16 biopsia intraoperatoria

PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN

CFGS Anatomía Patológica y Citología 84

UNIDAD DIDÁCTICA 16

MICROTOMÍA POR CONGELACIÓN.

1.- CORTES POR CONGELACIÓN. INTRODUCCIÓN.

1.1.- Ventajas. 1.2.- Inconvenientes.

2. TRATAMIENTO DE LOS CORTES. 3. EL CRIOSTATO. 4. MICROTOMOS DE CONGELACIÓN.

4.1.- Microtomos tipo MINOT. 4.2.- Microtomos específicos.

5.- TÉCNICA PARA EL CORTE POR CONGELACIÓN. 6.- BIOPSIA PREOPERATORIO O EXTEMPORÁNEA. 7.- INCIDENTES MÁS COMUNES EN EL CORTE POR CONGELACIÓN.



1.- CORTES POR CONGELACIÓN. El enfriamiento y la congelación de un tejido le confieren una consistencia tal que puede ser dividido en cortes delgados coloreables inmediatamente. Este es el principio de la microtomía por congelación. Este método como todos, tiene sus limitaciones y presenta una serie de ventajas e inconvenientes.

1.1.- Ventajas. La microtomía por congelación es un método muy rápido, de aquí su extremo interés en los exámenes extemporáneos. La congelación suprime sobre todo, todas las fuentes de artefactos motivados por la deshidratación y la inclusión. Permite mediciones celulares adecuadas y en particular permite la caracterización de los lípidos y de los procesos enzimáticos. Es el método de elección de la histoquímica.

1.2.- Inconvenientes.

Los cortes son generalmente gruesos incluso un técnico entrenado difícilmente puede conseguir grosores de menos de 10-15 micras. Los cortes así obtenidos son de una gran fragilidad, además su grosor es muchas veces irregular. Los tejidos blandos después de la congelación no adquieren una consistencia suficiente. 2.- TRATAMIENTO DE LOS CORTES. Una vez obtenidos los cortes por congelación, se procede a mantenerlos solidamente adheridos sobre el portaobjetos, lo que se consigue normalmente por la diferencia de temperatura entre corte y portaobjetos. No obstante en algunas ocasiones los cortes se desprenden con facilidad por lo que tendremos que preparar previamente la superficie del portaobjetos, recubriéndola de una capa muy fina de glicerina albuminosa que dejará la muestra adherida y preparada para su manipulación previa a la coloración. Si la coloración efectuada lo permite y es de interés, se procederá a un colodionaje, consiguiendo con ello una garantía contra el despegue de la pieza.



3.- EL CRIOSTATO. Los criostatos son cámaras frías dentro de las cuales el microtomo, la cuchilla, los portaobjetos y cubreobjetos así como la pieza a tratar son mantenidas cuidadosamente a una temperatura de -15/-20ºC. Estas condiciones homogéneas de temperatura, facilitan grandemente la microtomización de la pieza y permiten realizar rápidamente y sin que surjan grandes dificultades los portes por congelación de 5-15 micras. Han sido realizados numerosos modelos, unos representan recintos cerrados que dan acceso al microtomo por medio de túneles, estos criostatos son fuertes, escarchean poco pero son fatigantes y de uso difícil. Los otros tienen una puerta de acceso que se abre directamente sobre el microtomo, son de utilización cómoda, pero escarchean mucho a la temperatura ambiente del laboratorio. Para poder producir las temperaturas de congelación dentro del criostato, normalmente se utilizan productos como son GAS FREON, NIEVE CARBONICA etc., los cuales no son aconsejables para producir la congelación de las piezas a tratar pues la congelación de las mismas no se produce lo rápidamente que es aconsejable. Para realizar pues la congelación de piezas, utilizaremos la inmersión en ISOPENTANO y después en NITRÓGENO LÍQUIDO, con lo que aseguraremos una congelación más rápida y unas preparaciones de mejor calidad. Cuanto más baja sea la temperatura, más firmeza tendrá la pieza al cortarla, pero también nos producirá una disminución de la sensibilidad de las manos, limitando su agilidad, por tanto, pondremos especial interés en no cortarnos, eliminando con cubiertas de protección, las zonas no utilizadas del filo de la cuchilla. La manipulación del microtomo dentro del recinto enfriado será la misma que para los microtomos de normal utilización, resaltando que por ser estos criotomos utilizados casi siempre para tejidos sin fijación n inclusión, los cortes obtenidos no forman cintas o series, sino cortes individuales teniendo que ser recogidos uno a uno. La recogida de los cortes se efectúa con facilidad aplicando directamente sobre el mismo un cubreobjetos. El corte se adhiere fácilmente y el calor de un dedo aplicado sobre la cara opuesta del cubreobjetos es suficiente generalmente para el despliegue y adherencia permanente, suficiente para la continuación de las manipulaciones. No es lo mismo en las piezas fijadas, pues no se adhieren y necesitan pasar por un proceso de encolado previo.



4.- MICROTOMOS DE CONGELACIÓN (CRIOMICROTOMOS). Pueden ser de dos tipos:

4.1.- Microtomos de tipo MINOT. Equipados con un sistema que permite el enfriamiento del portabloques y de la cuchilla. Son poco aconsejables pues la congelación suele ser insuficiente y además se fuerza continuamente un microtomo inicialmente diseñado para cortar parafina.

4.2.- Microtomos ESPECIFICOS. Para cortes por congelación (microtomos tipo Letz o Sartorius), poseen un depósito con carbónico en estado líquido que permite su salida en forma de chorro de gas carbónico, el cual produce el enfriamiento del portabloques y de la cuchilla. En estos microtomos la cuchilla posee movimientos en sentido antero-posterior sobre un plano horizontal. Mediante un mando se puede regular la altura del portabloques y con un tornillo micrométrico se regula el avance automático. 5.- TÉCNICA PARA EL CORTE POR CONGELACIÓN. (CRIOMICROTOMOS) La muestra a estudiar debe ser de poco grosor, no más de 5- 6 mm. y de bordes lo más planos y regulares posible. Los tejidos friables como bazo, el sistema linfático o los tumores poco fibrosos han de ser fijados, generalmente con formol, mientras que los tejidos más firmes como corazón, hígado o tumores muy fibrosos, pueden ser cortados sin fijación alguna previa. Cuando haya que fijar conviene evitar los fijadores alcohólicos. El fijador más utilizado normalmente es el Formol al 10%. Colocar sobre el portabloques un pequeño trozo de papel de filtro mojado con agua y sobre él la pieza a estudiar. Se abre la salida de gas carbónico, el cual proyecta como una especie de polvo blanco o nieve carbónica sobre el portabloques. Esto se repetirá varias veces, hasta que la pieza quede rápida y correctamente congelada. Si durante el seccionamiento o corte posterior se observa que la pieza comienza a descongelarse, habrá que proyectar nuevamente gas carbónico cuantas veces sea necesario. Regular la altura del portabloques y el avance automático y proceder seguidamente al corte. Los cortes se van acumulando en la cara superior de la cuchilla; cuando tengamos agua donde se despliegan con rapidez.



Cuando las piezas no han sido fijadas (como ocurre normalmente en los exámenes extemporáneos) los cortes apenas poseen consistencia y se acumulan apelotonándose sobre la cuchilla. Esto puede evitarse enfriando la cuchilla mediante un nuevo chorro de gas carbónico y recogiendo los cortes uno a uno con un portaobjetos (corte y porta se adhieren con facilidad, especialmente si colocamos el pulpejo del dedo en la parte posterior del porta.) 6.- BIOPSIA PREOPERATORIA O EXTEMPORÁNEA. El tratamiento quirúrgico de un tumor se basa principalmente en la naturaleza y el grado de extensión de dicho tumor. En muchas ocasiones la visualización macroscópica del tumor orienta al cirujano sobre la extirpación o exéresis que ha de realizar, pero el examen macroscópico es insuficiente para determinar la naturaleza del tumor y el cirujano se ve obligado a recurrir a un diagnostico antomo-patológico mediante una biopsia peroperatoria que permita un examen histológico rápido. Este estudio suele realizarse mediante dos métodos:

a) Estudio mediante una lupa binocular o un microscopio estereoscópico de un corte de la pieza. Para ello fijaremos el corte con una mezcla de formol y alcohol metílico, tomaremos con azul de Toluidina alcohólico al 1% y seguidamente eliminaremos el exceso de colorante, pudiendo de esta manera establecerse un diagnóstico histológico. No obstante este tipo de estudio no se utiliza casi en la actualidad, por no permitir su estudio citológico.

b) Estudio por transparencia en el microscopio óptico: para ello se realizan cortes por

congelación, con o sin fijación previa. La tinción más utilizada es la Hematoxilina-Eosina rápida, conviniendo además hacer frotis o improntas de la lesión, utilizando coloraciones como el May—Grunwald—Giemsa o el Panóptico de Wright.

7.- INCIDENTES MÁS COMUNES EN EL CORTE POR CONGELACIÓN. LA PIEZA NO SE CONGELA. Ocurre como consecuencia de:

La platina se enfría pero se no cubre de escarcha. La platina se cubre de escarcha.

Solución:

El tubo de gas esta vacío o tiene escape, cambiar. El tubo tiene una mala colocación, esta invertido, ponerlo bien. Se ha utilizado un fijador alcohólico.



LA PIEZA SE DESPRENDE DE LA PLATINA DESDE LOS PRIMEROS CORTES. Ocurre como consecuencia de:

La cara inferior de la pieza es irregular. Una película de hielo se ha interpuesto entre la pieza y la platina.

Solución:

Recortar el bloque. Apoyar bien sobre el bloque. Interponer una hoja de papel de filtro.

LOS CORTES SE PULVERI ZAN Ocurre como consecuencia de:

La cuchilla está mal afilada. La pieza esta demasiado fría.

Solución:

Cambiar la cuchilla. Pulir la cuchilla nuevamente. Esperar un poco y que tome temperatura la pieza.

LOS CORTES SE ROMPEN Y FORMAN UN MAGNA SOBRE LA CUCHILLA. Ocurre como consecuencia de:

La pieza no esta bastante fría. La pieza ha estado mal o demasiado rápidamente fijada.

Solución:

Congelarla de nuevo. Hacer cortes más gruesos. Enfriar más la cuchilla y recoger los cortes individualmente.

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