BOALA MAREKBOALA MAREKPROBLEME ACTUALE IN PROBLEME ACTUALE IN

FERMELE AVICOLE DIN ROMANIAFERMELE AVICOLE DIN ROMANIA

Dr. Virgilia POPADr. Virgilia POPAINSTITUTUL PASTEURINSTITUTUL PASTEUR

INTALNIREA TRIMESTRIALA A INTALNIREA TRIMESTRIALA A SOCIETATII MEDICILOR VETERINARI IN PATOLOGIA AVIARA SOCIETATII MEDICILOR VETERINARI IN PATOLOGIA AVIARA

SI A ANIMALELOR MICI DIN ROMANIASI A ANIMALELOR MICI DIN ROMANIA

ACADEMIA DE ACADEMIA DE STIINTE AGRICOLE STIINTE AGRICOLE SI SILVICE ‘GHEORGHE SI SILVICE ‘GHEORGHE IONESCU SISESTI” IONESCU SISESTI”

AULA MAGNAAULA MAGNA Bucuresti 27.09.2012Bucuresti 27.09.2012

József Marek (1868–József Marek (1868–19521952)) 1907 –Boala Marek (polinevrita)1907 –Boala Marek (polinevrita)

1969 – I.V. Patrascu 1969 – I.V. Patrascu si colsi col. - Forma acuta a bolii Marek. - Forma acuta a bolii Marek 1970 – 1989 – studii sensibilitate linii SPF (S,P, N, PDRC) vs. tulpina Bc1970 – 1989 – studii sensibilitate linii SPF (S,P, N, PDRC) vs. tulpina Bc

1990 – 2000 – Teusdea, Coman, Stiube 1990 – 2000 – Teusdea, Coman, Stiube si colsi col. – studii epidemiologice, patogeneza, histopatologie, serologie, . – studii epidemiologice, patogeneza, histopatologie, serologie, vaccin, esec vaccinarevaccin, esec vaccinare

20002000 -- 2012 – nici-o comunicare 2012 – nici-o comunicare stiintifica stiintifica privind BM in Romaniaprivind BM in Romania

Boala MarekBoala Marek

http://www.cabi.org/isc/?compid=5&dsid=76375&loadmodule=datasheet&page=481&site=144http://www.cabi.org/isc/?compid=5&dsid=76375&loadmodule=datasheet&page=481&site=144

OIE, 2005. World Animal Health OIE, 2005. World Animal Health Publication and Handistatus II (data set Publication and Handistatus II (data set for 2004). Paris, France: Office for 2004). Paris, France: Office International des Epizooties.International des Epizooties.

Bulgaria – 1998Bulgaria – 1998 Ungaria – cunoscuta ca Ungaria – cunoscuta ca

fiind prezentafiind prezenta Federatia Rusa – idemFederatia Rusa – idem Polonia – idemPolonia – idem Ucraina – 2000Ucraina – 2000 Moldova – 2001Moldova – 2001 Romania – necomunicat Romania – necomunicat

pana in 2005pana in 2005

Boala MarekBoala Marek in Romaniain Romania

Boala MarekBoala Marek in Romaniain Romania

2005, 2006, 2007 –2005, 2006, 2007 – prezenta BM in Romania (cand era si prezenta BM in Romania (cand era si in lista bolilor notificabile)in lista bolilor notificabile)

http://www.oie.int/wahis_2/public/wahid.php/Countryinformation/Animalsituationhttp://www.oie.int/wahis_2/public/wahid.php/Countryinformation/Animalsituation

VIRUSURI HERPES LA ANIMALEVIRUSURI HERPES LA ANIMALE

BOALA / VIRUSUL MAREKBOALA / VIRUSUL MAREK Boala Marek (Marek disease, MD), este o boala virala tumorala a galinaceelor, intalnita preponderent Boala Marek (Marek disease, MD), este o boala virala tumorala a galinaceelor, intalnita preponderent

la varste tinere , cu manifestare frecventa de pareza acuta la varste tinere , cu manifestare frecventa de pareza acuta

Manual OIEManual OIE

Lista OIE – in 2012 nu este inclusa in lista bolilor notificabileLista OIE – in 2012 nu este inclusa in lista bolilor notificabile

Programul strategic national – Sectiunea 2. Supravegherea, prevenirea si controlul bolilor tumorale. Programul strategic national – Sectiunea 2. Supravegherea, prevenirea si controlul bolilor tumorale. 1. Oncopatii la pasari – leucemii si limfoame, inclusiv boala Marek, alte tumori. 1. Oncopatii la pasari – leucemii si limfoame, inclusiv boala Marek, alte tumori.

Agentul cauzal este un herpesvirus specific, virusul bolii Marek, MDV, sau Gallid herpesvirus 2, Agentul cauzal este un herpesvirus specific, virusul bolii Marek, MDV, sau Gallid herpesvirus 2, GaHV2 (alfaherpesvirus limfotropic asociat celular / oncogen)GaHV2 (alfaherpesvirus limfotropic asociat celular / oncogen)

Structura virusului: capsida; anvelopa virala; spiculi (glicoproteine); ADNdc liniar – 170 kb (core)Structura virusului: capsida; anvelopa virala; spiculi (glicoproteine); ADNdc liniar – 170 kb (core)

Virusul GaHV2 este inrudit cu alte doua herpesvirusuri intalnite la pasari, Gallid herpesvirus 3 Virusul GaHV2 este inrudit cu alte doua herpesvirusuri intalnite la pasari, Gallid herpesvirus 3 (GaHV3 sau MDV2) si herpesvirusul de curca (Turkey herpesvirus, HVT, sau Meleagrid herpesvirus (GaHV3 sau MDV2) si herpesvirusul de curca (Turkey herpesvirus, HVT, sau Meleagrid herpesvirus 1, MeHV1), care nu au potential patogen pentru gaini. 1, MeHV1), care nu au potential patogen pentru gaini.

BOALA / VIRUSUL MAREKBOALA / VIRUSUL MAREK

Tulpinile de herpesvirus de curca si cele de tip MDV2 (considerate in trecut Tulpinile de herpesvirus de curca si cele de tip MDV2 (considerate in trecut ca tulpini de MDV atenuate in mod natural), au fost si sunt utilizate in ca tulpini de MDV atenuate in mod natural), au fost si sunt utilizate in componenta multor vaccinuri aplicate in controlul / preventia bolii Marek, componenta multor vaccinuri aplicate in controlul / preventia bolii Marek, alaturi de tulpini atenuate de virus MD (GaHV2)alaturi de tulpini atenuate de virus MD (GaHV2)

In unele documente si lucrari stiintifice cele trei specii virale sunt inca In unele documente si lucrari stiintifice cele trei specii virale sunt inca prezentate ca fiind o singura specie virala cu trei serotipuri (HVT - serotipul prezentate ca fiind o singura specie virala cu trei serotipuri (HVT - serotipul 3, GaHV3 – serotipul 2, GaHV2 sau MDV – serotipul 13, GaHV3 – serotipul 2, GaHV2 sau MDV – serotipul 1

GaHV2 – GaHV2 – 4 patotipuri4 patotipuri: moderat (mMDV), virulent (vMDV), foarte virulent : moderat (mMDV), virulent (vMDV), foarte virulent (vvMDV), foarte (vvMDV), foarte virulent plus (vvMDV+)virulent plus (vvMDV+)

Vector / rezervor pentru: Vector / rezervor pentru: virusurile leucozelor, virusul BIA, virusurile leucozelor, virusul BIA, reovirus, enterovirus, virusul diftero-reovirus, enterovirus, virusul diftero-variolei, virusul bolii de Newcastle, variolei, virusul bolii de Newcastle, E.coli, Salmonella tiphimurium, E.coli, Salmonella tiphimurium, Campylobacter.Campylobacter.

Gazda intermediara: nematode cecale, Gazda intermediara: nematode cecale, cestodecestode, , protozoare, protozoare,

BOALA / VIRUSUL MAREKBOALA / VIRUSUL MAREK Vector: Vector: Alphitobius diaperinusAlphitobius diaperinus

(gandacul de grajd / balegar)(gandacul de grajd / balegar)

Manzat Moga R 2005: Boli virotice si prionice, Manzat Moga R 2005: Boli virotice si prionice, Ed. Brumar, Timisoara ISBN 973-602-085-1Ed. Brumar, Timisoara ISBN 973-602-085-1

Al 9-leaAl 9-lea Simpozion international Simpozion international privind boala Marek si herpesvirusurile aviare privind boala Marek si herpesvirusurile aviare

Berlin 24 - 28 iunie 2012Berlin 24 - 28 iunie 2012

Genomica si miRNA Genomica si miRNA ( micro ( micro

RNA – represori post-transcriptionali)RNA – represori post-transcriptionali)

Structura si asamblarea Structura si asamblarea viralavirala

ProteomicaProteomica ImunologieImunologie VaccinuriVaccinuri PatogenezaPatogeneza Latenta si tumorigenezaLatenta si tumorigeneza EpidemiologieEpidemiologie

EpidemiologieEpidemiologie Real time multiplex PCR – Real time multiplex PCR –

CIAV + MDVsCIAV + MDVs

LAMP (loop-mediated LAMP (loop-mediated isothermal amplification) vs isothermal amplification) vs PCR – detectie si diferentiere PCR – detectie si diferentiere MDVs 1,2,3MDVs 1,2,3

Monitorizarea MDV in praful Monitorizarea MDV in praful din halele de pui din Australiadin halele de pui din Australia

qPCR – CVI988 vaccin vs qPCR – CVI988 vaccin vs MDVs virulenteMDVs virulente

Nivelul infectiei si vaccinarea Nivelul infectiei si vaccinarea cu HVT asupra ratei de cu HVT asupra ratei de transmitere a MDVtransmitere a MDV

Caracterizare moleculara si Caracterizare moleculara si analiza filogenetica – MDVs analiza filogenetica – MDVs din cazuri clinice – Egiptdin cazuri clinice – Egipt

Prevalenta MDV si variatia Prevalenta MDV si variatia secventei EcoRI – Q (gena secventei EcoRI – Q (gena mec) in Iraqmec) in Iraq

Incarcatura virala, rata de Incarcatura virala, rata de dispersie si transmiterea dispersie si transmiterea laterala a MDVVacc Rispens / laterala a MDVVacc Rispens / CVI988 CVI988 lala pui SPF. pui SPF.

VaccinuriVaccinuri Vaccinarea prelungeste si mareste transmiterea Vaccinarea prelungeste si mareste transmiterea

tulpinilor foarte virulente de MDtulpinilor foarte virulente de MDVV

Vaccinuri contra MD produse pe linii celulare Vaccinuri contra MD produse pe linii celulare stabilizatestabilizate

Efectul momentului de vaccinare cu tulpina Efectul momentului de vaccinare cu tulpina Rispens CVI988 fata de infectie sau protectia fata Rispens CVI988 fata de infectie sau protectia fata de MDVde MDV

Interactiunea dintre tulpinile vaccinale MDV si Interactiunea dintre tulpinile vaccinale MDV si tulpinile de adenovirus din teren in culturile de tulpinile de adenovirus din teren in culturile de fibroblaste embrionare de puifibroblaste embrionare de pui

Gel-electroforeza post PCR MDV-B pentru detectia Gel-electroforeza post PCR MDV-B pentru detectia virusului Marek (GaHV2)virusului Marek (GaHV2). . Linia 1: martor negativ Linia 1: martor negativ (NFW, negativ); linia 2: proba 1401, splina, (negativ (NFW, negativ); linia 2: proba 1401, splina, (negativ v.Marek, + ampliconi nespecifici); linia 3: proba v.Marek, + ampliconi nespecifici); linia 3: proba 1402, splina, (pozitiv v.Marek, amplicon specific 669 1402, splina, (pozitiv v.Marek, amplicon specific 669 bp, + ampliconi nespecifici); linia 4: proba 1403, bp, + ampliconi nespecifici); linia 4: proba 1403, splina, (pozitiv v.Marek, amplicon specific 669 bp + splina, (pozitiv v.Marek, amplicon specific 669 bp + ampliconi nespecifici); linia 5: martor intern pozitiv ampliconi nespecifici); linia 5: martor intern pozitiv Marek - ADN proba teren 2004 (amplicon 669bp); Marek - ADN proba teren 2004 (amplicon 669bp); linia 6: Standard ADN - 100bp DNA Ladder linia 6: Standard ADN - 100bp DNA Ladder (Promega).(Promega).

1 2 3 4 5 6

669 bp

Metoda PCR clasic pentru detectia virusului bolii lui Marek:

Extracţie ADN: QIAamp DNA Mini kit (Qiagen- 51304).

PCR MDV-B: Amplicon - 669 bp, care reprezinta un fragment din gena B1, care codifica un epitop imunodominant si care se exprima tardiv in evolutia infectiei cu MDV. Amorse Cho K.O. et al. 1999, Avian Pathology 28: 47-53, specifice GaHV2 (inclusiv tulpini vaccinale derivate din GaHV2: Rispens / CVI988 / RB-1B).

Martor pozitiv: intern - ADN proba teren 2004.

Folicul plumifer/pene. Folicul plumifer/pene. Sange. Tesut tumoral. Sange. Tesut tumoral.

Cruste. Splina. Creier. Plex Cruste. Splina. Creier. Plex nervos / nerv sciaticnervos / nerv sciatic

--ficatficatabatorabatorPCPCDBDB

--ovarovar

--nerv sciaticnerv sciatic34 zile34 zilePCPCBCBC

+ 5/7+ 5/7splinasplina28 saptamani28 saptamaniRRGRRGBCBC20122012

--pulmonpulmon

--rinichirinichi

--creiercreierporumbelporumbelBB20102010

++creiercreier

++rinichirinichi

++splinasplina

++ficatficat11 / 17 11 / 17 saptamanisaptamani

RURUVNVN20072007

++noduli / cruste capilarenoduli / cruste capilareadulteadulteRRGRRGCLCL

+ 1/2+ 1/2rinichirinichi

+ 1/2+ 1/2nerv sciaticnerv sciatic

+ 2/2+ 2/2splinasplinaRURUGLGL20052005

++splinasplinaRURUBB20042004

Proba organProba organVarstaVarstaCategorieCategorie

Rezultat PCR Marek, Rezultat PCR Marek, amplicon 669 bpamplicon 669 bp

Origine Origine JudetJudetAnul Anul

--ficatficatabatorabatorPCPCDBDB

--ovarovar

--nerv sciaticnerv sciatic34 zile34 zilePCPCBCBC

+ 5/7+ 5/7splinasplina28 saptamani28 saptamaniRRGRRGBCBC20122012

--pulmonpulmon

--rinichirinichi

--creiercreierporumbelporumbelBB20102010

++creiercreier

++rinichirinichi

++splinasplina

++ficatficat11 / 17 11 / 17 saptamanisaptamani

RURUVNVN20072007

++noduli / cruste capilarenoduli / cruste capilareadulteadulteRRGRRGCLCL

+ 1/2+ 1/2rinichirinichi

+ 1/2+ 1/2nerv sciaticnerv sciatic

+ 2/2+ 2/2splinasplinaRURUGLGL20052005

++splinasplinaRURUBB20042004

Proba organProba organVarstaVarstaCategorieCategorie

Rezultat PCR Marek, Rezultat PCR Marek, amplicon 669 bpamplicon 669 bp

Origine Origine JudetJudetAnul Anul

Detectia virusului bolii Marek prin PCR clasic (2004 - 2012). Procentul probelor pozitive din probele analizate,

pe categorie zootehnica si varsta.

0

10

20

30

40

50

60

70

80

Pui carne (34 zile - abator) RU (11 - 17 saptamani) RRG (28 saptamani)Categorie / varsta

% p

rob

e p

ozi

tive

PC

R M

arek

Detectia virusului bolii Marek prin PCR clasic (2004 - 2012). Procentul probelor pozitive din probele analizate,

pe categorie zootehnica si varsta.

0

10

20

30

40

50

60

70

80

Pui carne (34 zile - abator) RU (11 - 17 saptamani) RRG (28 saptamani)

Categorie / varsta

% p

rob

e p

ozi

tive

PC

R M

arek

ConcluziiConcluzii

Pentru stabilirea incidentei / pagubelor datorate Pentru stabilirea incidentei / pagubelor datorate bolii Marekbolii Marek,, Institutul Pasteur ofera serv Institutul Pasteur ofera serviicii de cii de monitorizare a BM prin teste PCR si examene histo-monitorizare a BM prin teste PCR si examene histo-patologicepatologice

La cerere este posibila dezvoltarea testelor PCR pentru La cerere este posibila dezvoltarea testelor PCR pentru discriminarea tulpinilor vaccinale de cele salbaticediscriminarea tulpinilor vaccinale de cele salbatice

INSTITUTUL PASTEUR INSTITUTUL PASTEUR DIAGNOSTICDIAGNOSTIC

NOI TESTE PCRNOI TESTE PCR AVIAN LEUKOSIS VIRUS:AVIAN LEUKOSIS VIRUS:

all / A / Jall / A / J – PCR/Rpcr – PCR/Rpcr Tampoane (uscate, fara mediu de transport). Folicul plumifer. Sange. Ficat. Creasta. Amprente Tampoane (uscate, fara mediu de transport). Folicul plumifer. Sange. Ficat. Creasta. Amprente

organ.organ. AVIAN RHINOTRACHEITIS VIRUSAVIAN RHINOTRACHEITIS VIRUS: :

LSI (LSI (A/B, CA/B, C) – rPCR) – rPCR All (OIEAll (OIE) / ) / A, B, C, DA, B, C, D – rPCR – rPCR Tampoane (uscate, fara mediu de transport). Trahee. Pulmon Amprente organ. Secretii nazale / Tampoane (uscate, fara mediu de transport). Trahee. Pulmon Amprente organ. Secretii nazale /

bucale / faringiene. Exudate. Pool-uri 1-4 probe; 5-10 probebucale / faringiene. Exudate. Pool-uri 1-4 probe; 5-10 probe ORNITHOBACTERIUM RHINOTRACHEALEORNITHOBACTERIUM RHINOTRACHEALE: :

PCR/rPCRPCR/rPCR Tampoane (uscate, fara mediu de transport). Trahee. Pulmon Cord. Creier. Ficat. Articulatii. Tampoane (uscate, fara mediu de transport). Trahee. Pulmon Cord. Creier. Ficat. Articulatii.

Vertebre toracale. Amprente organ. Secretii nazale / bucale / faringiene.ExudateVertebre toracale. Amprente organ. Secretii nazale / bucale / faringiene.Exudate . . MYCOPLASMA MELEAGRIDISMYCOPLASMA MELEAGRIDIS: :

PCR/rPCRPCR/rPCR Tampoane (fara mediu de transport). Trahee. Pulmon Sac aerian. Articulatii. Amprente organ. Tampoane (fara mediu de transport). Trahee. Pulmon Sac aerian. Articulatii. Amprente organ.

Secretii nazale / bucale / faringiene. Exudate.Secretii nazale / bucale / faringiene. Exudate. MYCOPLASMA IOWAEMYCOPLASMA IOWAE: :

PCR/rPCRPCR/rPCR Tampoane / tampoane cloacale (fara mediu de transport). Trahee. Pulmon Sac aerian. Articulatii. Tampoane / tampoane cloacale (fara mediu de transport). Trahee. Pulmon Sac aerian. Articulatii.

Amprente organ. Secretii nazale / bucale / faringiene.ExudateAmprente organ. Secretii nazale / bucale / faringiene.Exudate. .

SeptembrieSeptembrie 2012 2012