Ganglio linfáticoHistología, biopsia e

inmunohistoquímica básicaDr. Luis Humberto Cruz Contreras

Hospital GeneralMorelia, Mich

Ganglio linfático - anatomía

Gangliolinfático

Centro germin

al

Manto

Centro germinal• Blastos

(centroblastos y centrocitos)

• Macrófagos de cuerpos teñibles

• Células dendríticas foliculares (capturar y preservar antígenos para presentación)

Zona del Manto• Linfocitos pequeños

NO estimulados (folículos primarios)

Zona Marginal

Paracorteza

Linfocitos T

Células interdigitantes

reticulares

Vénulas de endotelio

ALTO

Ganglio linfáticoManejo

Toma de biopsia y manejo SUBOPTIMO

• Diagnóstico correcto• Diagnóstico oportuno• MANEJO -

Toma de Biopsia

• Selección• Disección COMPLETA• NO fragmentos

Ganglio linfáticoBAAF

UTILIDAD BAAF

• Separar carcinoma vs Linfoma• Detectar recurrencias• Estadificación• Diagnóstico de LINFOMA … NO!!

Ganglio linfáticoMANEJO PATOLOGÍA

Fijación

• 10 veces el volumen en formol• REBANAR• FIJACIÓN 24 HRS• Se puede realizar citología por impronta• Tejido fresco sin fijar para biología molecular, citometría de

flujo

Ganglio linfáticoPROCESOHISTOLÓGICO

CORTES 3-5 MICRAS

• Tinción HE• Giemsa – Wright• PAS - Inmunoglobulinas• Reticulina

Gangio linfáticoIHQ

INMUNOHISTOQUÍMICA

• Estándar en muchas partes• CONFIRMATORIA, No Dx• Diagnóstico PRECISO• ¿ Costo?

Trivial, ante la necesidad de Dx preciso y los costos de Tratamiento

Gangio linfáticoIHQ

INMUNOHISTOQUÍMICA

• Control de Calidad – Testigos• Buscar testigos internos…

UN CORTE UNIFORMEMENTE AZUL…. NO SIRVE

Ganglio linfáticoPREGUNTAS INICIALES Y GENERALIDADES

¿Es un linfoma?

• CD45, EMA, PS100, HMB45

CD45, LCA (Leucocyte common antigen)

• Presente en casi todos los linfocitos• AUSENTE,

• Precursores de linfocitos (linfomas linfoblástico)• Linfoma anaplásico (Puede ser positivo para EMA, pero no otras citoqueratinas)• Células Reed Stenberg / Hodgkin

¿Linfoma B?

¿Linfoma B? Inmunoglobulinas• Células B = Capacidad de

secretar Ig• Retículo endoplásmico –

Paranuclear (Golgi positivo)• Clonalidad –Monotípico• Solo un tipo de cadena ligera

(RESTRICCIÓN DE CADENAS LIGERAS)

Lambda

Kappa

CD20 (L26)Fosfoproteína NO glucosilada de Membrana

Membrana de células B

• NO ES PERFECTO• No se expresa en etapas tempranas• NO se expresa cuando comienzan la diferenciación a cél. plasmática

MEMBRANA

• Núcleo, nucléolo, citoplasma = NEGATIVO

CD79aGlicoproteína de membrana que se asocia con las Ig CITOPLASMA DE células B

• SE UNE A CADENA alfa de Ig• Marcador casi perfecto• Todas las etapas de Diferenciación• 50% Linfomas linfoblásticos T

Otros marcadores…

CD5Glicoproteina de membrana cél. T Expresado en células T

• De manera más débil en LINFOMA LINFOCÍTICO DE CÉLULAS PEQUEÑAS

• LEUCEMIA LINFOCÍTICA CRÓNICA• LINFOMA DE CÉLULAS DEL MANTO

CALLA

• COMMON ACUTE LINFOBLASTIC LEUKEMIA ANTIGEN• CENTRO GERMINAL• Linfomas con origen en centro germinal : FOLICULAR,

DIFUSO DE CÉL. GRANDES, BURKITT• Linfomas / Leucemias linfoblásticos B y T

CD10Endopeptidasa Neutral de superficie (Zinc Dep)

CD23Glicoproteína de membrana

Células B activadas

• Ganglios reactivos centro germinal y zona del manto• CÉLULAS DENDRITICAS FOLICULARES

LINFOMA linfocítico de cél. Pequeña / LLC

• Marcador útil de este linfoma

Ciclina D1Ch 11q13Reg. Ciclo celular

Translocada en

• LINFOMA DE CÉL. DEL MANTO• Leucemia de cél. peludas

• Tinción NUCLEAR, en citoplasma es negativa

Control Interno

• CÉLULAS ENDOTELIALES

Bcl-2Proteína de membrana mitocondrial

Regula apoptosis

• Ch18q21• Translocación 14:18 • LINFOMA FOLICULAR

Utilidad

• Tej. Reactivos : Linfocitos B y T pequeños• Negativa en centro germinal normal• POSITIVA EN LINFOMA FOLICULAR!!!!• Reactivo vs folicular

Bcl-6Factor represor transcripción dep. ZINC

Expresa centro germinales reactivos

• Ch3q27• LINFOMA FOLICULAR, LINFOMA DIFUSO, LINFOMA BURKITT• Tinción NUCLEAR

Utilidad

Origen de centro germinal

CD3glicoproteína asociada a receptor de cél. T Marcador de

células T• Pérdida de este

marcador• SOLO 25% de

linfomas T• Tinción membranaUtilidad LIMITADA• No es el marcador

ideal

CD5 Marcador EXCELENTE DE CÉL. T!!

• Casi todos los linfomas T• Tinción Membrana FUERTE

CUIDADO!!!

• Linfoma linfocítico de cel. Pequeña / LLC y MANTO• Tinción débil• Diferencial: CD20 y CD79a

Otros CD1a

• Timocitos corticales y CÉL. LANGERHANS

CD4

• Linfocitos T Cooperadores

CD8

• Linfocitos T citotóxicos

CD45RO

• Marcador Linfocitos T (Sustituido actualmente por CD3 y CD5)

CD43• Sialophorina de Membrana, células T, B • NEOPLASIA GRANULOCÍTICAS INDIFERENCIADAS

CD56células NK CD56 / NCAM

• Neural cell adhesión molecule …. Identificada en cerebro• Tumores neuroectodérmicos• Células Natural Killer (2 tipos)

• Célula T NK• Célula NK-

CD57

• Algunos linfocitos normales periféricos y algunas células NK

TdTTerminal dioxynucleotidyl transferasa

PRECURSORES LINFOIDES B Y T

• DNA polimerasa intranuclear que cataliza la unión de dioxidonucleótidos

• Linfoma / Leucemias linfoblásticas• NO Leucemia mieloide

TINCIÓN NUCLEAR

• Presente en 1-2% linfocitos MO• Timocitos corticales

CD30Familia de factor de necrosis tumoral = activación

• Tinción membranosa y paranuclear• Tinción difusa = NEGATIVO

Expresión

• Células reactivas parafoliculares (blastoides)• LINFOMA ANAPLÁSICO• CÉLULAS DE REED-STENBERG

CD15Reconoce sequencia de azúcar (hapteno X)

FINAL de diferenciación MIELOIDE• NEUTRÓFILOS… Testigo interno• MEMBRANA Y CITOPLASMACélulas Reed-Sternberg / Hodgkin• 70-80% Linfomas Hodgkin• Débil : algunos linfomas B y T,

Carcinomas y células epiteliales normales

CD21Receptor de C3d y para EBV

Células dendríticas foliculares

• EXCELENTE MARCADOR• Algunos linfocitos B

CD21Receptor de C3d y para EBV

CD68proteína transmembrana

• TRÁFICO DE LISOSOMAS

Expresada en histiocitos normales y neoplásicos

Proteína S 100proteína de unión a calcio

¿S100?

• Solubles en SULFATO de amonio neutral al 100%• Identificadas por PRIMERA vez en cerebro

Expresion

• Células interdigitantes reticulares• Células de Langerhans• Tumores neurales, Melanomas

Ki67Nucleoproteína NO histona ¿Ki67?

• Kiel, Alemania, clona número 67• MIB-1 (Otro anticuerpo misma molécula)

Nucleoproteína que se expresa casi en todo el ciclo celular

• EXCEPTO G0• Máximo en mitosis• Índice de proliferación• Valor pronóstico• Ayuda diagnóstica

Ki67Ayuda diagnóstica

Linfoma de células pequeñas

Linfoma B Difuso de células grandes

Linfoma Burkitt

1-15% 45-95% 100%

Índice de proliferación

ALK-1Anaplastic lymphoma kinase

Tirosina cinasa 85% LINFOMAS ANAPLÁSICOS• Resultado Translocación 2:5• Citoplasma, núcleo y nucléolo• Algunos linfomas difusos

También tumor miofibroblástico inflamatorio• Misma translocación

Diagnósticar lo imposible NO diagnosticar

• Ganglios demasiado pequeños• Artificios• Necrosis extensa• MALA FIJACIÓN

Diagnóstico

Categorías

Reactivo

Neoplásico• Linfoma

• Cél. Grande• Cél. pequeñas

IHQ : Confirma y afina el dx

Divisiones iniciales

Linfomas • NO Hodgkin• Hodgkin

Linfomas • Cél. Madura• Células precursoras

Linfomas • Células B• Células T

Denis Parson Burkitt1911-1993

Médico Irlandés

• Enniskillen Irlanda• Padre ingeniero y ornitólogo• Familia protestante evangelista- papel activo en religión• Inicialmente entró a la escuela de ingeniería y por la influencia de un tío médico cambió• Perdió un ojo cuando era pequeño

Colegio real de cirujanos –EDINBURGO (Escocia)

• Trabajo como cirujano en varios hospitales

Denis Parson Burkitt1911-1993

Quiso ayudar a los más desprotegidos• Se unió al ejercito en la segunda guerra mundial

(Kenia, Somalia, Uganda)• Solicitó quedarse en Uganda• Interés en epidemiología• RELACIONÓ HIDROCELE CON FILARIASIS• Inició una fábrica de prótesis para enfermos

amputados por elefantiasis

1957- Encontró su primer caso de Linfoma de Burkitt, • Reunío datos y pacientes y encontró 51 pacientes• Sarcoma indiferenciado

Denis Parson Burkitt

Continuó su investigación• Posteriormente lo relacionó

con los ganglios linfáticos (lymphoma syndrome in Uganda, Burkitt y Grez O’Connor)

• Causa del linfoma (Mosquitos??)

• 1961 Michael Anthony Epstein le pidió muestras para buscar virus

• Se aisló 1ª vez Virus Epstein Barr