. LPS (Escherichia coli serotype
0127:B8), 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-
diphenyltetrazolium bromide (MTT) ๋ฐ๋ค๋ฅธ์ธ
ํฌ๋ฐฐ์์ ์ํด ํ์ํ ๋ชจ๋ ์ฌ๋ฃ๋ค์ Sigma
Chemical Company (St Louis, MO, USA)๋ก๋ถ
ํฐ ๊ตฌ์ ํ ๋ค. Type IV lambda carrageenan,
Brewerโs yeast, complete Freundโs adjuvant,
diclofenac, Evans blue๋ Sigma Chemical Co.
(USA)๋ก๋ถํฐ ๊ณต๊ธ๋ฐ์๋ค. ์ด ์ฐ๊ตฌ์์ ๋ชจ๋ ๋ค๋ฅธ
ํํ์ฝํ๋ค์ reagent grade์ด์๊ณ , ํ ์ง์ญ์์
์์ ์ ์ผ๋ก์ป์์์๋๊ฒ๋ค์ด์๋ค.
2. HPE์๊ตฌ์ฑHPE๋ผ๋ ์ ํ๋ช ์ผ๋ก ๋ น์ญ์ Japan Bio
Product (ํ๊ตญ)์์ ์ํํ๊ณ ์๋ ์ธํ๋ฐ ๊ฐ์๋ถ
ํด๋ฌผ์ธ ๋ผ์ด๋ฅ์ ์ฌ์ฉํ ๋ค. 10๊ฐ์์ ์ฑ์ด ์ถ์ฐ
์๊ธฐ์ค์ผ๋ก ์์ง๋์ธํ๋ฐ์ ์ฆ์ ์ผ์์์ ๋ณด๊ด
๋์๊ณ , ์ธ๊ฐ๋ฉด์ญ๊ฒฐํ๋ฐ์ด๋ฌ์ค(HIV)์ BํยทCํ
๊ฐ์ผ๋ฐ์ด๋ฌ์ค ์ํ์ ๊ฑฐ์น ํ ์กฐ๊ฐ์ผ๋ก ์๋ ค์ ธ ํจ
Vol.9 No.6 June 2012 โท115
Ar
ti
cl
e
Re
vi
ew
์ธํ๋ฐ ๊ฐ์๋ถํด๋ฌผ์ ํญ์ผ์์ฉ๊ณผ ์งํตํจ๊ณผ
์๋ถ์ ๋ถํด์ ํํ์ ๊ฐ์๋ถํด๋ฅผ ํตํด ๋ฌผ ์์์
์ถ์ถ๋์๋ค. ์ถ์ถ๊ณผ ๋ฉธ๊ท ๊ณผ์ ์ ํ์ง๊ด๋ฆฌ ๊ฐ์ด๋
๋ผ์ธ์๋ฐ๋ผ์คํ๋์๋ค. HPE ์ต์ข ์ฐ๋ฌผ์์๋ฅด๊ธฐ
๋(0.08%), ๋ฆฌ์ (0.1%), ํ๋์๋ผ๋(0.08%), ํฐ๋ก
์ (0.03%), ๋ฅ์ (0.12%), ๋ฉํฐ์ค๋(0.03%), ๋ฐ๋ฆฐ
(0.04%), ์๋ผ๋(0.08%), ์ธ๋ฆฐ(0.07%), ํธ๋ ์ค๋
(0.06%)์ ํฌํจํ ๋ค์ํ ์๋ฏธ๋ ธ์ฐ์ด ๋ค์ด์๋ 2
mL ์ฐํ์ ๋ณด๊ดํ ๋ค. Polysaccharide,
polynucleotide์ ๊ฐ์ ๋ถ์ฉ์ฑ ๊ณ ๋ถ์ ๋ฌผ์ง์ ์
์กฐ๊ณผ์ ์์์ ์ธ๋์๋ค.
3. ์ธํฌ๋ฐฐ์Macrophge RAW264.7 ์ธํฌ๋ค์ American
Type of Culture Collection๋ก๋ถํฐ ์ ์ํ ๋ค.
์ด ์ธํฌ๋ค์ 37โ์ ์ตํ ํ๊ฒฝ์์ 95%์ ๊ณต๊ธฐ,
5%์์ด์ฐํํ์๋ฅผ๊ฐ์ด๋ฃ์ด๋ณด๊ด๋์๋ค.
Routine subculture๋ฅผ์ํ๋งค๊ฐ์ฒด๋10% FBS,
2mM glutamine, 100ฮผg.mL penicillin/
streptomycin์๋ณด์ถฉํDMEM์ด๋ค.
4. ์ธํฌ์์กด๋ ฅ์ธํฌ ์์กด๋ฅ๋ ฅ์ ๋ํ HPE ์ง์ค์ ํจ๊ณผ๋ ์์
๋ MTT assay๋ฅผ ์ฌ์ฉํ์ฌ ํ๊ฐ๋๋ค. ๊ฐ๋ตํ๊ฒ ์ธ
ํฌ๋ค(10,000 cells/well)์ 96-well plate์ ์ฌ์ด
์ ธ 37โ์์ 24์๊ฐ ๋ฐฐ์๋์๋ค. ์ธํฌ๋ค์ HPE
๋๋PBS ์ปจ์ผํธ๋ ์ด์ ๊ณผ๊ธ์ ์ ์ธ์ปจํธ๋กค๋ก๋ง๋ค
๋ค์ก์ผ๋ฉฐ, ์ถ๊ฐ์ ์ธ 24์๊ฐ ๋์ 37โ์์ ๋ฐฐ์๋
์๋ค. ๋ฐฐ์ํ, MTT solution (5 mg/mL in PBS)
์ 100 ฮผL์ ๊ฐ๊ฐ์ 3์๊ฐ ๋์ 37โ์์ ๋ฐฐ์๋
well๊ณผ plate์ ์ถ๊ฐ๋์๋ค. ๋์ค์ dimethyl
sulfoxide 100 ฮผL๋์นจ์ ๋ formazon์์ฉํด๋๋ฅผ
๋์ด๊ธฐ ์ํด ๊ฐ๊ฐ์ well์ ์ถ๊ฐ๋์๋ค. ๊ฐ๊ฐ well
์ ํก๊ด๋๋ microplate reader๋ฅผ ์ฌ์ฉํด์ 450
nm์ผ๋ก์ธก์ ๋์๋ค.
5. ํจ์์ฐ๊ฒฐ๋ฉด์ญ๋ถ์๋ฒ์์ํ์ฌ์ดํ ์นด์ธ์์ธก์
RAW264.7 ์ธํฌ๋ค์ ๋ฐฐ์ ๋ฐฐ์ง 2 mL์ ํจ๊ป
6-well cell culture plate ์์์ 100,000
cells/mL ๋๋๋ก 24์๊ฐ ๋์ plate๋์๊ณ ,
indomethacin (50 ฮผM), dexamethasone (1 ฮผM)
๋๋ HPE (0.0018, 0.018, 0.18, 3.6 mL/ mL)์ผ
๋ก 2์๊ฐ ๋ ์ฌ์ ์ฒ๋ฆฌ๋์์ผ๋ฉฐ, ๊ทธ ๋ค์ ์ถ๊ฐ 24
์๊ฐ๋์LPS (1 ฮผg/mL)๋ก์ํ๋์๋ค. ์ข ์๊ดด์ฌ
์ธ์-ฮฑ(TNF-ฮฑ), interleukin(IL)-1ฮฒ, IL-6 ๊ฐ์
์ผ์ฆ์ ๋งค๊ฐ์ฒด๋ ์ ์กฐ์ ์ธ์คํธ๋ญ์ ์ ๋ฐ๋ผ ์ฅ
ELISA kits์์ํLPS ์น๋ฃ24์๊ฐํ์์๋ํ
๋์๋ค.
6. Western blot ๋ถ์๋ฒRAW264.7 ์ธํฌ๋ค์ indomethacin (50 ฮผM),
dexamethasone (1 ฮผM) ๋๋ HPE (0.0018,
0.018, 0.18, 3.6 mL/mL)์ผ๋ก 2์๊ฐ ์ฌ์ ์ฒ๋ฆฌ๋
์์ผ๋ฉฐ, LPS (1 ฮผg/mL)๋ก 24์๊ฐ ์๊ทน๋์๋ค. ์ด
๋จ๋ฐฑ์ง ๊ฐ์๋ถํด๋ฌผ์ 20 ฮผg์ 10% SDS-PAGE,
nitrocellulose ๋ง์ผ๋ก ์ ์ ์ด๋๋์๋ค.
nitrocellulose ๋ง์ 1์๊ฐ ๋์ ๋ฌด์ง๋ฐฉ์ ์ฐ์ ๋ก
๋ง๊ณ ๊ทธ ๋ค์ ์ ๋์ฑ์ nitric oxide๋ฅผ ์ํ
polyclonal ํญ์ฒด์ cyclooxygenase-2, ฮฒ-actin
์ ์ํ monoclonal ํญ์ฒด์ ํจ๊ป ๋ฐค์ ๋ฐฐ์ํ
๋ค. ๋ชจ๋ ํญ์ฒด๋ค์ ๊ฒฐํฉ์ ์ ์กฐ์ ์ธ์คํธ๋ญ์ ์ ๋ฐ
๋ฅธECL ๋ฐ๊ฒฌ์์คํ ์์ฌ์ฉํ์ฌ๋ฐ๊ฒฌํ ๋ค. ๋ฉด์ญ
๋ฐ์์ฑ band์ ๊ฐ๋๋ densitometric analysis
ํ๋ก๊ทธ๋จ(Japan)์์ฌ์ฉํ์ฌ๋ฐ๊ฒฌํ ๋ค.
7. ์คํ๋๋ฌผMale Spraque-Dawley ์ฅ(150-250 g)์ ICR ์ฅ
(25-28 g)๋ค์๋ํ๋ฐ์ด์ค๋งํฌ(ํ๊ตญ)์์์ ์ํ
๊ณ , ์ต์ 1์ฃผ์ผ๊ฐ ์คํ์ค ์กฐ๊ฑด์ ์์์์ผฐ๋ค. ๋ชจ๋
๋๋ฌผ๋ค์์ฑ๊ท ๊ด๋ํ๊ต๋๋ฌผ๋ณดํธ์์ํ๊ฐ์ด๋๋ผ์ธ
116
Article Review
์ ๋ฐ๋ผ ์ธ๋์ ์ผ๋ก ๋ค๋ฃจ์๋ค. HPE๋ ์์ผ์์ ํฌ
์ํ์ฌ 0.33, 1, 3, 6 mL/kg์ ์ฉ๋์ผ๋ก ํฌ์ฌํ
๋ค. ์ฌ์ฏ ๊ฐ์ ์น๋ฃ๊ตฐ(n=8-16)์ผ๋ก ๋๋์ด ์ฐ๊ตฌํ
๋๋ฐ, a) ์์ฝ๋์กฐ๊ตฐ, b)-e) HPE ํฌ์ฌ๊ตฐ, f) ํ์ฑ
์ฝ(diclofenac) ๋์กฐ๊ตฐ๋ฑ์ด์๋ค. HPE์์ฉ๋์์ด
์ ์ฐ๊ตฌ์์ํจ๋ฅ์ด์ธ์ ๋์ฉ๋์์ฌ์ฉํ ๋ค.
8. Carrageenan ์ ๋๋ท๋ฐ๋ถ์ข Winter ๋ฑ์ ์ํ Carrageenan ์ ๋ ๋ท๋ฐ๋ถ์ข
์ ์ฝ๊ฐ ์์ ํด ์ฌ์ฉํ ๋ค. 1% sodium
carrageenan 0.1 mL subplantar ์ฃผ๋ฅผ์ฅ์์ค๋ฅธ
๋ท๋ฐ์ ๋ณต๊ฐ๋ด์ฃผ์ฌ 30๋ถ์ผ๋ก ๊ด๋ฆฌ๋์๋ค. ์ค๋ฅธ๋ฐ
์ฉ๋์์ฆ์์ธก์ ๋๊ณ , Ugo Basile (์ดํ๋ฆฌ์)๋ก๋ถํฐ์
water plethysmometer์ ์ฌ์ฉํ carrageenan
์ฃผ์ฌํ0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12์๊ฐํ์์ธก์ ๋
์๋ค. ๋ฐ๋ถ์ข ๋น์จ์๋ค์์๋ฐฉ์ ์์ผ๋ก๊ณ์ฐ๋์๋ค.
๋ถ์ข ๋น์จ(%)= (B-A)/A x 100%
B๋ carrageenan ์ฃผ์ฌ ํ ๋ฐ์ ์ฉ๋์ด๋ฉฐ, A๋
์ฃผ์ฌ ์ ๋ฐ์ ์ฉ๋์ด๋ค.
9. ์์ธํธ์ฐ์ ๋ํ๊ดํฌ๊ณผ์ฑHPE์ ๊ทผ์ก๋ด ์ฃผ์ฌ ํ 30๋ถ, 2.5% Evans blue
solution์ ์ฅ๋ก ์ ๋งฅ์ฃผ์ฌํ๊ณ 20๋ถ ํ acetic
acid solution์ 0.6%์ 10 ฮผL/g(๋ชธ๋ฌด๊ฒ)๋ฅผ ๋ณต๊ฐ
๋ด๋ก ์ฃผ์ฌํ๋ค. ๋ ๋ค๋ฅธ 20๋ถ ํ ์ฅ๋ ํฌ์๋์๊ณ
์์ผ์๋ก ๋ณต๊ฐ์ ์ป์ด๋๋ค. ๋ณต๊ฐ ๊ตฌ๋ฉ ์ ์ฒด์ ์์ฒญ
์ก์๋นํก์๋ ฅ์๋ถ๊ด๊ด๋๊ณ๋ฅผ์ฌ์ฉํ์ฌ630 nm
์ผ๋ก์ธก์ ๋์๋ค.
10. Carrageenan-induced air pouchpouch๋ฅผ๋ง๋ค๊ธฐ์ํด8 mL์๊ณต๊ธฐ๊ฐ์ฅ๋ฑ์ํผ
ํ ๊ณต๊ฐ์ผ๋ก ์ฃผ์ ๋์๋ค. 0.2% carrageenan-
saline solution์ ๊ณต๊ธฐ ์ฃผ์ 24์๊ฐ ํ์ ์ฃผ์ ๋
์๋ค. Vehicle, HPE ๋๋ diclofenac (5 mg/kg)
์ 7์ผ ๋์ ๊ฐ์ ์๊ฐ์ ํ๋ฃจ ํ ๋ฒ ๋ณต๊ฐ ๋ด๋ก ํฌ
์ฌ๋์๋ค. ๋ง์ง๋ง์น๋ฃ24์๊ฐํ๋๋ฌผ๋ค์ํฌ์๋
์๊ณ , ์ผ์ถ๋ฌผ๊ณผ์ก์์ข ์์์ง๋์ด์ธก์ ๋์๋ค.
11. ๋ณด์กฐ์ ์ ๋ฐ๊ด์ ์ผCox์Welch (2004)์์ํด๋ณด๊ณ ๋์ด๋ก ์๋ฐ๋ฅด
๋ฉด ๋๋ฌผ๋ค์ ์์ ํ Freundโs adjuvant์ 1 mL
์์ ์ด์ฒ๋ฆฌ๋ Mycobacterium butyricum 1 mg
๋ก์ค๋ฅธ์ชฝ๋ท๋ฐ์ํผํ๋ก์ฃผ์ฌ๋์๋ค. ๋ณด์กฐ์ ์ฃผ์ฌ
11์ผํ์HPE๋ 10์ผ๋์๋ณต๋ง๋ด๋ก๋งค์ผํฌ์ฌ๋
์๋ค. ๊ด์ ์ผ์ ์ฒด์ ๋ณ๋์ ๋๊ณ๋ก ๋ฐ์ ๋ถ๋ ์ ๋
๋ฅผ ์ธก์ ํ๋ค. ๋ถ์ข ์ ๋น์จ์ ์์ ์ธ๊ธํ ๋ฐฉ๋ฒ์ผ๋ก
์ธก์ ํ ๋ค.
12. ์์ธํธ์ฐ์ ๋๋นํ๊ธฐ๋ฐ์HPE๋์คํ์ 30๋ถ์๊ทผ์ก๋ด๋กํฌ์ฌํ ๊ณ , ์ด
ํ์์ผ์์๋ ์์ธํธ์ฐ(0.7%, 0.1 mL/10 g ๋ชธ๋ฌด
๊ฒ)๋ ๋ณต๋ง ๋ด๋ก ์ฃผ์ฌ๋์๋ค. ์์ธํธ์ฐ์ ์ฃผ์ฌ 5๋ถ
ํ๋ค์10๋ถ๋์๋ชธ์ด๋นํ์ด์ก๋ค.
13. Randall-Selitto assayBrewer ํจ๋ชจ์ 20% ํํ๋ฌผ์ด ์ฅ ๋ท๋ฐ๋ฐ๋ฅ์ ์ฃผ
์ฌ๋์๋ค. Brewer ํจ๋ชจ ์ฃผ์ฌ 2์๊ฐ ํ HPE๋ ๋ณต
๋ง๋ด๋กํฌ์ฌ๋์๋ค. ์ด์ด์์ฒ์นํ0.5, 1, 2, 3, 4
์๊ฐ์ analgesymeter๋ฅผ ์ฌ์ฉํ์ฌ ๊ฐ ๊ตฐ์ ์์
๋์ง ์์ ๋ฐ๊ณผ ์ผ์ฆ ์๋ ๋ฐ ๋ ๋ค์ ํต์ฆ ์ญ์น๋ฅผ
์ธก์ ํ ๋ค. ํต์ฆ ์ญ์น๋ ์ฅ๊ฐ ์๋ฆฌ๋ฅผ ๋ด๊ฑฐ๋ ๋ฐ์
์์ถ๋ฆฌ๋ํ์์ํด์ ์๋์๋ค.
14. Tail-flick testTail-flick ์ ๋ณต๊ธฐ๋HPE ๋ณต๊ฐ๋ด์ฃผ์ฌํ5, 15,
30, 60, 90, 120, 180๋ถ์ ์ธก์ ํ ๋ค. ์ฅ ๊ผฌ๋ฆฌ์
๋๋ต ์ค๊ฐ ๋ถ๋ถ์ ์ด์ ์ง์ค์์ผฐ๊ณ , ์๊ทน์ผ๋ก๋ถํฐ
๊ผฌ๋ฆฌ๋ฅผ์น์ฐ๊ธฐ๊น์ง์์ ๋ณต์๊ฐ์๊ธฐ๋กํ ๋ค. ์กฐ์ง
์์์๋ง๊ธฐ์ํด์คํ์๊ฐ์15์ด๋กํ ๋ค.
15. Hot-plate testHot-plate test๋ฅผ ์ํด hot-plate์ ์จ๋๋ ์ญ
์จ55ยฑ0.5๋๋ก์ค์ ํ ๋ค. HPE ๋ณต๊ฐ๋ด์ฃผ์ฌ30
๋ถ ํ ์ฅ๋ฅผ hot-plate์ ์ฌ๋ ค๋๊ณ ์ฅ๊ฐ ๋ฐ์ด์ค๋ฅด
๊ฑฐ๋ ๋ท๋ฐ์ํฅ์ ๋๊น์ง๊ฒฝ๊ณผํ ์๊ฐ์์ด ๋จ์๋ก
๊ธฐ๋กํ๋ค. ์กฐ์ง ์์์ ๋ง๊ธฐ ์ํด ์คํ ์๊ฐ์ 30
์ด๋กํ ๋ค.
16. ํต๊ณ๋ถ์๋ชจ๋ ์ ์์ฑ์ ๋จ์ธก ๋ถ์ฐ๋ถ์(ANOVA)์ผ๋ก ๊ฒ์
ํ ๊ณ , ํน์ ์์ ์์๊ฐ๊ตฐ๊ฐ์ฐจ์ด๋๋ค์ค๋น๊ต์
์ ๋นํ Bonferroni correction์ ์ฌ์ฉํ์ฌ
p<0.05์ผ๋์ ์ํ๊ฒ์ผ๋ก๊ฐ์ฃผํ ๋ค. ๋ชจ๋ ๊ฒฐ๊ณผ
์น๋ํ๊ท ยฑํ์คํธ์ฐจ๋กํ์ํ ๋ค.
์ฐ๊ตฌ ๊ฒฐ๊ณผ
1. Cell ViabilityHPE 3.6 mL/mL ๋๋๊น์ง๋์ธํฌ๋ ์ฑ์ด๊ด์ฐฐ๋
์ง์์๋ค[๊ทธ๋ฆผ1].
2. Effects of HPE on LPS-induced andcytokine release in RAW264.7 cell
๋์์ธํฌ์ ์ํด ์์ฑ๋๋ NO๋ LPS์ ๋ ธ์ถ๋
ํ 0.64 ฮผM์์ 34.71 ฮผM๊น์ง ์ฆ๊ฐ๋์๊ณ , ์ด๋ฌ
Vol.9 No.6 June 2012 โท117
Ar
ti
cl
e
Re
vi
ew
์ธํ๋ฐ ๊ฐ์๋ถํด๋ฌผ์ ํญ์ผ์์ฉ๊ณผ ์งํตํจ๊ณผ
[๊ทธ๋ฆผ 1] RAW264.7 ๋์์ธํฌ์์ HPE์ ์ธํฌ ์์กด๋ ฅ์ ๋ฏธ์น๋ํจ๊ณผ
120
100
80
60
40
20
0
Viability (%
of co
ntrol)
IndomethacinDexamethasone
HPE
(ฮผM)(ฮผM)(mL/mL)
- 50 - - - - -- - 1 - - - -- - - 0.018 0.18 1.8 3.6
[๊ทธ๋ฆผ 2] HPE์ NO ์์ฑ(a) ๋ฐ ์ ์ผ์ฆ์ฑ ์ฌ์ดํ ์นด์ธ ์์ฑ(b)์ ๋ฏธ์น๋ ํจ๊ณผ
40
30
20
10
0
(a)
**** **
Nitrate(ฮผM
)
TNF-ฮฑIL-1ฮฒIL-6
LPSIndomethacin
DexamethasoneHPE
(ฮผg/mL)(ฮผM)(ฮผM)(mL/mL)
- 1 1 1 1 1 1 1- - 50 - - - - -- - - 1 - - - -- - - - 0.018 0.18 1.8 3.6
++**
++** ++
** ++**
120
90
60
30
0
(b)
**
Cytok
ine prod
uctio
n(%)
LPSIndomethacin
DexamethasoneHPE
(ฮผg/mL)(ฮผM)(ฮผM)(mL/mL)
- 1 1 1 1 1 1 1- - 50 - - - - -- - - 1 - - - -- - - - 0.018 0.18 1.8 3.6
******
++
**** ** +
**
* *+
***+**
+**
+** +
**
++
**++
**
++
**++
**
ํ๋ณํ๋HPE 1.8 mL/mL์3.6 mL/mL ๋๋์
์ ์ ์ํ๊ฒ ์ต์ ๋์๋ค[๊ทธ๋ฆผ 2a]. ๋ํ HPE๊ฐ
TNF-ฮฑ, IL-1ฮฒ, IL-6์ ์์ฑ์ ๋ฏธ์น๋ ํจ๊ณผ์ ๋
ํด์๋์ฐ๊ตฌํ ๋ค.
TNF-ฮฑ, IL-1ฮฒ, IL-6์ ์์น๋ LPS์ ์ํด ์
์ํ๊ฒ ์ฆ๊ฐํ๋๋ฐ, HPE๋ ์ฉ๋ ์์กด์ ์ผ๋ก
TNF-ฮฑ์์น์ ์ฆ๊ฐ๋ฅผ ์ต์ ์์ผฐ๊ณ , 3.6 mL/mL
๋๋์์ IL-1ฮฒ, IL-6 ์์น์ ์ฆ๊ฐ๋ฅผ ์ต์ ํ ๋ค
[๊ทธ๋ฆผ2b].
3. Effects of HPE on LPS-induced proteinexpression of iNOS and COX-2 inRAW264.7cell
LPS ์ฒ์น๊ตฐ์์iNOS์COX-2 ๋จ๋ฐฑ์ง๋ฐํ์
์น๋๋์กฐ๊ตฐ์๋นํด๊ฐ๊ฐ5๋ฐฐ, 4๋ฐฐ์ ๋๋๋์๋ค.
์ด๋ฌํ iNOS์ COX-2 ๋จ๋ฐฑ์ง ๋ฐํ ์ฆ๊ฐ๋ HPE
์ ์ํด ์ ์ํ๊ฒ ์ฉ๋ ์์กด์ ์ผ๋ก ์ต์ ๋์๋ค[๊ทธ
๋ฆผ3].
4. Effects of HPE on carrageenan-induced hind paw edema
Carrageenan์์ฅ์๋ฐ์์ฃผ์ฌํ๋ฉด์์ฝ๋์กฐ๊ตฐ
์ฅ์์ ๋ท๋ฐ์ ๋ถํผ๊ฐ ์๊ฐ ์์กด์ ์ผ๋ก ์ฆ๊ฐํ๋
๊ฒฐ๊ณผ๋ฅผ ๋ณด ๋ค[๊ทธ๋ฆผ 4]. ์ด๋ฌํ ์ฆ๊ฐ๋ 1์๊ฐ ์์
๋ถํฐ๊ด์ฐฐ๋์ดcarrageenan ์ฃผ์ฌํ6์๊ฐ์์ ์
์ ์ต๋์น๋ฅผ ๋ณด ๋ค. 0.33 mL/kg ์ฉ๋์ HPE๋
์์ฝ๋์กฐ๊ตฐ๊ณผ ๋น๊ตํ์๋ ๋ฐ ๋ถํผ์ ํฅ์ ๋ฏธ์น
์ง์์๋ค. ๊ทธ๋ฌ๋ 1, 3, 6 mL/kg ์ฉ๋์์๋์ ์
ํ๊ฒ๋ฐ๋ถํผ์์ฆ๊ฐ๋ฅผ๊ฐ์์์ผฐ๋ค. ๋ํํ์ฑ์ฝ๋
์กฐ๊ตฐ์ผ๋ก ์ฌ์ฉ๋ diclofenac๋ ์ ์ํ ํญ์ผ์ฆํจ๊ณผ
๋ฅผ๋ณด์ฌ์ฃผ์๋ค.
5. Effects of HPE on acetic acid-inducedvascular permeability
์์ธํธ์ฐ์ ์ํ ์ผ์์ก์ ์ ์ถ์ ์์ฝ ๋์กฐ๊ตฐ์
์์ฒด์ค10 g ๋น 31.6ยฑ2.6 ฮผg์ด์๋ค. HPE 0.33, 1,
3 mL/kg์์ฉ๋์์๋์ผ์์ก์ ์ถ์์๋ช ํํ๋ณ
ํ๊ฐ ๊ด์ฐฐ๋์ง ์์๋ค. ๊ทธ๋ฌ๋ HPE 6 mL/kg์์
๋์ผ์์ก์๋ณต๊ฐ๋ด์ ์ถ์์ ์ํ๊ฒ๊ฐ์์์ผฐ๋ค[๊ทธ
๋ฆผ5].
118
Article Review
[๊ทธ๋ฆผ 3] HPE์ iNOS ๋ฐ COX-2 ๋จ๋ฐฑ์ง ๋ฐํ์ ๋ํ ํจ๊ณผ
4
3
2
1
0Protein ex
pres
sion
(arbitra
ry units)
iNOSCOX-2
** **
++ ++
++
++
++
++
++
++
**+
**++**
LPSIndomethacin
DexamethasoneHPE
(ฮผg/mL)(ฮผM)(ฮผM)(mL/mL)
- 1 1 1 1 1 1 1- - 50 - - - - -- - - 1 - - - -- - - - 0.018 0.18 1.8 3.6
iNOS โถ
COX-2 โถ
ฮฒ-actin โถ
[๊ทธ๋ฆผ 4] HPE๊ฐ carrageenan์ผ๋ก ์ ๋๋ ์ฅ์ ๋ท๋ฐ ๋ถ์ข ์๋ฏธ์น๋ ํจ๊ณผ
150
120
90
60
30
00.5 1 2 4 6 8 10 12
Paw
swelling(%)
ControlHPE 0.33 mL/kg
1 mL/kg3 mL/kg6 mL/kg
Diclofenac 25 mg/kg
Time(h)
6. Effects of HPE on carrageenan-induced air pouch
์์ฝ ๋์กฐ๊ตฐ์ ์ํ ๋๋ฌผ๋ค์์ ์ผ์ถ๋ฌผ์ ์ฉ์ ์
6.3ยฑ0.8 mL ๊ณ , ์ก์์ข ํ์ฑ๋ฌผ์ 2.0ยฑ0.2 g์ด
์๋ค. ์คํ๊ตฐ์์ ์ผ์ถ๋ฌผ์ ์ฉ์ ์ ์ ์ํ ๋ณํ๋ฅผ
๋ณด์ด์ง ์์๋ค. ์ก์์ข ํ์ฑ๋ฌผ์ HPE 1, 3, 6
mL/kg์์์ ์ํ๊ฒ๊ฐ์ํ ๋ค[ํ1].
7. Effects of HPE on adjuvant-inducedarthritis
์์ฝ ๋์กฐ๊ตฐ์์ ๋ฐ์ ๋ถํผ๋ ์ 8์ผ์ ์ต๊ณ ์น๊ฐ
๊ด์ฐฐ๋์๊ณ , ๊ทธ ํ ์ 20์ผ๊น์ง ๊ฐ์ํ ๋ค. HPE
ํฌ์ฌ ํ ์ 5์ผ๊น์ง ์์ฝ ๋์กฐ๊ตฐ์ ๋นํด ๋์ ๋๋
๋ณํ๋ ์์๊ณ , ๋ฐ์ ๋ถํผ๋ HPE 0.33, 1, 3
mL/kg์ ์ฉ๋์์ ์ 18์ผ๋ถํฐ ์ 20์ผ๊น์ง ํ์
ํ๊ฐ์ํ ๋ค. HPE 6 mL/kg ์ฉ๋์์๋์ 20์ผ
์ ๋ฐ์ ๋ถํผ๋ฅผ ํต๊ณ์ ์ผ๋ก ์ ์ํ๊ฒ ๊ฐ์์์ผฐ๋ค
[๊ทธ๋ฆผ6].
8. Effects of HPE on acetic acid-inducedwrithing response
๊ทน์ฌํ ๊ณ ํต์ผ๋ก ์จ๋ชธ์ ๋นํธ๋ ํ์(writhing
Vol.9 No.6 June 2012 โท119
Ar
ti
cl
e
Re
vi
ew
์ธํ๋ฐ ๊ฐ์๋ถํด๋ฌผ์ ํญ์ผ์์ฉ๊ณผ ์งํตํจ๊ณผ
[๊ทธ๋ฆผ 5] HPE๊ฐ ์์ธํธ์ฐ์ผ๋ก ์ ๋๋ ์ฅ์์ ํ๊ด ํฌ๊ณผ์ฑ์๋ฏธ์น๋ํจ๊ณผ
45
30
15
0
Leak
age of d
ye (mg/10 g
. b. w
t.)
Control Diclofenac0.33 1 3 6
HPE(ml/kg)
**
[ํ 1] HPE๊ฐ Carrageenan ์ ๋ ์ก์์ข ํ์ฑ์ ๋ฏธ์น๋ ํจ๊ณผ
Each value represents meanยฑSEM from 9-12 rats per group** Significantly different (p๏ผ0.01) from control group
GroupDose Volume of exudate
Inhibitation (%)Granulation tissue
Inhibitation(%)(mL/kg) (mL) (g)
Control - 6.3ยฑ0.8 2.0ยฑ0.2
HPE 0.33 5.8ยฑ1.0 25.2 1.5ยฑ0.4 28.1
1 5.9ยฑ1.2 7.1 1.1ยฑ0.1** 44.5
3 4.3ยฑ0.7 -4.8 1.2ยฑ0.2** 39.6
6 5.1ยฑ1.2 31.4 1.1ยฑ0.1** 46.5
Diclofenac 5 mg/kg 4.7ยฑ0.4 18.9 0.9ยฑ0.1** 56.6
[๊ทธ๋ฆผ 6] HPE๊ฐ๋ณด์กฐ์ ๋ก์ ๋๋๊ด์ ์ผ์๋ฏธ์น๋ํจ๊ณผ
100
70
40
102 4 6 8 10 12 14 16 18 20
Paw
swelling(%)
ControlHPE 0.33 mL/kg
1 mL/kg3 mL/kg6 mL/kg
Diclofenac 5 mg/kg
Time after adjuvant injection (day)
Treatment
episode)๋์์ฝ๋์กฐ๊ตฐ์์18.0ยฑ1.6ํ ๋ค. HPE
0.33, 1, 3 mL/kg ์ฉ๋์ ํฌ์ฌํ ๋๋ฌผ๋ค์ ์์ธํธ
์ฐ์ผ๋ก์ธํด๋ณต๋ถ๋ฅผ๋นํธ๋ํ์๊ฐ์ ์ํ๊ฒ๊ฐ์ํ
๋ค. ํ์ฑ ๋์กฐ์ฝ์ผ๋ก ์ฌ์ฉ๋ ์๋ฏธ๋ ธํผ๋ฆฐ๋ ์ญ์
๋ชธ์๋นํธ๋ํ์๋ฅผ์ ์ํ๊ฒ๊ฐ์์์ผฐ๋ค[ํ2].
9. Effects of HPE on Randall-Selittoassay
์์ฝ ๋์กฐ๊ตฐ์์, ์ผ์ฆ์ด ์ ๋ฐ๋ ์ฅ ๋ฐ์ ํต์ฆ ์ญ
์น๋ ์คํ ๊ธฐ๊ฐ ๋ด๋ด ์ผ์ ํ๋ค. HPE 0.33, 1
mL/kg ์ฉ๋์์๋ ํต์ฆ ์ญ์น๋ฅผ ์ฆ๊ฐ์ํค์ง ์์
๋ค. ๊ทธ๋ฌ๋ HPE 3, 6 mL/kg ์ฉ๋์์๋ ์์ฝ ๋
์กฐ๊ตฐ์ ๋นํด ํต์ฆ ์ ๋ฐ ์ญ์น๋ฅผ ์ ์ํ๊ฒ ์ฆ๊ฐ์์ผฐ
๋ค[๊ทธ๋ฆผ7].
10. Effects of HPE on tail-flick test์คํ๊ธฐ๊ฐ๋์์์ฝ๋์กฐ๊ตฐ์์๋ฐ์์๊ฐ์์งง๊ฒ
์ ์ง๋์๋ค. HPE 0.33 mL/kg ์ฉ๋์์ 5๋ถ, 30
๋ถ, 60๋ถ์ ๋ฐ์์๊ฐ์ด ์ ์ํ๊ฒ ์ฆ๊ฐํ ๊ณ ,
HPE 1 mL/kg ์ฉ๋์์๋5๋ถ์์ ์์๋ง๋ฐ์์
๊ฐ์ด์ฆ๊ฐ๋์๋ค. HPE 3 mL/kg๊ณผ 6 mL/kg ์ฉ๋
์ํต์ฆ์ ๋ฐ์ญ์น๋ฅผ์ ์ํ๊ฒ์ฆ๊ฐ์์ผฐ๋ค[๊ทธ๋ฆผ8].
120
Article Review
[๊ทธ๋ฆผ 7] HPE๊ฐํต์ฆ์ญ์น์๋ฏธ์น๋ํจ๊ณผ
180
120
60
00 0.5 1 2 3 4
Pain thresh
old
(g)
ControlHPE 0.33 mL/kg
1 mL/kg3 mL/kg6 mL/kg
Diclofenac 25 mg/kg
Time (h)
[๊ทธ๋ฆผ 7] HPE์ tail flick ๋ํผ์ ๋ณต์๊ฐ์๋ฏธ์น๋ํจ๊ณผ
8
7
6
5
4
3
2
10 30 60 90 120 150 180
Pain se
nsitivity (s)
ControlHPE 0.33 mL/kg
1 mL/kg3 mL/kg6 mL/kg
Diclofenac 25 mg/kg
Time (min)
[ํ 2] HPE๊ฐ ์์ธํธ์ฐ์ผ๋ก ์ ๋๋ ๋นํ๊ธฐ ์ฆํ๊ตฐ์ ๋ฏธ์น๋ ํจ๊ณผ
Each value represents mean##SEM from 10-13 mice per group** Significantly different (p๏ผ0.01) from control group
GroupDose
Number of writhing Inhibitation rate (%)(mL/kg)
Control - 18.0ยฑ1.6
HPE 0.33 8.5ยฑ1.3** 52.6
1 8.6ยฑ1.0** 52.4
3 9.9ยฑ.3** 44.8
6 14.0ยฑ2.0 22.5
Aminopyrine 50 mg/kg 0.1ยฑ0.1** 99.4
11. Effects of HPE on hot-plate test์์ฝ ๋์กฐ๊ตฐ์์ ๋ฐ์์๊ฐ์ 13.8ยฑ1.6์ด ๋ค.
HPE 0.33, 1, 3 mL/kg ์ฉ๋์์๋๋ฐ์์๊ฐ์ด๊ฐ
๊ฐ25.2์ด, 23.6์ด, 25.0์ด๋ก์ฆ๊ฐํจ์ผ๋ก์จ์งํต์
์ฉ์ ๋ํ๋ด์๊ณ , ์ด๋ ์์ฝ ๋์กฐ๊ตฐ๊ณผ ํ์ ํ๊ฒ ๋ค
๋ฅธ์์น ๋ค[ํ3].
๊ณ ์ฐฐ
๋ณธ ์ฐ๊ตฌ์์๋ ์คํ์ค๋ด ์ธํฌ๋ฐฐ์๊ณผ ์์ฒด๋ด ๋๋ฌผ
๋ชจ๋ธ์ ์ฌ์ฉํ์ฌ HPE์ ํญ์ผํจ๊ณผ ๋ฐ ์งํต์์ฉ์
๋ํด ์กฐ์ฌํ ๋ค. LPS๋ก ์ ๋ฐํ RAW264.7 ๋์
์ธํฌ๋ ํญ์ผ์์ฉ์ ๋ํ๋ด๋ ์ฝ์ ๋ฐ ์์ฝ ์ ์ ์
ํจ๊ณผ๋ฅผ์ฐ๊ตฌํ๊ธฐ์ํ์ผ์ฆ์ฑ์ธํฌ๋ชจ๋ธ๋ก์์ฌ์ฉ๋
์ด์ ธ์๋ค(Kim et al. 2003).
๋์์ธํฌ์ ํ์ฑํ๋ iNOS์ COX-2์ ์ํด ํฉ
์ฑ๋ NO๋ฅผ ํฌํจํ์ฌ ์ผ์ฆ๋งค๊ฐ๋ฌผ์ง๋ฟ๋ง ์๋๋ผ,
TNF-ฮฑ, IL-1ฮฒ, IL-6์๊ฐ์์ ์ผ์ฆ์ฑ์ฌ์ดํ ์นด์ธ
์ ์์ฑํจ์ผ๋ก์จ ์ผ์ฆ๋ฐ์์ ๊ฐ์ํ๊ณ ์ฆ์ง์ํค๋
๋ฐ ์ค์ํ ์ญํ ์ ํ๋ค(Chan, & Riches. 2001).
๋ฐ๋ผ์, LPS ์ ๋ฐ RAW264.7 ๋์์ธํฌ์์ ์ด๋ฌ
ํํต์ฌ์ผ์ฆ์ฑ์ฌ์ดํ ์นด์ธ๊ณผ๋งค๊ฐ๋ฌผ์ง์ํ๊ฐํจ์ผ
๋ก์จ HPE์ ํญ์ผํจ๊ณผ๋ฅผ ํ์ธํ๊ณ ์ ํ ๋ค. HPE
๋ ์ฅ์ ๋์์ธํฌ์์ ์ธํฌ๋ ์ฑ์ ๋ณด์ด์ง ์์์ผ
๋, LPS๋ก์ ๋๋NO, TNF-ฮฑ, COX-2 ์์ฑ์ต์
ํจ๊ณผ๋ฅผ ๋ํ๋๋ค. ๊ทธ๋ฌ๋ฏ๋ก, ๋ณธ ์ฐ๊ตฌ ๊ฒฐ๊ณผ๋ HPE
๊ฐNO, TNF-ฮฑ, COX-2 ์์ฑ์ต์ ์๊ด๋ จ๋ํญ์ผ
์์ฉ์๊ฐ์ง๊ณ ์๋ค๋๊ฒ์๋ณด์ฌ์ค๋ค.
Carrageenan ์ ๋ฐ์์ฅ์๋ฐ๋ถ์ข ์ํญ์ผ์ฆ์ฝ์
๋ฅผํ๊ฐํ๋๋ฐ์์ ํฉํ๊ฒ์ฌ๋ฒ์ด๋ฉฐ, ๋ถ์ข ์ต์ ํจ๋ฅ์
ํ๊ฐํ๋ ๋ฐ์ ์์ฃผ ์ฌ์ฉ๋์ด ์๋ค. Carrageenan
ํฌ์ฌํ์ฅ์๋ฐ๋ถ์ข ๋ฐ์์๋๊ฐ์๋จ๊ณ(phase)๋ฅผ
๊ฐ๋ํ์์ด๋ค(Vinegar et al. 1969).
์ฒ์ 1์๊ฐ ๋์ ๊ด์ฐฐ๋๋ ์ด๊ธฐ ๋จ๊ณ๋ ํ์คํ๋ฏผ
๊ณผ์ธ๋กํ ๋๋ถ๋น์๊ฒฐ๊ณผ ๊ณ , ๋๋ฒ์งธ๋จ๊ณ์๋ถ์ข
์ ํ๋ก์คํ ๋๋ ๋ถ๋น๊ฐ ์์ธ์ด๋ค(Di Rosa et
al. 1971). ์์ฝ ๋์กฐ๊ตฐ์์ ์คํ์ฉ ์ฅ์ ๋ฐ ๋ถํผ๋
carrageenan ํฌ์ฌ ํ ์ ์ํ๊ฒ ์ฆ๊ฐํ ๊ณ , ์ด๋
๊ธ์ฑ ์ผ์ฆ์ฑ ์์์ ์๋ฏธํ๋ค. ๋ฐ๋๋ก, HPE ํฌ์ฌ
๊ตฐ์์๋ ์ฅ์ ๋ท๋ฐ ๋ถ์ข ์ ํ์ ํ๊ฒ ๊ฐ๋ผ์ํ๋ค.
์ด๋ฌํ ๊ฒฐ๊ณผ๋ HPE๊ฐ ์ผ์ฆ์ฑ ์งํ์ ์น๋ฃ์ ์์ด
์์ค์ ์์์์ ์ฉ๋ ์์๋์ ์ฌ๋ ฅ์ด์์์๋ง
ํด์ค๋ค.
ํ๊ด์ผํฌ์์์์น์๊ธ์ฑ์ผ์ฆ๋ฐ์์์ฃผ์ํํน
์ง์ค์ํ๋์ด๋ค. ํ์คํ๋ฏผ, ํ๋ก์คํ ๋๋, ๋ฅ์ฝ
ํธ๋ฆฌ์๊ณผ๊ฐ์์ผ์ฆ๋งค๊ฐ๋ฌผ์ง์์๊ทน์์ํด๋ฐฉ์ถ๋
๋ค(Hseu et al, 2005). ์ด๋์ธ๋๋งฅ๋ฐ์ธ์ ๋งฅ์ํ
์ฅ์ํค๊ณ , ํ๊ด ํฌ๊ณผ์ฑ์ ์ฆ๊ฐ์ํจ๋ค(Vogel, &
Vol.9 No.6 June 2012 โท121
Ar
ti
cl
e
Re
vi
ew
์ธํ๋ฐ ๊ฐ์๋ถํด๋ฌผ์ ํญ์ผ์์ฉ๊ณผ ์งํตํจ๊ณผ
[ํ 3] HPE๊ฐ hot-plate ๋ฐ์์๊ฐ์ ๋ฏธ์น๋ ํจ๊ณผ
Each value represents meanยฑSEM from 8-13 mice per group*, ** Significantly different (p๏ผ0.05, p๏ผ0.01) from control group
GroupDose
Response time (sec)(mL/kg)
Control - 13.8ยฑ1.6
HPE 0.33 25.2ยฑ2.5*
1 23.6ยฑ1.2*
3 25.0ยฑ2.5*
6 23.3ยฑ2.3
Morphine 5 mg/kg 35.4ยฑ3.0**
Vogel, 1997). ๊ทธ๊ฒฐ๊ณผ, ์ฒด์ก๊ณผํ์ฅ๋จ๋ฐฑ์ง์ด๋ณต๊ฐ
๋ด๋ก ์นจ์ถ๋์ด ๋ถ์ข ์ด ๋ฐ์ํ๋ค. HPE๋ ์์ธํธ์ฐ
์์ํ๋ณต๋ง์ผ์ฆ์๊ฐ๋๋ฅผ๊ฐ์์์ผฐ๊ณ , ์ด๋HPE
๊ฐ ๊ธ์ฑ ์ผ์ฆ๊ธฐ์์ํ๊ด ํฌ๊ณผ์ฑ์์ต์ ํ ์์๋ค
๋๊ฒ์์๋ฏธํ๋ค.
HPE์ ์์ฒด๋ด ํญ์ผํจ๊ณผ๋ ์๋ง์ฑ ์ผ์ฆ์ด ์๋
๋๋ฌผ๋ชจ๋ธ์์๋ ์ํํ ๋ค. ์ด ๋ชจ๋ธ์
carrageenan ํฌ์ฌ7์ผํ๊น์ง์ผ์ถ๋ฌผ์์๊ณผ๋ฐฑํ
๊ตฌ์ถ์ , ์ก์์ข , ์ผํฌ์, ๋จ๋ฐฑ์ง์ ๊ฑฐ์จ๋ฑ์ผ๋กํน
์ฑํ๋์๋ค(Hambleton, & Miller, 1989). HPE๋
์ก์์ข ํ์ฑ์ ์ ์ํ๊ฒ ์ต์ ํ ๋ค. ์ด ๊ฒฐ๊ณผ๋
HPE๊ฐ ์ผ์ฆ ๊ณผ์ ์์ ์ฆ์๊ธฐ๋ฅผ ์ต์ ํ๋ ๋ฅ๋ ฅ์ด
์์์์๋ฏธํ๋ค.
์ฐ๋ฆฌ๋HPE๊ฐ๋ง์ฑ์ผ์ฆ์ฑ์ง๋ณ๋ชจ๋ธ, ์ฆ๋ณด์กฐ์
๋ก ์ ๋ฐํ ์ฅ์ ๊ด์ ์ผ ๋ชจ๋ธ์์๋ ํญ์ผ ํจ๋ฅ์ ๋
ํ๋ผ์์๋์ง๋ฅผ์กฐ์ฌํ ๋ค. HPE๋๋ณด์กฐ์ ๋ก์
๋ฐ๋ ๋ง์ฑ ๊ด์ ๋ถ์ข ๋ฐ์์ ์ ์ํ๊ฒ ์ต์ ํ ๋ค.
์์ ํFreund ๋ณด์กฐ์ ๋ฅผ์ฅ๋ท๋ฐ์์ฃผ์ฌํ์ฌ์๋ฐ
๋ถ์์์ ์ผ์ฆ์ ์ ๋ฐํ ๋ค. ์ด ์ผ์ฆ์ 3-5์ผํ
์ต๊ณ ์น์ ์ด๋ฅด ๋ค. 2์ฐจ ๋ณ๋ณ์ ์ฃผ์ฌ ํ ๋ฐ์ํ๋
๋ฐ, ์ฒด์ค์ด ๊ฐ์ํ๊ณ ๋ฉด์ญ๋ฐ์์ด ๊ฐ์ํ ๋ค. ์ธ๊ท
์ฑ ํฉํฐ๋ ๋ฆฌ์นธ๊ณผ ๋ฌด๋ผ ๋ํฉํฐ๋(MDP)๊ฐ ์ด๋ฌ
ํ ์ฆ์์ ์ ๋ฐ์ํค๋ ์์ธ์ด ๋๋ค๋ ์ ์ด ๋ฐํ์ก
๋ค(Crofford, 1993). ์ฅ๊ธฐ ์คํ(์์ ํ Freund ๋ณด
์กฐ์ ์ ๋ฐ๊ด์ ์ผ์ฅ์๊ธฐ์ดํ์คํ)๋ฟ์๋๋ผ๋จ๊ธฐ
์คํ(์คํ์ฅ์ carrageenan ์ ๋ฐ ๋ถ์ข ๊ณผ ๊ด๋ จ๋
์คํ)์์๋ HPE๋ ์ ์ํ ํญ์ผ์ฆ ํจ๊ณผ๋ฅผ ๋ํ๋ด
์๋ค. ์ด ๊ฒฐ๊ณผ๋ HPE๊ฐ ๊ธ์ฑ ์ผ์ฆ๋ฟ ์๋๋ผ ๋ง์ฑ
์ผ์ฆ์์น๋ฃ์์๋ํจ๊ณผ์ ์์์์ฌํ๋ค.
HPE๋๋ณต๋ถ์์ถ, hot-plate, Randall-Selitto,
tail-flick ์คํ์ ํตํด ํ๊ฐํ ๋, ์งํต ์์ฉ์ ๋
ํ๋ด์๋ค. ์์ธํธ์ฐ์ ๋ด์ธ์ฑ ๋ฌผ์ง์ ๋ถ๋น๋ก ์ธํด
ํต์ฆ(algesia)์ ์ผ์ผํจ๋ค(Berkenkopf, &
Weichman, 1988). ์ด ๋ฐฉ๋ฒ์ ๋ฆฌํญ์๊ฒ๋์ ๋ฐ์
์ฐ๋ฌผ(Dhara et al. 2000)๋ฟ๋ง ์๋๋ผ ๋ณต๋ง์ก
(Deraedt et al. 1980)์์๋ PGE2์ PGF2ฮฑ์
์น๋ฅผ ์์น์ํค๋ ๋ฑ ์ผ๋ฐ์ ์ผ๋ก ํ๋ก์คํ๋ ธ์ด๋์
๊ด๋ จ์ด ์์ด์๋ค. Randall๊ณผ Selitto๊ฐ ๊ณ ์ํ ๋ฐ
์๋ ฅ ์คํ์์, ํจ๋ชจ์ ๋ํ ๋ถ์ข ๋ฐ์์ ์ ๋ฐ์ด
5-HT ๋ถ๋น์ ์ํด ๋ฐ์ํ ์ง์ ์ ์ธ ๋ชจ์ธํ๊ด ๋ณ
ํ์ ๊ฒฐ๊ณผ๋ก ์ด๋ฃจ์ด์ก๋ค(Stone et al. 1961). ์ผ์ฆ
๊ณผ ๊ฐ๋ ฅํ ํต๊ฐ๊ณผ๋ฏผ์ฑ(hyperalgesia)์ ํจ๋ชจ ์ฃผ์ฌ
1-3์๊ฐ ํ์ ๋ฐ์ํ๋ค(Winter, & Flataker,
1965). HPE๋ ๊ทน์ฌํ ํต์ฆ์ผ๋ก ์จ๋ชธ์ ๋นํธ๋ ๋ฐ
์์์ ํ์ ํ ์ต์ ์์ฉ์ ๋ํ๋ด๊ณ , ํต์ฆ ์ญ์น๋ฅผ
์ฆ๊ฐ์์ผฐ๋ค.
๊ธ์ฑ์งํต์์ฉ์๋ํ๋ด๋HPE์์ค์ถ์ ์์ฉ๊ธฐ
์ ์ ํ๊ฐํ๊ธฐ ์ํ์ฌ, hot-plate์ tail-flick๋ฒ
์ด ์ฌ์ฉ๋์๋ค. ์ด๋ค ๋ฐฉ์์์ ํต์ฆ์ ์ค์ถ์ ์์ฉ
๊ธฐ์ ์ํตํด๋งค๊ฐ๋๋ค. ์ด๋ค๋ฐฉ๋ฒ์๋๋์๊ฐ์๋ก
๋ค๋ฅธ๊ฒฝ๋ก๋ฅผ ํตํด์ ํด์ง๋ ํต์ฆ ์๊ทน์๋ํ ๋ฐ์
์ ๊ตฌ๋ถํ ์๋ ์๋ค. Hot-plate ๋ฐ์์ด ๋ ๋์
๋๋ ์ค์ถ์ ๊ด๋ จ๋์ด ์๋ ๋ฐ๋ฉด, tail-flick ๋ฐ์
์ ํต์ฆ ํ๋์ ๋ํ ์ฒ์ถ๋ฐ์ฌ์์ฉ์ ์ํด ๋งค๊ฐ๋
๋ฉฐ, ์ฃผ๋ก ์ฒ์ถ ์์ชฝ์์ ์กฐ์ง๋ ๋ฐ์์ผ๋ก ์ฌ๊ฒจ์ง๋ค
(Chapman et al. 1985).
HPE๋ hot-plate ์คํ์์ ์ ์ํ๊ฒ ๋ฐ์ ์๊ฐ
์์ฆ๊ฐ์ํค๊ณ , tail-flick ์คํ์์๋ํผ์ ๋ณต์๊ฐ
์ ์ ์ํ๊ฒ ์ฐ์ฅ์ํด์ผ๋ก์จ, ์งํต ํจ๊ณผ๋ฅผ ๋ํ๋
์์์ด์์ค์ถ์ ์์ฉ์ด์๋ค๋๊ฒ์ด๋ฐํ์ก๋ค.
๊ฒฐ๋ก ์ ์ผ๋กHPE๋๊ฐ๋ ฅํํญ์ผํจ๊ณผ๋ฐ์งํต์์ฉ
์ ๊ฐ๊ณ ์๋ ๊ฒ์ผ๋ก ๋ณด์ด๋ฉฐ, HPE๊ฐ ์ผ์ฆ๊ณผ ๊ด๋ จ
๋๋ค์ํ ์ง๋ณ์์์ด์ ์น๋ฃ์ ๋ก์ ์ฌ์ฉ๋ ์ ์
๋ค๋๊ฒ์์์์๋ค.
122
Article Review