INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL- ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Efecto de los colorantes sobre el crecimiento de

los microorganismosLaboratorio de microbiología general

Grupo 3QM1Laboratorio 3 y 4. Equipo 6

IntroducciónUn colorante es un compuesto orgánico natural o sintético, que al aplicarlo a un sustrato le confiere un color más o menos permanente.

Las sustancias coloreadas son las que absorben luz en la región visible del espectro (400 a 750 nm). Una sustancia presenta el color complementario del que absorbe ya que este se resta de la luz reflejada o transmitida. F. Klages.Tratado de Química Orgánica. Colorantes. 1968

Naturaleza química de los colorantesCromóforos: (del griego portador de color) es el responsable del color.

Son rearreglos de dobles enlaces conjugados en sistemas aromáticos o lineales, que dan la disponibilidad electrónica para absorber cuantos de la región del visible del espectro electromagnético, poseen átomos electrodonadores o electroatractores al final de estas conjugaciones.

NITRONITROSO

IMINA

AZO

JA Kiernan. Classification and naming of dyes, stains and fluorochromes. Biotechnic and Histochemistry · September 2001

Auxocromos: Evita las interferencias generadas en el cromóforo, intensificando el color del mismo y también permite acoplarse a las estructuras deseadas de un sustrato.

BÁSICOS O CATIÓNICOS:

ÁCIDOS O ANIÓNICOS:

-COOH, -OH, -SO3H-NHR, -NR2, -NH

FRY, B. A. (1957). J. gen. Microbiol. 16, 341-349

Usos de colorantes en microbiología

Colorantes por acción antimicrobiana

Derivados del trifenilmetano. Intervienen en la síntesis de pared celular.

Ejemplos: Verde brillante, Verde de malaquita, Cristal violeta.

Derivados de la acridina. Intervienen en la síntesis de ácidos nucléicos y proteínas.

Ejemplos: Acriflavina, Proflavina, Naranja de acridina.

Feduchi, Blasco, Romero, Yánez. Bioquímica. Conceptos esenciales. 2010.

Derivados del trifenilmetano. Mecanismo de acción:

La Pseudobase, adquiere carácter más lipofílico, lo que le confiere una mejor incorporación a la célula, y posteriormente pueda fijarse a los grupos Fosfato de los ácidos nucléicos.

Se ha demostrado su capacidad inhibitoria en la síntesis de glutamina en modelos bacterianos de Staphylococcus aureus. (Fry,1957).

Verde de Malaquita Cristal violeta

Estructuras de los colorantes

Derivados de la acridina. Mecanismo de acción:

Cuadro tomado de: Journal of Antimicrobial Chemotherapy (2001) 47, 1-13

Su mecanismo de acción es, la formación de un complejo DNA-acridina, que interfiere en la biosíntesis de ácidos nucléicos.

Azul de metileno

Safranina

Proflavina

Naranja de acridina

Estructuras de los colorantes

ObjetivoRealizar dos técnicas que permitan observar el efecto de los colorantes sobre la viabilidad de los los microorganismos.

ProcedimientoI. Efecto de colorantes en tubo

*La concentración de colorante en el tubo 1 es de 2 (㎍ / mL)Los colorantes utilizados fueron: cristal violeta, safranina, azul de metileno y verde de malaquita

II. Efecto de los colorantes en placa

*Las 3 concentraciones de los colorantes en las cajas fueron de: 1 ㎍ / mL, 0.1 ㎍ / mL y 0.01 ㎍ / mL

Resultados en tubo Laboratorio 3

Colorante

Escherichia coli Staphylococcus aureus

Dilución CMI (㎍ / mL)

Efecto Dilución CMI (㎍ / mL)

Efecto

Cristal violeta

10-1 2 bactericida

10-2 0.2 bactericida

Safranina

- >2 bactericida

10-2 0.2 bactericida

Azul de metileno

- >2 bactericida

10-2 0.2 bactericida

Verde de malaquit

a

- >2 bactericida

10-3 0.02 bactericida

CMI= Concentración mínima inhibitoria

- = Se desconoce la dilución

Resultados en tubo Laboratorio 4

Colorante

Escherichia coli Staphylococcus aureus

Dilución CMI (㎍ / mL)

Efecto Dilución CMI (㎍ / mL)

Efecto

Cristal violeta

10-2 0.2 X 10-8 2X10-7 X

Safranina

- >2 X - >2 X

Azul de metileno

- >2 X 10-1 2 X

Verde de malaquit

a

- >2 X No se sembróCMI= Concentración mínima inhibitoria

- = Se desconoce la dilución X= no se determinó

Resultados en tubo ambos laboratorios

Safranina

Dilución Escherichia coli Bacillus subtilis Staphylococcus aureus Klebsiella pneumoniae

10-4 + +/- +/- +

10-5 + +/- +/- +

10-6 + + +/- +

CMI >1μg/ml >1μg/ml >1μg/ml >1μg/ml

Cristal violeta

10-4 - - - +

10-5 - - - +

10-6 - - - +

CMI <0.01μg/ml <0.01μg/ml <0.01μg/ml >1μg/ml

Resultados en en placa Laboratorio 4

Resultados en en placa Laboratorio 3Safranina

Dilución Escherichia coli Bacillus subtilis Staphylococcus aureus Klebsiella pneumoniae

10-4 + +/- +/- +

10-5 + +/- +/- +

10-6 + + +/- +

CMI >1μg/ml <0.1μg/ml <0.1μg/ml >1μg/ml

Cristal violeta

10-4 - - - +

10-5 - - - +

10-6 - - - +

CMI <0.01μg/ml <0.01μg/ml <0.01μg/ml >1μg/ml

EvidenciasEvidencias del crecimiento con Safranina en placa

Dilución 10-6 Dilución 10-5 Dilución 10-4

Bacillus subtilis, Escherichia coli Escherichia coli (+) Escherichia coli (+) Klebsiella pneumoniae (+) Klebsiella pneumoniae (+) Klebsiella pneumoniae (+)

Donde 1: Bacillus subtilis 2: Escherichia coli 3: Staphylococcus aureus 4: Klebsiella pneumoniae

EvidenciasEvidencias del crecimiento con Cristal violeta en placa

Dilución 10-6 Dilución 10-5 Dilución 10-4

Klebsiella pneumoniae (+) Klebsiella pneumoniae (+) Klebsiella pneumoniae (+)

Donde 1: Bacillus subtilis 2: Escherichia coli 3: Staphylococcus aureus 4: Klebsiella pneumoniae

BibliografíaFeduchi, Blasco, Romero, Yánez. Bioquímica. Conceptos

esenciales. 2010.Editorial Médica Panamericana.F. Klages.Tratado de Química Orgánica. Colorantes. 1968. Ed.

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