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Campus científico de verano
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CAMPUS CIENTÍFICOS DE VERANO 2012
Envejecimiento y muerte celular:
APOPTOSIS
Ana Salas Bustamante.
Unidad de Ensayos Biotecnológicos y Biomédicos - Citometría
Marta Alonso Guervós.Unidad de Microscopía Fotónica y Proceso de Imágenes
Servicios Científico-Técnicos
CAMPUS CIENTÍFICOS DE VERANO 2012
Apoptosis = muerte celular programada
Funciones de la apoptosis
1- Eliminación de tejidos dañados o infectados
2- Desarrollo
3- Regulación vida-muerte (Homeostasis)
4- Regulación del sistema inmunitario
CAMPUS CIENTÍFICOS DE VERANO 2012
FASES DEL CICLO CELULAR
Fase S(síntesis)
Fase G2
Mitosis
Fase G1 /G0
Células que abandonan el ciclo celular y entran en
apoptosis
CAMPUS CIENTÍFICOS DE VERANO 2012
(www.microbiologybytes.com )
Fases de la apoptosis
Célula normal Disminución del
tamaño de la célula
Condensación de la cromatina y
disminución tamaño de la célula
Lisis de
cuerpos apoptóticos
Colapso nuclear
Continua la disminución del citoplasma celular
Formación de
cuerpos apoptóticos
CAMPUS CIENTÍFICOS DE VERANO 2012
- Marcaje de un cultivo celular con IP y Anexina-V
- Cuantificación de apoptosis por citometría de flujo
- Visualización de apoptosis por microscopía óptica
Taller: Prueba para analizar apoptosis
Tinción con ioduro de propidio (IP) y anexina-V marcada con un fluorocromo (FITC)
CAMPUS CIENTÍFICOS DE VERANO 2012
Prueba para analizar apoptosisTinción con ioduro de propidio (IP) y anexina-V marcada con un fluorocromo (FITC)
Cuadrado 1. Célula normal viable: IP y anexina-V quedan fuera de la célula.
Cuadrado 2. Fase temprana de apoptosis: anexina-V se une a la membrana plasmática de la célula y el IP se quedan fuera .
Cuadrado 3. Fase tardía de apoptosis: anexina V se une a la membrana plasmática de la célula y el IP entra en la célula.
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CAMPUS CIENTÍFICOS DE VERANO 2012
Citometría de flujo. Método analítico basado en medir múltiples fluorescencias y dispersión de la luz (“light scatter”) de células o partículas microscópicas alineadas secuencialmente mediante una corriente líquida (flujo laminar) cuando son presentadas de una en una a gran velocidad (miles porsegundo) frente a un haz de luzláser de longitud de ondaadecuada.Sorting. Método de separacióncelular basado en la citometría de flujo en el que se consigue separarcélulas mediante la ruptura del flujolaminar en microgotas que portanlas células en su interior y queposteriormete son atraídaselectrostáticamente y recogidas en distintos recipientes.
Citometría de flujo
CAMPUS CIENTÍFICOS DE VERANO 2012
Apoptosis por citometría de flujo
Cuantificación de la población decélulas apoptóticas en función de lacantidad de fluorescencia deAnexina V-FITC e IP de la muestra.
N4 = población apoptótica
CAMPUS CIENTÍFICOS DE VERANO 2012Fluorescencia
Microscopio láser confocal
CAMPUS CIENTÍFICOS DE VERANO 2012
Apoptosis por microscopía láser confocal
Célula apoptótica.Mezcla de una imagen de transmisión (imagen gris) y una imagen de fluorescencia (señal verde)
CAMPUS CIENTÍFICOS DE VERANO 2012
Enfermedades asociadas a la apoptosis
* Con la inhibición de apoptosis:
- Cáncer
- Enfermedades virales
- Enfermedades autoinmunitarias
* Con el aumento de apoptosis:
- Sida
- Enfermedades neurodegenerativas (Alzheimer, parkinson...)
CAMPUS CIENTÍFICOS DE VERANO 2012
(SPI. Universidad de Oviedo)
www.sct.uniovi.es
Tutoriales “Citometría de flujo” y "Microscopio Confocal"