ESPECTROFOTOMETRIA
Curvas de calibração e adição padrão
2017
Medidas espectrofotométricas
Calibração do equipamento
(para análise em λ fixo)
1) Selecionar o λ (nm) desejado;
2) Ajustar o 100% T usando a cubeta de vidro (ou quartzo) contendo o solvente (no caso, água destilada)
3) Ajustar o zero %T usando a cubeta negra;
Análise por curva de calibração
1) Fazer as medidas dos padrões e depois da(s) amostras (melhor fazer cada medida em triplicata);
2) De posse das absorbâncias e concentrações preparar o gráfico de calibração e determinar a equação da reta
10
0
mL
50
mL
50
mL
50
mL
50
mL
50
mL
50
mL
2 mL 4 mL 6 mL 8 mL 10 mL
0 mL
Solução-padrão de Fe(II) 10,0 mg L-
1
A = 0.2106 CFe + 0.0013
R2 = 0.9996
0.00
0.10
0.20
0.30
0.40
0.50
0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50
Fe - (mg L-1)
Ab
so
rvân
cia
Qual a melhor reta para análise quantitativa? É a que fornece a melhor sensibilidade, ou seja, é a que melhor distingue entre duas concentrações muito próximas e que dá maior sinal para amostras diluídas. Claramente vê-se que λ1 atende a esses requisitos. Duas concentrações próximas terão em λ1 a maior diferença em absorbância. O λ1 é o comprimento de onda de absorção máxima para a substância, simbolizada como λmax. Agora pode-se definir claramente qual o significado da constante ε . Se b e C são os mesmos para cada reta, ε tem que ser diferente, para que o valor de A se modifique. ε é uma constante que só depende da amostra, do solvente e do comprimento de onda. Não depende do caminho ótico ou da concentração, é uma propriedade daquela substância em relação ao meio em que está dissolvida e ao comprimento de onda usado. é chamada de absortividade molar, quando a concentração é expressa em mol/L (seria a absorbância por mol e por centímetro). A unidade de é L/mol.cm.
Adição Padrão
O método de adição-padrão consiste na adição de uma determinada quantidade de padrão à amostra. Deve-se medir a absorbância da amostra antes e após a adição do padrão, nas mesmas condições espectrofotométricas. Desse modo, pode-se minimizar a ação de interferentes contidos na amostra. O efeito dos interferentes é praticamente o mesmo nas soluções de amostra e de amostra mais padrões.
Maior o número de pontos, mais confiável é a análise.
Pode ser adição única - adições múltiplas são mais
adequadas.
Compensa interferências indeterminadas existentes
na amostra.
Usada quando não é possível reproduzir a matriz.
5,00 mL da
amostra +
todos os
reagentes
“branco”
todos os
reagentes
Concentrações
crescentes de
padrão