ANALISIS KONDISI DAN POTENSI LAMA FERMENTASI MEDIUM KOMBUCHA (TEH, KOPI, ROSELA)
DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN BAKTERI PATOGEN (Vibrio cholerae dan Bacillus cereus)
SKRIPSI
Oleh : NURUL AFIFAH
NIM. 05520045
JURUSAN BIOLOGI FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI UNIVERSITAS ISLAM NEGERI (UIN)
MAULANA MALIK IBRAHIM MALANG 2010
ANALISIS KONDISI DAN POTENSI LAMA FERMENTASI MEDIUM KOMBUCHA (TEH, KOPI, ROSELA)
DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN BAKTERI PATOGEN (Vibrio cholerae dan Bacillus cereus)
SKRIPSI
Diajukan Kepada: Fakultas Sains dan Teknologi
Universitas Islam Negeri (UIN) Malang Untuk Memenuhi Salah Satu Persyaratan Dalam
Memperoleh Gelar Sarjana Sains (S.Si)
Oleh: NURUL AFIFAH
NIM.05520045
JURUSAN BIOLOGI FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI UNIVERSITAS ISLAM NEGERI (UIN)
MAULANA MALIK IBRAHIM MALANG 2010
SURAT PERNYATAAN ORISINALITAS PENELITIAN
Saya yang bertanda tangan dibawah ini:
Nama : Nurul Afifah
NIM : 05520045
Fakultas/Jurusan : Sains dan Teknologi/Biologi
Judul Penelitian : Analisis Kondisi dan Potensi Lama Fermentasi Minuman Kombucha (teh, kopi, rosela) Dalam Menghambat Pertumbuhan Bakteri Patogen (Vibrio cholerae dan Bacillus cereus)
Menyatakan dengan sebenar-benarnya bahwa hasil penelitian saya ini tidak terdapat unsur-unsur penjiplakan karya penelitian atau karya ilmiah yang pernah dilakukan atau dibuat oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis dikutip dalam naskah ini dan disebutkan dalam sumber kutipan dan daftar pustaka.
Apabila ternyata hasil penelitian ini terbukti terdapat unsur-unsur jiplakan, maka saya bersedia untuk mempertanggung jawabkan, serta diproses sesuai peraturan yang berlaku.
Malang, 27 Januari 2010 Yang Membuat Pernyataan,
Materai Rp. 6000,-
Nurul Afifah NIM. 05520045
LEMBAR PERSETUJUAN
ANALISIS KONDISI DAN POTENSI LAMA FERMENTASI MEDIUM KOMBUCHA (TEH, KOPI, ROSELA)
DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN BAKTERI PATOGEN (Vibrio cholerae dan Bacillus cereus)
SKRIPSI
Oleh : NURUL AFIFAH
NIM. 05520045
Telah Disetujuai Oleh:
Dosen Pembimbing I Dosen Pembimbing II
Ir. Lilik Harianie, M.P Ach. Nashichuddin, MA NIP. 19620901 199803 2 001 NIP. 19730705 200003 1 002
Tanggal, 27 Januari 2010 Mengetahui,
Ketua Jurusan Biologi
Dr. Eko Budi Minarno, M.Pd NIP. 19630114 199903 1 001
HALAMAN PENGESAHAN
ANALISIS KONDISI DAN POTENSI LAMA FERMENTASI MEDIUM KOMBUCHA (TEH, KOPI, ROSELA)
DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN BAKTERI PATOGEN (Vibrio cholerae dan Bacillus cereus)
SKRIPSI
Oleh: NURUL AFIFAH
NIM. 05520045
Telah Dipertahankan di Depan Dewan Penguji Skripsi dan Dinyatakan Diterima Sebagai Salah Satu Persyaratan
Untuk Memperoleh Gelar Sarjana Sains (S.Si)
Tanggal 22 April 2010
Susunan Dewan Penguji : Tanda Tangan
1. Penguji Utama : Dr. Ulfah Utami, M.Si ( ) NIP. 19650509 199903 2 002 2. Ketua Penguji : Dr. Eko Budi Minarno, M.Pd ( ) NIP. 19630114 199903 1 001 3. Sekretaris : Ir. Liliek Harianie, M.P ( ) NIP. 19620901 199803 2 001 4. Anggota Penguji : Ach. Nashichuddin, MA ( ) NIP. 19730705 200003 1 002
Mengetahui dan Mengesahkan Ketua Jurusan Biologi
Fakultas Sains dan Teknologi
Dr. Eko Budi Minarno, M.Pd NIP. 19630114 199903 1 001
ANALISIS KONDISI DAN POTENSI LAMA FERMENTASI MEDIUM KOMBUCHA (TEH, KOPI, ROSELA)
DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN BAKTERI PATOGEN (Vibrio cholerae dan Bacillus cereus)
SKRIPSI
Diajukan Kepada : Universitas Islam Negeri (UIN) Maulana Malik Ibrahim Malang
Untuk Memenuhi Salah Satu Persyaratan Dalam Memperoleh Gelar Sarjana (S.Si)
Oleh : NURUL AFIFAH
NIM. 05520045
JURUSAN BIOLOGI FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI UNIVERSITAS ISLAM NEGERI (UIN)
MAULANA MALIK IBRAHIM MALANG 2010
Lembar Persembahan
Bismillahirrahmanirrahim...........................
@ Puji syukur terhaturkan kehadirat Ilahi Rabbi Sang penguasa semesta
alam yang senantiasa melimpahkan nikmat kesehatan dan cahaya ilmu
yang membukakan segala pintu kehidupan.
@ Dengan segenap kesabaran dan pengorbanan yang mungkin takkan sepadan, Alhamdulillah........ akhirnya aku dapat menyelesaikan karya
kecilku ini.
Alhamdulillah 1000...................x.
Inilah pengabdianku pada-Mu dalam memecah rahasia (ILMU) kebesaran
nama-Mu.
@ Karya ini ku persembahkan untuk : Ayahanda Sampurno dan Ibunda Mahmudatin Nisa
Allahumma ijal ualadii wa auladatii min ahli al-ilmi wa ahli al-khoir
Wala tajal ualadii wa auladatii min ahli as-syarri wa ahli
al-dhoir..................3x
Doa yang senantiasa terharap, akan selalu menjadi energi dalam setiap
langkahku. Entah sebesar apa harapan, pengorbanan, daya, keikhlasan
dan kesabaran yang telah tercurah kepada ananda, hingga mengantarkan
ananda menjadi seorang Sarjana Sains.
Hanya untaian doa, ikhtiar yang tulus dan ucapan terima kasih yang tak
bertepi yang ananda dapat haturkan, semoga Allah SWT senantiasa
melimpahkan keberkahan untuk janji surga-Nya yang mulia
@ Inspiration in my live..................... Nadhifatul Muyassaroh dan M. Zainur Rozikin,
terima kasih atas semua pengorbanan dan dukungan adek, semua telah
memberi kontribusi luar biasa untuk studi Neng Tuyung, adik-
adikku............ perjuangan neng takkan sampai disini untuk jadi teladan
kecil bagi kalian semua, Ayo buat bapak dan ibu tersenyum dengan kita.
@ Untuk pembimbing yang saya hormati.................. Ir. Lilik Harianie, M.P
Sungguh kesabaran, kebesaran hati dan kelegowoan ibu memberi saya
semangat baru dalam menyapa hidup di hari esok dengan ilmu.
@ Guru-Guru Terbaik di TK Dewi Sartika, SDN Pakukerto II, MTs. Maarif Sukorejo dan MA Maarif Sukorejo yang telah membukakan pintu
cakrawala ilmu padaku.
@ Best Friend in my Live: Nailil Hidayati, kesahajaanmu adalah pelajaran kerendahan hati yang
terbaik
Ai Rofiah, mbak suwun atas ketelatenannya mengingatkanku untuk
semua
Zahrotun Nisa, mbak Allah SWT takkan marah, kita harus lebih
mengenalnya...........................oce
Keikhlasan dalam persahabatan yang kalian beri...... telah membawaku
pada hakikat hidup yang lebih berarti.
@ Neng Inien Baidlok, Neng.........akhirnya aku telah merampungkan kuliahku. Semangat yang kau tularkan padaku menjadi spirit bagiku
dikala aku mulai putus asa.
@ Some one spesial, terima kasih telah banyak memotivasi dan membangkitkan semangatku, semoga Allah memberikan yang terbaik
untukmu dan ......
@ Keluarga Besar Pondok Pesantren AL-HIDAYAH
@ Terima kasih saya sampaikan kepada: Bapak Haji A. Mukti Jombang terima kasih atas penyediaan kultur
kombuchanya.
@ Teman-teman Biologi 2005 Semangat ........ Sungguh kebersamaan Qta adalah waktu yang telah
banyak memberiku pelajaran persahabatan yang indah
@ Mas Sholeh, Mbk lil, Mas Basyar n Pak Joko, matur nuwun atas semua bantuannya. Dan semua pihak yang telah membantu dan mendukung
dalam penyelesaian studi dan tugas akhir penulis.
Ku Persembahkan Karya Sederhana Ini Bagi Semua Ku Persembahkan Karya Sederhana Ini Bagi Semua Ku Persembahkan Karya Sederhana Ini Bagi Semua Ku Persembahkan Karya Sederhana Ini Bagi Semua
Yang Mencintai IlmuYang Mencintai IlmuYang Mencintai IlmuYang Mencintai Ilmu
Motto :Motto :Motto :Motto :
Melihat Dalam KesMelihat Dalam KesMelihat Dalam KesMelihat Dalam Kesederhanaederhanaederhanaederhanaanananan
i
KATA PENGANTAR
Assalamualaikum Wr. Wb.
Alhamdulillahirabbil alaminn, puji syukur kepada Allah SWT yang
senantiasa memberikan limpahan rahmat, taufik, inayah dan hidayah-Nya
sehingga penulis dapat menyusun skripsi dengan judul Analisis Kondisi dan
Potensi Lama Fermentasi Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) dalam
Menghambat Pertumbuhan Bakteri Patogen (Vibrio cholerae dan
Bacillus cereus) ini dan dapat terselesaikan dengan baik sebagai salah satu
syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Sains (S.Si).
Penyusunan skripsi ini tentu tidak lepas dari bimbingan dan bantuan dari
berbagai pihak. Oleh karena itu, iringan doa dan terima kasih yang sebesar-
besarnya penulis sampaikan kepada:
1. Prof. Dr. Imam Suprayogo selaku Rektor Universitas Islam Negeri (UIN)
Maulana Malik Ibrahim Malang.
2. Prof. Dr. Sutiman Bambang Sumitro, SU., D.Sc, selaku Dekan Fakultas
Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri (UIN)
Maulana Malik Ibrahim Malang.
3. Dr. Eko Budi Minarno, M.Pd selaku Ketua Jurusan Biologi Fakultas Sains
dan Teknologi Universitas Islam Negeri (UIN) Maulana Malik Ibrahim
Malang.
ii
4. Ir. Liliek Harianie AR, M.P selaku dosen pembimbing yang dengan penuh
keikhlasan dan kesabaran serta motivasi tiada henti telah membimbing dan
mengarahkan penulis dalam penyusunan skripsi ini.
5. Ach. Nasichuddin, MA selaku dosen pembimbing agama yang telah
membimbing penulis dalam memahami telaah penelitian dalam sudut
pandang islam untuk menunjang kesempurnaan penyusunan skripsi ini.
6. Seluruh Dosen, Staff dan Laboran jurusan biologi yang telah memberi
banyak ilmu pengetahuan yang sangat bermanfaat dalam penyempurnaan
penyusunan skripsi ini.
7. Bapak H. Abdul Mukti (Pengelola dan Pembudidaya Kultur Teh
Kombucha).
Semoga skripsi ini dapat membawa manfaat penuh berkah untuk
menambah khazanah ilmu pengetahuan biologi khususnya dibidang
pengembangan ilmu Mikrobiologi Pangan.
Wassalamualaikum Wr. Wb.
Malang, 28 Januari 2010
Nurul Afifah
iii
DAFTAR ISI
Halaman
KATA PENGANTAR ................................................................................... i DAFTAR ISI .................................................................................................. iii DAFTAR TABEL .......................................................................................... v DAFTAR GAMBAR ...................................................................................... vii DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................. viii ABSTRAK ..................................................................................................... ix
I. PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang ................................................................................. 1 1.2 Rumusan Masalah ............................................................................ 4 1.3 Tujuan Penelitian ............................................................................ 5 1.4 Hipotesis Penelitian ............................................................................. 5 1.5 Manfaat Penelitian ............................................................................... 5 1.6 Batasan Masalah .................................................................................. 6
II. TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Deskripsi Kombucha ....................................................................... 7 2.1.1 Fermentasi Kombucha .......................................................... 7 2.1.2 Kandungan Kimia Kombucha ............................................... 16 2.1.3 Mikrobiologi Kombucha . ...................................................... 20
2.1.4 Antibakteri Kombucha .......................................................... 22 2.2 Jenis-Jenis Medium Kombucha ....................................................... 27 2.2.1 Kombucha Teh ....................................................................... 27 2.2.2 Kombucha Kopi ...................................................................... 27 2.2.3 Kombucha Rosela ................................................................... 28 2.3 Tinjauan Tentang Bakteri Uji ......................................................... 30 2.3.1 Bakteri Vibrio cholerae ........................................................... 30 2.3.2 Bakteri Bacillus cereus ........................................................... 32 2.4 Pengujian Aktifitas Antimikroba ..................................................... 32 2.5 Kombucha Dalam Pandangan Islam ................................................ 33
III. METODE PENELITIAN 3.1 Rancangan Penelitian ....................................................................... 38 3.2 Waktu dan Tempat Penelitian ......................................................... 39 3.3 Variabel Penelitian ........................................................................... 39 3.4 Alat dan Bahan ................................................................................ 40 3.1 Alat ........................................................................................... 40 3.2 Bahan ........................................................................................ 40 3.5 Prosedur Penelitian .......................................................................... 40 3.5.1 Sterilisasi Alat dan Bahan ...................................................... 40 3.5.2 Persiapan Bakteri Indikator ................................................... 41
iv
3.5.2.1 Persiapan Medium ........................................................ 42 3.5.2.2 Persiapan Bakteri .......................................................... 42 3.5.3 Peremajaan Kultur Kombucha ............................................... 42 3.5.4 Pembuatan Medium ................................................................ 43 3.5.4.1 Kombucha Teh .............................................................. 43 3.5.4.2 Kombucha kopi ............................................................. 43 3.5.4.3 Kombucha Rosela ......................................................... 44 3.5.5 Pembuatan Paper Disk .......................................................... 45 3.5.6 Analisa Ketebalan Nata ....................................................... 45 3.5.7 Analisa pH Medium ............................................................. 45 3.5.8 Analisa Total Asam Medium ................................................ 46 3.5.9 Analisa Total Padatan Terlarut ............................................ 46 3.5.10 Analisa Antibakteri ............................................................. 46 3.5.11 Pengumpulan Data .............................................................. 47 3.5.12 Analisa Data ........................................................................ 47 3.5.13 Diagram Peremajaan Kombucha ........................................ 48 3.5.14 Diagram Alur Penelitian ...................................................... 49
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Hasil Penelitian ................................................................................ 50
4.1.1 Pengaruh Lama Fermentasi terhadap pH Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) ......................................... 50 4.1.2 Pengaruh Lama Fermentasi terhadap Ketebalan Nata
Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) ........................... 52 4.1.3 Pengaruh Lama Fermentasi terhadap Total Asam
Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) ........................... 56 4.1.4 Pengaruh Lama Fermentasi terhadap Total Padatan Terlarut Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) ........................... 60 4.1.5 Pengaruh Lama Fermentasi dan Jenis Medium terhadap
Diameter Zona Hambat Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) pada Pertumbuhan Bakteri Vibrio cholerae ............................... 63 4.1.6 Pengaruh Lama Fermentasi dan Jenis Medium terhadap
Diameter Zona Hambat Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) pada Pertumbuhan Bakteri Bacillus cereus ................................ 66
4.2 Pemanfaatan Kombucha dalam Pandangan Islam ............................ 71
V. PENUTUP 5.1 Kesimpulan ...................................................................................... 76 5.2 Saran ................................................................................................ 76
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................... 77
LAMPIRAN .............................................................................................. 81
v
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Kandungan Gizi Pada Kombucha Teh .................................... 16
Tabel 2.2 Mikroorganisme dalam Kultur Kombucha ............................. 22
Tabel 3.1 Rancangan Penelitian .............................................................. 38
Tabel 4.1 Hasil Analisis 2 faktor tentang Pengaruh Lama Fermentasi dan Jenis Medium terhadap Nilai pHMedium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) .............................................. 50
Tabel 4.2 Hasil Analisis UJD tentang Pengaruh Lama Fermentasi terhadap Nilai pH Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) .............................................. 51
Tabel 4.3 Hasil Analisis 2 Faktor tentang pengaruh Lama Fermentasi dan Jenis Medium terhadap Ketebalan Nata Medium
Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) .............................................. 53
Tabel 4.4 Hasil Analisis UJD tentang Pengaruh Lama fermentasi Terhadap Ketebalan Nata Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) .............................................. 54
Tabel 4.5 Hasil Analisis 2 Faktor tentang Lama Fermentasi dan Jenis Medium terhadap Nilai Total Asam
Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) ................................ 57
Tabel 4.6 Hasil Analisis UJD tentang Pengaruh Lama Fermentasi Terhadap Nilai Total Asam Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) .............................................. 58
Tabel 4.7 Hasil Analisis 2 Faktor tentang Lama Fermentasi dan Jenis Medium terhadap Nilai Total Padatan Terlarut
Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) ................................ 60
Tabel 4.8 Hasil Analisis UJD tentang Pengaruh Lama Fermentasi terhadap nilai Total Padatan Terlarut Medium
Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) .............................................. 61
Tabel 4.9 Hasil Analisis 2 Faktor tentang Pengaruh Lama Fermentasi dan Jenis Medium terhadap Diameter Zona Hambat
Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) pada Pertumbuhan Bakteri Vibrio cholerae .................................... 63
vi
Tabel 4.10 Hasil Analisis UJD tentang Pengaruh Lama Fermentasi terhadap Diameter Zona Hambat Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) pada Pertumbuhan Bakteri Vibrio cholerae ........................................................... 64
Tabel 4.11 Hasil Analisis 2 Faktor tentang Lama Fermentasi dan Jenis Medium terhadap Diameter Zona Hambat
Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) pada Pertumbuhan Bakteri Bacillus cereus ..................................... 67
Tabel 4.12 Hasil Analisis UJD tentang Pengaruh Lama Fermentasi terhadap Diameter Zona Hambat Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) pada Pertumbuhan Bakteri Bacillus cereus ........................................................... 68
vii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Nata Pada Fermentasi Kombucha ........................................... 13
Gambar 2.2 Sel Acetobacter dan Saccharomyces Dalam Matrix Selulosa Kombucha .................................................... 21
Gambar 4.1 Diagram Pengaruh Lama Fermentasi terhadap Nilai pH Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) ................................ 52
Gambar 4.2 Diagram Pengaruh Lama Fermentasi terhadap Ketebalan Nata Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) ................................. 56
Gambar 4.3 Diagram Pengaruh Lama Fermentasi terhadap Total Asam Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) ................................. 59
Gambar 4.4 Diagram Pengaruh Lama Fermentasi terhadap Total Padatan Terlarut Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) ................................. 62
Gambar 4.5 Diagram Pengaruh Lama Fermentasi terhadap Diameter Zona Hambat Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) ................................. 65
Gambar 4.6 Diagram Pengaruh Lama Fermentasi terhadap Diameter Zona Hambat Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) ................................. 69
viii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Kerangka Konsep Penelitian ................................................... 81
Lampiran 2. Data Hasil Analisis Kondisi dan Potensi Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) dalam Menghambat Pertumbuhan Bakteri Vibrio cholerae dan Bacillus cereus ......................................................................... 82
Lampiran 3. Hasil Analisis Statistik pH Medium Fermentasi Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) .............................................. 85
Lampiran 4. Hasil Analisis Statistik Ketebalan Nata Medium Fermentasi Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) .............................................. 87
Lampiran 5. Hasil Analisis Statistik Total Asam Medium Fermentasi Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) .............................................. 89
Lampiran 6. Hasil Analisis Statistik Total Padatan Terlarut Medium Fermentasi Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) ............................ 91
Lampiran 7. Hasil Analisis Statistik Potensi Daya Hambat Medium Fermentasi Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) Dalam Menghambat Pertumbuhan Bakteri Vibrio cholerae ........................................................................ 93
Lampiran 8. Hasil Analisis Statistik Potensi Daya Hambat Medium Fermentasi Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) Dalam Menghambat Pertumbuhan Bakteri Bacillus cereus ........................................................................ 95
Lampiran 9. Hasil Analisis Statistik dengan SPSS ...................................... 97
Lampiran 10. Gambar Alat dan Bahan Penelitian ......................................... 109
Lampiran 11. Gambar Hasil Penelitian ......................................................... 111
ix
ABSTRAK
Afifah, Nurul. 2010. Analisis Kondisi dan Potensi Lama Fermentasi Medium Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) dalam Menghambat Pertumbuhan Bakteri Patogen (Vibrio cholerae dan Bacillus cereus). Skripsi, Jurusan Biologi. Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri (UIN) Maulana Malik Ibrahim Malang. Pembimbing: Ir. Liliek Harianie M.P dan Ach. Nasichuddin, M.A
Kata Kunci : Kombucha, Potensi Antibakteri.
Minuman fermentasi kombucha mengandung Vitamin B1, B2, B3, B6, B12, B15, C, asam folat, asam glukoronat, asam glukonat, asam asetat, asam khondrotin sulfat, asam hyaluronik, asam laktat, acetaminophen, asam amino esensial dan enzim. Senyawa yang terkandung didalam minuman kombucha dapat dimanfaatkan sebagai bahan antimikroba. Kultur kombucha dapat diinokulasikan pada jenis medium selain teh, seperti kopi dan rosela. Minuman teh, kopi dan rosela adalah minuman yang mempunyai zat antimikroba tertentu didalamnya. Pada proses fermentasi kombucha, terjadi pembentukan zat asam oleh aktivitas mikroba yang ada didalamnya secara terus menerus sampai zat gula didalamnya habis. Kandungan asam asetat pada minuman ini mempunyai sifat mengikat toksin dan dapat menjadi bentuk ester yang mudah larut dalam air, selain itu kombucha juga bersifat constrictor (pengerut) lipofilik yang dapat bersifat toksik bagi mikroba patogen. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis kondisi dan potensi medium kombucha (teh, kopi, rosela) dalam menghambat pertumbuhan bakteri patogen (Vibrio cholerae dan Bacillus cereus).
Penelitian ini bersifat eksperimental menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) Faktorial dengan 15 perlakuan dan 3 ulangan, apabila terdapat perbedaan yang nyata dilanjutkan dengan Uji Jarak Duncan (UJD) 0,05/0,01. Perlakuan dalam penelitian ini adalah perbedaan jenis medium (teh, kopi, rosela) dan lama fermentasi (3, 6, 9 dan 12 hari) kultur kombucha. Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Mikrobiologi Universitas Islam (UIN) Maulana Malik Ibrahim Malang. Analisis pH medium, ketebalan nata dan daya hambat bakteri dilaksanakan di Laboratorium mikrobiologi sedangkan analisis total padatan terlarut dan total asam medium dilaksanakan di Laboratorium Kimia Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri (UIN) Malang.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa interaksi perbedaan jenis medium dan lama fermentasi minuman kombucha (teh, kopi, rosela) mempunyai potensi daya hambat terhadap pertumbuhan bakteri Vibrio cholerae dan Bacillus cereus. Berdasarkan hasil penelitian, diameter zona hambat terbesar pada bakteri Vibrio cholerae ditunjukkan oleh kombucha teh (8,67mm) dengan lama fermentasi 12 hari, sedangkan diameter zona hambat terbesar pada bakteri Bacillus cereus ditunjukkan oleh kombucha rosela (6,33mm) dengan lama fermentasi 12 hari, penurunan nilai pH terbesar terjadi pada kombucha kopi (6,7 - 3,7), peningkatan ketebalan nata terbesar terjadi pada kombucha teh (1,80mm - 4,2mm), peningkatan total asam terbesar terjadi pada kombucha kopi (0,16% - 1,03%) dan penurunan total padatan terlarut terbesar terjadi pada kombucha kopi (13,52 Brix 13,48 Brix).
1
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Allah SWT menciptakan segala sesuatu tidak pernah dalam keadaan sia-
sia atau tanpa manfaat, untuk itu kita harus mencari dan memanfaatkan semua
ciptaan Allah SWT dengan sebaik-baiknya. Hal ini telah dijelaskan oleh Allah
SWT dalam firmannya yaitu surat Ali-Imran ayat 190-191:
) , = yz Nu y 9$# F{ $# u # n= F z$# u 9$# $ p]9$# u ;M t U < ' T[{ = t6 9F{ $# t % !$# t . t !$# $ V u% #Y % u 4 n?t u / _ t 6x tG tu , = yz Nu u9$#
F{ $# u $ u /u $ t |M ) n= yz # x y W t/ y7 o ys 6 $ o) s z># x t $ 9$# Artinya : Sesungguhnya dalam penciptaan langit dan bumi, dan silih
bergantinya malam dan siang terdapat tanda-tanda bagi orang-orang yang berakal, (yaitu) orang-orang yang mengingat Allah sambil berdiri atau duduk atau dalam keadaan berbaring dan mereka memikirkan tentang penciptaan langit dan bumi (seraya berkata): "Ya Tuhan kami, tiadalah Engkau menciptakan Ini dengan sia-sia, Maha Suci Engkau, Maka peliharalah kami dari siksa neraka.
Berdasarkan ayat al-Quran tersebut, dapat dipahami bahwa setiap
makhluk yang diciptakan oleh Allah SWT tidak pernah sia-sia, karena setiap
sesuatu yang diciptakan selalu mempunyai nilai manfaat, mulai dari sesuatu yang
terbesar hingga yang terkecil seperti mikroorganisme. Oleh karena itu, manusia
diperintahkan untuk memanfaatkan semua ciptaan Allah SWT dengan sebaik-
baiknya.
2
Salah satu pemanfaatan ciptaan Allah SWT adalah penginokulasian
mikroorganisme (bakteri Acetobacter xylinum dan khamir Saccharomyces
cerevisiae) dalam minuman teh yang disebut Kombucha. Kombucha adalah
minuman fermentasi yang memanfaatkan hasil samping dari simbiosis bakteri dan
khamir yang berupa senyawa-senyawa asam dan nata (selulosa). Menurut
Barbosa-Canovas et, al., (1998), senyawa asam yang dihasilkan pada proses
fermentasi ini adalah berupa asam-asam organik (asam asetat). Asam organik
(asam asetat) dapat dimanfaatkan sebagai senyawa antimikroba karena dapat
menghambat pertumbuhan mikroba patogen dengan cara menonaktifkan atau
mempengaruhi sistem kerja sel seperti : dinding sel, membran sel, enzim-enzim
metabolik dan sistem sintesis protein.
Pemanfaatan asam organik (asam asetat) sebagai antimikroba juga telah
dijelaskan dalam hadits nabi riwayat Aisyah r.a (dilansir ibnu Majjah dalam
sunnahnya, Al-Athimah hadis, No. 3318), bahwasannya Rasulullah SAW
bersabda:
!"# & ' "# * +
," .&. )123 4( Artinya : Sebaik-baik lauk adalah cuka. Ya Allah, berkahilah cuka.
Sesungguhnya ia adalah lauk para Nabi sebelumku dan tidak akan pernah kekurangan sebuah rumah yang didalamnya ada cuka.
Penelitian ilmiah membuktikan bahwa cuka (asam asetat) merupakan
antibiotik yang baik untuk mencegah kerapuhan gigi, membersihkan alat-alat
3
pencernaan, antibakteri patogen, mengaktifkan proses pencernaan dan
metabolisme tubuh (An-Najjar, 2006).
Penelitian tentang kombucha membuktikan bahwa aktivitas antimikroba
pada kombucha berupa zat-zat asam organik yang terbentuk selama proses
fermentasi dapat menghambat beberapa jenis mikroba patogen terhadap manusia
(Steinkraus et, al., 1994; Greenwalt, 1998). Hasil penelitian Aditiwati dan
Kusnadi (2003) menunjukkan bahwa fermentasi selama 12 hari pada minuman
kombucha teh dapat menghasilkan 0,7% asam asetat. Asam asetat kombucha
sebesar 0,7% dapat menghambat pertumbuhan beberapa bakteri gram positif dan
gram negatif seperti: Salmonella cholerasius serotype typhimurium,
Staphylococcus aureus dan Escericia coli.
Rahayu dan Mulyani (2003) membuktikan bahwa cairan kopi yang sudah
diinokulasikan dengan kultur kombucha juga dapat dimanfaatkan sebagai obat
alternatif seperti halnya teh kombucha. Umumnya kombucha dibuat dari larutan
teh dan larutan kopi, tetapi menurut Kustyawati dan Ramli (2008) kelopak bunga
rosela juga dapat dimanfaatkan sebagai medium fermentasi kombucha. Kedua
jenis minuman ini adalah jenis minuman yang mengandung beberapa zat aktif
yang sangat baik bagi tubuh sehingga kedua jenis minuman ini sangat umum
dikonsumsi.
Mikroorganisme yang bersifat patogen terhadap manusia diantaranya
adalah bakteri Vibrio cholerae dan Bacillus cereus. Proses penyebaran kedua
bakteri ini sangat mudah yakni dengan perantara air dan makanan.
Vibrio cholerae merupakan bakteri penyebab penyakit kolera. Eksotoksin yang
4
dihasilkan oleh bakteri Vibrio cholerae dapat mencemari makanan yang dicuci
menggunakan air yang terkontaminasi oleh bakteri ini (Salyer dan Whitt, 1994
dalam Marlina, 2007), tetapi bakteri Vibrio cholerae merupakan bakteri yang
sangat resisten terhadap suasana asam karena bakteri ini dapat hidup pada kisaran
pH antara 8,5-9,5 (Jawetz, 2001).
Bacillus cereus dapat menginfeksi dan meracuni makanan yang
terkontaminasi oleh bakteri ini. Bacillus cereus hidup pada pH antara 4,9 9,3
dan resisten terhadap suasana yang sangat asam. Beberapa literatur menyebutkan
bahwa bakteri ini dapat tumbuh pada kisaran suhu 5 45 C (Wibowo, 1998).
Latar belakang diatas melandasi dilakukannya penelitian untuk
menganalisis kondisi medium dan potensi lama fermentasi medium kombucha
dalam menghambat pertumbuhan bakteri Vibrio cholerae dan Bacillus cereus.
1.2 Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang diatas, maka rumusan masalah pada penelitian
ini adalah :
1. Apakah ada pengaruh jenis medium kombucha (teh, kopi, rosela) terhadap
pertumbuhan bakteri Vibrio cholerae dan Bacillus cereus?
2. Apakah ada pengaruh lama fermentasi medium kombucha (teh, kopi, rosela)
terhadap pertumbuhan bakteri Vibrio cholerae dan Bacillus cereus?
3. Apakah ada pengaruh interaksi lama fermentasi dan jenis medium
kombucha (teh, kopi, rosela) terhadap pertumbuhan bakteri Vibrio cholerae
dan Bacillus cereus?
5
1.3 Tujuan Penelitian
Tujuan dari penelitian ini adalah :
1. Mengetahui pengaruh jenis medium kombucha (teh, kopi, rosela) terhadap
pertumbuhan bakteri Vibrio cholerae dan Bacillus cereus
2. Mengetahui pengaruh lama fermentasi medium kombucha (teh, kopi, rosela)
terhadap pertumbuhan bakteri Vibrio cholerae dan Bacillus cereus
3. Mengetahui pengaruh interaksi lama fermentasi dan jenis medium
kombucha (teh, kopi, rosela) terhadap pertumbuhan bakteri Vibrio cholerae
dan Bacillus cereus
1.4 Hipotesis Penelitian
1. Ada pengaruh jenis medium kombucha (teh, kopi, rosela) terhadap
pertumbuhan bakteri Vibrio cholerae dan Bacillus cereus
2. Ada pengaruh lama fermentasi medium kombucha (teh, kopi, rosela)
terhadap pertumbuhan bakteri Vibrio cholerae dan Bacillus cereus
3. Ada pengaruh interaksi lama fermentasi dan jenis medium kombucha (teh,
kopi, rosela) terhadap pertumbuhan bakteri Vibrio cholerae dan
Bacillus cereus
1.5 Manfaat Penelitian
Adapun manfaat dari penelitian ini adalah :
1. Secara teoritis penelitian ini sebagai sumbangan dalam bidang kesehatan
pangan dan gizi tentang pemanfaatan beberapa minuman fermentasi
6
kombucha (teh, kopi, rosela) sebagai obat antimikroba dan bentuk aplikasi
back to nature.
2. Sebagai informasi bagi masyarakat tentang manfaat minuman fermentasi
kombucha (teh, kopi, rosela).
1.6 Batasan Masalah
Adapun batasan masalah pada penelitian ini adalah :
1. Penelitian ini menggunakan kultur kombucha yang diperoleh dari
Pengelolahan dan Pembudidayaan Kultur Teh Kombucha di Jl. Kauman
No. 50 Peterongan Jombang.
2. Obyek penelitian ini adalah bakteri Vibrio cholerae dan Bacillus cereus
yang diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran
Universitas Brawijaya.
3. Lama fermentasi medium kombucha (teh, kopi, rosela) adalah 3 hari, 6
hari, 9 hari dan 12 hari
4. Lama inkubasi pengujian medium kombucha sebagai antibakteri adalah
1 x 24 jam.
5. Parameter yang digunakan dalam pengambilan data adalah ketebalan nata
yang terbentuk pada medium, pH medium, total padatan terlarut pada
medium, total asam medium dan luas zona hambat yang terbentuk selama
perlakuan (lama fermentasi). Diameter zona hambat diukur dengan
menggunakan jangka sorong. Diameter zona hambat adalah diameter yang
tidak ditumbuhi bakteri disekitar paper disk dikurangi diameter paper disk.
6. Pengujian daya antimikroba menggunakan metode difusi agar.
7
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Deskripsi Kombucha
2.1.1 Fermentasi Kombucha
Kombucha merupakan produk minuman tradisional hasil fermentasi
larutan teh dan gula yang memiliki cita rasa dan aroma yang khas, yaitu rasa
asam-manis, mengandung berbagai vitamin dan mineral serta asam-asam organik.
Fermentasi kombucha dipengaruhi oleh beberapa faktor lingkungan, seperti
jumlah inokulum (bibit), suhu inkubasi, pH, kadar sukrosa awal dan dibantu oleh
kultur khamir dan bakteri asam asetat (Frank, 1991).
Menurut Gandjar dan Syamsurizal (2006), ada tiga faktor penting dalam
proses fermentasi yaitu :
1. Inokulum, yaitu bahan (padat atau cair) yang mengandung spora atau
konidia, atau sel khamir yang sengaja ditambahkan pada substrat.
2. Substrat atau bahan yang akan didegradasi oleh fungi yang
ditambahkan.
3. Bioreaktor, yaitu tempat berlangsungnya proses-proses penguraian
substrat oleh mikroorganisme.
Menurut Fardiaz (1992) faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan
bakteri adalah zat makanan, pH, air, oksigen dan senyawa penghambat
pertumbuhan. Sedang menurut Buckle (1987) selain zat makanan, suhu, pH dan
aktifitas air, pertumbuhan bakteri juga dipengaruhi oleh waktu.
8
1. Zat Makanan
Komponen kimiawi dan bahan makanan dapat ikut menentukan jenis
mikroorganisme yang dominan didalam bahan makanan tersebut.
Komponen kimiawi tersebut sangat menentukan jumlah zat-zat gizi yang
paling penting untuk perkembangan mikroorganisme (Buckle, 1987).
2. Suhu Pertumbuhan
Menurut Buckle (1987), suhu dapat mempengaruhi pertumbuhan
mikroorganisme dengan dua cara yang berlawanan yaitu (1) apabila suhu
mengalami kenaikan sekitar suhu optimalnya, kecepatan metabolisme naik
dan pertumbuhan dipercepat sedangkan bila suhu turun sekitar suhu
optimalnya, kecepatan metabolisme akan menurun dan pertumbuhan juga
diperlambat. Selanjutnya, Winarno (1993) menyebutkan bahwa setiap
penurunan suhu 8 C akan membuat kecepatan reaksi berkurang menjadi
setengahnya. (2) bila suhu naik hingga diatas suhu maksimal atau turun
dibawah suhu minimal, maka pertumbuhan mungkin akan terhenti,
komponen sel menjadi tidak aktif dan sel-sel mengalami kematian.
3. Nilai pH
Setiap organisme memiliki kisaran pH tertentu yang masih memungkinkan
bagi pertumbuhannya dan juga mempunyai pH optimum. Pada umumnya,
mikroorganisme dapat tumbuh pada kisaran suhu 6,6-8,0 dan nilai pH luar
pada kisaran 2,0-1,0 sydah bersifat merusak (Buckle, 1987).
Mikroorganisme juga memerlukan pH tertentu untuk pertumbuhannya,
9
namun pada umumnya bakteri memiliki kisaran pH yang sempit, yaitu
sekitar pH 6,5-7,5 atau pada pH netral (Tarigan, 1988).
4. Aktifitas Air
Jumlah air yang terkandung didalam bahan makanan atau larutan disebut
sebagai aktivitas air (water activity). Jenis mikroorganisme yang berbeda
membutuhnkan jumlah air yang berbeda pula untuk pertumbuhannya.
Bakteri umumnya memerlukan media yang memiliki nilai aw tinggi (0,91),
khamir membutuhkan nilai aw 0,87-0,91 sedangkan kapang membutuhkan
nilai aw yang lebih rendah lagi, yaitu 0,80-0,87 (Buckle, 1987).
5. Ketersediaan Oksigen
Masing-masing organisme membutuhkan jumlah oksigen yang berbeda
untuk metabolismenya. Ada organisme yang tidak membutuhkan oksigen
sama sekali untuk pertumbuhannya (anaerob), ada yang membutuhkan
sedikit oksigen (mikroaerofil) dan ada yang dapat tumbuh dan berkembang
biak pada kondisi lingkungan yang cukup oksigen maupun tidak ada
oksigen sama sekali (anaerob fakultatif).
6. Senyawa penghambat
Pertumbuhan bakteri juga dipengaruhi oleh senyawa-senyawa dalam
bahan makanan yang bersifat antimikroba yang secara ilmiah ada didalam
bahan makanan tersebut maupun yang sengaja ditambahkan seperti asam
benzoat dan asam sorbat.
10
7. Waktu
Waktu antara masing-masing pembelahan sel berbeda-beda pada setiap
jenis mikroorganisme, tergantung dari spesies dan kondisi lingkungannya.
Menurut Fardiaz (1992), perbedaan dalam sifat-sifat sel suatu organisme
dan mekanisme pertumbuhannya menyebabkan perbedaan dalam
kecepatan pertumbuhan. Umumnya, semakin komplek dalam sifat-sifat sel
suatu organisme, maka waktu yang dibutuhkan oleh sel untuk membelah
semakin lama. Bakteri membelah lebih cepat dari pada khamir, sedangkan
khamir lebih cepat dari pada kapang. Bakteri membelah secara cepat dan
tumbuh maksiimal dalam waktu 45 menit, khamir baru membelah dengan
cepat dalam waktu 90 menit, kemudian kapang membelah dalam waktu
180 menit.
Menurut Buckle (1987), waktu antara pembelahan sel berbeda-beda
pada setiap jenis mikroorganisme, tergantung pada spesies dan kondisi
lingkungannya. Sedangkan menurut Fardiaz (1992), perbedaan mekanisme
pertumbuhan pada tiap-tiap sel suatu organisme berbeda-beda, umumnya semakin
kompleks mikroorganisme, maka waktu yang dibutuhkan oleh sel untuk
membelah akan semakin lama.
Acetobacter xylinum dan Saccharomyces cerevisiae mengawali
perombakan dengan memecah sukrosa menjadi glukosa dan fruktosa (Chen dan
Liu, 2000; Loncar et. al., 2006 dalam Kustyawati dan Ramli, 2008). Kemudian,
terjadi pemecahan glukosa dan fruktosa menjadi asam-asam organik dan alkohol
secara terus-menerus sampai gula yang terdapat pada larutan kombucha habis.
11
Sehingga asam yang dihasilkan akan terus meningkat pada waktu fermentasi yang
semakin lama (Aditiwati dan Kusnadi, 2003).
Pada proses fermentasi terjadi pemecahan karbohidrat, asam amino dan
lemak dengan bantuan enzim dari mikroba tertentu yang dapat menghasilkan
asam organik, karbon dioksida dan zat-zat lainnya. Proses fermentasi dapat
menyebabkan perubahan sifat fisika dan kimia bahan pangan yang meliputi kadar
pati, kadar alkohol, total asam dan pH (Winarno, 2002). Fermentasi kombucha
yang semakin lama akan menghasilkan asam yang semakin tinggi (Aditiwati dan
Kusnadi, 2003).
Khamir yang ditumbuhkan dalam medium dengan konsentrasi gula yang
tinggi akan mensintesis glukosa sebanyak 3-20%, sedangkan glukosa yang tersisa
akan dimanfaatkan melalui jalur fermentasi (Moat et. al., 2002). Proses fermentasi
melalui jalur glikolisis untuk menghasilkan asam piruvat. Asam piruvat dalam
kondisi anaerob akan mengalami penguraian oleh piruvat dekarboksilase menjadi
etanol dan karbon dioksida (Madigan et. al., 2002).
Menurut Wood (1998), proses fermentasi gula (pengubahan glukosa
menjadi alkohol dan 2O ) oleh khamir terjadi melalui reaksi berikut :
6126 OHC 2 OHHC 52 + 22CO
(Glukosa) Etil alkohol (etanol) (Karbon dioksida)
Moat et. al., (2002) menambahkan bahwa kemampuan khamir
memfermentasikan gula ditentukan oleh adanya sistem transport dan sistem enzim
Kondisi anaerob
Khamir
12
yang dapat menghidrolisis gula dengan akseptor elektron alternatif selain oksigen,
yakni pada kondisi anaerob fakultatif.
Pada proses fermentasi khamir Saccharomyces cerevisiae memproduksi
alkohol secara anaerob, kemudian alkohol menstimulasi pertumbuhan
Acetobacter xylinum untuk memproduksi asam asetat secara aerob, sedangkan
asam asetat akan menstimulasi pertumbuhan Saccharomyces cerevisiae. Hal ini
berlangsung secara terus menerus sampai gula yang terdapat pada larutan
kombucha berubah menjadi asam-asam organik yang diperlukan oleh tubuh
seperti asam asetat dan lain-lain (Chen dan Liu, 2000; Loncar et. al., 2006 dalam
Kustyawati dan Ramli, 2008). Saccharomyces cerevisiae dapat menghasilkan
70% asam organik seperti asam asetat, asam malat, asam suksinat dan asam
piruvat pada saat melakukan fermentasi (Akita, 1999 dalam Gandjar dan
Sjamsuridzal, 2006). Kamir dari genus Issatchenkia, Kluyveromyces,
Saccharomyces dan Zygosaccharomyces juga memiliki kemampauan untuk
memfermentasikan glukosa (Kurtzman dan Yarrow, 1998).
Bakteri Acetobacter xylinum mampu mengoksidasi glukosa menjadi asam
glukonat dan asam organik lain pada waktu yang bersamaan. Selain itu,
Acetobacter xilynum juga dapat mensintesis glukosa menjadi polisakarida atau
selulosa yang berupa serat-serat putih. Selulosa membentuk lapisan nata secara
bertahap hingga mencapai ketebalan sekitar 12 mm pada akhir fermentasi yang
dapat digunakan sebagai inokulum pada proses fermentasi selanjutnya (Aditiwati
dan Kusnadi, 2003).
13
Pada proses fermentasi kombucha terdapat aktivitas dari khamir untuk
merombak gula yang terdapat pada medium sebagai energi bagi pertumbuhannya.
Sebagai akibat dari aktifitas ini, maka akan terbentuk sebuah lapisan yang
terapung pada bagian atas medium yang disebut sebagai nata. Persentase gula
10% pada kombucha akan memberikan hasil nata yang paling tebal. Konsentrasi
gula yang berada dibawah atau diatas kebutuhan optimum akan menyebabkan
pembentukan selulosa tidak optimal sehingga nata yang akan dihasilkan
mempunyai ketebalan yang rendah (Lapus et. al., (1967).
Gambar 2.1 Nata pada fermentasi kombucha (Greenwalt, at al., (1998))
Greenwalt, et. al., (1998), menyatakan bakteri kombucha yang utama
yakni Acetobacter pada awalnya mengoksidasi etanol menjadi asetaldehid dan
kemudian menjadi asam asetat, aktivitas biokimia sekunder dari Acetobacter
adalah oksidasi glukosa menjadi asam glukonat.
Mikroorganisme dalam kombucha menggunakan sumber karbon dan
memproduksi selulosa yang tampak sebagai lapisan tipis dipermukaan.
Pemeriksaan mikroskopis menunjukkan bahwa kandungan pada nata kombucha
yang utama adalah khamir, bakteri dan selulosa. Selama proses fermentasi, khamir
dan bakteri melakukan metabolisme terhadap sukrosa dan menghasilkan sejumlah
14
asam-asam organik seperti asam asetat dan asam glukonat, oleh karena itu terjadi
peningkatan kadar asam-asam organik dan penurunan pH air seduhan teh
menurun dari 5 menjadi 2,5 selama 6 hari fermentasi dan setelahnya menjadi
stabil. Meskipun tidak ada sumber nitrogen lain yang ditambahkan pada teh
sebelum fermentasi, kadar protein sedikit meningkat seiring dengan semakin
lamanya waktu fermentasi. Protein-protein ini tampaknya adalah protein
ekstraseluler yang disekresikan oleh khamir dan bakteri selama proses fermentasi.
Glukosa yang dihasilkan dari sukrosa akan dimetabolisme oleh strain Acetobacter
untuk sintesa selulosa dan asam glukonat (Sreeramulu et. al., 2000).
Menurut Prescoott dan Dunn (1959), reaksi oksidasi etanol menjadi
asetaldehid dan kemudian asam asetat serta glukosa menjadi asam glukonat
adalah sebagai berikut :
OHHC 52 2O OHC 42 + OH 2 (etanol) Asetaldehid Air
OHC 42 2O COOHCH 3 Asetaldehid (Asam Asetat)
6126 OHC Bakteri asam asetat 7126 OHC 2O (Asam Glukonat)
Fermentasi kombucha sebaiknya dilakukan dalam wadah yang steril yang
terbuat dari kaca, karena wadah yang terbuat dari logam dapat bereaksi dengan
asam yang terkandung dalam kombucha. Suhu fermentasi kombucha yang ideal
adalah antara 27 3 C. Hal ini disebabkan karena aktivitas pertumbuhan dan
metabolisme mikroorganisme pada kombucha tumbuh optimal pada suhu 30C.
Pada suhu inkubasi 25 C dibutuhkan energi aktivasi yang lebih tinggi untuk kerja
15
enzim, sehingga aktivitas mikroorganisme dalam membentuk asam asetat akan
terhambat. Sedangkan pada suhu inkubasi yang cukup tinggi dapat terjadi
inaktivasi enzim, karena diduga sebagian protein-enzim terdenaturasi pada suhu
yang tinggi, sehingga akan mengurangi produksi asam asetat oleh
mikroorganisme (Aditiwati dan Kusnadi, 2003).
Proses pematangan kombucha terjadi antara 7-10 hari, karena pada saat ini
rasa kombucha sudah terasa nikmat. Jika kurang dari 7 hari, kenikmatan
kombucha belum terasa dan jika lebih dari 10 hari, kombucha sudah terasa cukup
asam. Kombucha merupakan agen penghasil senyawa biokimia karena
mikroorganisme yang ada dalam kultur kombucha mengubah kandungan gula
didalamnya menjadi berbagai jenis asam dan vitamin yang berkhasiat (Naland,
2004).
Yuliani (2007), dalam penelitiannya menyatakan bahwa pertumbuhan
mikroorganisme pada minuman kombucha juga dipengaruhi oleh zat aktif yang
sudah ada pada medium. Mikroorganisme kombucha dapat tumbuh dengan
optimal pada kadar medium 0,5%. Pada persentase ini, mikroorganisme
kombucha dapat melakukan metabolisme dengan baik karena zat aktif yang
terkadung didalam medium tidak mempunyai pengaruh antimikroba yang
signifikan terhadap pertumbuhan dan metabolisme bakteri kombucha. Sedangkan
pada persentase yang lebih tinggi, zat antimikroba yang terdapat pada medium
dapat menghambat pertumbuhan dan metabolisme mikroorganisme kombucha.
16
2.1.2 Kandungan Kimia Kombucha
Menurut Novar (1996), kandungan nutrisi kombucha (tiap 120 ml) adalah
sebagai berikut :
Tabel 2.1 Kandungan Zat Gizi Pada Kombucha Teh Zat Gizi Kandungan Kalori 40 Kal Total Lemak 0 g Sodium 0 g Total Karbohidrat 8 g Gula 8 g Protein 0 g Vitamin C 0,1152 mg Asam Folat 0,6420 mg Riboflavin 1,1594 mg
Kandungan kombucha secara umum menurut Naland (2004), adalah:
1. Vitamin B1 (Tiamin)
Vitamin B1 berperan dalam metabolisme karbohidrat untuk pembentukan
energi. Kecukupan vitamin B1 yang dianjurkan dikaitkan dengan
kecukupan energi, yakni sekitar 0,4 mg untuk setiap 1000 kalori. Tiamin
tidak bisa disimpan banyak oleh tubuh dan dalam jumlah terbatas dapat
disimpan didalam hati, ginjal, jantung, otak dan otot, jika tiamin terlalu
banyak dikonsumsi, kelebihannya akan dibuang melalui air kemih. Pada
prinsipnya, tiamin berperan sebagai koenzim dalam reaksi-reaksi yang
menghasilkan energi dari karbohidrat dan memindahkan energi untuk
membentuk senyawa kaya energi yang disebut adenosin trifosfat (ATP).
2. Vitamin B2 (Riboflavin)
Vitamin B2 diperlukan oleh tubuh untuk memproses asam amino, lemak
dan karbohidrat sehingga menghasilkan energi ATP. Energi ATP
diperlukan bagi sel tubuh kita dan juga berfungsi sebagai antioksidan.
17
Penyerapan riboflavin paling banyak terjadi diusus kecil. Vitamin ini
disimpan didalam tubuh dan sebagian kecil disimpan dihati dan ginjal.
3. Vitamin B3 (Niasin)
Vitamin B3 berfungsi membantu metabolisme dalam menghasilkan energi.
Niasin juga berperan dalam metabolisme lemak untuk menurunkan kadar
kolesterol jahat, yakni LDL (Low Density Lipoprotein) dan triglyserida,
serta meningkatkan kadar HDL (High Density Lipoprotein) hingga bisa
mengurangi penyakit pembuluh darah dan jantung koroner.
4. Vitamin B6 (Piridoksin)
Vitamin B6 terdapat dalam 3 bentuk yaitu : vitamin B6 yang berasal dari
tumbuh-tumbuhan dinamakan piridoksin. Sedangkan yang berasal dari
hewan dinamakan piridoksal dan piridoksamin. Ketiga bentuk vitamin
didalam tubuh diubah nenjadi piridoksal fosfat yang merupakan koenzim
dalam metabolisme berbagai asam amino.
5. Vitamin B12 (Sianokobalamin)
Vitamin B12 dibantu asam folat berperan penting didalam metabolisme
antar sel didalam tubuh. Kekurangan vitamin B12 membuat perkembangan
tubuh menjadi lambat dalam waktu yang cukup lama. Keadaan ini ditandai
dengan gangguan pembentukan dan perkembangan sel darah
(hematopoiesis) yang menimbulkan anemia megaloblastik (anemia
pernisiosa) gangguan neurologi seperti berkurangnya daya ingat dan
gangguan keseimbangan, kerusakan sel epitel terutama epitel saluran
cerna, serta debilitas umum atau kelemahan secara umum.
18
6. Vitamin B15
Vitamin B15 juga disebut asam pangamik. Vitamin B15 berasal dari asam
amino glycine. Asam pangamik merupakan dimethyl glycine (DMG).
Vitamin B15 berperan sebagai oksigenator jaringan tubuh dan sebagai
penangkap radikal bebas.
7. Vitamin C
Vitamin C berperan dalam pembentukan substansi antar sel dan berbagai
jaringan, serta meningkatkan daya tahan tubuh, misalnya aktifitas
fagositosis sel darah putih dan tranportasi zat besi dari transferin didalam
darah ke feritin didalam sumsum tulang, hati dan limpa.
8. Asam Folat (Citroforum Factor atau Leucovorin)
Asam folat berfungsi untuk membantu produksi sel-sel darah,
menyembuhkan luka, membentuk otot, serta membantu proses
pembelahan sel. Asam folat sangat penting untuk pembentukan DNA dan
RDA (zat-zat pembentuk dinding sel). Kekurangan asam folat dapat
menyebabkan kerusakan DNA yang dapat mengarah ke penyakit kanker.
9. Asam Glukoronat (Glucoronic Acid)
Asam ini berfungsi mengkonjugasi atau mengikat toksin (racun) dan
logam-logam berat, sehingga lemak mudah larut dalam air dan mudah
dikeluarkan oleh tubuh.
10. Asam Glukonat (Gluconic Acid)
Asam Glukonat dalam kombucha berfungsi untuk mengawetkan makanan
dalam tubuh.
19
11. Asam asetat (Asam Etanoat atau Asam cuka)
Asam asetat merupakan bagian terbesar dari asam yang dihasilkan oleh
proses fermentasi Kombucha. Asam inilah yang memberikan rasa masam
pada minuman kombucha. Peran utama asam asetat adalah mengikat
toksin dan bisa menjadi bentuk ester yang mudah larut dalam air, sehingga
mudah dikeluarkan oleh tubuh. Didalam tubuh, peranan asam asetat
diperkirakan lebih besar dibandingkan dengan asam glukoronat.
12. Asam Chondrotin sulfat
Asam ini merupakan bagian dari tulang rawan yang melapisi permukaan
sendi, berperan menjaga keutuhan dan kesehatan persendian.
13. Asam Hyaluronic atau Asam Hyaluronidase
Asam ini juga berada dicairan sendi dan berperan sebagai pelumas,
sehingga fungsi sendi tetap terjaga dengan baik.
14. Asam Laktat (Asam 2-Hidroksipropanoat)
Asam laktat yang dihasilkan dalam proses fermentasi kombucha sangat
tinggi, sehingga dapat mencegah serangan penyakit kanker.
15. Acetaminophen (Parasetamol)
Kombucha mengandung senyawa yang sangat mirip dengan
Acetaminophen. Fungsinya sebagai analgetik atau penghilang rasa nyeri
yang sangat kuat.
16. Asam Amino Esensial
Selain mengandung jenis protein tertentu, kombucha juga mengandung
berbagai macam asam amino. Asam amino berperan sebagai bahan untuk
20
membangun protein yang bermafaat menganti bagian sel-sel tubuh yang
telah rusak. Jenis asam amino tersebut antara lain isoleusin, leusin, lisin,
metionin, Penilalanin, threonin, triptopan, glisin dan valin.
17. Enzim
Enzim adalah senyawa organik tertentu yang berperan memperlancar
metabolisme zat-zat didalam tubuh.
18. Antibiotik
Antibiotik yang terkandung didalam kombucha terutama dalam membatasi
pertumbuhan bakteri lain (terutama bakteri patogen) yang dapat
mencemari koloni jamur kombu. Dengan adanya antibiotik ini, jamur
kombu dapat memproteksi dirinya sendiri.
2.1.3 Mikrobiologi Kombucha
Kultur kombucha adalah sekumpulan bakteri dan khamir yang hidup
bersama secara simbiotik membentuk matriks miselium seperti benang
(Baggs, 2001). Kultur kombucha ini biasa disebut SCOBY (Simbiotic Culture of
Bacteria and Yeast). Bakteri utama berasal dari genus Acetobacter, khususnya
(Acetobacter xylinum, Acetobacter xylinoides,dan Bacterium gluconium) dan
komponen khamir (Saccharomyces pombe, Saccharomyces ludwigii,
Saccharomyces cerevisiae, Pichia fermentant dan sebagainya) (Wong, 2001).
Gandjar dan Syamsurizal (2006), menambahkan bahwa mikroorgnisme yang
berperan dalam fermentasi minuman kombucha adalah Acetobacter xylinum dan
dua khamir yaitu Pichia fermentans dan Kloeckera apiculata.
21
Komposisi inokulum dalam kultur kombucha adalah khamir dan bakteri
asam asetat yang tumbuh bersimbiosis yang mempunyai aktivitas sinergis dan
saling melengkapi dalam fermentasi. Kombucha berkhasiat untuk membantu
pencernaan, menurunkan kolesterol, menurunkan berat badan, menstabilkan kadar
glukosa dalam darah, membantu sistem imun, dan membuang racun dari tubuh
(Gunther, 1999). Reiss (1994) dalam Dragoljub dan Markov (2002) melaporkan
bahwa teh kombucha adalah suatu simbiosis antara khamir yang osmofil yaitu
Schizosaccharomyces pombe, Saccharomyces ludwigii, pichia sp., dan bakteri
Acetobacter xylinum bersama Acetobacter yang lain.
Gambar 2.2. Sel Acetobacter dan Saccharomyces dalam matrix Selulosa Kombucha (Greenwalt et. al., 2000).
Hasil penelitian Safak (2002), menunjukkan bahwa ditemukan 15 strain
jamur yang berhasil diisolasi dari teh kombucha. Strain yang dapat teridentifikasi
pada penelitiannya adalah Saccharomyces cerevisiae, Candida krusei, Kloeckera
apiculata dan kluyveromyces africanus. Hasil tersebut menunjukkan bahwa kultur
campuran mikroorganisme yang terdapat dalam kombucha terdiri dari khamir dan
bakteri asam asetat (Greenwalt, et. al.,1998).
22
Menurut Greenwalt, et. al., (2000) kultur kombucha terdiri dari beberapa
mikroorganisme seseperti pada tabel 2.2 :
Tabel 2.2. Mikroorganisme dalam kultur kombucha Mikroorganisme Spesies Bakteri Acetobacter xylinum, Acetobacter aceti, Acetobacter
pasteurianus, Gluconobacter Khamir Brettanomyces, Bretanomyces bruxellensis, Brettanomyces
intermedius, Candida, Candida fatama, Mycoderma, Mycotorula, Phichia, Pichia membrana efacius, Saccharomyces, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces cerevisiae subp. Aceti, Schizosaccharomycees, Torula, Torulaspora delbbrueckii, Torulopsis, Zygosaccharomyces, Zygosaccharomyces bailii, Zigosaccharomyces rouziz.
Aditiwati dan Kusnadi (2003), menyatakan bahwa selama proses
fermentasi berlangsung maka khamir Saccharomyces cerevisiae akan mengubah
gula (sukrosa) dalam medium menjadi alkohol dan senyawa lain yang secara
simultan dilanjutkan dengan oksidasi alkohol menjadi asam asetat oleh bakteri
Acetobacter xylinum. Khamir akan menghasilkan enzim-enzim seperti invertase,
zimase, karboksilase, heksokinase, dehidrogenase, dan bakteri menghasilkan
enzim alkohol dehidrogenase.
2.1.4 Antibakteri Kombucha
Pelzar dan Chan (1998) menyatakan bahwa bahan antimikroba adalah
suatu bahan yang dapat mengganggu pertumbuhan dan metabolisme mikroba.
Pemakaian bahan antimikroba merupakan suatu usaha untuk mengendalikan
mikroba, yaitu segala kegiatan yang dapat menghambat dan membasmi mikroba.
Tujuan utama dari pemakaian zat antimikroba adalah mencegah penyebaran
penyakit, infeksi, membasmi mikroorganisme pada inang yang terinfeksi dan
mencegah pembusukan dan perusakan oleh mikroba. Selain istilah bahan
23
antimikroba, ada beberapa istilah khusus yang sering digunakan untuk proses
pengendalian atau penghambatan mikroorganisme seperti sterilisasi, desinfektan,
antiseptik, sanitasi, germisida dan bacterostatis. Produksi asam pada kultur
kombucha memiliki pH 2,5 yang membatasi kemampuan bakteri patogen dari
berbagai mikroorganisme lain, termasuk kontaminan yang mungkin ada pada
medium untuk tumbuh (Greenwal et. Al., 1998). Efek antimikroba asam organik
kombucha tergantung pada penurunan pH pada rentang pertumbuhan dan
penghambatan metabolik oleh molekul-molekul asam yang tidak terpecah (tidak
terdisosiasi) (Jay, 1992).
Asam-asam organik juga berbeda pada sifat-sifat lipofiliknya yang akan
menentukan tingkat kemudahan asam-asam tersebut untuk memasuki bagian
dalam sel. Sejumlah penelitian membuktikan bahwa secara umum dan dalam
situasi yang serupa, aktifitas antimikroba asam adalah asam asetat > asam
propionat > asam laktat > asam sitrat. pH dan tingkat kelarutan asam yang tinggi
pada kombucha juga sangat berpengaruh terhadap sifat antimikroba yang
dihasilkan. Asam juga memiliki sifat molekul yang berbeda-beda sehingga pada
konsentrasi yang sama akan memiliki tingkat efektifitas yang berbeda dan akan
menghasilkan konsentrasi molekul yang tidak terdisosiasi. Khamir dan kapang
secara khusus sensitif terhadap asam sorbat dan asam propionat, sedangkan
bakteri lebih sensitif terhadap asam asetat (Ray, 1996).
Frank (1991) melaporkan bahwa teh kombucha bersifat antibakteri
terhadap Helicobacter pylori, yaitu bakteri yang dapat menyebabkan gastritis.
Minuman ini mengandung vitamin B1, B2, B6, B12, asam folat serta asam
24
glukoronat. Senyawa asam tersebut membentuk ikatan dengan sisa metabolisme
yang tidak terpakai, dengan drugs dan racun, sehingga membantu proses
detoksifikasi.
Secara umum pada proses fermentasi kombucha terjadi simbiosis antara
bakteri Acetobacter xylinum dan khamir Saccharomyces cerevisiae. Simbiosis ini
menghasilkan zat asam dan alkohol yang menghalangi pertumbuhan
mikroorganisme asing yang tidak berasal dari jamur teh kombucha. ( Blanc 1996;
Greenwalt et. Al., 1998 dalam Dragoljub dan Markov 2002).
Penelitian Greenwalt et. al., (1998) membuktikan bahwa aktifitas
antibakteri pada kombucha melawan mikroorganisme patogenik sebagian besar
dikontribusikan oleh zat asam yang terkandung didalam kombucha, hal ini dapat
diketahui dengan uji yang dilakukan pada beberapa mikroorganisme yang
mengalami penghambatan hampir sama, tetapi pada saat sampel teh kombucha
dinetralkan, aktifitas antibakteri ini menghilang. Oleh karena itu, aktifitas
antibakteri ini kemungkinan besar dikontribusikan oleh keasaman teh kombucha.
Kombucha mengandung 7 g/L (0,7%) asam asetat. Asam asetat pada kombucha
memiliki aktifitas antibakteri secara invitro melawan Stapilococcus aureus,
E.Coli, Salmonella cholerasius, serotype typhimurium, dan Agrobacterium
tomefaciens.
Asam asetat atau asam etanoat ( COOHCH 3 ) adalah suatu cairan tidak
berwarna yang memiliki aroma yang tajam dan rasanya asam. Asam asetat
terionisasi secara lemah dalam larutan encer dan sejak dulu digunakan sebagai
bahan pengawet karena efek antimikrobanya (Naidu, 2000).
25
Berdasarkan mekanisme kerjanya, antibakteri dibagi dalam 5 kelompok
yaitu :
1. Antibakteri yang menghambat metabolisme sel bakteri
Antibakteri yang menghambat metabolisme sel bakteri dan mencegah
pembentukan asam folat. Bakteri harus mensintesis asam folat sendiri (bakteri
tidak dapat menyerap asam folat dari medium) dan dihambat oleh antibakteri
(Mckane dan Kandel, 1986). Mekanisme kerja antibakteri seperti inilah yang
menghambat metabolisme sel bakteri patogen dan menyebabkan efek
bakteriostatis. Apabila antibakteri menang bersaing, asam para-aminobenzoat
untuk diinkorporasikan dalam pembentukan asam folat, maka terbentuk analog
asam folat yang nonfungsional. Akibatnya kehidupan bakteri akan terganggu
(Gan, 1987).
2. Antibakteri yang menghambat sintesa dinding sel bakteri
Antibakteri yang menghambat sintesa dinding sel bakteri menghambat
reaksi retakhir (transpeptidasi) dalam rangkaian pembentukan peptidoglikan
(Gan, 1987). Antibakteri jenis ini menghasilkan sel bakteri yang rapuh secara
osmotik, yang akan mengalami lisis kecuali ditumbuhkan pada medium yang
mencegah pemasukan air (Mckane dan Kandel, 1986).
3. Antibakteri yang mengganggu fungsi membran sel bakteri
Membran sel memegang peranan penting dalam sel, yakni sebagai
pengatur permeabilitas selektif, melakukan pengangkutan aktif dan
mengendalikan susunan dalam sel. Membran sel mempengaruhi konsentrasi
metabolit dan bahan gizi didalam sel karena merupakan tempat berlangsungnya
26
pertukaran gas dan materi organik dan anorganik yang dibutuhkan oleh sel.
Beberapa antibakteri diketahui mampu merusak dan memperlemah satu atau lebih
dari fungsi tersebut. Bila fungsi-fungsinya terganggu, maka akan menyebabkan
gangguan terhadap kehidupan sel (Waluyo, 2004). Kerusakan membran
menyebabkan keluarnya berbagai komponen penting dalam sel bakteri seperti
protein, asam nukleat, nukleotida dan lain-lain (Gan, 1987).
4. Antibakteri yang menghambat sintesa protein sel bakteri
Sintesa protein merupakan hasil akhir dari proses utama yaitu transkripsi
(sintesa asamribonukleat) dan translasi (sintesa protein yang dikode RNA)
(Waluyo, 2004). Sintesa protein berlangsung di ribosom dengan bantuan mRNA
dan tRNA. Pada bakteri, ribosom terdiri dari 2 subunit, yang berdasarkan
konstanta sedimentasi dinyatakan sebagai ribosom 30S dan 50S. Untuk berfungsi
pada sintesa protein, kedua komponen ini akan bersatu pada pangkal rantai
mRNA menjadi ribosom 70S (Gan, 1987). Beberapa senyawa antibakteri dapat
menghambat sintesa protein bakteri secara prokariotik (70S) dan menyebabkan
efek merusak struktur pada ribosom eukariotik (80S) (Mckane dan Kandel,
1986).
5. Antibakteri yang menghambat sintesis asam nukleat sel bakteri
Senyawa antibakteri ini menghambat transkripsi mRNA dari DNA dengan
terikat dan menginaktifkan mRNA polimerase bakteri sehingga proses transkripsi
akan terhambat dan proses translasi tidak dapat dilakukan (Mckane dan Kandel,
1986).
2.2 Jenis-Jenis Medium Kombucha
27
2.2.1 Kombucha Teh
Tanaman teh dengan nama latin Camelia sinensis pada umumnya tumbuh
didaerah yang beriklim tropis dengan ketinggian 200-2000m diatas permukaan
laut dengan suhu cuaca 14-25C. Teh memiliki berbagai efek yang
menguntungkan kesehatan, terutama karena sifat antibakteri dan antioksidannya
(Hesseltine, 1991 dalam Ganjar 2006).
Daun teh mengandung senyawa-senyawa yang memiliki manfaat dan
khasiat yang luas. Selain itu, daun teh juga dapat meningkatkan proses
metabolisme, antikanker, antibakteri, antioksidan, menurunkan tekanan darah, dan
menurunkan kandungan kolesterol dalam darah. (Hesseltine, 1991 dalam Ganjar
2006).
Kombucha teh mengandung senyawa-senyawa penting yaitu tiamin (vit
B1), riboflavin (vit B2), Niasin (Vit B3), piridoksin (vit B6), Sianokobalamin
(vitB12), vit C, dan Polyfenol. Niasin (vit B3) berperan dalam metabolisme lemak
untuk menurunkan LDL dan triglyserida, serta meningkatkan kadar HDL, hingga
bisa mengurangi penyakit pembuluh darah dan jantung koroner (Naland, 2004).
Sedangkan pada kombucha teh juga terdapat Vit C, asam folat, asam glukoronat,
asam glukonat asam asetat, asam hialoronat, asam laktat, asam amino, enzim dan
zat antibiotik (Rahayu, 2006).
2.2.2 Kombucha kopi
Pada kopi terdapat beberapa senyawa penting diantaranya kafein,
karbondioksida, asam organik, serta trigonelin. Dua senyawa asam yang terdapat
di dalam kopi yang telah disangrai adalah senyawa fenolik. Satu diantaranya
28
adalah asam kafeat (coffeic acid), asam lainnya adalah asam klorogenat yang
mengandung asam kafeat yang menentukan cita rasa kopi. Selain kedua asam
tersebut, yang juga menentukan cita rasa kopi dan jumlahnya relatif kecil adalah :
asam nitrat, asam malat, asam tartrat, dan asam oksalat (Winarno, 2002).
Kombucha kopi merupakan hasil fermentasi cairan kopi manis oleh
mikroorganisme dari kelompok bakteri dan jamur. Senyawa gula yang terkandung
didalam minuman kopi akan dirubah menjadi berbagai jenis asam, vitamin dan
alkohol berkhasiat. Kombucha kopi berperan dalam mencegah berbagai macam
penyakit seperti rematik, kanker, peradangan sendi, meningkatkan stamina dan
sistem kekebalan tubuh, selain itu, kombucha juga dapat berfungsi sebagai
penawar racun serta mengandung zat-zat antibiotik yang berperan penting dalam
proses biokimia tubuh (Naland, 2004).
Senyawa-senyawa kimia yang terdapat pada kombucha kopi yaitu, vitamin
B1 (tiamin), vitamin B2 (riboflavin), vitamin B3 (niasin), vitamin B12
(sianokobalamin), vitamin C, asam asetat, asam amino, asam glukoronat, asam
laktat, alkohol, pH 3,33%, kafein dan tannin. Pada kombucha kopi juga terdapat
senyawa-senyawa asam asetat 10,2 %, asam ascorbat 3,08 mg %, vitamin B1
(tiamin) 0,017 mg %, vitamin B2 (Riboflavin) 0,028 mg %, vitamin B3 (Niasin),
vitamin B12 0,772 %, asam amino 7,7 % dan caffein 0,53 mg/l (Rahayu, 2006).
2.2.3 Kombucha Rosela
Kelopak bunga rosela merupakan tanaman herba yang memiliki banyak
manfaat. Tanaman ini memiliki kandungan zat besi dan vitamin C yang cukup
tinggi. 100 g kelopak bunga rosela memiliki kandungan zat besi yaitu 8,98 mg
29
serta memiliki kandungan vitamin C sebanyak 244,4 mg. Kelopak rosela juga
memiliki kandungan vitamin B dan beberapa asam amino esensial yang sangat
dibutuhkan oleh tubuh. (DEPKES RI. No. SPP. 1065/35.15/05 dalam penelitian
Kustyawati dan Ramli, 2008). Ketiga jenis minuman ini sudah sangat umum
dijumpai di kalangan masyarakat luas, baik sebagai kuliner maupun sebagai
minuman kesehatan.
Teh kelopak bunga Rosela mengandung asam sitrat dan malat sehingga
mempunyai rasa asam manis yang segar dan khas dengan warna natural alami
yang menarik serta beberapa mineral. Selain memiliki citarasa segar, kelopak
bunga rosela mempunyai efek farmakologis yang cukup lengkap, seperti diuretik,
onthelmitic, antibakteri, antiseptik, antiradang, menurunkan panas, mencegah
gangguan jantung, kanker darah, dan menstimuli gerak peristaltik usus
(Kustiyawati dan Ramli, 2008).
Pigmen alami yang memberi warna merah pada seduhan kelopak bunga
Rosela adalah Antosianin dan mempunyai sifat antioksidan yang kuat. Zat aktif
yang paling berperan dalam kelopak bunga rosela meliputi gossypetin, antosianin,
dan glukosida hibiscin. Setiap 100 gram kelopak bunga Rosela kering
mengandung 260-280 mg vitamin C, vitamin D, B1 dan B2, kalsium 486 mg,
Omega-3, magnesium, beta karoten, serta asam amino esensial seperti lysine dan
arginin (Kustiyawati dan Ramli, 2008 ).
30
2.3 Tinjauan Tentang Bakteri Uji
2.3.1 Deskripsi Vibrio cholerae
Kolera merupakan wabah penyakit yang telah membunuh jutaan manusia.
Penyakit kolera ini disebabkan oleh eksotoksin yang dihasilkan oleh bakteri
V. Cholerae yang ditularkan melalui makanan yang dicuci dengan air yang
terkontaminasi bakteri tersebut (Salyer dan Whitt, 1994 dalam Marlina 2007).
Bakteri ini pertamakali ditemukan oleh Robert Koch pada tahun 1884 dan sangat
penting dalam dunia kedokteran karena menyebabkan penyakit kolera. V.
cholerae banyak ditemui dipermukaan air yang terkontaminasi dengan feses yang
mengadung bakteri tersebut, oleh karena itu penularan penyakit kolera ini dapat
melalui air, makanan dan sanitasi yang buruk (Ballow, 1991).
Bekteri ini memasuki tubuh manusia lewat makanan dan atau minuman,
masuk kedalam usus halus. Setelah masuk kedalam usus halus mikroba akan
mengkolonisasi usus halus dan membentuk toksin. Toksin ini akan mengaktivasi
adenylcyclase, suatu enzim seluler sehingga ion Na tidak dapat diserap oleh usus
dan menyebabkan keluarnya ion Cl kedalam lumen usus. Dengan demikian,
keseimbangan osmotik terganggu dan jumlah cairan memasuki lumen secara
masif dan terjadilah diare. Penderita kolera, apabila tidak cepat ditolong dengan
melakukan rehidrasi, dapat meninggal karena kekurangan cairan atau dehidrasi
(Brock, et al. 1991 dalam Soemirat, 2005).
Bakteri V. cholerae termasuk bakteri gram negatif, berbentuk batang
bengkok seperti koma dengan ukuran panjang 2-4 mikrometer. Pada isolasi, Koch
menamakannya Kommabacillus, tapi bila biakan diperpanjang, bakteri ini bisa
31
menjadi batang yang lurus yang mirip dengan bakteri enterik gram negatif.
Bakteri ini dapat bergerak sangat aktif karena mempunyai satu buah flagela polar
yang halus (monotrik). Bakteri ini tidak membentuk spora. Pada kultur dijumpai
koloni yang cembung (corvex), halus dan bulat yang keruh (opaque) dan
bergranul bila disinari (Jawetz dan Joklik, 2001 dalam Amelia 2005).
Bakteri V. cholerae mampu bertahan diperairan laut dan darat serta dapat
berkoloni disaluran pencernaan, khususnya usus halus. Faktor virulensi utama
bakteri V. cholerae adalah pili yang disebut Tcp (toxin coregulated pili). Adesin
lainnya yang dihasilkan bakteri ini adalah hemagutinin. Bakteri V. cholerae
mampu berpindah tempat karena memproduksi subtansi anti-perlekatan, yaitu
protein Hap (Purwoko, 2007).
Ciri lain bakteri V. cholerae adalah dapat tumbuh pada pH yang sangat
tinggi (8,5-9,5) dan sangat cepat mati oleh asam. Pertumbuhan sangat baik pada
pH 7,0 karenanya pembiakan pada media yang mengandung karbohidrat yang
dapat difermentasi akan cepat mati (Amelia, 2005). Bakteri V. cholerae bersifat
aerob dan anaerob fakultatif. Suhu optimum untuk pertumbuhan adalah pada suhu
18-30 derajat celcius. Bakteri ini dapat tumbuh pada berbagai jenis media,
termasuk media tertentu yang mengandung garam mineral dan asparagin sebagai
sumber karbon dan nitrogen. V. cholerae ini tumbuh baik pada agar TCBS
(Thiosulfate-Citrate-bile-Sucrose), yang menghasilkan koloni berwarna kuning
dan pada media TTGA (Telorite-Taurocholate-Gelatin agar) (Ballow, 1991).
32
2.3.2 Deskripsi Bacillus cereus
Salah satu jenis mikroba yang sering mencemari makanan diantaranya
adalah Bacillus cereus karena terdapat dalam lingkungan umum sehingga sangat
mudah mencemari makanan. Keracunan makanan, menjadi catatan tersendiri
dalam masalah kesehatan di tanah air sepanjang tahun 2004. Jumlah kasusnya
terbilang banyak dan massal, menimpa berbagai kalangan.
Bakteri Bacillus cereus merupakan bakteri berbentuk batang, gram positif,
mempunyai spora dengan letak bervariasi antara sentral sampai terminal. Besar
dan letak spora tidak melebihi batas tepi sel bakteri. Bakteri ini meragi glukosa,
fruktosa dan trehalosa. Beberapa strain meragi sukrosa, salisin, maltosa, manosa,
gliserol, inositoldan laktosa (Wibowo, 1998).
Bacillus cereus jarang menghasilkan urease, sebagian besar strain
menghidrolisis amilum, kasein dan gelatin. Pada kadar NaCl rendah pertumbuhan
bakteri ini akan terhambat. Bacillus cereus dapat tumbuh pada suhu 5 45 C
dengan suhu optimal antara 30-37 C, sporanya pada media akim milk, fosfat
buffer atau makanan dengan kadar asam yang rendah dan akan mati pada suhu
100 C selama 2-8 menit. Pada keadaan kering, spora tersebut relative akan tahan
pemanasan, dan akan mati pada pemanasan 121 C selama 17- 30 menit
(Wibowo, 1998).
2.4 Pengujian Aktifitas Antimikroba Dengan Metode Difusi Agar (Agar Diffusion)
Ada 2 metode yang biasanya digunakan untuk menguji aktifitas antibakteri
yaitu metode difusi agar (Agar Diffusion) dan uji tabung (Tabung Assays).
33
Metode pengujian difusi agar biasanya dilakukan pada cawan. Dalam pengujian
ini mikroorganisme yang akan diuji dikontakkan dengan suatu sumuran berisi
senyawa antibakteri melalui metode cawan tuang. Diameter sumuran seharusnya
tidak boleh kurang dari 8 mm (Dart, 1996).
Agar cair bersuhu 50C yang akan dijadikan medium diinokulasikan
dengan mikroorganisme sensitif tanpa penambahan senyawa yang akan diuji.
Agar kemudian dituangkan kedalam cawan petri dan dibiarkan memadat.
Senyawa yang akan diuji dengan standart referensi yang sesuai ditempatkan
dalam 2 tabung berbeda. Kedua bahan ini kemudian didifusikan kedalam agar.
Organisme tumbuh membentuk zona hambat setelah waktu inkubasi yang
mencukupi. Senyawa antibakteri seharusnya dimungkinkan untuk berdifusi
setelah dituangkan pada agar zona ini adalah penanda timbulnya penghambatan
mikroorganisme (tidak ada pertumbuhan). Luas zona yang terbentuk tergantung
pada konsentrasi senyawa aktif yang digunakan adalah dasar kuatitatif metode ini.
Semakin lama senyawa antibakteri dibiarkan berdifusi, zona penghambatan yang
terbentuk juga semakin luas. Diasumsikan bahwa senyawa yang diuji dapat
berdifusi dengan bebas dalam medium yang digunakan (Dart, 2004).
2.5 Cuka Dalam Pandangan Islam
Allah SWT telah memberikan nikmat yang tidak terhingga didunia ini
kepada makhluknya, sehingga manusia sebagai kholifah dibumi diperintahkan
untuk selalu menjaga dan melestarikannya agar dapat mempunyai nilai manfaat
bagi kehidupan manusia itu sendiri maupun makhluk hidup yang lain.
34
Allah SWT menciptakan segala sesuatu dimuka bumi ini adalah untuk
kesejahteraan semua makhluknya dan tidak terkecuali untuk kesejahteraan
manusia sebagai kholifah dibumi. Manusia wajib memelihara dan memanfaatkan
ciptaan Allah dengan sebaik-baiknya agar kekayaan bumi dapat tetap lestari dan
mempunyai nilai manfaat optimal. Perintah Allah SWT untuk melestarikan dan
memanfaatkan semua ciptaannya terdapat dalam surat Ali-Imran 190-191 :
) , = yz Nu y 9$# F{ $# u # n= F z$# u 9$# $ p]9$# u ;M t U < ' T[{ = t6 9F{ $# t % !$# t . t !$# $ V u% # Y % u 4 n?t u / _ t 6x tG tu , = yz Nu u9$#
F{ $# u $ u /u $ t |M ) n= yz # x y W t/ y7 o ys 6 $ o) s z># x t $ 9$#
Artinya:Sesungguhnya dalam penciptaan langit dan bumi, dan silih bergantinya malam dan siang terdapat tanda-tanda bagi orang-orang yang berakal, (yaitu) orang-orang yang mengingat Allah sambil berdiri atau duduk atau dalam keadan berbaring dan mereka memikirkan tentang penciptaan langit dan bumi (seraya berkata): "Ya Tuhan kami, tiadalah Engkau menciptakan Ini dengan sia-sia, Maha Suci Engkau, Maka peliharalah kami dari siksa neraka.
Ayat diatas menjelaskan bahwa segala apa yang diciptakan oleh Allah
tidak ada yang bersifat sia-sia, baik dari hal yang terbesar sampai pada yang
terkecil, hal ini Allah SWT jelaskan dalam al-Quran surat al-Baqarah ayat 26 :
* ) !$# tGt r& z> o W sVt $ Z |t/ $ ys $y s% s 4 $ r's % !$# (# t#u t n=us r& ,ys 9 $# n/ ( $ r&u t% !$# (# x2 9 )u s !#s$t y# ur& !$# #xy /
W sVt / #Z V2 t u / # Z Wx. 4 $ t u / ) t) x9$#
Artinya : Sesungguhnya Allah tiada segan membuat perumpamaan berupa nyamuk atau yang lebih rendah dari itu. adapun orang-orang yang
35
beriman, Maka mereka yakin bahwa perumpamaan itu benar dari Tuhan mereka, tetapi mereka yang kafir mengatakan: "Apakah maksud Allah menjadikan Ini untuk perumpamaan?." dengan perumpamaan itu banyak orang yang disesatkan Allah, dan dengan perumpamaan itu (pula) banyak orang yang diberi-Nya petunjuk. dan tidak ada yang disesatkan Allah kecuali orang-orang yang fasik.
Kalimat yang bergaris bawah diatas mempunyai arti Perumpamaan
nyamuk atau yang lebih rendah dari itu. Kalimat ini dapat diartikan bahwa
sesuatu yang lebih kecil dari pada nyamuk adalah mikroorganisme. Kombucha
adalah jenis minuman yang memanfaatkan mikroorganisme dalam proses
pembuatannya, yaitu pemanfaatan hasil simbiosis mutualisme antara bakteri
(Acetobacter xylinum) dan khamir (Saccharomyces cerevisiae) yang berupa asam-
asam penting yang dapat dimanfaatkan untuk menstabilkan metabolisme tubuh.
Pada proses pembuatan minuman ini juga dibutuhkan medium yang berasal dari
tumbuh-tumbuhan (teh, kopi, rosela). Pemanfaatan jenis-jenis tumbuhan yang
mengandung zat-zat antibakteri ini selain untuk menambah cita rasa juga
berfungsi sebagai peningkatan terhadap fungsi antimikroba patogen yang dimiliki
oleh nimuman ini.
Fermentasi kombucha menghasilkan berbagai jenis zat asam, terutama
asam asetat (cuka) yang merupakan jenis zat asam terbesar yang dihasilkan
selama proses fermentasi ini berlangsung. Asam asetat adalah zat asam yang
mempunyai banyak manfaat. Penelitian ilmiah membuktikan bahwa cuka
merupakan antibiotik yang baik untuk mencegah kerapuhan gigi, membersihkan
alat-alat pencernaan, melawan bakteri-bakteri parasit yang ada dalam perut,
mengaktifkan proses pencernaan dan metabolisme tubuh, membantu mengatasi
obesitas, mengobati penyakit asma, alergi, juga pada kasus-kasus diare berat
36
karena cuka mengandung sejumlah zat pengerut (contrictor). Cuka bisa digunakan
untuk mengobati penyakit persendian, meminimalisir efek sengatan lebah dan
lain-lain. Sebuah riset empirik telah membuktikan bahwa cuka adalah larutan
ringan asam asetat (acetic/athanoic acid, CH3COOH) yang berkisar antara 4-5 %
(An-Najjar, 2006).
Imam Ibnu Majjah melansir hadist ini dalam Sunan Ibnu Majjah (Kitab
Al-Athhimah, hadist nomor 1102, 3316, 3318) sebagai berikut: Kami mendapat
hadist dari Abbas bin Ustman Ad-Dimasyqi, (tuturnya:) kami mendapat hadist
dari Al-Walid bin Muslim, tuturnya: kami mendapat hadist dari Anbasah bin
Abdurrahman; dari Muhammad bin Zadzan, bahwasannya ia memberinya hadist
sambil berkata : Saya mendapat Hadist dari Ummu Saad, tuturnya: Rasulullah
SAW masuk menemui Aisyah ketika saya sedang berada ditempatnya. Beliau
bertanya : Ada makanan? Aisyah menjawab, Kami hanya memiliki roti, kurma
dan cuka.(An-Najjar, 2006). Rasullah SAW bersabda :
* + !"# & ' "#
," .&. )123 4( Artinya : Sebaik-baik lauk adalah cuka. Ya Allah, berkahilah cuka.
Sesungguhnya ia adalah lauk dari para Nabi sebelumbku dan tidak akan pernah kekurangan sebuah rumah yang didalamnya ada cuka.
Hadits ini juga diriwayatkan oleh imam ahmad dalam Musnad-Nya
(Hadits nomor 14755), tuturnya: Kami mendapat hadist dari Bahz, tuturnya: Kami
mendapat hadist dari Ibnu Saad, tuturnya: Kami mendapat hadits dari Thalhah
bin Nafi; dari Jabir bin Abdullah; bahwasannya Nabi Muhammad SAW
37
menggandeng tangannya menuju kerumah beliau. Sesampai disana, beliau
bersabda : Tidak ada makanan ataupun menu makan malam apa-apa. Thalhah
ragu-ragu dan berkata: Kemudian orang-orang dirumah Nabi SAW mengeluarkan
remukan roti. Nabi Muhammad SAW lalu bertanya: Apa tidak ada lauk?. Mereka
mejawab : Tidak ada, hanya ada cuka sedikit.Nabi kerkata : Bawalah kemari!.
Sesungguhnya cuka adalah sebaik-baik lauk. (An-Najjar, 2006).
Cuka dalam hadits ini adalah mencakup semua jenisnya, tidak ada
perbedaan antara satu cuka dan yang lainnya. Kita tidak dituntut untuk mencari
asal cuka tersebut. Begitulah kemuliaan dan nikmat yang telah dikaruniakan oleh
Allah SWT kepada manusia. Maka seandainya manusia bisa berfikir dan memiliki
ilmu pengetahuan yang memadai, seyogyanya mereka dapat memanfaatkan apa
yang telah disediakan Allah SWT dan juga bertanggung jawab untuk memelihara
kelestarian dan memanfaatkannya untuk kemaslahatan umat manusia dimuka
bumi ini. Adanya semua sumberdaya hayati diharapkan supaya manusia lebih
meningkatkan keimanannya dengan lebih mensyukuri nikmat yang telah diberikan
(al-Qordowi, 2001).
38
BAB III
METODE PENELITIAN
3.1 Rancangan Penelitian
Rancangan Penelitian yang digunakan dalam penelitian ini adalah RAL
faktorial dengan 15 perlakuan dan 3 kali ulangan. Desain perlakuan pada
penelitian ini disajikan pada tabel 3.1
Jenis Medium
Lama Fermentasi
Ulangan K1 K2 K3
P1 R1 B1P1R1K1 B1P1R1K2 B1P1R1K3 R2 B1P1R2K1 B1P1R2K2 B1P1R2K3 R3 B1P1R3K1 B1P1R3K2 B1P1R3K3 R4 B1P1R4K1 B1P1R4K2 B1P1R4K3 R5 B1P1R5K1 B1P1R5K2 B1P1R5K3
P2 R1 B1P2R1K1 B1P2R1K2 B1P2R1K3 R2 B1P2R2K1 B1P2R2K2 B1P2R2K3 R3 B1P2R3K1 B1P2R3K2 B1P2R3K3 R4 B1P2R4K1 B1P2R4K2 B1P2R4K3 R5 B1P2R5K1 B1P2R5K2 B1P2R5K3
P3 RI B1P3R1K1 B1P3R1K2 B1P3R1K3 R2 B1P3R2K1 B1P3R2K2 B1P3R2K3 R3 B1P3R3K1 B1P3R3K2 B1P3R3K3 R4 B1P3R4K1 B1P3R4K2 B1P3R4K3 R5 B1P3R5K1 B1P3R5K2 B1P3R5K3
P1
R1 B2P1R1K1 B2P1R1K2 B2P1R1K3 R2 B2P1R2K1 B2P1R2K2 B2P1R2K3 R3 B2P1R3K1 B2P1R3K2 B2P1R3K3 R4 B2P1R4K1 B2P1R4K2 B2P1R4K3 R5 B2P1R5K1 B2P1R5K2 B2P1R5K3
P2
R1 B2P2R1K1 B2P2R1K2 B2P2R1K3 R2 B2P2R2K1 B2P2R2K2 B2P2R2K3 R3 B2P2R3K1 B2P2R3K2 B2P2R3K3 R4 B2P2R4K1 B2P2R4K2 B2P2R4K3 R5 B2P2R5K1 B2P2R5K2 B2P2R5K3
P3
R1 B2P3R1K1 B2P3R1K2 B2P3R1K3 R2 B2P3R2K1 B2P3R2K2 B2P3R2K3 R3 B2P3R3K1 B2P3R3K2 B2P3R3K3 R4 B2P3R4K1 B2PER4K2 B2P3R4K3 R5 B2P3R5K1 B2P3R5K2 B2P3R5K3
39
Keterangan : B1 : Bakteri Vibrio cholerae B2 : Bakteri Bacillus cereus PI : Mediun Teh P2 : Medium Kopi P3 : Medium Rosela R1 : kontrol R2 : Lama fermentasi 3 hari R3 : Lama fermentasi 6 hari R4 : Lama fermentasi 9 hari R5 : Lama fermentasi 12 hari K1 : Ulangan 1 K2 : Ulangan 2 K3 : Ulangan 3
3.2 Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan November-Desember 2009 di
Laboratoriun Mikrobiologi Jurusan Biologi Fakultas Sains Dan Teknologi
Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang
3.3 Variabel Penelitian
Pada penelitian ini terdapat tiga macam variabel yaitu :
1. Variabel Bebas : Medium fermentasi Kombucha (teh, kopi, rosela)
dengan lama fermentasi 3 hari, 6 hari, 9 hari dan
12 hari
2. Variabel terikat : pH medium, Ketebalan Nata, Total Asam medium,
Total padatan terlarut medium dan Diameter zona
hambat medium fermentasi Kombucha (teh, kopi,
rosela) dengan lama fermentasi 3 hari, 6 hari, 9 hari
dan 12 hari
40
3. Variabel terkendali : Suhu medium, Konsentrasi (teh, kopi, rosela),
Kadar sukrosa medium dan inokulum kombucha
3.4 Alat dan Bahan
3.4.1 Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah : Tabung reaksi, beaker
glass, hot plate, pengaduk, cawan petri, lampu spiritus, kertas saring, perforator,
jarum ose, pH meter, laminar flow, pinset, kapas, kertas alumunium foil, gelas
ukur, jangka sorong, autoklaf, timbangan.
3.4.2 Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah kultur Kombucha
(diperoleh dari Pengelolahan dan Pembudidayaan Kultur Teh Kombucha di
Jl. Kauman No.50 Peterongan Jombang), Gula Pasir (Merk Gulaku), Teh (Merk
Sariwangi), Kopi (diperoleh dari Perkebunan Rakyat desa Tlogosari Kecamatan
Tutur Pasuruan), Kelopak Rosela (Balai Mediterania Medica Malang), Bakteri
Vibrio cholerae dan Bacillus cereus (diperoleh dari Laboratoriun Kedokteran
Universitas Brawijaya Malang), Medium TSA dan TSB.
3.5 Prosedur Penelitian
3.5.1 Sterilisasi Alat dan Bahan
Semua alat dan bahan yang akan digunakan dalam proses pembuatan
kultur kombucha maupun analisa sampel (Uji aktifitas antibakteri) disterilkan
terlebih dahulu dengan menggunakan autoklaf pada suhu 121 C selama 15
menit.
41
3.5.2 Persiapan Bakteri Indikator
3.5.2.1 Persiapan Medium
Medium yang digunakan dalam penelitian ini adalah medium TSA dan
TSB. Medium TSA digunakan untuk pembiakan bakteri Vibrio cholerae dan
Bacillus cereus. Adapun caranya sebagai berikut :
1. Disiapkan media TSA dan TSB sintetik
2. Dimasukkan masing-masing bahan media tersebut kedalam labu
erlenmeyer kemudian dipanaskan dan diaduk sampai larutan homogen
3. Dituangkan masing-masing larutan medium pada tabung reaksi sebanyak
10 ml pada medium tegak dan 8 ml pada medium miring kemudian ditutup
dengan kapas
4. Medium tegak dan medium miring disterilkan dalam autoklaf pada suhu
121 C selama 15 menit
Recommended