PROTOCOLO DE TRABAJO PARA EL
DIAGNOSTICO Y CONTROL DE LA
TUBERCULOSIS
HOSPITAL DE APOYO DE HUANTA
LABORATORIO DE ANALISIS CLINICO
Huanta - Perú
2012
HOSPITAL DE APOYO DE HUANTA
Señor DoctorEDGARDO ARTURO GARCIA RAMOSDIRECTOR DEL HOSPITAL DE APOYO HUANTA
Señora BiólogaROSA MARIA BAUTISTA MARTINEZJEFA DEL SERVICIO DE LABORATORIO
Señor BiólogoWALTER RAÚL RAMOS VALDIVIARESPONSABLE DEL PROGRAMA DE TUBERCULOSIS
Laboratorio Clínico Programa de Tuberculosis
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TABLA DE CONTENIDOS
ASPECTOS GENERALES1. LA MUESTRA DE ESPURO: METODOS DE OBTENCION
1.1 EXPECTORACION NATURAL1.2 EXPETORACION INDUCIDA
2. MUESTRAS EXTRAPULMONARES ORINA JUGO GASTRICO LIQUIDO DE SEROSAS (PLEURA-PERITONEO) LIQUIDO CEFALORAQUIDEO BIOPSIAS Y MATERIALES RESECADO.
3. BACILOSCOPIA3.1 PREPARACION DEL EXTENDIDO3.2 COLORACION (TÉCNICA DE ZIEHL NEELSEN)3.3 OBSERVACION MICROSCOPICA3.4 METODO DE LECTURA
4. INFORME DE RESULTADOS DE BACILOSCOPIA5. CONSEVACION Y ELIMINACION DE LAS LÁMINAS6. CULTIVO PARA Mycobacterium tuberculosis
PARA DIAGNOSTICO PARA CONTROL
6.1 MUESTRA PARA CULTIVO6.2 DESCONTAMINACION DE LA MUESTRA6.3 LECTURA DE CULTIVOS6.4 INFORME DE RESULTADOSDEL CULTIVO
7. BIOSEGURIDAD EN LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPIA Y CULTIVOS.
7.1. DEL AMBIENTE Y LA INFRAESTRUCTURA DE LOS LABORATORIOS7.2. DE LA CONDUCTA DEL PERSONAL EN EL LABORATORIO.7.3. DEL VESTURARIO DEL PERSONAL7.4. DEL ASEO DE PISOS, MESAS DE TRABAJO Y CABINA DE
BIOSEGURIDAD.7.5. MANEJO DE DESECHOS7.6 DEL PROCESAMIENTO
8. ANEXO PREPARACION DE REACTIVOS
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ASPECTOS GENERALES
La tuberculosis ha causado y sigue causando estragos en el género humano, de
preferencia en la población de escasos recursos, por lo que se le llama “la enfermedad
de los pobres”.
La tuberculosis es una enfermedad infecciosa causada por un bacilo denominado
Mycobacterium tuberculosis, que se transmite a través de las gotitas de saliva que los
enfermos eliminan al exterior al hablar, toser o escupir. Esta enfermedad ataca
preferentemente a los pulmones, pero puede afectar también a otros órganos del
cuerpo humano.
Según cifras de la Organización Mundial de la Salud, esta enfermedad cada año mata
a cerca de dos millones de personas en el mundo. En el 2008 se calculó que más de
tres millones de mujeres contrajeron la tuberculosis y de ellas 700 mil murieron por esa
enfermedad. De éstas, 200 mil también eran portadoras del VIH.
El Perú es el segundo país con más enfermos de TBC, después de Brasil, donde un
60 % de los enfermos se encuentran registrados en Lima.
Unos 34 mil peruanos son afectados con este mal, y que las causas para que siga
creciendo este mal es sobre todo el nivel de pobreza y desnutrición, en varios lugares
del país. El 52 % de los pacientes son hombres entre las edades de 15 a 60 años.
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1. LA MUESTRA DE ESPUTO: METODOS DE OBTENCIÓN
1.1 EXPECTORACION NATURAL
A) CALIDAD
Una buena muestra es aquella que proviene del árbol bronquial, y es obtenida
después de un esfuerzo de tos. Sin embargo, una muestra con apariencia de saliva
puede ser positivo.
B) CANTIDAD
Para ser considerado suficiente, la muestra debe tener un volumen aproximado de 5 a
10 ml. Si el enfermo tiene escasa secreción, la muestra no debe ser inferior al esputo
obtenido de tres expectoraciones sucesivas, salvo justificadas excepciones.
C) NUMERO DE MUESTRAS Y MOMENTOS DE RECOLECCION.
Se recomienda analizar dos o tres muestras de cada sintomático respiratorio. La
primera muestra debe obtenerse en el momento de la consulta y la segunda al día
siguiente, al despertar por la mañana. Sin embargo, puede ser necesario una tercera
muestra obtenida al momento de entregar al laboratorio la segunda muestra.
Para el control del tratamiento examinar una muestra mensualmente mientras dure la
terapia antituberculosa.
D) OBTENCION DE LA MUESTRA
En el momento de la consulta.
Tomar un envase limpio para esputo y anotar el número de orden en el cuerpo del
envase.
Entregar el envase rotulado al paciente, pero conservar la tapa.
Llevar al paciente al Ambiente de Recolección Inmediata del Esputo (ARIES),
Este lugar debe tener buena ventilación y debe prohibirse la presencia de otras
personas con el paciente en el momento de la toma de muestra.
Debe explicarse en forma sencilla e instruir al paciente para que produzca esputo
respirando profundamente, reteniendo aire y lanzándolo violentamente. Repetir el
procedimiento hasta obtener la cantidad adecuada. Evitar siempre que se
derrame el esputo.
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Muestra matinal
Debe darse al paciente otro recipiente numerado, el que llevará a su domicilio, con
instrucciones para que escupa en su interior al levantarse por la mañana y siempre
antes del desayuno.
1.2 EXPECTORACIÓN INDUCIDA
Cuando el paciente no logra expectorar y es necesario el examen del esputo, puede
inducirse la obtención de muestra de la siguiente forma:
2 MUESTRAS EXTRAPULMONARES
Debe procesarse por cultivo, pues la escasa cantidad de bacilos así como la presencia
de Mycobacterias saprofitas, hacen que la baciloscopía no sea concluyente.
ORINA
La muestra más recomendada es al muestra de orina obtenida en la primera micción
de la mañana, previa higiene externa con agua y jabón. Es preferible recolectar entre
300 a 500 ml., en un envase limpio y estéril de boca ancha, que facilite la recolección
directa.
La muestra debe ser procesada inmediatamente siempre por cultivo. Se sugiere
cultivar por lo menos tres muestras seriadas.
Debe recordarse que la prueba de baciloscopía efectuada al sedimento urinario no
necesariamente es diagnóstico concluyente de tuberculosis, por cuanto existen
mycobacterias saprofitas en orina, que pueden producir resultados falsos positivos en
el examen de baciloscopía.
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Obtención postural Nebulización Lavado Bronquial Hisopado laríngeo
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JUGO GÁSTRICO
La recolección se hace por la mañana con el paciente en ayunas, utilizando una
sonda nasogástrica por la que se aspira el jugo gástrico. Utilizando una jeringa de 20
a 50 ml. Vaciar la muestra en un envase limpio de 50 a 100 ml., de capacidad.
Cultivar de inmediato conservar en refrigeración no más de 6 horas. Mínimo debe
tomarse 3 muestras. Su utilización es más frecuente en niños. Este trabajo es
realizado por personal de Enfermería.
LIQUIDO DE SEROSAS (PLEURA – PERITONEO)
La muestra debe ser obtenida por el personal médico. El cultivo debe hacerse lo más
rápido posible, así como el estudio baciloscópico. Debe procesarse todo el líquido
extraído por aspirado en jeringa de 50 a 100 ml.
LIQUIDO CEFALORAQUIDEO.
La obtención de la muestra está reservada al personal médico. Obtenida la muestra
en un volumen de aproximadamente 5 ml., esta se dividirá en dos partes iguales; una
de las cuales se centrifugará y cultivará inmediatamente, no precisando
descontaminación previa. La segunda se conservará en refrigeración a 4 °C. Si la
primera parte de la muestra está contaminada, la otra parte se siembra luego de su
descontaminación. Si el volumen de la muestra es pequeño, se siembra toda la
muestra. En todos los casos se hará baciloscopía del sedimento luego de centrifugar
la muestra.
BIOPSIAS Y MATERIAL RESECADO.
Se utiliza un envase estéril. La muestra se divide en dos partes: una parte se envía de
inmediato al laboratorio para el cultivo y la otra se conserva o envía para el estudio
histopatológico en un frasco con formol al 10 %.
3. LA BACILOSCOPIA
Es la herramienta fundamental rutinaria para el diagnostico de la tuberculosis y
el seguimiento del tratamiento de los pacientes con tuberculosis pulmonar.
Deberá emplearse en toda muestra pulmonar o extrapulmonar y para el control
mensual del tratamiento y retratamiento antituberculoso, y previamente en toda
muestra que se decida derivar a cultivo.
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El examen directo de esputo (baciloscopía) tiene una mayor confiabilidad
diagnóstica (especificidad del 98 %) y capacidad de detección (sensibilidad del 60 –
80%) que el criterio clínico y radiológico.
3.1 PREPARACIÓN DEL EXTENDIDO
Colocar sobre la mesa de trabajo una hoja doble de papel periódico o una
bandeja de fierro enlozado o acero inoxidable (dimensiones recomendadas: 60
x 40 x 10 cm) con papel periódico, humedecido con fenol al 5 %.
Numerar las láminas portaobjetos empleando un lápiz graso, con el código
respectivo del registro de muestras para investigación Bacteriológica en
tuberculosis. Deberá trazarse una línea en cada lámina portaobjeto empleando
el lápiz graso, la que dividirá la superficie en una tercera parte destinada a la
numeración y dos terceras partes para hacer el extendido. Esta línea debe
trazarse en la cara inferior de la lámina a fin de evitar que se borre la
numeración al momento de efectuar la coloración.
Destapar cuidadosamente el envase de la muestra que se va a procesar,
manteniendo la boca del envase cerca del mechero encendido.
Dividir un aplicador de madera
(bajalengua) en dos o tres partes y
tomarlo entre el pulgar y el índice
de la mano, para luego
seleccionar y extraer la partícula
útil, que es la porción muco-
purulenta de color amarillo
verdoso del esputo, enrollándola
en el aplicado.
Colocar la partícula útil sobre el portaobjeto y extenderla, haciendo movimientos
de vaivén, hasta lograr que el extendido sea homogéneo (ni muy fino ni muy
grueso), que no llegue a los bordes de la lámina. Por ningún motivo debe
calentarse la lámina mientras se haga el extendido, debido a que por el calor se
forman círculos concéntricos y precipitados granulosos.
Pasar por la llama del mechero los bordes de la lámina extendida, colocar
sobre el soporte de madera y dejar secar a temperatura ambiente.
Fijar cada lámina una vez seca, mediante dos o tres pasajes rápidos sobre la
llama del mechero con el extendido hacia arriba.
3.2 COLORACIÓN (TÉCNICA DE ZIEHL NEELSEN)Laboratorio Clínico Programa de Tuberculosis
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Colocar sobre el soporte de
coloración (alambre o varilla de
vidrio)la serie de láminas fijadas
con el extendido hacia arriba, el
número hacia el operador y la
varilla próxima al operador
ligeramente más alta que la
otra.
Cubrir la totalidad de la superficie del extendido con el colorante fucsina básica
fenicada.
Calentar suavemente con la llama del mechero de alcohol o un hisopo de
algodón humedecido en alcohol hasta la emisión de vapores, repetir el proceso
por tres veces, no debe hervir la preparación. Si el volumen del colorante
disminuye por evaporación, debe agregarse más hasta cubrir totalmente el
extendido y dejar enfriar. El tiempo mínimo de coloración con fucsina es de 5
minutos.
Eliminar la fucsina tomando la lámina por el extremo numerado, entre el dedo
pulgar y el índice o con una pinza, inclinándola hacia delante y dejando caer el
agua corriente a baja presión sobre la parte que no tiene el extendido.
Cubrir la totalidad de la superficie del extendido con la solución de alcohol
ácido durante dos minutos, hasta obtener una coloración rosa pálido. De ser
necesario decolorar nuevamente, efectuando movimientos en vaivén de la
lámina.
Una vez eliminado el alcohol ácido lavar nuevamente la lámina con agua a baja
presión, cuidando de no desprender la película que formó el extendido.
Cubrir la superficie del extendido con el colorante azul de metileno previamente
filtrado, durante 30 segundos a un minuto.
Eliminar el azul de metileno y lavar cada lámina con agua a baja presión, por
ambos lados.
Dejar secar las láminas al medio ambiente.
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3.3 OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA
Para la observación se debe emplear un
microscopio compuesto con el objetivo de
inmersión 100x, colocando una gota de
aceite de inmersión sobre el extendido.
Cada campo microscópico, se debe
observar en superficie y en profundidad,
para lo cual se utilizará permanentemente
el tornillo micrométrico.
3.4 METODO DE LECTURA
Los bacilos aparecen como bastoncitos delgados, ligeramente curvos, teñidos de
rojo, generalmente con gránulos más coloreados en su interior, aislados, en pareja o
en grupo sobre un fondo azul claro.
Es aconsejable seguir una pauta uniforme de observación, avanzando de izquierda a
derecha del extendido, y observando un mínimo de 100 campos útiles, lo que un
biólogo capacitado hace en aproximadamente 5 minutos. Se considera campo
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microscópico útil aquel en el cual se observa elementos celulares de origen bronquial
(leucocitos, fibras mucosas y células ciliadas). Los campos en que no aparecen
dichos elementos no deben contabilizarse en la lectura.
El observador irá tomando nota del número de bacilos observados y del número de
campos microscópicos a observarse, que variará según la cantidad de bacilos que
contenga la muestra.
Si en una lámina se encuentra sólo de 1 a 9 bacilos en 100 campos microscópicos
observados, debe ampliarse la lectura a otros 100 campos más. Si persistiese el
resultado, realizar otro extendido de la misma muestra e informar lo encontrado y
solicitar nueva muestra.
Al término de la lectura retirar la lámina de la platina del microscopio, limpiar el aceite
de inmersión de la lámina con tolueno y guardar la lámina.
Limpiar el exceso de aceite del objetivo de inmersión del microscopio con papel lente
humedecido en alcohol antes de realizar la siguiente lectura.
4. INFORME DE RESULTADOS DE BACILOSCOPIA
Negativo ( - )No se encuentra bacilos ácido alcohol resistentes (BAAR) en
100 campos microscópicos observados.
Positivo ( + )Menos de 1 BAAR promedio por campo en 10 campos
observados (10 – 99 bacilos en 100 campos).
Positivo ( ++ )De 1 a 10 BAAR promedio por campo en 50 campos
observados.
Positivo ( +++ )Más de 10 BAAR promedio por campo en 20 campos
observados.
En caso de encontrar de 1 a 9 bacilos ácido alcohol resistentes en 100 campos
microscópicos observados, se adoptará la siguiente conducta.
Leer 100 campos útiles más por la zona del extendido en busca de positividad.
Si persiste la observación, realizar otro extendido de una porción más
representativa de la misma muestra en búsqueda de positividad.
Si persiste la observación o no se encuentran más BAAR, la muestra se
interpreta e informa como negativa, ya que podría tratarse de micobacterias
saprofitas. El hallazgo se anota sólo en el registro.
De inmediato se deriva la muestra problema a cultivo para su confirmación
bacteriológica.
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En el formato de resultados, en “observaciones”, indicar que se está derivando
la muestra a cultivo y sugerir el envío de más muestras.
5. CONSEVACION Y ELIMINACION DE LAS LÁMINAS
El sistema nacional de garantía de calidad de las baciloscipías requiere que las
láminas se conserven al menos un mes hasta que puedan ser solicitadas para su
lectura.
Las láminas leídas se limpian con un algodón embebido en alcohol pasándolo por la
superficie con leve presión, se comprueba que se mantenga visible la numeración y se
las guarda con sus resultados.
Luego del mes, de no serles solicitadas puede limpiar las láminas dejando las
negativas en las que no se observen ralladuras para preparar nuevos extendidos y
enviando los positivas a otra sección del laboratorio.
La limpieza se realiza de la siguiente manera:
Separe las láminas positivas de las negativas y lávelas por separado
Coloque las láminas en un recipiente con una solución de hipoclorito de sodio
concentrado comercial al 30 % durante 48 horas.
Lave con abundante agua
Seque al calor seco o a temperatura ambiente y limpie con un paño antes de volverlas
a usar.
6. CULTIVO PARA Mycobacterium tuberculosis
El cultivo de Mycobacterium tuberculosis permite diagnosticar los casos que
presentan baciloscopía negativa, y aportar hasta un 20 % más de confirmación
bacteriológica (especificidad del 100 % y sensibilidad del 80 – 90 %).
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Indicaciones para el cultivo de Mycobacterium tuberculosis:
PARA DIAGNOSTICO
La segunda muestra del sintomático respiratorio con radiografía de pulmones
sospechosa de TB (Rx anormal) en seguimiento diagnóstico.
Muestra paucibacilar de baciloscopía; es decir cuando se encuentra de 1 a 9
BAAR en 100 campos microscópicos observados.
Muestras extrapulmonares: todas las muestras de biopsias, piezas
anatómicas, tejidos y fluidos (exudados, orina, líquido cefalorraquídeo,
líquido sinovial, etcétera) de casos con sospecha de tuberculosis
extrapulmonar, deberán ser sometidas a estudios bacteriológicos mediante
baciloscopía directa y cultivo de Mycobacterium tuberculosis.
Toda muestra pulmonar o extrapulmonar de los pacientes portadores del
virus de la inmunodeficiencia humana (VIH positivos) y sospecha de
tuberculosis, se cultivará.
Muestra de baciloscopías negativas en menores de 15 años para diagnóstico
de tuberculosis pulmonar.
PARA CONTROL:
Muestra de pacientes con sospecha de fracaso al esquema primario (Uno)
de tratamiento, por persistencia de baciloscopía directa positiva al cuarto
mes de tratamiento o cuando presenta baciloscopías positivas en dos
controles sucesivos después de un período de negativización de dos meses.
Muestra de pacientes con sospecha de fracaso al esquema secundario (Dos)
de tratamiento, por persistencia de baciloscopía directa positiva al cuarto
mes de tratamiento o cuando presenta baciloscopías positivas en dos
controles sucesivos después de un período de negativización de dos meses.
Muestra de pacientes con TB – MDR en retratamiento para el control del
tratamiento.
Muestra de pacientes crónicos multitratados (más de dos tratamientos
completos previos) y con persistencia de positividad a la baciloscopía directa.
En forma excepcional, el laboratorio derivará a cultivo muestras a pedido y
bajo responsabilidad de los médicos, quienes deberán indicar en
observaciones de la “Solicitud de Investigación Bacteriológica en
Tuberculosis” las condiciones del paciente que ameriten la prueba, que sean
diferentes a las antes mencionadas.
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6.1 LA MUESTRA PARA EL CULTIVO
Procedimiento para muestras obtenidas asépticamente:
Las muestras obtenidas asépticamente, que recolectadas en un recipiente
estéril pueden cultivarse prescindiendo del proceso de descontaminación
incluyendo a:
- Muestras obtenidas por punción: Líquido cefalorraquídeo, pleural,
peritoneal y articulares. Si se cuenta con volúmenes suficientes deben
ser centrifugados y el sedimento se sembrará en varios tubos de cultivo,
si la cantidad de la muestra es pequeña se sembrará toda la muestra.
- Materiales de biopsia pleura, hepática y ganglionar: Fraccionar el
material biológico con instrumento quirúrgico esterilizado en un mortero
de porcelana previamente esterilizado. Agregar agua destilada, hasta
obtener una suspensión, sembrar directamente en el medio de cultivo.
Procedimiento a seguir para muestras contaminadas:
Muestras como: esputo, orina, contenido gástrico, entre otras, deben ser
descontaminadas.
Muestras de orina como contenido gástrico, se deberán centrifugar el
volumen total a 3000 ó 3500 RPM, durante 20 a 30 minutos. Eliminar el
sobrenadante. Descontaminar y sembrar el sedimento.
6.2 DESCONTAMINACION DE LA MUESTRA SIN CENTRIFUGACION Y
EMPLEO DEL MEDIO OGAWA ACIDIFICADO
En una cabina de Bioseguridad o frente al mechero de Bunsen, colocar las
muestras debidamente rotuladas en una bandeja.
Trasvasar 1 ml. de muestra de esputo a un tubo de 25x150 tapa rosca estéril.
Agregar 4 ml. De solución estéril de hidróxido de sodio (NaOH) al 4 %.
Poner los tubos en estufa o baño maría a 37 °C por 20 minutos.
Retirar los tubos de la estufa o baño maría y homogenizar.
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Muestra obtenida asépticamente
Muestra contaminada
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Inocular 0.1 ml. en cada uno de los tubos con medio Ogawa, tratando de
bañar toda la superficie del medio.
Colocar los tubos con la tapa ajustada, inclinados en un bandeja.
Incubar en estufa a 37 °C.
Revisar los cultivos a las 48 y 72 horas para observar si existe
contaminación, alcalinizado (color blanco amarillento) o acidificado (color azul
oscuro) por mala neutralización de la muestra.
Realizar la lectura a los 7, 15, 30 y 60 días respectivamente.
El desarrollo de colonias antes de 48 horas es indicativo de contaminación,
algunas veces el medio se licua por acción de gérmenes proteolíticos.
6.3 LECTURA DE CULTIVOS
El desarrollo de Mycobacterium tuberculosis generalmente aparecen luego de 2 a 3
semanas. Las colonias típicas son de color crema, secas, rugosas de aspecto de
coliflor y de borde irregular.
6.4 INFORME DE RESULTADOS DEL CULTIVO
Negativo ( - ) No se observa colonias.
N° de colonias Número total de colonias, si hay menos de 20.
Positivo ( + ) De 20 a 100 colonias.
Positivo ( ++ ) Colonias separadas más de 100.
Positivo ( +++ )Colonias confluyentes (se observa desarrollo en toda
la superficie del medio).
( C ) Cultivo contaminado.
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Se debe realizar frotis y coloración Ziehl-Neelsen de las colonias que no tienen
morfología típica. De observarse BAAR, se enviará el cultivo para su tipificación al
I.N.S.
PRUEBA DE SENSIBILIDAD
Identificación para la prueba de sensibilidad a fármacos antituberculosos de primera
línea:
Cepa del cultivo positivo que sirvió para el diagnóstico de fracaso al esquema
primario (Uno).
Cepa del cultivo positivo que sirvió para el diagnóstico de fracaso al esquema
secundario (Dos).
Cepas de cultivos positivos de pacientes con infección VIH o SIDA/TB.
Con fines de investigación, cuando se está realizando encuestas nacionales
de vigilancia a la resistencia a los medicamentos antituberculosos en el Perú.
Cepas del cultivo positivo de paciente con tuberculosis pulmonar frotis
positivo, contacto de caso índice con TB – MDR, comprobada por prueba de
sensibilidad. En esta situación se requiere una cuidadosa evaluación por el
CERI correspondiente.
Cepa del cultivo positivo de personal de salud, con tuberculosis pulmonar
frotis positivo, que labore en contacto con enfermos de tuberculosis.
Indicaciones para la prueba de sensibilidad a fármacos antituberculosos de segunda
línea.
Cepa del cultivo positivo a partir del sexto mes (150 dosis recibidas) de
retratamiento estandarizado para TB – MDR, a medicamentos
antituberculosos de primera y segunda línea.
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Cepa del cultivo positivo de pacientes crónicos multitratados que recibieron
fármacos anti antituberculosos de segunda línea al momento del diagnóstico.
7. BIOSEGURIDAD EN LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPIAS Y
CULTIVOS
7.1. DEL AMBIENTE Y LA INFRAESTRUCTURA DE LOS LABORATORIOS.
Se debe utilizar pintura epóxica (lavable) en el pintado de las paredes.
Asimismo, la unión del cielo-raso con la pared y de ésta con el piso no
deberá terminar en ángulo recto sino en forma cóncava para facilitar su
limpieza.
Los laboratorios deberán contar con extinguidores de incendio de anhídrido
carbónico.
No deberá instalarse teléfono en el ambiente físico donde se encuentra el
área de procesamiento de baciloscopías y/o cultivos.
7.2. DE LA CONDUCTA DEL PERSONAL EN EL LABORATORIO
Se deberá prohibir el ingreso de personas ajenas al servicio de laboratorio.
Anualmente, el personal de laboratorio deberá pasar por una evaluación
médica, ajustándose a la norma vigente para el control de la tuberculosis.
Toda persona que labora en el laboratorio y que en cualquier momento
cumpla con la definición de sintomático respiratorio deberá ser investigado
con baciloscopía, según norma nacional.
En el laboratorio está terminantemente prohibido comer, beber, fumar,
guardar alimentos, guardar utensilios de cocina, aplicarse cosméticos.
El personal de laboratorio deberá mantener obligatoriamente las uñas cortas,
limpias y sin esmalte.
Está terminantemente prohibido colocar o almacenar bebidas o alimentos en
las refrigeradoras y estufas de laboratorio.
Mientras esté procesando las muestras, deberá evitar tocarse los ojos, nariz,
boca, y la piel descubierta con las manos enguantadas.
Cada vez que el Biólogo interrumpa su trabajo o se contamine, deberá
lavarse las manos con abundante agua y jabón germicida (líquido o en
barras pequeñas) por 15 a 30 segundos, y secarse con toallas descartables
o unipersonales.
7.3. DEL VESTUARIO DEL PERSONALLaboratorio Clínico Programa de Tuberculosis
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Para el procesamiento de las muestras, el personal deberá usar gorro
descartable o de tela, respirador para uso en bacteriología de la tuberculosis
ajustado a la nariz, guantes quirúrgicos descartables y mandilones cerrados
por detrás (mandilón tipo quirúrgico), de mangas largas, los mismos que no
se usarán fuera del laboratorio.
Los mandilones deberán ser hervidos o esterilizados en autoclave y luego
lavados con detergente o jabón.
No se deberá guardar la ropa de uso diario en los ambientes de trabajo del
laboratorio.
El personal que usa cabello largo deberá mantenerlo amarrado hacia atrás y
utilizar gorro obligatoriamente. El cabello largo puede ser peligroso en el
laboratorio, particularmente alrededor del fuego de mecheros. También
accidentalmente puede ser echado de lado por manos contaminadas con
material infeccioso.
El personal deberá quitarse brazaletes, aretes y collares largos antes de
comenzar a trabajar ya que éstos pueden producir accidentes en la mesa de
trabajo o contaminarse fácilmente con material infeccioso.
Los zapatos deberán cubrir totalmente los pies para protegerlos de
eventuales derrames de ácidos y de sustancias infecciosas. Asimismo,
deberán evitarse los tacos altos en la medida que facilitan caídas y otros
accidentes.
7.4. DEL ASEO DE PISOS, MESAS DE TRABAJO Y CABINA DE
BIOSEGURIDAD
El personal de limpieza del establecimiento de salud deberá ser
obligatoriamente capacitado, y estrictamente supervisado en el correcto
aseo de pisos y mesas de trabajo.
Los pisos de los laboratorios deberán limpiarse todos los días con soluciones
desinfectantes al final de la jornada de trabajo, utilizando un trapeador.
Nunca barrer el piso en seco ni encerar.
Los laboratorios que no dispongan de mesas de trabajo con superficies lisas
y de fácil lavado (fórmica), deberán efectuar la limpieza con mayor prolijidad,
particularmente las hendiduras, grietas u otros lugares que puedan retener
material contaminado.
Está terminantemente prohibido guardar material de limpieza dentro del
ambiente de trabajo del laboratorio (baldes, escobillas, escobillones, Laboratorio Clínico Programa de Tuberculosis
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etcétera).
La limpieza de las cabinas de bioseguridad deberá realizarse al culminar la
jornada de trabajo con etanol al 70 %.
7.5. MANEJO DE DESECHOS
La adecuada eliminación del material de
laboratorios es responsabilidad del personal
a cargo del procesamiento de las muestras.
Los recipientes (tachos de basura) deberán
contener bolsas plásticas de color rojo para
desechar el material contaminado.
El procedimiento ideal para la eliminación de
envases para esputo es la descontaminación
previa en autoclave o la incineración.
Donde no se disponga de autoclave ni de alguna facilidad de incineración, se
realizará la desinfección previa de las muestras de esputo, añadiendo el
envase fenol al 5% o lejía al 1% por 30 minutos, en cantidades suficientes
para que cubra totalmente la muestra, y luego deberá inutilizarse el envase
para que no sea reutilizado.
Las pipetas usadas y el material de trabajo desechable deberán ser tratados
con un desinfectante adecuado, por ejemplo fenol al 5%, al que estarán
expuestos (sumergidos) durante dos horas, siendo posteriormente
esterilizados por autoclave.
7.6. DEL PROCESAMIENTO
Los procedimientos para efectuar baciloscopías y cultivo de Mycobacterium
tuberculosis deben realizarse de acuerdo a las normas técnicas vigentes,
tratando de reducir al mínimo la formación de gotitas, aerosoles,
salpicaduras o derrames.
Mientras se realiza los procedimientos técnicos, la puerta del laboratorio
deberá mantenerse cerrada.
Se tendrá especial cuidado para no producir aerosoles al destapar los
envases, abrir tubos, preparar muestras, transferir cultivos utilizando pipetas,
al centrifugar muestras, al agitar tubos y cuando algún tubo con cultivo se
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rompa accidentalmente. Asimismo, al realizar el extendido de la muestra y
durante el calentamiento de la lámina con fucsina fenicada.
Si ocurriera un derrame accidental, el personal deberá cubrir
inmediatamente con papel u otro material absorbente la zona del derrame.
Luego se aplicará en dicha zona un desinfectante líquido (fenol al 5%) y se
le dejará actuar durante 30 minutos evacuando a todo el personal de la
zona. Finalmente se procederá a su limpieza.
Se notificará al Jefe inmediato superior todo derrame, accidente o exposición
real a material infeccioso. Se hará un informe por escrito de tales accidentes
e incidentes y se deberá realizar una evaluación de la ocurrencia a fin de
evitar que se vuelva a repetir, así como el seguimiento y tratamiento si
resultara necesario.
Se deberá usar pipetas o bombillas de jebe; no utilizar las pipetas con la
boca.
ANEXO 1
PREPARACIÓN DE REACTIVOSLaboratorio Clínico Programa de Tuberculosis
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Para preparar un litro de fucsina fenicada se necesitan 3 g. De fucsina básica y 100
ml. De alcohol de 95°. Se disuelve por agitación y se agregan 55 ml. De fenol
acuoso. Se agita y se agrega agua destilada hasta completar un litro. Se deja
reposar 24 horas y se filtra (el fenol acuoso se prepara agregando a 100 g. De fenol
cristalizado, 10 ml. De agua destilada. Se calienta en baño maría hasta la completa
disolución y se enfría. El fenol acuoso se mantiene líquido).
Para preparar un litro de azul de metileno se emplea 1 g. De azul de metileno y 100
ml. De alcohol de 95°. Se disuelve por agitación y se agrega agua destilada hasta
completar un litro. Se deja reposar 24 horas y se filtra antes de usar.
Para preparar un litro de solución decolorante se requiere 30 ml., de ácido
clorhídrico para análisis y 970 ml., de alcohol de 95°. Con la pipeta se deja escurrir
el ácido clorhídrico por las paredes del matraz, que contiene el alcohol, y se agita
suavemente.