Download pdf - Making quality control easy - INTI · Falta de uniformidad de las muestras microbiológicas ... y no de la constitución ... Eficiencia. Límite de detección

Making quality control easy

Uso de materiales de referencia Uso de materiales de referencia

microbiológicos

26 de octubre 2011

1.- Control de calidad de medios de cultivo

2.- Validación de métodos (Comparación de métodos)

3.- Aseguramiento de la calidad

Aplicaciones de los materiales de referencia

3.- Aseguramiento de la calidad- Control de calidad interno (Evaluaciones entre analistas)

(Controles de proceso)

- Control de calidad externo (Ensayos de aptitud)

4.- Calibrar y verificar equipos

Control de calidad de medios de cultivode cultivo

G-ENAC-04 ISO 17025, apartados 4.6 y 5.5

Control de calidad de medios de cultivo

El laboratorio debe asegurar la calidad de los medios de cultivo empleados

Microorganismos de control positivo y negativo

Medios de cultivo listos para su uso:

1. Todos los medios suministrados, utilizables en forma directadeben ser validados

Evaluación cuantitativa sobre la recuperación y/o inhibición de losmicroorganismos


2. Especificaciones del fabricante

Nombre; componentes; período de validez y criterios de aceptabilidad;condiciones de conservación; plan y frecuencia de muestreo; control deesterilidad; control de crecimiento de microorganismos de interés y nodeseados y criterios de aceptabilidad; controles físicos y criterios deaceptabilidad; fecha de emisión de especificidades.

Certificado fabricante


Medios de cultivo listos para su uso:

3. Lotes identificados.

Evidencias cumplimiento de especificaciones de calidad

4. Proveedores ISO 9000. 4. Proveedores ISO 9000.

Validación inicial


Medios de cultivo preparados:

1. Materiales de partida. Conservación en condiciones adecuadas

2. Agua. - Destilada o desionizada, libre de bactericidas, inhibidores o interferentes.

- Controles de calidad:Ensayos químicosEnsayos químicos

Conductividad (Contínuo)pH (Contínuo)COT (Mensual)Metales pesados (Cu,Cd,Zn,Pb) (Anual)Amoniaco (Mensual)

Ensayos bacteriológicosAerobias (Mensual)Validación de lote (Trimestral)


3. Controles de calidad.

- Propiedades físicas (pH, esterilidad)- Evaluación del crecimiento

Propiedades bioquímicas (Diferenciales y diagnósticas)


Propiedades bioquímicas (Diferenciales y diagnósticas)Recuperación de los microorganismos de interésInhibición de los microorganismos no deseados


Productividad

A) Medios con agar:

- Comparación con lotes previos.


- Comparación con lotes previos.

- Comparación con medios generales (Calculo de PR: Relación de productividad) (Microorganismos deseados 30-70%; Microorganismos no deseados 0.1-0%)

- Uso de materiales de referencia certificados (CRM)


Productividad

• Extensión o inclusión. (50-70% de lotes previos)

• Recuento en gota (Miles-Misra)


• Recuento en gota (Miles-Misra)

• Método ecométrico (Mossel). Calculo de AGI (Absolute growth index)

• Filtración membrana



Productividad

B) Caldos

- Crecimiento en un solo tubo (Comparación de lotes)- Crecimiento en un solo tubo (Comparación de lotes)

- Uso de múltiples tubos (Comparación de lotes)

- Técnica del Número Más Probable (NMP)


Selectividad

Supresión del crecimiento de un microorganismoSF= D0-Ds (log)


SF= D0-Ds (log)D0 Diferencia entre la dilución más alta con al menos 10 UFC y el medio de referenciaDs La dilución más alta con un crecimiento comparable al del medio de referencia

Especificidad

Caracteristicas esenciales que permiten diferenciar organismos relacionados


1. Etiquetado

2. Envasado

3. Conservación3. Conservación


4. Registro

Validación de Métodos

Clasificación de Métodos

- Fenotípicos

. Aislamiento en cultivo

. Inmunológicos

. Microscópicos

. Cromatográficos

. Electroforéticos. Electroforéticos

- Genotípicos

. Hibridación de sondas

. Amplificación (PCR)

- Características del método

. Identificación

. Cualitativos

. Cuantitativos

- Origen del método. Oficial

Clasificación de Métodos

. Oficial

. Normalizado

. Sistemas de ensayo (Kit)

. Propios

¿Qué es validar?

ISO 17025. Los laboratorios de ensayo deben disponer de métodosadecuados para realizar los análisis que les han sido solicitados.

- Definición y documentación del método

- Validación del método

Validación. Proceso de evaluación de las características de un procedimiento de medida y comprobación de que dichas características cumplen una serie de requisitos preestablecidos.

¿Cómo validar?

- Experiencia y conocimientos personales

- Cursos de formación- Cursos de formación

-Documentación

. ISO 17025

. Guía G-CSQ-2; Guía G-ENAC-04

. AOAC International (Microbiology Guidelines)

. Campend & Chorleywood. Food Research Ass.

. Microbial Analysis of Food and Water. Elsevier

¿Cómo validar?

. Microbial Analysis of Food and Water. Elsevier

. ISO 13843. Guía de validación de métodos micro.

. Guía Eurachem/CITAC. EA Guide04/10. Accreditation for microbiological laboratories.. Quality assurance/Quality control. Guidance for laboratories performing PCR. Analysis of environmental samples (EPA). ISO 16140. Microbiología de los alimentos para consumo humano y animal. Protocolo para la validación de métodos alternativos.

- Documentación (Cont.):

. International Accreditation New Zeland. Technical guide.

. Uncertainty of quantitative determinations derived by cultivation of microorganisms. Mikes. Advisory Commision for metrology. Expert Group for Microbiology

¿Cómo validar?

Microbiology. ISO 13843. Water quality- Guidance on validation of microbiological methods. ISO 17994. Water quality-Criteria for establishing the equivalency of two microbiological methods. Lightfoot and Maier. 1998. Microbiological analysis of food and water. Guideliness for quality assurance. Elsevier. Amsterdam.

Validación en Microbiología

1. Falta de uniformidad de las muestras microbiológicas (Distribución heterogénea)

DistribuciónNo Gaussiana Poisson o Binomial negativa

2. Taxonomias microbiológicas imprecisas

3. Cambios en las muestras microbiológicas (Variabilidad)Organismos “naturales” Organismos colecciónOrganismos “naturales” Organismos colección

4. El análisis microbiológico depende del comportamientoy no de la constitución (Seres vivos) El nº de colonias observadas es una aproximación del nº de cel. vivas. Variación en la morfología celular y cambios en la actividad metabólica.

5. Los métodos microbiológicos no son “Robustos”. Efecto matriz; Estrés; Calidad de los medios de cultivo; Entrenamiento de los analistas

6. Interacciones con el detector. Efecto matriz:

. Factores abióticos

. Factores bióticos

7. Fenómeno de sobredispersión

8. Recuperación de cel. viables:

Validación en Microbiología

8. Recuperación de cel. viables: . Tasa de recuperación absoluta. Tasa de recuperación relativa

9. Muestras naturales o naturales “spiked”. Utilizar muestras con recuentos bajos y microorganismos similares

Diseño de la validación

1. PLANIFICACIÓN

- Asignación de responsable- Descripción documentada del procedimiento:

. Asegurar la correcta realización del ensayo y su rept.

. Establecer los límites de aplicación, objetivos y modode realización

- Definición de las características y requisitos al método

2. REALIZACIÓN

- Serie de pruebas que proporcionen valores para los parámetrosdefinidos en los requisitos.

3. CONTROL

- Comprobación del cumplimiento de objetivos- Declaración final

Validación: Parámetros a determinar

- Método de identificación:

. Especificidad/Selectividad/Sensibilidad

. Falsos positivos/ F. Negativos

. Eficiencia

- Método cualitativo:- Método cualitativo:



. Eficiencia

. Límite de detección

. Efecto matriz

- Método cuantitativo:



. Eficiencia

. Límite de cuantificación

Validación: Parámetros a determinar

. Límite de cuantificación

. Efecto matriz

. Intervalo de trabajo

. Exactitud

. Precisión

. Linealidad

. Incertidumbre

1. Sensibilidad, Especificidad, Falsos positivos, Falsos negativos,Eficiencia, Selectividad

Especificidad: Grado en que un método se ve afectado por los otros componentes en una muestra con múltiples componentes Un método específico es el que no se ve afectado por ninguno de los otros componentes.

Selectividad: Capacidad de un medio para inhibir o disminuir el crecimiento de la microbiota acompañante.

Validación

de la microbiota acompañante.

Desviación negativa: El método da un resultado negativo sin confirmación y el método de referencia da un resultado positivo. Esta desviación es falso negativo cuando se puede demostrar que el resultado verdadero es positivo.

Desviación positiva: Al contrario que la desviación negativa.

Sensibilidad: Capacidad del método de detectar ligeras variaciones en el número de microorganismos dentro de una determinada muestra.

Validación

Sensibilidad: a/(a+b)

Especificidad: d/(c+d)

F. Positivos: c/(a+c)

Inclusividad

Exclusividad

Validación

F. Negativos: b/(b+d)

Eficiencia: (a+d)/n

Selectividad: log [(a+d)/n]

2. Límite de detección

Número de microorganismos que pueden ser detectados pero en cantidad que no puede ser estimada con precisión.

• Se reconstituye un material BACuanti.• Se efectúan diluciones seriadas y se analizan 10 veces cada una de las diluciones.

Validación

3. Límite de cuantificación

Número de microorganismos dentro de una variabilidad establecida que pueden determinarse bajo las condiciones experimentales del método evaluado.

Validación

LQ = LD + 3 SA)

B) Nº de copias en la que se obtiene un RSDr<25%

Accordance (Conformidad) Repetibilidad cualitativa

Concordance (Concordancia) Reproducibilidad cualitativa

Porcentaje de muestras encontradas con el mismo resultado (P/N)

Validación

Concordance odds ratio (COR):(Oportunidad relativa de concordancia)

Accordance * (100- concordance)COR=

Concordance * (100- accordance)

3. Exactitud

Grado de concordancia entre el resultado de la medición y el valor de referencia aceptado

Validación

A. Técnica de duplicadosB. Materiales de referencia

(BACuanti)

Concordancia entre los resultados obtenidos al aplicar el procedimiento experimental repetidas veces bajo las condiciones establecidas

r (Repetibilidad) Precisión en las mismas condiciones

4. Repetibilidad y reproducibilidad

Validación

rStr 2∞= rSr .8,2=

R (Reproducibilidad) Precisión cambiando condiciones

RStR 2∞= RSR 8,2= 22int8,2 entrelabralb SSR +=

R S D R S D (A nalista) M A R 1 R 2 R 3 R S D 1 A

A na lista 1 M B R 1 R 2 R 3 R S D 1 B

M A R 1 R 2 R 3 R S D 2 A A na lista 2 M B R 1 R 2 R 3 R S D 2 B

M A R 1 R 2 R 3 R S D 3 A A na lista 3 M B R 1 R 2 R 3 R S D 3 B

T O T A L

21

21

21 BA RSDRSDRSD +=

22

22

22 BA RSDRSDRSD +=

233

23 BA RSDRSDRSD +=

Repetibilidad

4. Repetibilidad y reproducibilidad

Validación

T O T A L

ANALISTA 1 ANALISTA 2 ANALISTA 3 RSD RSD (Rango)

Muestra A R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3 RSD A

Muestra B

R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3 RSD B

TOTAL

3

23

22

21 RSDRSDRSDRSD ++=

2

22BA RSDRSDRSD +=

Reproducibilidad

Solo hay dos verdades absolutas en la vida:

Incertidumbre

Incertidumbre

Muerte Impuestos

Accuracy=Trueness+Precision

Incertidumbre

Uncertainty=Bias (sistematic) +Imprecision (random)

Trueness=1/Bias

Precision=1/Imprecision

Accuracy=Desviación de una medición del valor verdadero

Trueness=Desviación del valor medio de una serie de resultadosy el valor de referencia aceptado

Bias= Diferencia entre el resultado esperado y el valor de

Incertidumbre

Bias= Diferencia entre el resultado esperado y el valor de referencia aceptado (error sistemático)

Precision= Desviación de los resultados entre ensayos independientes obtenidos bajo condiciones establecidas (error aleatorio)

Error = Diferencia entre el valor obtenido y el valor verdadero

Incertidumbre= Parametro asociado con el resultado de una medida que caracteriza la dispersión de los valores que pueden ser razonablemente atribuidos al mesurando.

Incertidumbre= Intervalo alrededor de una medida, en el que una

Incertidumbre

Incertidumbre= Intervalo alrededor de una medida, en el que una repetición de la medida produciría un resultado que se encontraría incluido en dicho intervalo

Incertidumbre=Parámetro asociado al resultado de la medición quecaracteriza la dispersión de los valores que podrían ser razonablemente asignados al mesurando

Incertidumbre

Accuracy=Trueness+Precision

Uncertainty=Bias +Imprecision Uncertainty=Bias +Imprecision (sistematic) (random)

Errores sistemáticos (bias):

Volumen y en concentración- Medida del volumen de muestra

- Error de dilución debido a error en los equipos de medida

- Enmascaramiento de las colonias en la placa (cultivo)

- Recuperación incompleta de la población diana

Incertidumbre

- Recuperación incompleta de la población diana

- Error del analista en el recuento (cultivo)- Cambio en el concentración del microorganismo durante laconservación de la muestra

Dificultad de obtener recuentos exactos Dificultad cálculo bias

Errores aleatorios (random):

Volumen y concentración

- Variabilidad intrínseca de los microorganismos en la muestra(Distribución, recuento, volumen, muestreo, etc.)

Incertidumbre

(Distribución, recuento, volumen, muestreo, etc.)- Equipos empleados

- Variabilidad en los recuentos

1. “Bottom-up” (Componente a componente)

- Costoso y difícil- No tiene en cuenta diferencias en matrices- Bias del analista- No contempla variabilidad entre submuestras- Dificultad de establecer la incertidumbre de diversos

componentes (calidad del medio, fluctuación de Tª..)

Incertidumbre

componentes (calidad del medio, fluctuación de Tª..)- No contempla variaciones en el día a día.

NO APROPIADO PARA MEDICIONES MICROBIOLÓGICAS

2rv

2cvv u+u=u

K

I=ucv

3

resurv =

ucv incertidumbre de calibración y urv incertidumbre de resolución

1) Incertidumbre de volumen

Incertidumbre de calibración Incertidumbre de resolución

Incertidumbre: Técnica de duplicados

K 3

2rp

2cpp u+u=u

K

I=ucp

3

resurp =

ucp incertidumbre de calibración y urp incertidumbre de resolución

2) Incertidumbre de pesada

Incertidumbre de calibración Incertidumbre de resolución

donde:Ci es la concentración inicial de microorganismos ufc/mLVf es el volumen finalVi es el volumen inicialdVi es el error del volumen inicialdVf es el error del volumen finaldCi es el error en el recuento inicial de microorganismos (ufc/mL)

2

2

22

2

2

2

2 dVfVf

ViCidCi

Vf

VidVi

Vf

Ciu

Vf

ViCiCf

d

+

+

=

=3) Incertidumbre de dilución

4) Incertidumbre de reproducibilidad

Se corresponderá con el valor de RSDR encontrado

Incertidumbre: Técnica de duplicados

Se corresponderá con el valor de RSDR encontrado

32

dU E =

5) Incertidumbre de exactitud

Se combinarán todas las incertidumbres obtenidas asumiendo que existe una distribución de Poisson La incertidumbre total expandida para K=2:

6) Incertidumbre combinada

222Er

2dp

2vtotal uuuu+u2=I +++

Desviacion estándar

Número de datosK

IUREF =

MR

MRMRREF n

SWU =

=MRS

=MRn

1) Incertidumbre del material de referencia

3) Reproducibilidad cotidiana

RUσ= CpW %Re=σ

=mS Desviación estándar de los log de los valores obtenidos

n

SWU mEXP

REP = =n Número de experimentos

2) Incertidumbre de repetición

Incertidumbre: Material de referencia (BACuanti)

d

RRp

nU

σ= CpWExpR %Re=σ

Rep%= Reproducibilidad del material de referencia o muestra adicionalesC= Recuento

4) Recuperación no adecuada

3

)1( CRECUREC

−=C= Recuento obtenido

REC= Recuperación

5) Incertidumbre combinada

22Rp

2RECREP

2REFtotal uuu+u2=I ++

2. “ Top-down” (Estimación de la repetibilidad y repr oducibilidad en laboratorios bajo control)

A) S intralaboratorio (Reproducibilidad intermedia)

Incertidumbre

A) SR intralaboratorio (Reproducibilidad intermedia)

B) SR entrelaboratorios (ensayo interlaboratorios)

C) SR entrelaboratorios (ejercicios de intercomparación)

RSD RSD (Analista) MA R1 R2 R3 RSD1A

Analista 1 MB R1 R2 R3 RSD1B

MA R1 R2 R3 RSD2A Analista 2 MB R1 R2 R3 RSD2B

MA R1 R2 R3 RSD3A Analista 3 MB R1 R2 R3 RSD3B

21

21

21 BA RSDRSDRSD +=

22

22

22 BA RSDRSDRSD +=

233

23 BA RSDRSDRSD +=

Repetibilidad

SR intralaboratorio (Reproducibilidad intermedia)1. Reproducibilidad dentro del laboratorio

Incertidumbre

TOTAL

ANALISTA 1 ANALISTA 2 ANALISTA 3 RSD RSD (Rango)

Muestra A R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3 RSD A

Muestra B

R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3 RSD B

TOTAL

3

23

22

21 RSDRSDRSDRSD ++=

2

22BA RSDRSDRSD +=

Reproducibilidad

ANOVA

Incertidumbre

a) SR obtenido de un estándar:

- No bias- Verificación de la repetibilidad

b) SR obtenido de un Ejercicio de Intercomparación:

Incertidumbre

b) SR obtenido de un Ejercicio de Intercomparación:

- Buenos resultados- El ejercicio cubre todos los componentes de incertidumbre ymatrices.

Incertidumbre

2. Estimación adicional del bias del método y el laboratorio

- Las fuentes del bias deben ser eliminadas- El resultado debería ser corregido si el bias es significativo y

basado en datos como CRM-El bias puede variar dependiendo de cambios en la matriz. Paraello se deberían emplear varios CRM en matrices diferentes.

Calculado a partir:

1. Análisis de CRM2. Participación en Ejercicios de Intercomparación3. Ensayos de recuperación

Incertidumbre

- Bias (Diferencia porcentual del valor certificado)- Incertidumbre del valor certificado

2)(2)( refCUbiasRMSbiasU +=n

ibiasbiasRMS

2)(∑=

ANALISIS DE CRM:

bias n

2)(2)(2)()( refCUn

biasSbiasbiasU ++=

CRM: 11.5±±±±0.5 0.5/11.5=0.26

(0.26/11.5)x100=2.21%

BIAS: x=11.9 S=2.2% n=12 Bias=(11.9-11.5)/11.5=3.48%

Sbias=2.2% n=12

Incertidumbre

Sbias=2.2% n=12

2)(2)(2)()( refCUn

biasSbiasbiasU ++=

%2.42%21.22)12

%2.2(2%)48.3( =++

Bias CRM1 3.48% S 2.2% n=12 U(Cref)= 2.21%Bias CRM2 -0.9% S 2.0% n=7 U(Cref)= 1.8%Bias CRM3 2.4% S 2.8% n=10 U(Cref)= 1.8%

2 222 +−+

Incertidumbre

nibias

biasRMS2)(∑

= %5.23

2%4.22%)9.0(2%48.3 =+−+

U(Cref)= 1.9%

2)(2)( refCUbiasRMSbiasU += %1.32%9.12%5.2 =+

EJERCICIOS DE INTERCOMPARACIÓN:

Incertidumbre

SR (S entre labs)=9% %6.212

%9)( ===

nRS

refCU

Bias 2%,7%,-2%,3%, 6%, 5%n

ibiasbiasRMS

2)(∑=

%6.42%52%62%32)2(2%72%2 =+++−++

2)(2)( refCUbiasRMSbiasU += %3.52%6.22%6.4 =+

%6.47

%5%6%3)2(%7%2 =+++−++

ENSAYOS DE RECUPERACIÓN:

U(Conc)±1.2% U(Conc)=0.6%

U(vol)Max. Bias= 1%; Repetibilidad= 0.5%

%76.02%5.02)3

%1()( =+=volU

%00.120762%6.02)(2)()cov( =+=+= volUconcUeryreCU

Incertidumbre

coveryre

Bias 2%,7%,-2%,3%, 6%, 5%

nibias

biasRMS2)(∑

=%6.4

7

2%52%62%32)2(2%72%2 =+++−++

2)cov(2)( eryreCUbiasRMSbiasU += %3.52%0.12%6.4 =+

Resumen:

1. Uso directo de la SR de un ensayo con material de referencia o a partir de un Ejercicio de Intercomparación.

2. Estimación de la reproducibilidad intralaboratorio+bias y 2. Estimación de la reproducibilidad intralaboratorio+bias y combinación de ambas.

El primer método es más conservador

6. Linealidad

Aseguramiento de la calidadAseguramiento de la calidad

“El laboratorio debe tener procedimiento de control de la calidad de modo que pueda verificar la validez de los ensayos y calibraciones que realiza”.

ISO 17025. Sección 5.9

� Control de calidad externo: Ejercicios de intercomparación (PTs)

Importancia de la gestión de PTs:

• Preparación de muetras• Envío a los participantes

� Control de calidad interno:� Verificación entre analistas� Control de proceso� Gráficos de control

InoculoMuestra preparada

METODO 1 METODO 2

• Envío a los participantes• Interpretación y uso de los resultados

1. Control de calidad externo (Ensayos de aptitud)

• Participación regular• Organizadores acreditados• Material homogéneo y estable (MR o CMR)

Aseguramiento de la calidad


2. Control de calidad interno

Procedimientos realizados para la evaluación contínua del trabajo

Asegurar la coherencia de los resultados obtenidos y el cumplimiento de los criterios establecidos

Controles periódicos

Control de la variabilidad entre analistas, equipos, etc.

1. Control de las condiciones de trabajoInformación sobre la esterilidad de los medios, materiales y buenasprácticas de realización de los ensayos.

2. Control de la precisiónMuestras naturales sin inocular y/o muestras naturales inoculadas conmateriales de referencia


3. Control de la recuperaciónMuestras inoculadas con materiales de referencia

4. Ensayos cualitativosControl del límite de detección

1. Concentración:

A) Filtración. - Policarbonato; Reconcentración cartucho filtrante- Sistema de concentración directo (CellTrap)


B) CentrifugaciónC) IMS

2. Elución:

3. Tratamientos: Ácido, Calor, Eliminación de inhibidores, Extracción, Purificación

4. Aplicación de sistemas de detección: (PCR, etc.)


Tipos de evaluaciones de ensayos:

• Uso de replicados• Uso de muestras inoculadas (Controles de proceso)

PositivosNegativos

• Controles positivos y negativos• Ensayos cruzados entre analistas• Ensayos en paralelo con métodos alternativos


• Ensayos en paralelo con métodos alternativos• Gráficos de control

40

60

80

100

120

x-3s (46.82)

x-2s (53.64)

x (70.38)

x+2s (92.35)

COLIFORMES TOTALES SOP/Method: PE-B/001Medium: Tergitol

Batch number: R06007AChart number:

Strain (code & name): COLIFORMES TOTALES

SOP/Method number :PE-B/001

Medium Tergitol

Batch number : R06007A

Chart number :

Count Date Lab code Person1 63 16/7/98 GOA2 61 17/7/98 GOA3 63 22/7/98 RMG4 69 22/7/98 RMG5 54 23/7/98 RMG

Aseguramiento de la calidad: Gráficos de control

0

20

40

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20

x+2s (92.35)

x+3s (105.79)

Test value

5 54 23/7/98 RMG6 71 28/7/98 GOA7 68 28/7/98 RMG8 62 30/7/98 RMG9 75 30/7/98 GOA

10 69 3/8/98 GOA11 55 3/8/98 RMG12 70 5/8/98 RMG13 87 5/8/98 GOA14 91 6/8/98 RMG15 68 6/8/98 GOA16 86 10/8/98 CMM17 77 10/8/98 GOA18 87 11/8/98 GOA19 86 13/8/98 RMG20 62 13/8/98 GOA

1. Muestras naturales analizadas por diferentes analistas y métodos en paralelo

2. Muestras inoculadas con material de referencia titulado por los propios analistas

3. Muestras inoculadas con material de referencia certificado

Aseguramiento de la calidad:Ensayos cruzados entre analistas




Aseguramiento de la calidad:Controles de proceso

Inóculo1 L


Muestra preparada

METODO 1 METODO 2 (ACIDO, CALOR, SIN TRATAMIENTO)


1.81

1.071.24

1.14 1.111.06

2.982.792.99

2.94

3.23

3.08

2.241.81

2.121.86 2.09

1.92

1.51

0.93 1.040.891.040.96

0.00

0.50

1.00

1.50

2.00

2.50

3.00

3.50

Red.Sin Trata Red. Calor Red. Ácido Final

TRATAMIENTO

REDUCCIONES MEDIAS

MUESTRA AMUESTRA B

Serie3MUESTRA AMUESTRA BSerie6

MUESTRA AMUESTRA B

Calibración y verificación Calibración y verificación de equipos

Ct=-3,028 log[DNA]]]] +39,6148

R²= 0,94743 r= -0,9733

Rectas de calibrado

CURVA ESTANDAR

40

50

Certificación Multisector

507 ptos

0

10

20

30

40

0 2 4 6 8 10

Log Nº copies

Ct

Correlación entre PCR a tiempo-real y cultivo para L. pneumophila

Cultivos de Legionella

1

10

100

1000

10000

100000

1000000

1 10 100 1000 10000 100000 1000000

Nº cells calculated from PCR results

CF

U d

ete

cte

d by

cul

ture

y=1.05 x-341.8R2=0.943

Rectas de calibrado

1

10

100

1000

10000

100000

1 10 100 1000 10000 100000


CF

U d

ete

cte

d by

cul

ture

Muestras de agua


1:1

1:10

1:100

Ct=-3,26 log[DNA]+35,6 R²= 0,759

Recta calibrado IPC

25

30

35

Control interno (IPC)

0

5

10

15

20

25

0 1 2 3 4

Log conc. DNA (fg)

Ct Serie1

Lineal (Serie1)

145 ptos.100 fg DNA

E. coliy = 0.5014x - 0.0828

R2 = 0.7564

2.00

3.00

4.00-D

-Glu

coro

nida

se a

ctiv

ity

� Fluorimetría

Rectas de calibrado

-2.00

-1.00

0.00

1.00

2.00

0 1 2 3 4 5 6 7

Log cfu/100 mL

Log

ββ ββ-D

-Glu

coro

nida

se a

ctiv

ity

� Colorimetría

Rectas de calibrado

1. ¿Qué es un material de referencia?

2. ¿Qué es un material de referencia certificado?

6. ¿Qué proporciona el uso de los materiales de referencia y materiales de referencia certificados?

4. ¿Qué son los productos BACuali, BACuanti, BACuanti PCR y BACuanti DNA desarrollados por Labaqua?

5. ¿Qué diferencia existe entre los diferentes materiales presentados por Labaqua?

3. ¿Qué características principales tienen los materiales de referencia microbiológicos desarrollados porLabaqua?

7. ¿Qué vantajas presentan estos materiales frente a las cepas habituales procedentes de Colecciones deCultivo?

Preguntas más frecuentes

8. ¿ Son los productos BACuali, BACuanti, BACuanti PCR y BACuanti trazables con cepas de Colecciones de8. ¿ Son los productos BACuali, BACuanti, BACuanti PCR y BACuanti trazables con cepas de Colecciones deCultivo?

9. ¿En que actividades del laboratorio puedo emplear estos materiales?

10. ¿Es obligatoria la realización de todas estas actividades?

11. ¿Qué es validar un método de ensayo?

12. ¿Cuales son los controles de calidad que debe efectuar un laboratorio?

13. ¿Cuales son los controles de calidad internos que debe realizar un laboratorio?

14. ¿Qué son los controles externos de calidad?

15. ¿Con que periodicidad debe un laboratorio realizar las actividades internas de control de calidad?

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