Click here to load reader
Upload
ege-university-faculty-of-pharmacy-department-of-pharmacognosy
View
164
Download
2
Embed Size (px)
Citation preview
Droglar Üzerinde Standardizasyon Parametreleri
Prof. Dr. Hüsniye KAYALARE.Ü. Eczacılık Fakültesi
Farmakognozi Ana Bilim Dalı[email protected]
Bitkisel ilaçlarda kalite sorunları: 1-Bitki türleri arasındaki farklılıklar, 2-Anlık ve mevsimsel değişikliklere bağlı olarak aktif kimyasal
maddelerin bitki içindeki miktarlarının değişebilmesi, 3-Çevresel faktörler (ürün kalitesinde değişiklikler), 4-Farklı tarım metotları, 5-Hasat sonrası depolama şartları, 6-Bitkisel ilaçların üretimindeki farklılıklar, 7-Toksik maddelerle ve mikrobiyolojik kontaminasyon, 8-GAP (Good Agricultral Practice) ve GMP (Good Manufacturing
Practice) kurallarına uymama, 9-Hileli farmasötiklerin kullanılması, 10-Yasaklanmış hayvansal/bitkisel maddelerin karışımlara eklenmesi, 11-Kullanım süresi geçmiş preparatların piyasaya sürülmesi, 12-İlaç etkileşimleri ve diğer yan etkiler hakkında bilgi verilmemesi, 13-Yeterli bilimsel çalışma yapılmaması. Farmakokinetik, farmako
dinamik özellikler, etkinlik ve güvenlikle ilgili bilgilerin kısıtlı olması
Droglar üzerinde Standardizasyon Parametreleri
1-Çözücü ile ekstraksiyon verimi2-Kül miktar tayini (total kül, sülfat külü,
hidroklorik asitte çözünmeyen kül tayini)3-Toplam katı madde tayini4-Toplam lif Tayini5-Toplam nem tayini6-Uçucu yağ tayini7-Mikrobiyal kontaminasyon tayini8-Acılık değeri tayini9-Hemolitik aktivite tayini
10-Şişme indisi tayini11-Köpürme indisi tayini12-Tanen miktar tayini13-Arsenik ve ağır metal tayini (AAS-atomic
absorbtion spectrometry; ICP-inductively coupled plasma; NAA-neutron activation analysis)
14-Pestisit Tayini
6.2. Fitokimyasal AnalizlerBitkisel droglarda bulunan organik maddeler1-Karbonhidratlar2-Glikozitler3-Tanenler4-Proteinler ve amino asitler5-Renk maddeleri6- Sabit yağlar ve mumlar7- Uçucu yağlar8- Alkaloitler9- Fenolik bileşikler10- Polisakkaritler
6.3. Ekstre ve izolatların analizi (kalitatif analiz, kantitatif analiz, biyolojik analiz)
6.4. Son Ürün6.4.1. Stabilite 6.4.2. Güvenlik6.4.3.Etkinin saptanması6.4.4.Tüketici Bilgileri
*Tıbbi bitkisel üründe aktif bileşenlerin kalitatif ve kantitatif özellikleri
1-Bitkisel ilaç kıyılmış veya toz edilmiş bitki kısımlarından oluşuyorsa
i-terapötik aktivitesi bilinmiyorsa bitkisel materyalin miktarı verilir.
(örn Valerianae radix ….. 900 mg)ii-terapötik aktiviteden sorumlu bileşenler
biliniyorsa bu bileşenlere ekivalen miktarlar verilir (örn. Sennae folium 415-500 mg, Sennoside B
üzerinden hesaplanmış 12.5 mg hidroksiantrasen glikozitlerine eşdeğer)
Bitkisel ilaç ekstre edilmiş materyalden oluşuyorsa
Ekstraksiyonda kullanılan çözücücünün oranı ve verimi ile birlikte ekstre miktarı, eğer aktiviteden sorumlu bileşenler biliniyorsa, bu bileşenlerin miktarına eşdeğer ekstre miktarı verilir.
örnek Valerianae radix kuru etanol ekstresi % 60 (v/v) Sennae folium kuru etanol ekstresi % 60 (v/v) 50-
65 mg, 12.5 sennoside b üzerinden hesaplanmış hidroksiantrsen glikozitlerine eşdeğer
-dozaj formu-endikasyonları-dozu-uygulama şekli-kullanım süresi-majör yan etkileri-doz aşımı-kontrendikasyonu, uyarılar, önlemler, majör
etkileşimler-hamilelik ve emzirme döneminde kullanım
-son kullanma tarihi-seri numarası-satış ruhsat izin bilgileri bulunmalıdır 6.4.5.Son Üründe Kontrol Testleri
RADIX GINSENGKALİTE KONTROLÜ VE STANDARDİZASYONU
GINSENG RADIXDroğun Tanımı: Radix Ginseng, Nepal ve Mançurya'dan Doğu
Sibirya ve Kore'ye kadar uzanan oldukça geniş bir coğrafyada yabani olarak yetişen Panax ginseng C.A.Mey. başta olmak üzere diğer bazı Panax türlerinin (Araliaceae) ilkbahar ve sonbaharda topraktan çıkarılıp kökçüklerinden temizlendikten sonra birkaç dakika süreyle kaynar suya batırılıp sıcak havada kurutulmuş köklerinden ibarettir.
Panax repens Maxim türü ile Kuzey Amerika'da, Doğu Kanada'dan Florida'ya kadar tüm doğu kıyılarında bulunan Panax quinque-folium L. türü de tıbbi olarak kabul edilen türlerdir. Drog 10 veya daha yukarı yaş olgunluğuna erişmiş fertlerden üretilir.
Ticarette kırmızı ve beyaz türleri mevcut olup kırmızı tür daha değerlidir.
önemli üretici ülkeler Hong-Kong, Singapur, Tayvan, Kore ve
ÇinEn makbul sayılanı Kore'nin kırmızı
ginsengidir.
Kullanım Yerleri: Radix Ginseng çay halinde veya daha iyisi güvenilir fitofarmakonları halinde;
1- Yorgunluk ve bitkinlik gibi genel halsizlik durumlarıyla astenide,
2- Nekahat dönemlerinde, 3- Fitokozmetoloji'de
Sunuş Şekilleri: Bazı ülkelerde drog (Ginseng Radix), çay olarak kullanılmak üzere standardize edilip kabaca toz edilmiş drog (Ginseng Pulvis normatus) ile ekstre fluidi (Ginseng Extractum fluidum) ve özellikle ekstresi (Ginseng Extractum siccum) gibi galenik preparatları mevcut ise de en iyisi güvenilir fitofarmakonları halinde kullanılmasıdır. En kaliteli doğal kök ekstresi, Kore'de devlet kontrolünde üretilen koyu şurubumsu bir ekstredir. Yüksek kaliteye sahip standart bir üründür. Yine İsviçre'de Lugano şehrinde "Ginseng Products (Pharmaton)" tarafından da bir ekstre üretilmektedir. G 115 Ginseng ekstresi adı verilen bu ekstre de standart bir ekstredir.
Botanik özellikleri
Drog Enine Kesiti Mikroskobik Görüntüsü
Toz drog inceleme
Kırmızı Ginseng mikroskobik preparatı
Beyaz Ginseng mikroskobik preparatı
Beyaz ginseng türünde nişasta taneleri ayrı gözlenirken Kırmızı Ginseng’de bu tanecik yapısı kısmen bozulmuş ve küme oluşturmuştur.
İNCE TABAKA KROMATOGRAFİSİ
HPLC
HPLC UV Dedektör: 203 nm dalga boyuKolon: 4.6 x 250 mm ODS bağlı silikajel 5
mikrometre partikül boyutuKolon sıcaklığı: 25 °CAkış hızı: 1.6 ml/dkMobil faz: su, asetonitril0-20 dk….%80 su, % 20 asetonitril izokratik elüsyon20-60 dk ….%80--%58 su, % 20---%42 asetonitrl
linear gradient elüsyon
HPLC
Pharmaton® vitality
CYDONIA OBLONGA MILLER BİTKİSİNİN BİYOLOJİK AKTİVİTE YÖNÜNDEN DEĞERLENDİRİLMESİ
GENEL BİLGİLER
C. oblonga Miller Rosaceae familyasına dahildir.
Ülkemizde özellikle Batı Anadolu’da yetişmektedir.
Mayıs- Haziran aylarında çiçek açmaktadır.
Boyu 8 m kadar olabilen, çalı görünümlü bir ağaçtır.
GENEL BİLGİLER
Dalları gençken tüylü, sonraları tüysüz,Yaprakları 10×7 cm; oval, yumurta veya
yuvarlağımsı biçimde,Yaprak sapı 1-2 cm uzunluğunda,Çiçekleri 5-6 cm uzunluğunda,Meyveleri 3-12 cm boyunda; armut veya
küremsi şekillidir.
GENEL BİLGİLER
Halk hekimliğindeki kullanımları :1. Yaprakları;Öksürük,Astım,Böbrek taşları,Baş ağrısı,Hipertansiyon,Karın ağrısı,
Soğuk algınlığı Grip tedavisinde, Boğaz ağrısı, Bronşit
tedavisinde, Diüretik olarak,
GENEL BİLGİLER
2. Çiçek sapı; Bronşiyal yatıştırıcı olarak,3. Tohumları; Diyarede,4. Meyveleri; Öksürük, Sistit tedavisinde kullanılmaktadır.Yurt dışında da halk hekimliğinde çeşitli kullanımlara sahiptir.
GENEL BİLGİLER
C. oblonga Miller çok geniş yayılış gösterdiği için, yapılan literatür araştırmalarında, bitki hakkında çeşitli araştırmalar yapılmıştır.
BOTANİK BÖLÜM
C. oblonga Miller, Rosales takımının, Rosaceae familyasının, Pomoideae (Maloideae) alt familyasının Cydonia cinsine girer.
Cydonia cinsi içerisinde bu türden başka Cydonia sinensis Thouin ve Cydonia japonica Pers. olmak üzere iki tür daha vardır.
C. sinensis Thouin
C. japonica Pers.
BOTANİK İNCELEMELER
C. vulgaris türü içerisinde 2 botanik varyete bulunmaktadır: C. vulgaris maliformis ve C. vulgaris piriformis
Sinonimleri: Pyrus cydonia L., Cydonia vulgaris Pers.
Yabani ve kültüre edilmiş şekilde yetişebilmektedir.
BOTANİK İNCELEMELER
Türkiye’de özellikle Batı Anadolu’da,Kuzey Batı İran, Kuzey Kafkasya, Hazar denizi dolayları,Kuzey Anadolu,Türkistan,Avrupa’nın güney bölgeleri, Kuzey
Afrika’ya kadar dağılış göstermektedir.
BOTANİK İNCELEMELER
Ülkemizde yetiştirilen ayva çeşitleri:
1. Bardak Ayvası2. Demir Ayvası3. Ekmek Ayvası4. Limon Ayvası5. Eşme Ayvası
BOTANİK İNCELEMELER
C. oblonga Mill. bitkisinin yaprakları, 06.12.2009 tarihinde bitki meyveli haldeyken, ve 23.04.2010 tarihinde bitki çiçekli durumdayken İzmir ilinin Kemalpaşa ilçesinin Yeni Mezarlık mevkiinden toplanmıştır.
BOTANİK İNCELEMELER
Bitkiye ait herbaryum örnekleri, Ege Üniversitesi Eczacılık Fakültesi Farmakognozi Anabilim Dalı Herbaryumu’nda 1419 ve 1420 numaraları ile kayıtlıdır.
BOTANİK İNCELEMELER
70°’lik etanol içinde saklanan bitkinin yaprak kısmı anatomik ve mikroskobik incelemeler için kullanılmıştır.
BOTANİK İNCELEMELER
KİMYASAL BÖLÜM
1. Nem Miktar Tayini2. Total Kül Miktar Tayini3. Sülfat Külü Miktar Tayini4. Hidroklorik Asitte
Çözünmeyen Kül Miktar Tayini
KALİTE KONTROL ÇALIŞMALARI
Nem Miktar Tayini
Sabit vezinde cam tartım
kabı~ 1 g Drog
105 °C’lik etüv
Sabit vezne gelen drog
KALİTE KONTROL ÇALIŞMALARI
Total Kül Miktar Tayini
Sabit vezinde kroze
~ 1 g Drog
600°C’lik yakma fırını
Sabit vezne gelen drog
KALİTE KONTROL ÇALIŞMALARI
Hidroklorik Asitte Çözünmeyen Kül Miktar Tayini
Distile su+HCL
Total kül miktar tayini
Plak ısıtıcıda ısıtılır
Kül bırakmayan süzgeç kağıdından
süzülür
Sabit vezne gelen drog
KALİTE KONTROL ÇALIŞMALARI
Sülfat Külü Miktar Tayini
Sabit vezinde kroze
~ 1 g Drog
600°C’lik yakma fırını
%10 H2SO4% 15.8
Amonyum karbonat
Sabit vezne gelen drog
KALİTE KONTROL ÇALIŞMALARI
Drogdan;1. Etanol ekstresinin hazırlanması,2. Etil asetat ekstresinin hazırlanması,3. N-hegzan ekstresinin hazırlanması,4. İnfüzyonunun hazırlanması.
FİTOKİMYASAL ANALİZLER
Daha önce yapılan çalışmalarda ayva yaprağının büyük miktarda flavonoid ve fenolik bileşikler, az miktarda tanen ve çok az miktarlarda da alkaloit, steroidal sapogenoller, triterpenik saponozit nişasta içerdiği bulunmuştur.
FİTOKİMYASAL ANALİZLER
Tanen Teşhisi
1 g ekstre2 ml suda çözündürül
ür
1-2 damla %5’lik FeCl3
Oluşan çökelti mavi
renkli ise TANEN √
FİTOKİMYASAL ANALİZLER
Flavonozoit Teşhisi (Shibata=Siyanidin Reaksiyonu)
30 mg ekstre 3 ml etanol
0.2 mg Mg tozu
Derişik HCl
Turuncu mor renk oluşursa
FLAVONOZOİT √
FİTOKİMYASAL ANALİZLER
Alkaloit Teşhisi
20 mg ekstre
5 ml 1 N sülfürik asitle
çalkalanır
2 ayrı tübe alınır
Mayer reaktifi
ilave edilir
Dragendorff reaktifi
ilave edilir
Çökelti beyaz renkli ise
ALKALOİT √
Çökelti turuncu renkli ise ALKALOİT
√
FİTOKİMYASAL ANALİZLER
Steroidal Sapogenollerin Teşhisi (Salkowski Deneyi)
20 mg ekstre
% 10’luk H2 SO4 ile hidroliz edilir
Süzülür
Kloroformla
çalkalanırKloroformlu
tabaka alınır
Kloroformlu kısım
1-2 damla derişik H2SO4
Önce sarı renkli halka oluşur
Bekledikten sonra kan
kırmızısı renk oluşursa
STEROİDAL SAPOGENOLL
ER √
FİTOKİMYASAL ANALİZLER
Triterpenik Saponozitlerin Teşhisi
1-2 mg ekstre
Anisaldehit-Süfürik
asit damlatılır
Pembeden mora renk değişimi varsa TRİTERPENİK SAPONOZİT √
FİTOKİMYASAL ANALİZLER
Nişasta Teşhisi
1 mg ekstre
1 ml su ile kaynatılır
Soğutulur
Süzülür
Süzüntü 1 damla %1’lik İyot
Koyu mavi renk oluşursa NİŞASTA √
FİTOKİMYASAL ANALİZLER
BİYOLOJİK AKTİVİTE TAYİNLERİ
SİTOTOKSİK AKTİVİTE TAYİNİ3.8 g deniz tuzu, 100 ml
distile suda çözülür.Tuzlu su tanka konur ve
üzerine Brine Shrimp yumurtaları eklenir.
Devamlı ışık altında bırakılan yumurtalardan, 2 gün içinde içinde larvalar çıkar.
SİTOTOKSİK AKTİVİTE TAYİNİMaddelerden; 1000, 100, 10 ppm olmak
üzere 3 ayrı konsantrasyonda çözeltiler hazırlanır.
48 saat sonra Brine Shrimp larvaları yumurtadan çıkıp, hazır hale gelince her flakona 5 ml %3.8’lik deniz tuzu çözeltisi eklenir ve 10 larva sayılarak konur.
24 saat sonunda, yaşayan Brine Shrimp larvaları sayılır ve kaydedilir.
Veriler bilgisayar yardımıyla değerlendirilerek LC50 değerleri hesaplanır.
Bacillus cereus Staphylococcus
aureus Streptococcus
epidermidis Enterecoccus
faecalis Escherichia coli Pseudomonas
aeruginosa Proteus vulgaris
Salmonella typhimurium
Candida albicans Metisilin-Oksasiline
dirençli Staphlococcus aureus
Escherichia coli (Hemorajik)
ANTİMİKROBİYAL AKTİVİTE TAYİNİ1. Test Mikroorganizmaları ve Büyüme
Şartları
ANTİMİKROBİYAL AKTİVİTE TAYİNİ1. Test Mikroorganizmaları ve Büyüme
Şartları
Bakteriler; %10 gliserin içeren Brain-Heart İnfüzyon
(BHI) besiyerinde -80 °C’de stoklanmış, Nutrient Broth (NB) besiyerinde 35 °C’de
18-24 saat, Maya;
Sabouraud Dekstroz Broth (SDB) besiyerinde 25 °C’de 48 saat inkübe edilerek aktifleştirilmiştir.
ANTİMİKROBİYAL AKTİVİTE TAYİNİ1. Test Mikroorganizmaları ve Büyüme
Şartları
Brain Heart İnfüzyon (BHI) besiyeri:Besin substratı (beyin ekstraktı, kalp
ekstraktı ve peptonlar) 27,5 gD(+) glukoz 2,0 gNaCl 5,0 gNa2HPO4 2,5 gDistile su 1000 ml
ANTİMİKROBİYAL AKTİVİTE TAYİNİ2. Kullanılan Besiyerleri ve Çözeltiler
Nutrient Broth (NB) besiyeri:Et ekstraktı 3,0 gPepton (Et) 5,0 gDistile su 1000 mlo Sabouraud Dekstroz Broth (SDB) besiyeri:Pepton (Et) 5,0 gPepton (Kazein) 5,0 gD(+) glukoz 20,0 gDistile su 1000 ml
ANTİMİKROBİYAL AKTİVİTE TAYİNİ2. Kullanılan Besiyerleri ve Çözeltiler
Sabouraud Dekstroz Agar (SDA) besiyeri:Pepton 10,0 gD(+) glukoz 20,0 g/lAgar-agar 17,0 gDistile su 1000 mlo Mueller Hinton Broth (MHB) besiyeri:Et ekstraktı 2,0 gKazein hidrolizat 17,5 gNişasta 1,5 gDistile su 1000 ml
ANTİMİKROBİYAL AKTİVİTE TAYİNİ2. Kullanılan Besiyerleri ve Çözeltiler
Mueller Hinton Agar (MHA) besiyeri:Et ekstraktı 2,0 gKazein hidrolizat 17,5 gNişasta 1,5 gAgar 13,0 gDistile su 1000 mlo Serum fizyolojik (% 0.9 Tuzlu su)
ANTİMİKROBİYAL AKTİVİTE TAYİNİ2. Kullanılan Besiyerleri ve Çözeltiler
Disk Difüzyon metodu:
ANTİMİKROBİYAL AKTİVİTE TAYİNİ3. Antimikrobiyal Aktivitenin Belirlenmesi
Bakteri ve maya suşları
aktifleştirilir
MHA/SDA besiyerinin
yüzeyine inokule edilir
20 µl ekstre solüsyonuyla 6 mm çapındaki filtre kağıt
diskler doyurulur
Filtre kağıt diskler MHA/SDA petrileri
yüzeyine yerleştirilir
Bakteriler 35ºC’de 24-48 saat, maya ise 25ºC’de 48 saat
inkübasyondan sonra inhibisyon zonları milimetrik olarak
ölçülür
Kuyu Difüzyon metodu:
ANTİMİKROBİYAL AKTİVİTE TAYİNİ3. Antimikrobiyal Aktivitenin Belirlenmesi
Bakteri ve maya suşları
aktifleştirilir
24 ml MHA/SDA besiyerine ilave
edilir9 cm çaplı
petri kaplarına dökülür
Katılaştıktan sonra besiyeri üzerinde delici yardımıyla 6
mm çapında 6 adet kuyu açılır
Kuyu içerisine 50 µl ekstre solüsyonu
ilave edilir
Bakteriler 35ºC’de 24-48 saat, maya ise 25ºC’de 48 saat
inkübasyondan sonra inhibisyon zonları milimetrik olarak
ölçülür
Mikrodilüsyon metodu:
ANTİMİKROBİYAL AKTİVİTE TAYİNİ3. Antimikrobiyal Aktivitenin Belirlenmesi
Bakteri ve maya suşları
aktifleştirilir
MHB/SDB besiyerinin
besiyerinde 100 kat dilüe edilir
Ekstrenin çift katlı dilüsyon serileri, U tabanlı ve
kuyucuklu steril mikroplak içerisinde MHB ile ilk kuyucuklardan yan kuyucuklara doğru
seyreltilerek, 50 µl hacimde hazırlanır
Bakteriler 35ºC’de 24-48 saat, maya ise 25ºC’de 48 saat
inkübasyondan sonra MİK ölçülür
ANTİOKSİDAN AKTİVİTE TAYİNİ
Belli konsantrasyon aralığındaki seyreltilmiş
örnek ekstraktların üzerine Uygun
oranda seyreltilmiş α-tokoferol
konur4 ml % 0.004’lük DPPH çözeltisi
eklenir30 dk oda ısısında
karanlıkta bekletilirAbsorbans değeri,
517 nm de metanole karşı ölçülür
1. DPPH Radikali Yakalama Aktivitesi
ANTİOKSİDAN AKTİVİTE TAYİNİ2. ABTS.+Radikal Katyon Yakalama
Aktivitesi Ekstreler belirli konsantrasyonlarda, uygun çözücülerde
çözülür
0.1 ml ekstre
10 µl α-tokoferol standart çözeltisi
ABTS.+ çözeltisin
e ilave edilir
30 °C’de 734 nm deki absorbans değişimi 6 dk
süresince izlenir
ANTİOKSİDAN AKTİVİTE TAYİNİ3. Toplam Fenolik Madde Analizi
0.1 ml ekstrakt çözeltisi
2.8 ml deiyonize su
2 ml % 2’lik Na2(CO)3
0.1 ml % 50’lik Folin Ciocalteu reaktifi
Absorbans değeri, 750 nm de suya
karşı ölçülür
25 °C’de karanlıkta
30 dk bekletilir
ANTİOKSİDAN AKTİVİTE TAYİNİ4. Toplam Flavonoid Madde Analizi
0.5 ml ekstrakt çözeltisi
1.5 ml % 95’lik etanol 0.1 ml AlCl3
2.8 ml deiyonize
su
40 dk inkübasyona bırakılır
Absorbans değeri, 415 nm de etanole
karşı ölçülür
UÇUCU YAĞ ELDESİ
UÇUCU YAĞ ELDESİÇalışmamızda, C. oblonga bitkisinin
yaprak kısımlarında uçucu yağ eldesinde su distilasyon yöntemi kullanıldı.
Laboratuarda Clevenger apareyinde yapılan su distilasyon işlemi için yaklaşık 100 g materyal 2 lt’lik balona doldurulduktan sonra 1 lt su ilave edilerek 4 saat süreyle işlem sürdürülmüştür.
Materyalimizden elde edilen uçucu yağ içindeki bileşenler, Gaz Kromatografisi kolonundan ayrılıp iyonlaştırıldıktan sonra her bileşenin tek tek kütle spektrumları alınmıştır.
RUTİNİN YÜKSEK BASINÇLI SIVI
KROMATOGRAFİSİ (HPLC) İLE MİKTAR
TAYİNİ
Hemoroid, varis, iç kanamaları ve felçleri önleme,
Platelet agregasyonunu önleme,
Hasar görmüş venler ve arterleri onarma,
Kanser tedavisinin yan etkilerini ortadan kaldırma,
Ağız içindeki kabarıklıklar ve
yaraların kapanmasında,
Sindirim hareketini düzenleme,
Aldoz-redüktaz aktivitesini inhibe etme,
Hemofili semptomları ve kalp rahatsızlık riskini azaltma,
Kolestrolü düşürme,
MİKTAR TAYİNİRutin insan sağlığı açısından çok
önemlidir.
MİKTAR TAYİNİ
~500 mg drog
Metanolle karıştırıldı(50 mlx3)
Süzgeç kağıdından geçirilerek süzüldü
40°C’de alçak basınç
altında rotavaporda
uçuruldu
1. Droglardan Ekstrenin Hazırlanışı
MİKTAR TAYİNİ2. Örnek Çözeltilerin Hazırlanışı
İlk, Son, Mey kodları verilen ekstreler 2
ml metanolde çözüldü
0.45 µm’lik Chromafil Xtra PTFE-45/25 markalı filtreden
geçirilerek süzüldü.
MİKTAR TAYİNİ3. Standart Rutin Çözeltisinin Hazırlanışı
50 mg saf rutin
numunesi
10 ml metanolde bir balonjojede çözüldü
MİKTAR TAYİNİ4. Standart Rutine Ait Ölçü Eğrisinin
Hazırlanışı 0.5 µg/ml, 2.5 µg/ml, 5 µg/ml, 10 µg/ml ve 25 µg/ml olmak
üzere standart rutin çözeltisinden 5 dilüsyon
hazırlandı
Her birinden 3’er defa,
10 µl uygulandı
Alan değerleri ölçüldü
Okunan alan değerlerinden, rutin’e ait ölçü
eğrisi hazırlandı
Yüksek Basınçlı Sıvı Kromatografisi (HPLC) analiz şartları:Cihaz: Agilent 1100 Series HPLC-DAD
DedectorKolon: ACE 5 C18 (250 mmx4.6 mm)Mobil faz: % 5’lik Formik asitli
su:Metanol (50:50 v/v)Akış hızı: 0.900 ml/dkDedektör: Agilent 1100 SeriesDalga Boyu: 360 nmKolon sıcaklığı: 25°C
MİKTAR TAYİNİ
Validasyon, kimyasal analiz uygulamalarında önemli bir gerekliliktir.
Yöntem validasyonu, kullanılmakta olan yöntemin performansının uygulamadaki gereklilikleri için uygun olup olmadığının doğrulanmasıdır.
Bu çalışmada analiz yönteminin laboratuar içi geçerliliğini ortaya koyabilmek için gerçeklik, kesinlik, seçicilik, tanımlama, doğrusallık ve sağlamlık ile ilgili çalışmalar yapılmıştır.
MİKTAR TAYİNİ5. Validasyon
BULGULAR
C. oblonga Mill. bitkisinin yaprakları 10x7 cm genişliğindedir.
Yapraklar, yumurta,oval veya elips şekilli ve koyu yeşil renklidir.
Yaprakların kenarları dişsiz, genç yapraklarda sap kanatçıklıdır.
Yaprakların alt kısmı ağırlıklı olarak çıkıntılıdır.
BOTANİK BÖLÜM1. Makroskobik Bulgular
Yapraktan alınan enine kesitlerde yaprağın bifasiyal olduğu görülmüştür.
Yaprağı örten kutikulanın kalın olduğu görülmüştür.
Üst epidermis hücrelerinin kalın çeperli, uzun, dikdörtgenimsi hücrelerdir.
Palizat parankiması sık dizilmiş uzun hücrelerden oluşmuştur. Sünger parankiması hücreleri ise gevşek dizilmiştir.
BOTANİK BÖLÜM2. Mikroskobik Bulgular
Hem alt hem üst epidermiste yer alan stomaların mezofitik tipte olduğu görülmüştür.
İletim demeti, sklerankima demetleri ile çevrilmiştir. Kollenkima olmadığı görülmüştür.
Belirgin bir damar parankiması görülmemiştir.
İletim demetlerinin çevresinde bol miktarda basit prizmatik billurların ve druzların olduğu görülmüştür.
BOTANİK BÖLÜM2. Mikroskobik Bulgular
Anomositik tip stomalar hem alt, hem de üst epidermiste yaygın olarak görülmüştür.
Yaprak epidermisi üzerinde kutikula noktacıkları görülmüştür.
BOTANİK BÖLÜM2. Mikroskobik Bulgular
Yaprak alt epidermisinde hidadot olduğu da görülmüştür.
Drog Miktarı (g) % Nem Miktarı1.0014 9.18911.0005 9.17411.0013 9.2170
Ortalama % Nem Miktarı: 9.1934
KALİTE KONTROL ÇALIŞMALARI1. Nem Miktar Tayini
2. Total Kül Miktar TayiniDrog Miktarı (g) % Total Kül Miktarı
1.003 11.92121.009 12.16041.006 12.0821Ortalama % Total Kül Miktarı: 12.0546
KALİTE KONTROL ÇALIŞMALARI3. Sülfat Külü Miktar Tayini
Drog Miktarı (g) % Sülfat Külü Miktarı1.007 18.13901.008 17.95561.0017 17.9295Ortalama % Sülfat Külü Miktarı: 18.0080
4. Hidroklorik Asitte Çözünmeyen Kül Miktar TayiniDrog Miktarı (g) % HCl de Çözünmeyen Kül
Miktarı1.0012 1.3261.0018 1.2241.0022 1.157
Ortalama % HCl de Çözünmeyen Kül Miktarı: 1.2457
FİTOKİMYASAL ANALİZ SONUÇLARIEkstreler %
Verim (g)
Flavonoid
Tanen Alkaloid
Steroidal Sapogenoller
Triterpenik Saponozitler
Nişasta
Etanol 12.33
++++ + - - - -
Etil asetat
17.05
++ - - - - -
N-hegzan
3.45 - - - - - -
İnfüzyon 14.21
+++ ++++
- - - -
Ekstreler ppm LC50
Etanol 1000:100:10 >1000
Etil asetat 1000:100:10 723.09
N-hegzan 1000:100:10 >1000
İnfüzyon 1000:10:10 >1000
Kolşisin 0.0009
SİTOTOKSİK AKTİVİTE
ANTİMİKROBİYAL AKTİVİTEMinimum İnhibitör Konsantrasyonu (MİK) (µg/ml)
Mikrodilüsyon YöntemiEkstreler Etanol Etil
asetatN-
hegzanSu Standart
AntibiyotikTest
Organizmaları
G (8-1024 µg/ml)
B. cereus + 128 512 >1024 >1024
0,25
S. aureus + 8 >1024 >1024 32 0,06S. aureusa + 8 >1024 >1024 16 0,50
S. epidermidis + 128 >1024 >1024 1024 0,25E. faecalis + 256 >1024 >1024 >102
40,12
E. coli - >1024 >1024 >1024 >1024
<0,015
E. colib - 256 >1024 >1024 >1024
<0,015
P. aeuruginosa - 128 >1024 >1024 >1024
0,12
P. vulgaris - 32 >1024 >1024 >1024
<0,015
S. typhimurium
- 256 >1024 >1024 >1024
<0,015
C. albicans 128 1024 >1024 1024 8
ANTİMİKROBİYAL AKTİVİTEİnhibisyon Zonu (mm)Disk Difüzyon Yöntemi
Ekstreler Etanol Etil asetat
N-hegzan
Su Standart Antibiyotik
Test Organizmala
rı
G (80 µg/disk)
B. cereus + - - - - 28S. aureus + - - - - 32S. aureusa + - - - - 33
S. epidermidis + - - - - 25E. faecalis + - - - - 24
E. coli - - - - - 40E. colib - - - - - 43
P. aeuruginosa - - - - - 36P. vulgaris - - - - - 33
S. typhimurium
- - - - - 40
C. albicans - - - - 18
ANTİMİKROBİYAL AKTİVİTEİnhibisyon Zonu (mm)Kuyu Difüzyon Yöntemi
Ekstreler Etanol Etil asetat
N-hegzan
Su Standart Antibiyotik
Test Organizmala
rı
G (200 µg/kuyu)
B. cereus + 10 - - - 29S. aureus + - - - - 32S. aureusa + 9 - - - 33
S. epidermidis + - - - - 26E. faecalis + 8 - - - 28
E. coli - 7 - - - 42E. colib - 7 - - - 46
P. aeuruginosa - - - - - 38P. vulgaris - 10 - - - 36
S. typhimurium
- - - - - 42
C. albicans - - - - 19
DPPH Radikal Yakalama Aktivitesi’ne ait α-tokoferol kalibrasyon eğrisi
ANTİOKSİDAN AKTİVİTE1. DPPH Radikal Yakalama Aktivitesi
ANTİOKSİDAN AKTİVİTEEkstreler (mg/ml) % DPPH
İnhibisyon (Ort. ± SD)
(n=3)
EC50 Değerler
i ( mg/ml)
Ekstre %
Verimi
α-Tokoferol Ekivalan Değeri (mg/ml) (Ort. ±
SD) (n=3)Su (0.5 mg/ml) 21.0642±0.00
3 0.9940 14.219.7773±0.001
Su (0.75 mg/ml) 44.2880±0.004
18.8882±0.002
Su (1.0 mg/ml) 46.5102±0.004
19.7600±0.002
Etanol (0.5 mg/ml)
50.6416±0.004 0.5154 12.33
21.3805±0.002
Etanol (0.75 mg/ml)
72.5196±0.004
29.9637±0.002
Etanol (1.0 mg/ml)
92.9264±0.004
37.9695±0.002
Etil asetat (0.5 mg/ml)
3.3803±0.003
- 17.05
2.8606±0.001
Etil asetat (0.75 mg/ml)
4.1940±0.003 3.1589±0.002
Etil asetat (1.0 mg/ml)
5.6651±0.003 3.7360±0.001
N-hegzan - - 3.45 -
ANTİOKSİDAN AKTİVİTE2. ABTS.+ Radikal Katyon Yakalama
AktivitesiABTS.+Radikal
Katyon Yakalama Aktivitesi’ne ait α-tokoferol kalibrasyon eğrisi Ekstreler (0.5 mg/ml) % ABTS İnhibisyonu
(Ort. ± SD) (n=3)α-Tokoferol Ekivalan
Değeri (mg/ml) (Ort.± SD) (n=3)
Su 27.64±0.007 24.2974±0.007Etanol 48.76±0.006 44.3135±0.006
Etil asetat 7.62±0.004 5.2308±0.004N-hegzan - -
ANTİOKSİDAN AKTİVİTE3. Toplam Fenolik Madde Analizi
Gallik asit kalibrasyon eğrisi
3. Toplam Fenolik Madde AnaliziEkstreler (1 mg/ml) Miktar
Su-1 13.9949 mg/100 mgSu-2 13.9556 mg/100 mgSu-3 13.9343 mg/100 mg
Etanol-1 15.2672 mg/100 mgEtanol-2 15.3080 mg/100 mgEtanol-3 15.1945 mg/100 mg
Etil asetat-1 2.3506 mg/100 mgEtil asetat-2 2.3264 mg/100 mgEtil asetat-3 2.3143 mg/100 mgN-hegzan-1 0.9330 mg/100 mgN-hegzan-2 0.9815 mg/100 mgN-hegzan-3 1.0057 mg/100 mg
ANTİOKSİDAN AKTİVİTE
ANTİOKSİDAN AKTİVİTE4. Toplam Flavonoid Madde Analizi
Kersetin kalibrasyon eğrisi
ANTİOKSİDAN AKTİVİTE4. Toplam Flavonoid Madde Analizi
Ekstreler (1 mg/ml) MiktarSu-1 1.317 mg/100 mgSu-2 1.364 mg/100 mgSu-3 1.411 mg/100 mg
Etanol-1 14.986 mg/100 mgEtanol-2 15.722 mg/100 mgEtanol-3 15.470 mg/100 mg
Etil asetat-1 4.620 mg/100 mgEtil asetat-2 4.954 mg/100 mgEtil asetat-3 4.994 mg/100 mgN-hegzan-1 1.583 mg/100 mgN-hegzan-2 1.693 mg/100 mgN-hegzan-3 1.646 mg/100 mg
C. oblonga Miller bitkisinin meyveli döneminde toplanan yapraklarından su distilasyonuyla elde edilen uçucu yağda 40 bileşik bulunmuştur.
Bu bileşikler, yağda toplam yağın % 64.5’ini oluşturmaktadır.
Bulduğumuz sonuçlara göre, meyveli dönemde toplanan uçucu yağda seskiterpen hidrokarbon [germakren D (% 8.6)] ve aromatik aldehit [benzaldehit (% 4.9)] bulunmaktadır.
UÇUCU YAĞ ELDESİ
RUTİN MİKTAR TAYİNİUygulanan rutin konsantrasyonuna karşı
okunan alan değerleriKonsantrasyon (µg/ml) Okunan Alan Değerleri
0.5 162.42.5 811.85 1624.510 3404.625 9044.2
RUTİN MİKTAR TAYİNİ
Standart Rutin Kromatogramı RT=5.054
MEYVE EKSTRELERİNE AİT BULGULAR
Mey 1-1 Ekstresi Rutin Piki HPLC Kromatogramı RT=5.070
Mey 1-2 Ekstresi Rutin Piki HPLC Kromatogramı RT=5.059
MEYVE EKSTRELERİNE AİT BULGULAR
Mey 2-1 Ekstresi Rutin Piki HPLC Kromatogramı RT=5.069
Mey 2-2 Ekstresi Rutin Piki HPLC Kromatogramı RT=5.073
SONBAHARDA TOPLANAN YAPRAK EKSTRELERİNE AİT BULGULAR Son 1-1
Ekstresi Rutin Piki HPLC Kromatogramı RT=5.106
Son 1-2 Ekstresi Rutin Piki HPLC Kromatogramı RT=5.106
SONBAHARDA TOPLANAN YAPRAK EKSTRELERİNE AİT BULGULAR Son 2-1
Ekstresi Rutin Piki HPLC Kromatogramı RT=5.106
Son 2-2Ekstresi Rutin Piki HPLC Kromatogramı RT=5.105
İLKBAHARDA TOPLANAN YAPRAK EKSTRELERİNE AİT BULGULAR İlk 1-1
Ekstresi Rutin Piki HPLC Kromatogramı RT=5.110
İlk 1-2Ekstresi Rutin Piki HPLC Kromatogramı RT=5.114
İLKBAHARDA TOPLANAN YAPRAK EKSTRELERİNE AİT BULGULAR İlk 2-1
Ekstresi Rutin Piki HPLC Kromatogramı RT=5.114
İlk 2-2 Ekstresi Rutin Piki HPLC Kromatogramı RT=5.117
MEYVEDEKİ RUTİN MİKTARI
Ekstre Miktarı (g)
Alan Değeri Ekstredekİ % Rutin Miktarı
Drogdaki % Rutin Miktarı
Mey 1-1 (0.5 g)
386.871 0.09665 0.2165
Mey 1-2 (0.5 g)
390.864 0.09764 0.2187
Mey 2-1 (0.5 g)
385.470 0.09613 0.2157
Mey 2-2 (0.5 g)
394.577 0.09840 0.2208
Ekstrelerdeki % Rutin Miktarı Ort. ± SD
Drogdaki % Rutin Miktarı Ort. ± SD
0.09721 ± 0.001 0.21793 ± 0.002
SONBAHARDA TOPLANAN YAPRAKTAKİ RUTİN MİKTARI
Ekstre Miktarı (g)
Alan Değeri Ekstredekİ % Rutin Miktarı
Drogdaki % Rutin Miktarı
Son 1-1 (0.5 g)
2821.82 0.7006 1.5791
Son 1-2 (0.5 g)
2835.24 0.7039 1.5866
Son 2-1 (0.5 g)
2829.11 0.7011 1.5832
Son 2-2 (0.5 g)
2841.80 0.7043 1.5903
Ekstrelerdeki % Rutin Miktarı Ort. ± SD
Drogdaki % Rutin Miktarı Ort. ± SD
0.7025 ± 0.002 1.5848 ± 0.005
İLKBAHARDA TOPLANAN YAPRAKTAKİ RUTİN MİKTARI
Ekstre Miktarı (g)
Alan Değeri Ekstredekİ % Rutin Miktarı
Drogdaki % Rutin Miktarı
İlk 1-1 (0.5 g) 2675.21 0.6665 1.4970
İlk 1-2 (0.5 g) 2665.30 0.6641 1.4915
İlk 2-1 (0.5 g) 2671.71 0.6645 1.4951
İlk 2-2 (0.5 g) 2654.60 0.6602 1.4855
Ekstrelerdeki % Rutin Miktarı Ort. ± SD
Drogdaki % Rutin Miktarı Ort. ± SD
0.6638 ± 0.003 1.4923 ± 0.005
Kullanılacak yöntemin geçerliliğini ortaya koyacak olan doğrusallık, seçicilik, kesinlik ve gerçeklik gibi parametreleri içeren yöntem validasyon çalışmaları yapılmıştır.
VALİDASYON
5 ayrı konsantrasyonda hazırlanan standartlardan HPLC cihazına 3’er enjeksiyon şeklinde verilmiş ve bu konsantrasyonlardaki rutin cihaz tarafından ölçülen alanına karşılık regresyon eğrisi çizilmiştir.
1. DOĞRUSALLIK (LİNEARİTY)
Konsantrasyon (µg/ml)
Okunan Alan Değerleri
0.5 162.42.5 811.85 1624.510 3404.625 9044.2
2. SEÇİCİLİK (SELECTİVİTY) Karşılaştırmak suretiyle standart olarak
enjekte edilen rutin pikinin retensiyon zamanı ile ekstredeki rutin tespit edilmiştir. Ayrıca ekstrelere rutin ilave edilerek bu desteklenmiştir.
Son 1-1 Ekstresi ve Standart Rutin Karışımına Ait Kromatogram RT=5.106
3. KESİNLİK (PRECİSİON)Konsantrasyonları bilinen numunelerden
3’er paralel hazırlanmış ve her numune 3’er defa enjekte edilmiştir. Böylece tekrarlanabilirlik koşullarında analiz gerçekleştirilmiştir.
Konsantrasyon (µg/ml)
Alan Değeri Retensiyon Zamanı (dk)
1. Ölçüm 0.5 1638.4 5.0632. Ölçüm 0.5 1621.0 5.0563. Ölçüm 0.5 1618.6 5.0594. Ölçüm 0.5 1643.7 5.062 5. Ölçüm 0.5 1635.9 5.061
Mean ± SD 1631.5±0.001
5.060±0.003
% RSD 0.680 0.055
4. GERİ KAZANIM (ACCURACY)
Konsantrasyonu bilinen standardın, numuneye alınıp, numuneye eklenip yapılan geri alma cevabına, geri kazanım (recovery) denir.
Örnekteki rutin
miktarı (µg/ml)
Örneğe eklenen rutin
miktarı (µg/ml)
Örnekten geri alınan
miktar (µg/ml)
Geri Kazanım (%) ± SD
RSD (%)
0.5 (Meyve) 2.5 2.44 97.6±6.223
6.376
0.5 (İlkbahar)
7.5 7.5 99.9±1.061
1.061
0.5 (Sonbahar)
15 14.70 98.0±4.879
4.979
4. SAĞLAMLIK (ROBUSTNESS)
Çalışmamızda; akış hızı, kolon sıcaklığı, mobil faz ve diode array dedektör ölçüm alanında yapılan küçük değişimler sonucunda yöntemimizin sağlamlığı kanıtlanmıştır.
SONUÇLAR
C. oblonga Mill. bitkisinin tayinine yardımcı olacak anatomik özellikler, makroskobik ve mikroskobik olarak belirlenmiştir.
Avrupa Farmakopesi’nde yer ala yöntemler esas alınarak; nem, total kül, hidroklorik asitte çözünmeyen kül ve sülfat külü miktarları belirlenmiştir.
Çalışmalarımız ilerde hazırlanacak bir monograf için kaynak oluşturabilecek niteliktedir.
Etil asetat ekstresi dışındaki ekstrelerin sitotoksik aktivite göstermemesi,droğun halk arasındaki kullanımının güvenliği açısından oldukça önemlidir.
Yapılan antimikrobiyal aktivite çalışmaları sonucunda, etanol ekstresinin diğer ekstrelere göre mikroorganizmalar üzerinde daha etkili olduğu bulunmuştur.
Antimikrobiyal aktivite çalışmalarımızda, etanol dışındaki ekstrelerin etkili olmaması; kullanılan mikroorganizmaların, ekstrelerdeki aktif madde ya da maddelerin yapılarına benzer antibiyotiklere karşı dirençli olduğunu ortaya çıkarmıştır.
Yapılan antioksidan aktivite tayini sonuçlarında, aynı droğun farklı ekstrelerinde farklı oranlarda antioksidan aktivite belirlenmiştir.
Antioksidan etkideki bu farklılık, droğun farklı ekstrelerindeki etken madde içeriğinin değişiminden kaynaklanmaktadır.
Meyveli dönemde toplanan yapraktaki uçucu yağdaki major madde olarak seskiterpen hidrokarbonun [germakren D (% 8.6)] olduğu saptanmıştır.
Yapılan miktar tayini sonuçlarına göre, meyveli dönemde toplanan yapraktan hazırlanan drogda rutin miktarının, çiçekli dönemde toplanan yapraktan hazırlanan droğa ve meyveye göre daha yüksek olduğu bulunmuştur.
Folia Sennae’nin kalite kontrol akış şeması
Folia sennae nin kalite kontrol akış şeması
Folia sennae
hammadde kalite
kontrolüÜrün kalite
kontrolü
BitkiMorfolojiMakroskopik analizMikroskopik analizHPLCMonograf kriterleri
Farmasötik şekil analizleri
FOLİA SENNAE (TK),Sinameki yaprağı
Drog Cassia angustifolia VAHL, Cassia senna L (Caesalpinaceae) nin yaprakcıklarıdır. Ph.Eur. I'e göre sennosit B üzerinden hesaplanan hidroksiantrasen türevleri en az %2,5 olmalıdır. Ana bileşik olarak sennozit A ve B (aglikon:reindiantron yapısındaki izomerler, sennidin A ve B) az miktarda sennozit C ve D (aglikon: aloe-emodin, rein heterodiantron yapısındaki izomerler, sennidin C ve D) bunun dışında serbest aglikonlar; rein, krizofanol, aloe-emodin ayrıca müsilaj, reçine, flavon türevleri ve az miktarda uçucu yağ bulunur.
Folia sennae nin kullanılışı;
Drog kalınbarsağa etki eden güçlü bir laksatiftir. Etkisini 8 saat sonra gösterir. Kalınbarsakta bakterilerin etkisiyle sennozit ve drogda bulunan diğer antrasen heterozitlerinden serbest hale gelen aglikonlar, kalınbarsak peristaltizmini, salgı sekresyonunu arttırır ve suyun resorpsiyonunu inhibe eder. Drogun alınmasıyla ortaya çıkan karın ağrısı daha çok yüksek dozdan ileri gelmektedir.Tedavide drog bitkisel çay ve ekstresi halinde sıklıkla kullanılır. Drog çabuk alışkanlık yapar.
Mensturasyon ve hamilelikte kontrendikedir.
Folia sennae nin kullanılışı;
Geleneksel tıpta kullanımı; Laksatif, stomaşik Senna yapraklarının tozları sirke ile karıstırılarak
macun halinde bazı deri hastalıklarında kullanılırSinameki kına ile birlikte siyah saç boyası olarak
kullanılır
Folia sennae’nin morfolojisi
Kısa çalı tipinde 1.5 metre boyundadır. Paripinnat uçuk sarımsı yeşil yapraklara sahiptir. Çiçekleri tetrasiklik zigomorfiktir. Meyveleri geniş eliptik biraz basık reniform tipte olup 4.7 cm uzunlugunda 2 cm genişliğindedir
MAKROSKOPİK VE MİKROSKOPİK ANALİZ
Toz analizi: YapraklarMakroskopik karakterlerRenk: koyu kahverengiKoku: hafif aromatikTat: hafif acıMikroskopik karakterler• Cassia angustifolia
yaprak tozları düzensiz şekilli parenkimi hücreleri ve onun kısımlarını gösterir.• Damlacık
hücrelerden dışarı çıkmış cok sayıda granül görünür.
MAKROSKOPİK VE MİKROSKOPİK ANALİZ
Toz analizi: bakla (pods)Makroskopik karaklerlerRenk: koyu kahverengiKoku: hafif aromatikTat: hafif acıMikroskopik karakterler• Cassia angustifolia
bakla tozları parenkima hücre duvarları gösterir.
• Düzensiz sekilli parenkima hücreleri ve kalın trake duvarları ve parçaları görünür.
• Damlacık hücrelerden çıkan çok sayıda granül görünür.
Saflık testiMikrobiyoloji Folia sennae droglarında Salmonella
spp.negatif olmalıdır. Diğer mikroorganizmalar için kabul edilebilir max.limit (16-18)dir.
Dekoksiyon hazırlanması için: aerobik bakteri-10üssü7/g; küf ve maya-10üssü5/g; Escherichia coli-10üssü2/g; diger enterobakterler-10üssü4/g.
Dahilen kullanım için: aerobik bakteri-10üssü5/g; küf ve maya-10üssü4/g; Escherichia coli-0/g; diğer enterobakterler-10üssü3/g.
Saflık testi
Yabancı organik madde Saplarında %2 den fazla
olmamalı.drogda %1den fazla olmamalıToplam kül %12 den fazla olmamalı Asitte çözünmeyen kül %2den fazla olmamalıSuda çözünen kısım %3den az olmamalıNem %10 dan fazla olmamalı
Saflık testiPestisit kalıntılarıNormalde Folium sennae de aldrin ve
dieldrin max.kalıntı sınırı 0.05 mg/kg dan fazla olmamalı. Diğer pestisitler için WHO kurallarına bakılır.
Ağır metallerSırasıyla kurşun ve kadmiyum düzeyi
10 ve 0.3 mg/kg dan fazla olmamalı
HPLC profiliC.angustifolia:
yapraklar Numune
hazırlama- Enjeksiyon
hacmi- Alet – Çözücü sistem- Akış hızı- Deger bulma-
-C.angustifolia yaprakları(5g) -25 mikrolitre -Waters HPLC 501 Shimadzu -Metanol-su(1:1) -0.5 ml/dk -270nm
Sennae yaprak ekstresinin kalite kontrolü
Folia Sennae'nin İ.T.K. ile incelenmesi:
Analiz çözeltisi: 50 mg toz edilmiş drog 5 ml su+etanol (1+1) karışımıyla kaynayıncaya kadar ısıtılır, ardından santrifüj edilir. Drog üzerindeki ekstreden 10 mikrolitre alıp band şeklinde plağa tatbik edilir.
Metod : Yükselen Tabaka : Kieselgel 60 F254Çözücü sistem: n-propanol-etilasetat-su-
glasiyel asetikasit(40+40+29+1)
Folia Sennae'nin İ.T.K. ile incelenmesi:
Belirteç: önce konsantre nitrik asit püskürtülür, ardından 15 dakika 120°C de etüvde ısıtılır. Sennozitler kırmızı-kahverengi renk alır, UV365 nm de ise sarı kahverengi floresans verir. Ardından %8 lik (A/H) etanollü KOH çözeltisinden püskürtülür, tekrar 110°C de 5-10 dakika ısıtılır. Sennozitler kırmızı-kahverengi zonlar halinde görülür.
Sennozit A Rf = 0,30-0,35Sennozit B Rf = 0,15
Son ürün testleriSennalax enterik tablet İlaç etken maddesi: Sennozit BSennozit B kalın bağırsak
hareketleri ile kalın bağırsak içerik hacmini ve su miktarını artırır. Bu etkiler ile dışkının yumuşatılmasını ve atılmasını sağlar.
Kullanımı: kabızlık, ameliyat ve radyolojik tetkikler
öncesi bağırsakların boşaltılması,
kronik atoni
Tabletlerde kalite kontrol
Genel görünüm:Boyut, şekil ve kalınlık: Bu tabletin sıkıştırılarak
paketlenmesi için önemlidir.
Organoleptik özellikleri: Tabletin renk ve
kokusuna bakılır.
Tüm tabletler için kalite kontrol testleri
Aktif madde içeriğiParçalanma İçerik sabitliğiEtiketleme Enterik tabletlerde en önemli test
parçalanma testidir.
Tabletlerde kalite kontrol süreci
I. tablet ağırlığı- tek kefeli elektrikli terazi
II. kırma gücü - ufalanma ve dağılma saatini kontrol eder.
III. Tablet kalınlığı -çok kalın tabletler özellikle blisterler içine paketlemeyi etkiler.
IV. dağılma saati.V. Ufalanma.
Tablet formülasyonlarına uygulanan fiziksel testler
Yığın yoğunluğuToz inceliğiKuruluk kaybıParçalanma testiTablet ufalanmaÇözünme testiİlaç salım testiDozaj formunun tekdüzeliğiKonteynır geçirgenlik testiİnaktif madde etiketleme
Kaynaklar
http://www.academia.edu/4110379/Quality_Controlling_of_Tablets
http://apps.who.int/medicinedocs/pdf/s2200e/s2200e.pdf
http://www.ilacpedia.com/sennalax-enterik-tablet