Chevaliez Du 2009

VIRUS DE L’HEPATITE CVIRUS DE L’HEPATITE C

& Marqueurs& Marqueurs

Stéphane ChevaliezStéphane Chevaliez

Centre National de RéférenceCentre National de Référence

Des Hépatites B, C et deltaDes Hépatites B, C et delta

Laboratoire de Virologie & INSERM U955Laboratoire de Virologie & INSERM U955

Hôpital Henri MondorHôpital Henri Mondor

Université Paris XIIUniversité Paris XII

CréteilCréteil

VIRUS DE L’HEPATITE CVIRUS DE L’HEPATITE C

& Marqueurs& Marqueurs

Stéphane ChevaliezStéphane Chevaliez

Centre National de RéférenceCentre National de Référence

Des Hépatites B, C et deltaDes Hépatites B, C et delta

Laboratoire de Virologie & INSERM U955Laboratoire de Virologie & INSERM U955

Hôpital Henri MondorHôpital Henri Mondor

Université Paris XIIUniversité Paris XII

CréteilCréteil

Virus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite CI. Aspects VirologiquesI. Aspects VirologiquesVirus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite C

I. Aspects VirologiquesI. Aspects Virologiques

Virus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite C

• Famille : Famille : FlaviviridaeFlaviviridae

• Genre : Genre : HepacivirusHepacivirus

Phylogénie de la région codant la protéine NS5B

Virus de l’Hépatite C et Marqueurs

Adapted from Simmonds et al., 1999; 2001.

• Famille : Famille : FlaviviridaeFlaviviridae

• Genre : Genre : HepacivirusHepacivirus

• Hôte naturel : HommeHôte naturel : Homme

Virus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite C

Bartenschalger et al., 2004.


Organisation StructuraleOrganisation StructuraleOrganisation StructuraleOrganisation StructuraleVirus de l’Hépatite C et Marqueurs



Organisation GénomiqueOrganisation GénomiqueOrganisation GénomiqueOrganisation GénomiqueVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Protéines Structurales Protéines Non-Structurales

IRES

5’NTR 3’NTR

C E1 E2 NS2 NS3 NS5A NS5B

NS4A

NS4B

p 7

Adapted from Tail et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881

Régions 5’ et 3’NCRégions 5’ et 3’NCRégions 5’ et 3’NCRégions 5’ et 3’NCVirus de l’Hépatite C et Marqueurs


IRES

5’NTR 3’NTR


NS4A

NS4B

p 7

Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881

Site d’Entrée Interne du RibosomeSite d’Entrée Interne du RibosomeSite d’Entrée Interne du RibosomeSite d’Entrée Interne du RibosomeVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881

From Department of Structural Biology, Stanford University Medical School, USA

Site d’Entrée Interne du RibosomeSite d’Entrée Interne du RibosomeSite d’Entrée Interne du RibosomeSite d’Entrée Interne du RibosomeVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Organisation GénomiqueOrganisation GénomiqueOrganisation GénomiqueOrganisation GénomiqueVirus de l’Hépatite C et Marqueurs


IRES

5’NTR 3’NTR


NS4A

NS4B

p 7


STÉATOSE

ROS

FIBROSEActivation des cellules étoilées

Insulino-Résistance

Cytokines (TNF, TGF, IL-8, FasL)Produits de la peroxydation lipidique

CytokinesNF-kB

TNF

NécroInflammation

Cytokines TGF

Cytokines Réponse

immunitaire

TGF

CapsideTNF

Génotype 3

CapsideNS5A

Adapted from Asselah et al., 2006

Protéine de Capside & PathogenèseProtéine de Capside & PathogenèseProtéine de Capside & PathogenèseProtéine de Capside & PathogenèseVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Piodi et al., Hepatology 2008, 48(1): 16-27.

VHC génotype 1b

xyz

xy

z

Piodi et al., Hepatology 2008, 48(1): 16-27.

Glycoprotéines E1-E2Glycoprotéines E1-E2Glycoprotéines E1-E2Glycoprotéines E1-E2Virus de l’Hépatite C et Marqueurs


IRES

5’NTR 3’NTR


NS4A

NS4B

p 7


Glycoprotéines d’EnveloppeGlycoprotéines d’EnveloppeGlycoprotéines d’EnveloppeGlycoprotéines d’EnveloppeVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Heijne et al., Nature Reviews Molecular cell Biology, 2006; 7: 909-918

Région HVR1 (27 amino-acides) 80% de divergence nucléotidique entre génotypes Epitope majeur de neutralisation

Timm et al., World J Gastroenterol 2007; 13(36)4808-4817.

Région HVR1Région HVR1Région HVR1Région HVR1Virus de l’Hépatite C et Marqueurs

Protéine Non-structurale 3Protéine Non-structurale 3Protéine Non-structurale 3Protéine Non-structurale 3Virus de l’Hépatite C et Marqueurs


IRES

5’NTR 3’NTR


NS4A

NS4B

p 7


1 631189

Sérine protéaseSérine protéaseSérine protéaseSérine protéase Hélicase/NTPaseHélicase/NTPaseHélicase/NTPaseHélicase/NTPase

Protéine NS3Protéine NS3Protéine NS3Protéine NS3Virus de l’Hépatite C et Marqueurs

Sérine protéaseSérine protéaseSérine protéaseSérine protéase

• Modulateur de la réponse interféron type I via les

Toll-Like receptor (TLR3)

Hélicase/NTPaseHélicase/NTPaseHélicase/NTPaseHélicase/NTPase


1 631189

Bode et al., 2007; Archives of Biochemistry and Biophysics, 462: 6254-265

Production d’IFN-Production d’IFN- en Réponse à en Réponse à une Infection Viraleune Infection ViraleProduction d’IFN-Production d’IFN- en Réponse à en Réponse à une Infection Viraleune Infection Virale


Bode et al., 2007; Archives of Biochemistry and Biophysics, 462: 6254-265

1.1. Clivage de TRIFClivage de TRIF 2.2. Clivage de CARDIFClivage de CARDIF

Inhibition de la Phosphorylation Inhibition de la Phosphorylation d’IRF3 par NS3d’IRF3 par NS3Inhibition de la Phosphorylation Inhibition de la Phosphorylation d’IRF3 par NS3d’IRF3 par NS3


Sérine protéaseSérine protéaseSérine protéaseSérine protéase

• Modulateur de la réponse interféron type I via les

Toll-Like receptor (TLR3)

• Cible de molécules antivirales

VX-950 (Telaprevir®, Vertex)

SCH503034 (Boceprevir®, Schering-Plough)

ITMN 191 (Intermune)

Hélicase/NTPaseHélicase/NTPaseHélicase/NTPaseHélicase/NTPase


1 631189

OPM Database, University of Michigan, College of Pharmacy.

Site actifSite actif((His57, Asp81, Ser139)

Telaprevir (VX-950)

Boceprevir (SCH 503034)

ITMN 191

Protéine NS4BProtéine NS4BProtéine NS4BProtéine NS4BVirus de l’Hépatite C et Marqueurs


IRES

5’NTR 3’NTR


NS4A

NS4B

p 7


Complexe de RéplicationComplexe de RéplicationComplexe de RéplicationComplexe de RéplicationVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463.

ARN Polymérase ARN-dépendanteARN Polymérase ARN-dépendanteARN Polymérase ARN-dépendanteARN Polymérase ARN-dépendanteVirus de l’Hépatite C et Marqueurs


IRES

5’NTR 3’NTR


NS4A

NS4B

p 7


Lesburg et al., Nat struct Biol 1999, 6: 937-943; Bressanelli et al., Proc Natl Acad Sci USA 1999, 96: 13034-13039; Ago et al., Srructure Fold Des 1999, 7: 1417-1426.

Polymérase ViralePolymérase ViralePolymérase ViralePolymérase ViraleVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Réplication

– Modèle du poliovirus. Virus à ARN monocaténaire de polarité positive

De Clercq., Nature Review Drug Discovery, 2007; 6: 1001-18

Réplication ViraleRéplication ViraleRéplication ViraleRéplication ViraleVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Copyright © 2006 Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, New Jersey, USA

AA

NNI site A (Thumb/fingertips)Indoles

Benzimidazoles

NNI site B (Thumb)Phe derivatives

Thiophene-COOHDihydroxypirones

Pyranoindoles

BB

NNI site C (Palm)BenzothiadiazineAcyl-pyrrolidine

Proline sulfonamideAcrylic acid derivatives

Active SiteActive Site

Allosteric GTP

CC

2’-methyl nucleosides4’ azido-cytidine

NNI site D (R200 hinge)Benzofurans

AA

BBCC

DD

Cibles des Molécules AntiviralesCibles des Molécules AntiviralesCibles des Molécules AntiviralesCibles des Molécules AntiviralesVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Cycle ViralCycle ViralCycle ViralCycle Viral

Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463



Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463


Modèle d’Entrée ViraleModèle d’Entrée ViraleModèle d’Entrée ViraleModèle d’Entrée Virale






Maturation de la PolyprotéineMaturation de la PolyprotéineMaturation de la PolyprotéineMaturation de la Polyprotéine



Structure des Protéines NSStructure des Protéines NSStructure des Protéines NSStructure des Protéines NS






Complexes de RéplicationComplexes de RéplicationComplexes de RéplicationComplexes de Réplication






Virus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite CII. Modèles d’EtudeII. Modèles d’Etude

Virus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite CII. Modèles d’EtudeII. Modèles d’Etude

Souris transgéniquesSouris SCID/uPA

Modèles AnimauxModèles AnimauxModèles AnimauxModèles AnimauxVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Visualisation des cellules Huh7 infectées

3 - Vecteur de transfert de la GFP

2 - Expression des glycoprotéines E1E2 du VHC

1 - Expression de Gag-Pol de MLV

CMVCMV MLV MLV Gag-PolGag-Pol

CMVCMV VHC E1-E2VHC E1-E2

CMVCMV LTRLTR LTRLTRGFPGFP

Co-transfection des cellules 293 T

Production de ppVHC infectieuses

Infection in vitro des cellules Huh7

Pseudoparticules Rétrovirales (HCVpp)Pseudoparticules Rétrovirales (HCVpp)Pseudoparticules Rétrovirales (HCVpp)Pseudoparticules Rétrovirales (HCVpp)Virus de l’Hépatite C et Marqueurs

AA

BB

Adapted from Nature Review Drug Discovery, 2002; 1:911-916

Réplicons SubgénomiquesRéplicons SubgénomiquesRéplicons SubgénomiquesRéplicons SubgénomiquesVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Adapted from www.molecular-virology.uni-hd.de

Système Productif (HCVcc)Système Productif (HCVcc)Système Productif (HCVcc)Système Productif (HCVcc)Virus de l’Hépatite C et Marqueurs

Virus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite CIII. Variabilité GénétiqueIII. Variabilité Génétique

Virus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite CIII. Variabilité GénétiqueIII. Variabilité Génétique

Virus de l’hépatite CProduction virale (/24 heures) 1012

T1/2 virus libre (heures) 2 - 3

T1/2 brin ARN (heures) ~10

Taux de mutation Très élevé

Mutants d’échappement au SI Fréquent

Cellules ciblesTaille du compartiment Probablement grande

Soriano et al., J Antimicro Chemother 2008, 62: 1-4

Dynamique ViraleDynamique ViraleDynamique ViraleDynamique ViraleVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

• Erreurs au cours de la réplication– Fréquentes

. 10-4-10-4 mutations par nucléotide copié au cours de la réplication du VHC

– Spontanées– Au hasard

• Absence d’activité exonucléasique 3’5’ ("proofreading")– Accumulation de mutations

• A l’origine de : – La diversification des types et des sous-types– La distribution en quasi-espèces

ARN Polymérase ARN-dépendanteARN Polymérase ARN-dépendanteARN Polymérase ARN-dépendanteARN Polymérase ARN-dépendanteVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Simmonds et al. Hepatology 2005.


Diversification des GénotypesDiversification des GénotypesDiversification des GénotypesDiversification des Génotypes

7

Central Africa

Murphy et al., AASLD, Hepatology, 2007.

Diversification des GénotypesDiversification des GénotypesDiversification des GénotypesDiversification des GénotypesVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

• Facteur prédictif de la réponse au traitement

• Conditionne – La dose de ribavirine (800 - 1400 mg)– La durée de traitement (16 - 72 semaines)


GénotypesGénotypesGénotypesGénotypes

Weiner et al., Virology 1991; 180:842-848; Martell et al., J Virol 1992;66:3225-36.


Distribution en Quasi-espèceDistribution en Quasi-espèceDistribution en Quasi-espèceDistribution en Quasi-espèce

• Dérive génétique– Accumulation de mutations ponctuelles

• Glissement génétique– Suite à la modification brutale de l’environnement

réplicatif


Mécanismes d’Evolution de la Mécanismes d’Evolution de la Quasi-espèceQuasi-espèceMécanismes d’Evolution de la Mécanismes d’Evolution de la Quasi-espèceQuasi-espèce

• Joue un rôle dans le maintien de l’infection chronique

• Joue un rôle dans l’échec des traitements antiviraux

• Joue un rôle dans la sévérité de la maladie

Farci P, 2000; Science, 288: 339-344; Lavillette D, 2005; Journal of Virology, 79(10): 6023-6034; Farci P, 2002; PNAS, 99: 3081-3086; Chambers TJ et al., 2005; 79: 3071-3083; Sullivan et al., JID 2007, 196: 239-248.


Distribution en Quasi-espèceDistribution en Quasi-espèceDistribution en Quasi-espèceDistribution en Quasi-espèce

Virus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite CIV. Exemples d’Application IV. Exemples d’Application de la Variabilité Génétiquede la Variabilité Génétique

Virus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite CIV. Exemples d’Application IV. Exemples d’Application de la Variabilité Génétiquede la Variabilité Génétique

• Diversification et diffusion du VHC

• Transmission du VHC

• Mécanismes de persistance et d’infection du VHC

• Compartimentation tissulaire du VHC

• Mécanisme d’échec thérapeutique et de

résistance

Impacts de la Variabilité Génétique Impacts de la Variabilité Génétique du VHCdu VHCImpacts de la Variabilité Génétique Impacts de la Variabilité Génétique du VHCdu VHC







résistance



7

Central Africa

Murphy et al., AASLD, Hepatology, 2007.

Diversification des GénotypesDiversification des GénotypesDiversification des GénotypesDiversification des GénotypesVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Génotype & Mode de TransmissionGénotype & Mode de TransmissionGénotype & Mode de TransmissionGénotype & Mode de Transmission

52% 54%

63%

0%

20%

40%

60%

80%

100%

UDVI Transfusion Autres

31b1aAutres

Pawlotsky et al., J Infect Dis, 1995; 171(6): 1607-10.


27%

39%

36%

0%

20%

40%

60%

80%

100%

UDVI Transfusion Autres

4321b1a1nt

Payan et al., J Viral Hepat 2005;12: 405-13.

Génotype & Mode de TransmissionGénotype & Mode de TransmissionGénotype & Mode de TransmissionGénotype & Mode de TransmissionVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Génotype 3a Génotype 3a Chez les UDVIChez les UDVI

0.1 substitution per site

JK049TrKj

NE125NE048

HCV-3a

HCV-3fHCV-3c

HCV-3bHCV-3k

Australie

USA, Côte Ouest

Argentine

Brézil

France

USA, Côte Est

75

72

83

79

100

92

60

62

81

63

98

98

99

62

52

7195

56

Morice et al., J Med Virol 2006;78:1296-1303.







résistance



• Mise en évidence d’une séroconversion VHC lors du dépistage et du suivi des patients hémodialysés en juillet 2005, à l’hôpital Henri Mondor

• L’ensemble des patients hémodialysés ont été testés (anticorps anti-VHC et ARN viral)– Mise en évidence d’un 2nd cas au cours de la même période

• Analyses génétique et phylogénique

• Recherche du VHC dans l’environnement– Supports et surfaces inertes

Transmission Nosocomiale Transmission Nosocomiale "Mondorienne""Mondorienne"Transmission Nosocomiale Transmission Nosocomiale "Mondorienne""Mondorienne"


Identification de deux cas de séroconversion en 2004 au sein de l’unité d’hémodialyse de l’hôpital Henri Mondor :

– Patient "1" infecté par un génotype 3a

– Patient "2" infecté par un génotype 1

Transmission Nosocomiale Transmission Nosocomiale "Mondorienne""Mondorienne"Transmission Nosocomiale Transmission Nosocomiale "Mondorienne""Mondorienne"


1h_FrSSD98

1h_98CM15211h_98CM1357

1f_FR21i_FR16

1i_QC771iQC181

1m_GUI171m_GUI11

1m_GUI241d_HC1N161d_BA107

1d_FR17Patient 81b_HCJ4

Patient 7Patient 6

Patient 5Patient 4

1b_HCP011b_HCVBK

1c_HCG91c_SR0311c_Khaja1

1l_M5186N1l_98CM14271l_98CM1457

1e_M4541N1e_CAM1078

1e_QC1721g_1382

1g_21521g_EG024

1a_HCV11a_HCVH

1a_HCJ11j_QC2

1j_QC891k_QC68

1k_QC82Patient 3Patient 2*Patient 2**

2a_HCJ65a_SA13

6a_EUHK2Patient 1

3a_NLZ14a_ED43

0.05

Genotype 4

Genotype 3

Genotype 6Genotype 5

Genotype 2

Genotype 1

100

100

100

Patients VHC chroniqueSéroconversion VHC

Girou et al., Clin Infect Disease 2008, 47(5): 627-633.

G1

Analyse Analyse PhylogéniquePhylogéniqueAnalyse Analyse PhylogéniquePhylogénique

Région NS5B (329 nt)CLUSTALXDNADist (PHYLIP 3.5)Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2)Neighbor-JoiningBootstraping : 1000 replicatesNJPlot


6a_332b_JFH1Patient 1 (7/04)

5a_SA131b_HVR3812

S5 (7/05)Patient 3 (7/05)Patient 3 (9/05)Patient 2 (7/04)Patient 2 (9/04)Patient 3 (7/04)S4 (6/05)S3 (6/05)S2 (6/05)Patient 3 (01/05)S1 (6/05)

1a_HCT27X52a_Q2B

3a_CB1a_HCT18X5

Patient 61b_AWV2C33

Patient 8Patient 4

Patient 74a_ED43

0.2

100



Analyse PhylogéniqueAnalyse PhylogéniqueAnalyse PhylogéniqueAnalyse Phylogénique

Région HVR1 (81 nt)CLUSTALXDNADist (PHYLIP 3.5)Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2)Neighbor-JoiningBootstraping : 1000 replicatesNJPlot


6a_332b_JFH1Patient 1 (7/04)

5a_SA131b_HVR3812

S5 (7/05)Patient 3 (7/05)Patient 3 (9/05)Patient 2 (7/04)Patient 2 (9/04)Patient 3 (7/04)S4 (6/05)S3 (6/05)S2 (6/05)Patient 3 (01/05)S1 (6/05)

1a_HCT27X52a_Q2B

3a_CB1a_HCT18X5

Patient 61b_AWV2C33

Patient 8Patient 4

Patient 74a_ED43

0.2

100

Surfaces inertes



Région HVR1 (81 nt)CLUSTALXDNADist (PHYLIP 3.5)Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2)Neighbor-JoiningBootstraping : 1000 replicatesNJPlot



• Screening de 64 patients hémodialysés à l’hôpital Hubert Kutuku Maga, Cotonou, Bénin (Afrique)– Détection anticorps anti-VHC– Détection ARN VHC (limite détection <50UI/mL)

• Etude génétique et phylogénique de deux régions distinctes du génome viral– NS5B– Core-E1

Transmission Nosocomiale au Transmission Nosocomiale au BéninBéninTransmission Nosocomiale au Transmission Nosocomiale au BéninBénin



5aSA132aHCJ6

Patient 496aEUHK2 3aNLZ1

Patient 624aED431hFrSSD98

1h98CM13571h98CM1521

1cHCG91cSR0311cKhaja11aHCV1

1aHCVH1aHCJ1

1jQC21jQC891kQC68

1kQC821eM4541N

1eCAM10781eQC172

1g13821g2152

1gEG0241lM5186N1l98CM14271l98CM1457

1fFR2Patient 59Patient 46Patient 54Patient 2

Patient 28Patient 64Patient 16Patient 36

Patient 18Patient 17Patient 8

Patient 71bHCJ41bHCVBK

1bHCP01Patient 401iFR16

1iQC771iQC181Patient 48Patient 60Patient 52

Patient 261dFR17

1dHC1N161dBA1071mGUI171mGUI111mGUI24

0.05

5999

96

34100

72

100

98

43

Région NS5B (286 nt)CLUSTALXDNADist (PHYLIP 3.5)Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2)Neighbor-JoiningBootstraping : 1000 replicatesNJPlot

Génotype 2

Génotype 4

Génotype 3

Génotype 1

Génotype 6

Génotype 2Génotype 5

Génotype 1, sous-type b

Génotype 3, sous-type a

Génotype 1, sous-type i

Génotype 1, sous-type ?

100


Transmissions NosocomialesTransmissions NosocomialesTransmissions NosocomialesTransmissions Nosocomiales

Région HVR1 (81 nt)CLUSTALXDNADist (PHYLIP 3.5)Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2)Neighbor-JoiningNJPlot

2aQ2B

3aCB2bJFH1

1aHCT18X56a33

4aED431aHCT27X5

Patient 7Patient 8Patient 16Patient 18

Patient 17Patient 2

Patient 28Patient 64


5aSA13Patient 59


Patient 601bAWV2C33

1bHVR3812

0.2



MAXIMUM DE VRAISEMBLANCEMAXIMUM DE VRAISEMBLANCE

Assignation Provisoire d’un Nouveau Assignation Provisoire d’un Nouveau Sous-type : Sous-type : Etude de la région NS5BEtude de la région NS5B

Patient 16Patient 18Patient 17Patient 8Patient 7


1f_L38350

1e_AY894555

1g_AF271822

1g_AF271820

1d_L39302

1d_L39299

1b_M58335

1b_D90208

1i_AY434119

1h_AY434131

1j_AY434158

1j_AY434128

1k_AY434122

1k_AY434112

1a_M67463

1a_M62321

1c_D14853

1c_AY051292

0.05

PARCIMONIEPARCIMONIE

Patient 16Patient 18Patient 17Patient 7Patient 8Patient 64Patient 461f_L38350

1h_AY434131

1i_AY434119

1d_L39302

1d_L39299

1b_M58335

1b_D90208

1e_AY894555

1g_AF271822

1g_AF271820

1j_AY434158

1j_AY434128

1k_AY434122

1k_AY434112

1a_M67463

1a_M62321

1c_D14853

1c_AY051292


MAXIMUM DE VRAISEMBLANCEMAXIMUM DE VRAISEMBLANCE

Assignation Provisoire d’un Nouveau Assignation Provisoire d’un Nouveau Sous-type : Sous-type : Etude de la région Core-E1Etude de la région Core-E1

PARCIMONIEPARCIMONIE

Patient 7Patient 64

Patient 46Patient 18Patient 16

Patient 17Patient 8

1h_AY4341321h_AY257087

1d_L383771i_AY434120

1i_L484951b_M583351b_L38372

1b_D902081f_L38371

1l_AY2570911l_AY257083

1c_AY0512921c_D14853

1g_AF2717971g_AF2717981e_AY894553

1e_L383611k_AY434123

1k_AY4341131j_AY434129

1j_AY4341061a_M67463

1a_M62321

0.02 Patient 64Patient 46Patient 18Patient 16Patient 17Patient 7Patient 81d_L383771i_AY4341201i_L484951b_D902081b_L383721b_M583351l_AY2570911l_AY2570831c_AY0512921c_D148531g_AF2717971g_AF2717981e_AY8945531e_L383611k_AY4341231k_AY4341131j_AY4341291j_AY4341061a_M674631a_M623211f_L383711h_AY4341321h_AY257087


• Epidémie à VHC au sein d’une unité d’hémodialyse en Grèce ("Papageorgiou General HospitalPapageorgiou General Hospital", Thessaloniki), Thessaloniki)

• 17 patients hémodialysés contaminés en quelques mois

• Analyses génétique et phylogénique

• Etude de la réponse neutralisante– Système HCVpp

Lavillette et al., J Virol 2005;79:6023-34

Transmission Nosocomiale en GrèceTransmission Nosocomiale en GrèceTransmission Nosocomiale en GrèceTransmission Nosocomiale en GrèceVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

0,1 substitution per site

HCV-1HCV-H

SR052HC-G9

SR037HC-J4

HCV-BKBE90

Pt-11Pt-10Pt-9Pt-5Pt-12Pt-13Pt-15

Pt-16Pt-2Pt-4

Pt-3Pt-1Pt-17Pt-7Pt-6Pt-8

1b

HCV-1

1a

1c

Souche B

Souche A



Région HVR1 (81 nt)CLUSTALXDNADist (PHYLIP 3.5)Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2)Neighbor-JoiningNJPlot


Incubation HCVpp avec des dilutions de sérum

Détermination de l’infectivité (bruit de fond)

Détermination de l’activité neutralisante du sérum

Infection de cellules Huh7

Pseudoparticules Rétrovirales (HCVpp)Pseudoparticules Rétrovirales (HCVpp)Pseudoparticules Rétrovirales (HCVpp)Pseudoparticules Rétrovirales (HCVpp)


Patient-10 (souche B)

ARN VHC(UI/mL)

Semaines

% neutralisationinfection

Huh7

ARN VHC

Réponse Neutralisante

ALAT

Contrôle Neutralisation1,E+01

1,E+02

1,E+03

1,E+04

1,E+05

1,E+06

1,E+07

1,E+08

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

200

1,E+01

1,E+02

1,E+03

1,E+04

1,E+05

1,E+06

1,E+07

1,E+08

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

-60

-50

-40

-30

-20

-10

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

• Absence de réponse neutralisante et absence de contrôle de l’infection


Réponse Neutralisante - Groupe 1Réponse Neutralisante - Groupe 1Réponse Neutralisante - Groupe 1Réponse Neutralisante - Groupe 1Virus de l’Hépatite C et Marqueurs

• Réponse neutralisante forte et spécifique• Réponse neutralisante inversement proportionnelle

à la cinétique de la charge virale

Patient-1 (souche A)

1,E+01

1,E+02

1,E+03

1,E+04

1,E+05

1,E+06

1,E+07

1,E+08

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

200

1,E+01

1,E+02

1,E+03

1,E+04

1,E+05

1,E+06

1,E+07

1,E+08

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

% neutralisationinfection

Huh7

Réponse Neutralisante - Groupe 2Réponse Neutralisante - Groupe 2Réponse Neutralisante - Groupe 2Réponse Neutralisante - Groupe 2

ARN VHC(UI/mL)

Semaines

ARN VHC

Réponse Neutralisante

ALAT

Contrôle Neutralisation








résistance



Histoire NaturelleHistoire NaturelleHistoire NaturelleHistoire Naturelle

Hépatite Aiguë

Hépatite Chronique50 - 85%

Cirrhose 20 - 30%

Décompensation6 - 10%

HCC4 - 5% par an

Mortalité

10 -

30

ans


Histoire NaturelleHistoire NaturelleHistoire NaturelleHistoire Naturelle

Hépatite Aiguë


Cirrhose 20 - 30%

Décompensation6 - 10%

HCC4 - 5% par an

Mortalité

10 -

30

ans


Persistance ViralePersistance Virale

• Persistance virale– Echec de la réponse immune, pourtant

présente et adaptée, à éliminer le virus ou les cellules qui l’abritent

• Interface complexe


Processus Multi-étapeProcessus Multi-étape

Hépatite Aiguë

Infection Chronique


1. Mise en place de l’infection aiguë

2. Etablissement de la persistance virale

3. Maintient de l’infection au cours du temps


Hépatite Aiguë

Infection Chronique


1. Mise en place de l’infection aiguë

2. Etablissement de la persistance virale ?

3. Maintient de l’infection au cours du temps

Processus Multi-étapeProcessus Multi-étapeVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Adapted from Ferrari C, Gasroenterology 2007; 132(2): 801-805

Persistance du VHCPersistance du VHCVirus de l’Hépatite C et Marqueurs






résistance



Roque-Afonso et al., J Virol 2005;79:6349-57)

Région 5’NCRégion 5’NC Région E1-E2Région E1-E2

Compartimentation Plasma-PBMCCompartimentation Plasma-PBMCCompartimentation Plasma-PBMCCompartimentation Plasma-PBMCVirus de l’Hépatite C et Marqueurs






résistance



HEPATITE C : Stratégie HEPATITE C : Stratégie

Diagnostique & Suivi Diagnostique & Suivi

VirologiqueVirologique

HEPATITE C : Stratégie HEPATITE C : Stratégie

Diagnostique & Suivi Diagnostique & Suivi

VirologiqueVirologique

Virus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite CI. Cinétique des Marqueurs I. Cinétique des Marqueurs

VirologiquesVirologiques

Virus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite CI. Cinétique des Marqueurs I. Cinétique des Marqueurs

VirologiquesVirologiques

Marqueurs VirologiquesMarqueurs VirologiquesMarqueurs VirologiquesMarqueurs VirologiquesStratégie diagnostique & suivi virologique

Marqueurs indirects

Anticorps anti-VHC totaux

Marqueurs directs

ARN VHC

Génotype VHC

Cinétique des MarqueursCinétique des MarqueursCinétique des MarqueursCinétique des Marqueurs

ARN VHC

Symptômes +/-

Temps après contage (mois)

Tit

re

Anti-VHC

ALAT

Normal

0 1 2 3 4 5 6 12 24 36 48

Infection Aiguë

Stratégie diagnostique & suivi virologique

Cinétique des MarqueursCinétique des MarqueursCinétique des MarqueursCinétique des Marqueurs

ARN VHC

Symptômes +/-

Temps après contage (mois)

Tit

re

Anti-VHC

ALAT

0 1 2 3 4 5 6 12 24 36 48

Infection Chronique

Normal


Virus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite CII. Tests VirologiquesII. Tests VirologiquesVirus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite CII. Tests VirologiquesII. Tests Virologiques

Tests Virologiques MoléculairesTests Virologiques MoléculairesTests Virologiques MoléculairesTests Virologiques Moléculaires

Tests quantitatifsSeuil de détection ≥ qualitatifs

Quelle quantité est présente ?

Tests qualitatifsTrès sensibles( 50 IU/mL)

Est-ce que le VHC est présent ?


Détermination du Génotype

Quel type de VHC est présent ?

Tests Virologiques MoléculairesTests Virologiques MoléculairesTests Virologiques MoléculairesTests Virologiques MoléculairesStratégie diagnostique & suivi virologique

Est-ce que le VHC est présent et en quelle quantité ?


Quel type de VHC est présent ?

Tests Quanti-Qualitatifs

Détection-Quantification de l’ARN VHC

Intérêts de la Détection - Intérêts de la Détection - Quantification de l’ARN VHCQuantification de l’ARN VHCIntérêts de la Détection - Intérêts de la Détection - Quantification de l’ARN VHCQuantification de l’ARN VHC

• Evaluation de la réplication virale chez des patients anticorps anti-VHC positifs

• Evaluation de la réponse virologique au cours du traitement pegIFN - RBV

– Réponse virologique rapide (semaine 4)– Réponse virologique précoce (semaine 12)– Réponse fin de traitement (EOT)– Réponse virologique soutenue (semaine 24 post-Rx)


Techniques DisponiblesTechniques DisponiblesTechniques DisponiblesTechniques Disponibles

b-DNA PCR

Branched DNA Polymerase chain reaction

Amplification du signal Amplification de la cible

Quantitative Quantitative


Principe des TechniquesPrincipe des TechniquesPrincipe des TechniquesPrincipe des Techniques

b-DNA PCR





bDNA : PrincipebDNA : PrincipebDNA : PrincipebDNA : Principe

ARN VHC

Capture ProbeCapture Extender

Label extender

Preamplifier

Amplifier with hybridizedlabel probe

Adapted from Siemens


bDNA : Forces & FaiblessesbDNA : Forces & FaiblessesbDNA : Forces & FaiblessesbDNA : Forces & Faiblesses

• Forces– Quantification indépendante du génotype– Tolérance de polymorphismes nucléotidiques– Faible volume de prise d’essai– Large intervalle de quantification linéaire

. ≥ 6.90 Log10 UI/mL

• Faiblesses– Faible sensibilité

. LLOD: 2.80 Log10 UI/mL

– Faux positifs dans les faibles valeurs – Méthode semi-automatisée (Siemens system 340 analyzer)– 12 contrôles par run


Principe des TechniquesPrincipe des TechniquesPrincipe des TechniquesPrincipe des Techniques

b-DNA PCR





PCR : PrincipePCR : PrincipePCR : PrincipePCR : Principe

VHC ARN ADNc Amplicons(ADNdb)


Avantages Techniques de la PCR Avantages Techniques de la PCR en temps réelen temps réel

• Diminution du risque de contamination

• Amélioration de la sensibilité

• Augmentation de l’intervalle de quantification linéaire

• Amélioration précision et reproductibilité

• Augmentation de débit à travers l’automatisation

• Diminution des coûts


10 102 103 104 105 106 107 108

Cobas AmplicorHCV Monitor v2.0

SuperQuant

LCx HCV RNAAssay

Versant HCV RNA3.0 (bDNA)

Intervalle de QuantificationIntervalle de QuantificationStratégie diagnostique & suivi virologique

10 102 103 104 105 106 107 108

Cobas AmplicorHCV Monitor v2.0

SuperQuant

LCx HCV RNAAssay

Versant HCV RNA3.0 (bDNA)

TaqMan 48 HCVTaqMan 48 HCV(Roche)(Roche)

HCV Quant ASRHCV Quant ASR(Abbott)(Abbott)

Versant HCV RNAVersant HCV RNA1.0 (kPCR, Siemens)*1.0 (kPCR, Siemens)**en développement

Intervalle de QuantificationIntervalle de QuantificationStratégie diagnostique & suivi virologique

• Diminution du risque de contamination

• Amélioration de la sensibilité

• Augmentation de l’intervalle de quantification linéaire

• Amélioration précision et reproductibilité

• Augmentation de débit à travers l’automatisation

• Diminution des coûts


Avantages Techniques de la PCR Avantages Techniques de la PCR en temps réelen temps réel

Plates-formesPlates-formesPlates-formesPlates-formesCAP-CTM96 (ROCHE)

kPCR (SIEMENS)

m2000SP-m2000RT (ABBOTT)


• Remplace les techniques qualitatives de détection de l’ARN VHC

• Quantifie l’ensemble des charges virales observées en pratique clinique– Faibles charges virales au cours du traitement

• Surveille efficacement les cinétiques virales (évaluation précoce des réponses virologiques au traitement)


Avantages Cliniques de la PCR Avantages Cliniques de la PCR en temps réelen temps réel

Quantification de l’ARN du VHCQuantification de l’ARN du VHCQuantification de l’ARN du VHCQuantification de l’ARN du VHCCAP-CTM48 (Roche) versus bDNA 3.0 (Siemens)

Dif

fere

nce

bet

wee

n H

BV

DN

A l

eve

ls m

eas

ure

d i

n

CA

P/C

TM

an

d i

n b

DN

A (

in L

og

10 I

U/m

L)

3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0-1.5

1.0

-1.0

1.5

0.0

0.5

-0.5

Mean of HCV RNA levels measured in CAP/CTM and bDNA (in Log10 UI/mL)

Genotype 1 (n=29)

Genotype 2 (n=27)

Genotype 3 (n=29)

Genotype 4 (n=30)

Genotype 5 (n=9)

Genotype 6 (n=2)

Chevaliez et al., 2007; Hepatology, 46(1): 22-31.

Meandifference

+ 1.96 meandifference

- 1.96 meandifference


Différences de QuantificationDifférences de QuantificationDifférences de QuantificationDifférences de Quantification

Chevaliez et al., 2007; Hepatology, 46(1): 22-31.

Genotype 1 (n=29)

Genotype 2 (n=27)

Genotype 3 (n=29)

Genotype 4 (n=30)

Genotype 5 (n=9)

Genotype 6 (n=2)

-1.5

1.0

-1.0

1.5

0.0

0.5

-0.5

15%15%30%30%

Dif

fere

nce

bet

wee

n H

CV

RN

A l

eve

ls m

eas

ure

d i

n

CA

P/C

TM

an

d i

n b

DN

A (

in L

og

10 U

I/m

L)

CAP-CTM48 (Roche) versus bDNA 3.0 (Siemens)


Chevaliez et al., manuscript in preparation.

m2000SP-m2000RT (Abbott) versus bDNA 3.0 (Siemens)

Mean of HCV RNA levels measured in m2000SP/m2000RT and bDNA (in Log10IU/mL)

3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0-1.5

1.0

-1.0

1.5

0.0

0.5

-0.5

Dif

fere

nce

bet

wee

n H

CV

RN

A l

eve

ls m

eas

ure

d i

n

m20

00 S

P/m

200

0 RT a

nd

in

bD

NA

(in

Lo

g1

0 I

UI/

mL

)

Meandifference

+ 1.96 meandifference

- 1.96 meandifference

Genotype 1 (n=55)

Genotype 2 (n=21)

Genotype 3 (n=29)

Genotype 4 (n=24)

Genotype 5 (n=9)

Genotype 6 (n=3)

Quantification de l’ARN du VHCQuantification de l’ARN du VHCQuantification de l’ARN du VHCQuantification de l’ARN du VHCStratégie diagnostique & suivi virologique

David Sherman., Molecular Symposium, September 2007 (source: Siemens Medical Solutions Diagnostics).

kPCR HCV 1.0 (Siemens) versus bDNA 3.0 (Siemens)

132 clinical samples

Quantification de l’ARN du VHCQuantification de l’ARN du VHCQuantification de l’ARN du VHCQuantification de l’ARN du VHCStratégie diagnostique & suivi virologique


Génotypes du VHCGénotypes du VHCGénotypes du VHCGénotypes du VHC

Simmonds et al. Hepatology 2005; Murphy et al., AASLD, Hepatology, 2007.

7

Central Africa


Intérêts de la Détermination du Intérêts de la Détermination du GénotypeGénotypeIntérêts de la Détermination du Intérêts de la Détermination du GénotypeGénotype

• Détermination systématique du

génotype

– Facteur prédictif de la réponse au

traitement

– Conditionne

• La dose de ribavirine

• La durée du traitement (24 vs 48 semaines)


Détermination du GénotypeDétermination du GénotypeDétermination du GénotypeDétermination du Génotype

• Détermination moléculaire du génotype VHC (génotypage)

• Détermination sérologique du génotype VHC (“sérotypage”)


Détermination du GénotypeDétermination du GénotypeDétermination du GénotypeDétermination du Génotype

• Détermination moléculaire du génotype VHC (génotypage)

• Détermination sérologique du génotype VHC (“sérotypage”)


Cibles pour le GénotypageCibles pour le GénotypageCibles pour le GénotypageCibles pour le Génotypage


IRES

5’NTR 3’NTR


NS4A

NS4B

p 7



Cibles pour le GénotypageCibles pour le GénotypageCibles pour le GénotypageCibles pour le Génotypage


IRES

5’NTR 3’NTR


NS4A

NS4B

p 7



Méthodes de GénotypageMéthodes de GénotypageMéthodes de GénotypageMéthodes de Génotypage

• Séquençage direct des produits d’amplification1

• Restriction fragment length polymorphism analysis (RFLP)2

• Hybridation inverse des produits d’amplification sur support solide : Line Probe Assay (INNO-LiPA HCV, Innogenetics)3

• Autres méthodes :– Single-strand conformation polymorphism analysis (SSCP)4

– Spectrométrie de masse MALDI-TOF après miniséquençage5

1Arens et al., J Clin Virol, 2001; 22:11-29.; 2Davidson et al., J Gen Virol 1995; 76: 1197-204; 4Lareu et al., 1997; 3Le Pogam et al., 1998; J Clin Microbiol; 36: 1461-3; Ilina et al., J Clin Miocrobiol, 2005; 43(6): 2810-15


Méthodes de GénotypageMéthodes de GénotypageMéthodes de GénotypageMéthodes de Génotypage

• Séquençage direct des produits d’amplification1

• Restriction fragment length polymorphism analysis (RFLP)2

• Hybridation inverse des produits d’amplification sur support solide : Line Probe Assay (INNO-LiPA HCV, Innogenetics)3

• Autres méthodes :– Single-strand conformation polymorphism analysis (SSCP)4

– Spectrométrie de masse MALDI-TOF après miniséquençage5

1Arens et al., J Clin Virol, 2001; 22:11-29.; 2Davidson et al., J Gen Virol 1995; 76: 1197-204; 4Lareu et al., 1997; 3Le Pogam et al., 1998; J Clin Microbiol; 36: 1461-3; Ilina et al., J Clin Miocrobiol, 2005; 43(6): 2810-15


VersantVersant®® HCV Genotype 2.0 HCV Genotype 2.0 AssayAssayVersantVersant®® HCV Genotype 2.0 HCV Genotype 2.0 AssayAssay

3

17

15

20

21

23. AC

Marker

CC

AC

4

5

10

12

24. 6 c-l

16

2b 3a 4b 6a1b 6c-l1a

6

7

8

9

11

13

14

18

19

25. 1a

25. 1b

5’UTRSame bands

as the 1.0 version

Core region


Importance de la Région Virale pour la Importance de la Région Virale pour la Détermination du Sous-typeDétermination du Sous-typeImportance de la Région Virale pour la Importance de la Région Virale pour la Détermination du Sous-typeDétermination du Sous-type

Analyse phylogénique de la région

5’NC

1ère génération

de Line probe assay

(LiPA1.0)

2ème génération

de Line probe assay

(LiPA2.0)PCR en

temps réel

1a (n=233) 80,3%

(n=187)

73,0% (n=170)

98,3% (n=229)

94,4% (n=220)

1b (n=253) 94,1%

(n=238)

91,7% (n=232)

98,0% (n=248)

93,3% (n=236)

Chevaliez et al., EASL 2009.


Virus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite CIII. Diagnostic VirologiqueIII. Diagnostic Virologique

Virus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite CIII. Diagnostic VirologiqueIII. Diagnostic Virologique

Diagnostic de l’Infection AiguëDiagnostic de l’Infection AiguëDiagnostic de l’Infection AiguëDiagnostic de l’Infection Aiguë

Ac anti-HCV

-

-

+

+

ARN VHC*

-

+

-

+

* Technique sensible seuil de détection ≤ 50 IU/ml

Diagnostic

Absence d’infection aiguë

Infection aiguë C

Probablement pas d’infection aiguë

Difficile de conclure


Diagnostic de l’Infection ChroniqueDiagnostic de l’Infection ChroniqueDiagnostic de l’Infection ChroniqueDiagnostic de l’Infection Chronique

• Détection des anticorps anti-VHC totaux par ELISA

• Recherche d’ARN du VHC par un test sensible*

• Détection d’ARN du VHC* si le test ELISA (-) chez des patients hémodialysés ou immunodéprimés

* Technique sensible seuil de détection ≤ 50 IU/ml


Virus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite CIII. Prise en Charge III. Prise en Charge

ThérapeutiqueThérapeutique

Virus de l’Hépatite CVirus de l’Hépatite CIII. Prise en Charge III. Prise en Charge

ThérapeutiqueThérapeutique

Intérêts des Tests Virologiques Intérêts des Tests Virologiques en Thérapeutiqueen ThérapeutiqueIntérêts des Tests Virologiques Intérêts des Tests Virologiques en Thérapeutiqueen Thérapeutique

Consensus conference: treatment of hepatitis C; 2002, Gastroenterol Clin Biol, 26(2): B303-20

• Décision de traiter

• Optimisation du schéma thérapeutique

• Etude de la réponse virologique au traitement


Classification des PatientsClassification des PatientsClassification des PatientsClassification des Patients

Type1

Types2, 3

Types4, 5, 6

Génotypes VHC

Consensus conference: treatment of hepatitis C; 2002, Gastroenterol Clin Biol, 26(2): B303-20


Indications Actuelles du TraitementIndications Actuelles du TraitementIndications Actuelles du TraitementIndications Actuelles du Traitement

• Patients infectés par un VHC de génotype 1– Interferon pégylé plus ribavirine (1000 - 1400 mg/j)– Durée : 48 semaines

• Patients infectés par un VHC de génotype 2/3– Interferon pégylé plus ribavirine (800 mg/j)– Durée : 24 semaines

• Patients infectés par une VHC de génotype 4, 5 et 6– Interferon pégylé plus ribavirine (1000 - 1400 mg/j)– Durée : 48 semaines


Génotype VHC

VHC-1 (4,5,6)Quantification ARN

VHC-2,3

Bithérapie24 semaines

Ribavirine 800 mg

Bithérapie48 semaines

Ribavirine 1000-1400 mg

Quantification ARN à S12

Diminution < 2 Log Diminution 2 Log ARN VHC +

Arrêt traitementpoursuite avec

IFN pégylé pour ralentir la

progression de la maladie

hépatique

Poursuite jusqu’à S24

Si ARN VHC -Poursuite jusqu’à

S48

diminution 2 Log ARN VHC -

Poursuite jusqu’à S48

Optimisation du Traitement en Optimisation du Traitement en Fonction de la Réponse VirologiqueFonction de la Réponse VirologiqueOptimisation du Traitement en Optimisation du Traitement en Fonction de la Réponse VirologiqueFonction de la Réponse Virologique

• Outils virologiques sensibles– Sensibilité : 10-15 UI/mL– Evaluation de la réponse au traitement

• Répondeurs virologiques rapides– Raccourcissement de la durée de traitement

• Répondeurs virologiques précoces partiels– Allongement de la durée de traitement


Raccourcissement de la Durée de Traitement

RVR facteur prédictif de la RVSRVR facteur prédictif de la RVSRVR facteur prédictif de la RVSRVR facteur prédictif de la RVS

0

20

40

60

80

100

RVR

RVPc

RVPp

Génot

ype

1

Génot

ype

2

Génot

ype

3

Génot

ype

4

Fried et al., EASL 2008, Journal of Hepatology, 48(Suppl.2): S5

N= 1383 (Analyse rétrospective)


Importance de la RVRImportance de la RVRImportance de la RVRImportance de la RVR

• Analyse rétrospective de patients infectés par un VHC de génotype 1 traités pendant 48 semaines par pegIFN alfa-2a + RBV (N = 453)

ARN VHC PositifÀ S24

4 12 24

Semaine ARN négatif

91

66

45

2

Ferenci P, et al. J Hepatol. 2005;43:425-433.

20

40

60

80

100

RV

S (

%)

0


Traitement Court : Génotype 1Traitement Court : Génotype 1Traitement Court : Génotype 1Traitement Court : Génotype 1

• Patients par un VHC de génotype 1

– ARN VHC < 600,000 IU/ml

– PegIFN-2b + ribavirine

– 24 semaines de traitement

– Comparaison des données obtenus avec les résultats de l’étude pivot (Mann et al., Lancet 2001)

Zeuzem et al., J Hepatol 2006;44:97-103.


Traitement Court : Génotype 1Traitement Court : Génotype 1Traitement Court : Génotype 1Traitement Court : Génotype 1

Zeuzem et al., J Hepatol 2006;44:97-103.

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Week 4 Week 12 Week 24

24 weeks24 weeks

48 weeks48 weeks(Mann et al., (Mann et al., 2001)2001)

Time to first negative HCV RNA (< 50 IU/ml)Time to first negative HCV RNA (< 50 IU/ml)

% S

VR

% S

VR


Jensen et al., Hepatology 2006;43:954-960

Traitement court : Génotype 1Traitement court : Génotype 1Traitement court : Génotype 1Traitement court : Génotype 1

0

20

40

60

80

100

% d

e R

VS

% d

e R

VS

Peg-IFN alpha 2a 180 µg/semaine + RBV 800 ou 1000-1200 mg/jPeg-IFN alpha 2a 180 µg/semaine + RBV 800 ou 1000-1200 mg/j

ARN VHC > 50 UI/mL à S4

24-DF24-DF

24-DS24-DS

48-DF48-DF

48-DS48-DS

73%

89% 88% 91%

ARN VHC < 50 UI/mL à S4

44%

23%35%

16%


Shiffman et al., EASL 2006.

Etude ACCELERATE : Génotypes 2/3Etude ACCELERATE : Génotypes 2/3Etude ACCELERATE : Génotypes 2/3Etude ACCELERATE : Génotypes 2/3Stratégie diagnostique & suivi virologique

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Génotype 2 Génotype 3

16 semaines

24 semaines% R

VS

% R

VS

p=<0.0001p=<0.0001 p=0.1565p=0.1565

65%

82%

65%71%

Rapid virological responseRapid virological responseHCV RNA < 50 IU/ml at week 4HCV RNA < 50 IU/ml at week 4

No rapid virological responseNo rapid virological responseHCV RNA ≥ 50 IU/ml at week 4HCV RNA ≥ 50 IU/ml at week 4

Etude ACCELERATE : Génotypes 2/3Etude ACCELERATE : Génotypes 2/3Etude ACCELERATE : Génotypes 2/3Etude ACCELERATE : Génotypes 2/3Stratégie diagnostique & suivi virologique

Shiffman et al., EASL 2006.

0102030405060708090

100

16 semaines

24 semaines

0102030405060708090

100

82%90%

27%

49%

SVR rate SVR rate

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

14 weeks14 weeks

24 weeks24 weeks

% S

usta

ined

vir

olo

gic

al re

sp

on

se

% S

usta

ined

vir

olo

gic

al re

sp

on

se

Dalgard et al., Hepatology 2008;47:35-42

RVR (HCV RNA < 50 IU/ml at week 4)

93%84%

Genotype 2 Genotype 3

92%97%

Traitement court : Génotypes 2/3Traitement court : Génotypes 2/3Traitement court : Génotypes 2/3Traitement court : Génotypes 2/3


PegIFN-2b

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

12 weeks12 weeks

24 weeks24 weeks

% S

usta

ined

vir

olo

gic

al re

sp

on

se

% S

usta

ined

vir

olo

gic

al re

sp

on

se

(Lagging et al., Hepatology 2008;47:1837-45)

71%71%

91%91%

RVR

62%62%

41%41%

n = 120n = 120n = 111n = 111 n = 68n = 68n = 71n = 71

No RVR

PegIFN-2a

Traitement court : Génotypes 2/3Traitement court : Génotypes 2/3Traitement court : Génotypes 2/3Traitement court : Génotypes 2/3


• Durée de traitement de 6 mois chez tous les patients avec une RVR indépendamment du génotype

• Raccourcissement de la durée de traitement à 12 ou 16 semaines chez les patients infectés par une génotype 2/3 avec un ARN indétectable à S1 ou S2 (?)

RésuméRésuméRésuméRésuméStratégie diagnostique & suivi virologique

Allongement de la Durée de Traitement

Traitement Long : Génotypes 2/3Traitement Long : Génotypes 2/3Traitement Long : Génotypes 2/3Traitement Long : Génotypes 2/3

• Older age

• Male gender

• High BMI

• Fibrosis ≥ F3


Génotype 1 : Traitement LongGénotype 1 : Traitement LongGénotype 1 : Traitement LongGénotype 1 : Traitement Long

010

20

30

40

50

60

70

80

90

100

48 weeks(n=230)

72 weeks(n=225)

53% 54%% S

VR

Berg et al., Gastroenterology 2006;130:1086-97


0

20

40

60

80

100

% d

e R

VP

NSNS NSNS

NSNS

p=0.04p=0.04

S 4 S 12 S 4 S 12

ARN VHC < 50 UI/mlARN VHC < 50 UI/ml ARN VHC ≥ 50 UI/mlARN VHC ≥ 50 UI/ml

Berg et al., Gastroenterology 2006;130:1086-97

48 semaines

72 semaines

Génotype 1 : Traitement LongGénotype 1 : Traitement LongGénotype 1 : Traitement LongGénotype 1 : Traitement LongStratégie diagnostique & suivi virologique

RésuméRésuméRésuméRésuméStratégie diagnostique & suivi virologique

• Allongement de la durée de traitement à 72 semaines améliore la RVS :

– Chez les patients avec une RVP partielle

– Chez les non-répondeurs à un premier traitement par une bi-thétrapie standard qui sont retraités

HEPATITE C : Résistance HEPATITE C : Résistance

aux Traitementsaux TraitementsHEPATITE C : Résistance HEPATITE C : Résistance

aux Traitementsaux Traitements

• Définition– Propriétés intrinsèques des souches

virales qui s’opposent à l’action antivirale des effecteurs ou à des médicaments antiviraux

Résistance aux traitements

Résistance ViraleRésistance ViraleRésistance ViraleRésistance Virale

• Résistance du VHC à la thérapie par l’interféron

• Résistance du VHC à la ribavirine

• Résistance du VHC aux inhibiteurs spécifiques


Résistance du VHCRésistance du VHCRésistance du VHCRésistance du VHC






PEG-IFN- 2a + ribavirine (Fried et al., 2002)

PEG-IFN- 2b + ribavirine(Manns et al., 2001)

Manns et al., Lancet 2001;358:958-65 ; Fried et al., N Engl J Med 2002;347:975-82; Hadziyannis et al., Ann Intern Med 2004;140:346-55.

PEG-IFN- 2a + ribavirine (Hadziyannis et al., 2004)

Génotype 1 Génotypes 2, 3

54%54%

24%24%

58%58%

48%48%

18%18%16%16%


Taux d’EchecsTaux d’EchecsTaux d’EchecsTaux d’Echecs

FacteursFacteursVirauxViraux

CaractéristiquesCaractéristiquesde la maladiede la maladie

FacteursFacteursd’Hôted’HôteTraitementTraitement

ECHECS DU TRAITEMENTECHECS DU TRAITEMENT

Cinétique Virale sous TraitementCinétique Virale sous TraitementCinétique Virale sous TraitementCinétique Virale sous Traitement

2nde phase

7 14 T(n)

Cutoff

1ère phase

1

0 1 2 3

2

3

4

5

6

7

Jours

Neumann et al., Science 1998;282:103-7.


0

1

2

3

4

5

6

7

0 4 7 8 15 22 291-7-28

Cut-off tests qualitatifs

Cut-off tests quantitatifs

Génotype 4

Génotype 1

Génotype 3

AR

N d

u V

HC

(L

og

10 U

I/mL

)

Jours

7

Résistance IntrinsèqueRésistance IntrinsèqueRésistance IntrinsèqueRésistance IntrinsèqueRésistance aux traitements

Pawlotsky et al., manuscript en preparation.

0

1

2

3

4

5

6

7

0 4 7 8 15 22 291-7-28



Génotype 4

Génotype 1

Génotype 3

AR

N d

u V

HC

(L

og

10 U

I/mL

)

Jours

7



0

1

2

3

4

5

6

7

0 4 7 8 15 22 291-7-28



Génotype 4

Génotype 1

Génotype 3

AR

N d

u V

HC

(L

og

10 U

I/mL

)

Jours

7



Viral FactorsViral Factors

Antiviral Antiviral resistanceresistance

DelayedDelayedclearanceclearance

LongerLongerhalf-life ofhalf-life of

infected cellsinfected cells

– Motif nucléotidique responsable de cette différence de sensibilité ?

– Pas de sélection de mutations de résistance, même si modification de la composition de la quasi-espèce virale

RésuméRésuméRésuméRésuméRésistance aux traitements






Mécanismes d’Action Mécanismes d’Action Hypothétiques de la RBVHypothétiques de la RBVMécanismes d’Action Mécanismes d’Action Hypothétiques de la RBVHypothétiques de la RBV

Adapted from Lau et al., Hepatology 2002; 35: 1002-9.

RibavirineRibavirine

RibavirineRibavirine

Transporteur

RMP RDP RTP

GMP

GTP

IMPDHIMP

RdRp

Réplication

HCV RNA

Hépatocyte

(2) Inhibition de la RdRp VHC(1) Inhibition de l’IMPDH

HCV RNA "Catastrophe

(3) Effet mutagène

erreur”

CTLTh1 IFN-, TNF-

(4) Effets immunomodulateurs


Pawlotsky et al., Gastroenterology 2004;126:703-14

-1.0-1.0

-0.5-0.5

0.00.0

0.50.5

00 22 44 66 88 1010 1212 1414 1616 1818 2020 2222 2424 2626 2828

Mean HCV RNA decrease (log IU/ml)Mean HCV RNA decrease (log IU/ml)

Time (days)Time (days)

ControlsControls

RibavirinRibavirinmonotherapymonotherapy


Effet Antiviral de la RBVEffet Antiviral de la RBVEffet Antiviral de la RBVEffet Antiviral de la RBV

00

1100

2200

3300

4400

5500

SemainesSemaines

**

**

**

**

**

* p<0.05* p<0.05

2424 72726060525248483030 3636

RBV jusqu’à S52RBV jusqu’à S52

Arrêt RBV à S24Arrêt RBV à S24

Bronowicki et al., Gastroenterology 2006

Po

urc

enta

ge

de

Rec

hu

tes

(HC

V R

NA

+)

Po

urc

enta

ge

de

Rec

hu

tes

(HC

V R

NA

+)

Suivi post-thérapeutiqueSuivi post-thérapeutique

Prévention de la RechutePrévention de la RechutePrévention de la RechutePrévention de la RechuteRésistance aux traitements

Prévention de la Rechute Prévention de la Rechute (PROVE-2)(PROVE-2)Prévention de la Rechute Prévention de la Rechute (PROVE-2)(PROVE-2)


Hézode et al., en révision favorable.

T12/PR12

n/N=

T12/P12(Sans RBV)

48

22/460

10

20

40

50

Ta

ux

de

re

ch

ute

s (

%)

30

T12/PR24

14

8/57 19/63

30

PR48(Contrôle)

22

10/45

• Ribavirin mechanisms of action in chronic hepatitis C remain unknown

• Ribavirin direct antiviral effect is modest and transient

• Long-term ribavirin administration does not select for specific resistance substitutions

RésuméRésuméRésuméRésuméRésistance aux traitements






Cibles Cibles Potentielles des Potentielles des Inhibiteurs Inhibiteurs SpécifiquesSpécifiques

Cibles Cibles Potentielles des Potentielles des Inhibiteurs Inhibiteurs SpécifiquesSpécifiques


1. Attachement viral, fusion, décapsidation

2. Traduction de l’ARN viral

3. Maturation de la polyprotéine

4. Réplication du génome viral

5. Maturation de la particule virale


Viral entry inhibitorsViral entry inhibitorsHepatitis C immunoglobulin HCIg)Hepatitis C immunoglobulin HCIg)HCV-Ab 68 and Ab 65 (monoclonal Ab)HCV-Ab 68 and Ab 65 (monoclonal Ab)

HCV RNA translation inhibitorsHCV RNA translation inhibitors ISIS 14803 (antisense) ISIS 14803 (antisense) AVI – 4065 (antisense) AVI – 4065 (antisense) Heptazyme (ribozyme)Heptazyme (ribozyme)VGX-410C (small molecule IRES inhibitor)VGX-410C (small molecule IRES inhibitor)TT 033 (siRNA) TT 033 (siRNA)

Posttranslational processing inhibitorsPosttranslational processing inhibitors NS3-4A serine proteinase inhibitorsNS3-4A serine proteinase inhibitors

BILN 2061BILN 2061ITMN 191ITMN 191VX-950 VX-950 SCH 503034SCH 503034ACH-806/GS-9132ACH-806/GS-9132

HCV replication inhibitorsHCV replication inhibitors NS5B polymerase inhibitorsNS5B polymerase inhibitors

MK-0608MK-0608HCV-796HCV-796R1626R1626JTK-003JTK-003NM-283NM-283XTL 2125XTL 2125

Cyclophilin B inhibitorsCyclophilin B inhibitorsDEBIO-025DEBIO-025NIM 811NIM 811

NS5A inhibitorsNS5A inhibitorsA-831, A-689A-831, A-689

Helicase inhibitorsHelicase inhibitors QU663 QU663 Recombinant Ab fragmentsRecombinant Ab fragments

Virus assembly and release inhibitorsVirus assembly and release inhibitorsUT-231B (iminosugar-glucosidase inhibitor)UT-231B (iminosugar-glucosidase inhibitor)Celgosivir (glucosidase inhibitor) Celgosivir (glucosidase inhibitor)

Phase of DevelopmentPhase of Development

**

**

**

**

PreclinicalPreclinical II IIII IIIIII IVIV

**

**

**

Pawlotsky JM, Chevaliez S, McHutchison JG, Gastroenterology 2007;132:1979-98.


Molécules en DéveloppementMolécules en DéveloppementMolécules en DéveloppementMolécules en Développement

sensible

résistant

sensible

résistant

Inhibiteur

résistant

sensible


Mécanismes de la RésistanceMécanismes de la RésistanceMécanismes de la RésistanceMécanismes de la Résistance

Arrêt inhibiteur

sensible

résistant

Inhibiteur

résistant

sensible



sensiblesensible

résistant + fitrésistant + fit

Arrêt inhibiteur

sensible

résistant

Inhibiteur

résistant

sensible



résistant trés fitrésistant trés fit

sensiblesensible

Arrêt inhibiteur


Inhibiteurs en Inhibiteurs en DéveloppementDéveloppementInhibiteurs en Inhibiteurs en DéveloppementDéveloppement


• Inhibiteurs de la maturation de la polyprotéine– Anti-protéase NS3

• Telaprevir (VX-950)• Boceprevir (SCH503039)• ITMN-191

• Inhibiteurs de la réplication Virale– Analogues nucléosidiques : R1626, R7128– Analogues non nucléosidiques : GS9190


Inhibiteurs en DéveloppementInhibiteurs en DéveloppementInhibiteurs en DéveloppementInhibiteurs en Développement






Telaprevir (VX-950)


ITMN 191


IRES

5’NTR 3’NTR


NS4B

p 7

NS4A


Inhibiteurs de la Maturation Inhibiteurs de la Maturation de la Polyprotéinede la PolyprotéineInhibiteurs de la Maturation Inhibiteurs de la Maturation de la Polyprotéinede la Polyprotéine


Mutations de Résistance aux Mutations de Résistance aux Inhibiteurs de NS3/4AInhibiteurs de NS3/4AMutations de Résistance aux Mutations de Résistance aux Inhibiteurs de NS3/4AInhibiteurs de NS3/4A

Compounds

Ciluprevir (BILN 2061)

Telaprevir (VX-950)


ITMN-191

TMC435350

In vitro

A156V/T, D168V/A/Y, R155Q

A156V/T

A156S/T, V170A, T54A

A156V/T, D168V/A, R155K/Q

?

In vivo

No data

A156S/V/T, R155K/T, T54A, V36A/M

T54A

No data

No data



Compounds


Telaprevir (VX-950)


ITMN-191

TMC435350

In vitro

A156V/T, D168V/A/Y, R155Q

A156V/T

A156S/T, V170A, T54A

A156V/T, D168V/A, R155K/Q

?

In vivo

No data

A156S/V/T, R155K/T, T54A, V36A/M

T54A

No data

No data



Compounds


Telaprevir (VX-950)


ITMN-191

TMC435350

In vitro

A156V/T, D168V/A/Y, R155Q

A156V/T

A156S/T, V170A, T54A

A156V/T, D168V/A, R155K/Q

?

In vivo

No data

A156S/V/T, R155K/T, T54A, V36A/M

T54A

No data

No data



Compounds


Telaprevir (VX-950)


ITMN-191

TMC435350

In vitro

A156V/T, D168V/A/Y, R155Q

A156V/T

A156S/T, V170A, T54A

A156V/T, D168V/A, R155K/Q

?

In vivo

No data

A156S/V/T, R155K/T, T54A, V36A/M

T54A

No data

No data

• A highly selective, reversible peptidomimetic inhibitor of the HCV NS3-4A serine protease

• IC50 of the order of 0.5 µM in vitro

• HCV RNA level reduction of 3-4 Log10 in vivo

Lin et al., AAC 2006, 50(5): 1813-1822; Zhou et al., Antimicrob Agents and Chemother 2008, 52(1): 110-120.


Telaprevir (VX-950)Telaprevir (VX-950)Telaprevir (VX-950)Telaprevir (VX-950)

Welsch et al., Genome Biology 2008, 9(1): R16.1-R16.18.

Telaprevir

Reesink et al., Gastroenterology 2006, 131: 997-1002.

HC

V R

NA

ch

ang

e fr

om

b

asel

ine

(Lo

g10

IU/m

L)

Days

-5-5

-4-4

-3-3

-2-2

-1-1

00

11

00 11 22 33 44 55 66 77 88 99 1010 1111 1212 1313 1414

Baseline Baseline

Placebo (n=6)Placebo (n=6)

VX-950 750mg q8h VX-950 750mg q8h (n=8)(n=8)

-4.41-4.41

-0.21-0.21


Antiviral Effect of TVR Monotherapy Antiviral Effect of TVR Monotherapy (Phase Ib)(Phase Ib)Antiviral Effect of TVR Monotherapy Antiviral Effect of TVR Monotherapy (Phase Ib)(Phase Ib)

Reesink et al., Gastroenterology 2006, 131: 997-1002.

-5-5

-4-4

-3-3

-2-2

-1-1

00

11

00 11 22 33 44 55 66 77 88 99 1010 1111 1212 1313 1414

Baseline Baseline

Placebo (n=6)Placebo (n=6)

VX-950 450mg q8h VX-950 450mg q8h (n=10)(n=10)

VX-950 1250mg q12h VX-950 1250mg q12h (n=10)(n=10)

VX-950 750mg q8h VX-950 750mg q8h (n=8)(n=8)

-4.41-4.41

-0.21-0.21

-2.21-2.21

-2.37-2.37

HC

V R

NA

ch

ang

e fr

om

b

asel

ine

(Lo

g10

IU/m

L)

Days


Antiviral Effect of TVR Monotherapy Antiviral Effect of TVR Monotherapy (Phase Ib)(Phase Ib)Antiviral Effect of TVR Monotherapy Antiviral Effect of TVR Monotherapy (Phase Ib)(Phase Ib)

T54

R155

A156 V36

Amino Acid Substitutions Associated Amino Acid Substitutions Associated with Telaprevir Resistancewith Telaprevir ResistanceAmino Acid Substitutions Associated Amino Acid Substitutions Associated with Telaprevir Resistancewith Telaprevir Resistance

Sarrazin et al., Gastroenterlogy 2007, 132: 1767-1777.

466 7811 3.5 9 12 71

36/156A156V/T36/155T54AR155K/TV36M/AWT


PROVE-2 TrialPROVE-2 TrialPROVE-2 TrialPROVE-2 Trial

Weeks

480 2412

Placebo + Peg-IFNPlacebo + Peg-IFN2a + Ribavirin (RBV)2a + Ribavirin (RBV)

VX-950 750 mg q8h + Peg-IFN2a

+ RBV



+ RBV

Peg-IFNPeg-IFN2a + RBV2a + RBV Follow-upFollow-up

Follow-upFollow-up

Follow-upFollow-up

PR48

T12/PR24

T12/PR12

T12/P12

Follow-upFollow-up

72

Zeuzem et al., AASLD 2008, Abstract 243.



80

T12/PR12

69

T12/PR24

Wk4

T12/P12 (No RBV)

13

PR48(Control)

50

0

20

40

60

80

100

Pa

tie

nts

Wit

h U

nd

ete

cta

ble

H

CV

RN

A (

%)

Wk4 Wk4 Wk4Wk12

43

62

Wk12

80

Wk12

73

Wk12

46

SVR

36

SVR

60

SVR

69

SVR

11/82 39/7835/82 38/82 66/8248/78 28/78 66/82 49/82 56/81 59/81 56/81

PROVE-2: RVR, EVR, SVRPROVE-2: RVR, EVR, SVRPROVE-2: RVR, EVR, SVRPROVE-2: RVR, EVR, SVR


Relapse RateRelapse RateRelapse RateRelapse Rate


T12/PR12 and T12/PR24 Combined

3

0

10

20

30

5/163

Pat

ien

ts W

ith

Vir

olo

gic

B

reak

thro

ug

h b

y W

eek

12 (

%)

0

10

20

30

19/78

T12/P12(No RBV)

24

19/78P

atie

nts

Wit

h V

iro

log

ic

Bre

akth

rou

gh

by

Wee

k 12

(%

)


Patients Receiving Telaprevir Patients Receiving Telaprevir and Peg-IFN2a without RBVand Peg-IFN2a without RBVPatients Receiving Telaprevir Patients Receiving Telaprevir and Peg-IFN2a without RBVand Peg-IFN2a without RBV

• Among the 6 patients who received the combination of telaprevir and Peg-IFN2a without RBV

– 3 subtype 1a patients remained HCV RNA positive on treatment

– 3 patients became HCV RNA undetectable upon therapy and relapsed after treatment

• 2 infected with subtype 1b• 1 infected with subtype 1a


Chevaliez et al., IASL 2008.

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90

Patient 1: subtype 1aPatient 1: subtype 1a

HC

V R

NA

(L

og

10 I

U/m

L)

0

1

2

3

4

5

6

7

0 3 6 9 12 15 18 21 24 27


0 8 16 24 32 40 48 56 64 72


HC

V R

NA

(L

og

10 I

U/m

L)

Patient 4: subtype 1bPatient 4: subtype 1b Patient 5: subtype 1aPatient 5: subtype 1a Patient 6: subtype 1bPatient 6: subtype 1b

NON-RESPONDERSNON-RESPONDERS

RELAPSERSRELAPSERS

Weeks

WeeksTVR + Peg-IFN2a for 12 weeks

SOC

SOC

0

1

2

3

4

5

6

7

0 9 18 27 36 45 54 0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45

Viral KineticsViral KineticsViral KineticsViral KineticsRésistance aux traitements

0

1

2

3

4

5

6

7

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90

HC

V R

NA

(L

og

1 0 IU

/mL

)

Weeks

WT

AB C D

E F

R155K/NV36L/MWT

A40TV36L/M + A40TR155K/N + A40TV36L/M + R155K/NV36L/M + R155K/N + A40T

Patient 2

TVR-Peg-IFN

Quasispecies AnalysisQuasispecies AnalysisQuasispecies AnalysisQuasispecies Analysis

Chevaliez et al., IASL 2008.


0

1

2

3

4

5

6

7

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90

HC

V R

NA

(L

og

1 0 IU

/mL

)

Weeks

WT

AB C D

E F

AA

R155K/NV36L/MWT


Patient 2

TVR-Peg-IFN

Quasispecies AnalysisQuasispecies AnalysisQuasispecies AnalysisQuasispecies AnalysisRésistance aux traitements

0

1

2

3

4

5

6

7

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90

HC

V R

NA

(L

og

1 0 IU

/mL

)

Weeks

WT

AB C D

E F

AA BB

R155K/NV36L/MWT


Patient 2

TVR-Peg-IFN


0

1

2

3

4

5

6

7

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90

HC

V R

NA

(L

og

1 0 IU

/mL

)

Weeks

WT

AB C D

E F

AA BB CC

DD EER155K/NV36L/MWT


Patient 2

TVR-Peg-IFN


HC

V R

NA

(L

og

1 0 IU

/mL

)

Weeks

WT

AB

C

D

E

R155K/E + T42SWT

0

1

2

3

4

5

6

7

0 8 16 24 32 40 48 56 64 72

A BWT

C E

Patient 3

TVR-Peg-IFN

SOC


HC

V R

NA

(L

og

1 0 IU

/mL

)

Weeks

WT

AB

C

D

E

R155K/E + T42SWT

0

1

2

3

4

5

6

7

0 8 16 24 32 40 48 56 64 72

A BWT

C E

Patient 3

TVR-Peg-IFN

SOC


HC

V R

NA

(L

og

1 0 IU

/mL

)

Weeks

WT

AB

C

D

E

R155K/E + T42SWT

0

1

2

3

4

5

6

7

0 8 16 24 32 40 48 56 64 72

A BWT

C D E

Patient 3

TVR-Peg-IFN

SOC


Pt 1Pt 1 Pt 2Pt 2 Pt 3Pt 3 Pt 4Pt 4 Pt 5Pt 5 Pt 6Pt 6

R26KR26K

V36L/MV36L/M V36AV36A

T42ST42S

A40TA40T A40TA40T

T54ST54S T54ST54S T54AT54A

Y56FY56F

T91AT91A

R155KR155K R155KR155K R155K/ER155K/E R155T/AR155T/A

G174SG174S

Observed Amino Acid ChangesObserved Amino Acid ChangesObserved Amino Acid ChangesObserved Amino Acid ChangesRésistance aux traitements

Location of the Amino Acid ChangesLocation of the Amino Acid ChangesLocation of the Amino Acid ChangesLocation of the Amino Acid ChangesRésistance aux traitements

Location of the Amino Acid ChangesLocation of the Amino Acid ChangesLocation of the Amino Acid ChangesLocation of the Amino Acid ChangesRésistance aux traitements

• Among the 9 patients who received the triple combination of telaprevir, Peg-IFN2a and RBV

– 7 patients achieved an SVR

– 1 patient relapsed

– 1 subtype 1b patient stopped antiviral treatment at 6 weeks when HCV RNA was undetectable and relapsed thereafter

Patients Receiving the Triple Patients Receiving the Triple CombinationCombinationPatients Receiving the Triple Patients Receiving the Triple CombinationCombination


0

1

2

3

4

5

6

7

0 9 18 27 36 45 54 63 72 81

HC

V R

NA

(L

og

1 0 IU

/mL

)

Weeks

Patient 8

WT

L14FWT

L14F + V36C

AB C

AA BB

CCV36C

*

*TVR + Peg-IFN + RBV for 6 weeks


Cys36

D81

S139

H57

F43 C36

Val36D81

S139

H57

F43 V36

3D Structure of the V36 Mutations3D Structure of the V36 Mutations3D Structure of the V36 Mutations3D Structure of the V36 MutationsRésistance aux traitements

V36 Variants

N (%)Fold-

change in IC50

Relative replication capacity in Huh7.5 cells (%)

WT 1.0 100

V36M 24 (10%) 7.7 77 ± 12

V36A 10 (4.1%) 8.2 104 ± 26

V36L 3 (1.2%) 2.5 ND

V36G 1 (0.4%) 12.3 59 ± 8

V36C 1 (0.4%) 8.6 98 ± 9

V36 Variant ResistanceV36 Variant ResistanceRésistance aux traitements

V36 Variants

N (%)Fold-

change in IC50


WT 1.0 100

V36M 24 (10%) 7.7 77 ± 12

V36A 10 (4.1%) 8.2 104 ± 26

V36L 3 (1.2%) 2.5 ND

V36G 1 (0.4%) 12.3 59 ± 8

V36C 1 (0.4%) 8.6 98 ± 9


V36 Variants

N (%)Fold-

change in IC50


WT 1.0 100

V36M 24 (10%) 7.7 77 ± 12

V36A 10 (4.1%) 8.2 104 ± 26

V36L 3 (1.2%) 2.5 ND

V36G 1 (0.4%) 12.3 59 ± 8

V36C 1 (0.4%) 8.6 98 ± 9


Per

cen

tag

e o

f P

rote

oly

tic

Act

ivit

y

1005 10

50

100 FRET Technology

Telaprevir (µM)

WT

V36CV36M

V36L V36

Variants

IC50 VX-950 (S.E.)

(µM) Fold-change

WT 0.6 (0,2) 1

V36L 1.3 (0.1) 2

V36C 2.4 (1.3) 4

V36M 3.05 (3.85) 5








AA


Benzimidazoles



Pyranoindoles (HCV371)

BB

NNI site C (Palm)Benzothiadiazine (A-848837)

Acyl-pyrrolidineProline sulfonamide

Acrylic acid derivatives


Allosteric GTP

CC

2’-methyl nucleosides (NM283, MK608)4’ azido-cytidine (R1626)

NNI site D (R200 hinge)Benzofurans (HCV086, HCV796)

AA

BBCC

DD


AA


BenzimidazolesPro 495, Pro 496, Val 499Pro 495, Pro 496, Val 499


BenzimidazolesPro 495, Pro 496, Val 499Pro 495, Pro 496, Val 499



Pyranoindoles (HCV371)Met 423Met 423

BB

NNI site C (Palm)Benzothiadiazine (A-848837)

Acyl-pyrrolidineProline sulfonamide

Acrylic acid derivativesAsn 411, Met 414, Tyr 448Asn 411, Met 414, Tyr 448


Allosteric GTP

CC

2’-methyl nucleosides (NM283, MK608)4’ azido-cytidine (R1626)

NNI site D (R200 hinge)Benzofurans (HCV086, HCV796)

Cys 316, Val 201Cys 316, Val 201

AA

BBCC

DD

Placebo

500 mg bid

1500 mg bid

3000 mg bid

4500 mg bid

Traitement Suivi

Jours

0 5 10 15 20 25 30

-5

-4

-3

-2

-1

0

1

-2.6 log10

-3.7 log10

-1.2 log10

Réd

uct

ion

de

l’AR

N d

u V

HC

(Lo

g U

I/mL

)R1626 : Phase IbR1626 : Phase IbR1626 : Phase IbR1626 : Phase IbRésistance aux traitements

R7128 : Phase IIR7128 : Phase IIR7128 : Phase IIR7128 : Phase II

Jours

0 5 10 15 20 25 30--6

-5

-4

-3

-2

-1

0 PegIFN + RBV + placeboPegIFN + RBV + R7128 500 mg bidPegIFN + RBV + R7128 1500 mg bid

Réd

uct

ion

AR

N V

HC

(L

og

10)

Lalezari et al., EASL 2008.


MK 7009monotherapy

0

1

2

3

4

5

6

0 50 90 130 170 210 250

Day

log

IU/m

L

LOQLOQ

MK 7009+ MK-608 Chimp AChimp A

Chimp BChimp B

Chimp CChimp C

SVR

Olsen et al., APASL 2008

Combinaison de MK-7009 et Combinaison de MK-7009 et MK-608MK-608Combinaison de MK-7009 et Combinaison de MK-7009 et MK-608MK-608


Prévention de la RésistancePrévention de la Résistance

• Réduire au maximum la réplication virale

• Augmenter la barrière pharmacologique

• Utiliser des molécules avec une barrière

génétique élevée

• Compliance


Health & Medicine

Chevaliez Du 2009