صدق الله العظيم

وننزل من القرآن ما هو شفاء ورحمة للمؤمنين وال يزيد

الظالمين إال خسارا

المملكة العربية السعودية

وزارة التعليم العالي

جامعة طيبة

عمل الطالبتان

لينا العنزي

2870441

أماني المطيري

2870167

مقدم للدكتورة : سحر

الكمي • المتسلسل البوليميراز تفاعل real-time: باإلنجليزية )اللحظي

polymerase chain reaction ) ويسمىالمتسلسل البوليميراز تفاعل أيضا

اللحظي quantitative: باإلنجليزية )ألكميreal time polymerase chain reaction )

النووي ) الحمض كمية قياسه بسببالبوليمراز( تفاعل أيضا أو أيضا

في مهمة أداة وهو الحركي المتسلسل . التقنية هذه تعتمد الجزيئي أألحياء علم

مبدأ نفس على  المخبريةالمتسلسل البوليميراز  تفاعل

Real-Time Polymerase Chain Reaction )RT-PCR( 

تحويل على تعمل جزيئية كمية9 طريقة هوالم=ر>سال النووي الريبي الـ mRNAالحمض أو

RNA <م@ز AرBالم متمم Non-codingغير دنا إلىcDNA ، =ة Aَخ الناس= إنزيم باستَخدام وذلك

Iة= ي >س= يجري . Reverse TranspcriptaseالعAك ثموذلك الدنا من أكثر أو Mمحدد Mموقٍع تضَخيم

بوليميراز إنزيم Taq-DNAباستَخدامPolymerase.

مع • Eمباشرة Fم Gخ HضIالم للدنا Jالكمي القياس مع ويظهر Eمباشرة Fم Gخ HضIالم للدنا Jالكمي القياس ويظهرالحاجة بدون وذلك التفاعل، من دورة Pكل الحاجة نهاية بدون وذلك التفاعل، من دورة Pكل نهايةاسم جاء هنا ومن التفاعل، نهاية حتى اسم لالنتظار جاء هنا ومن التفاعل، نهاية حتى لالنتظار

الجيني.   التعبير من Rكال الخاليا IمPنظIت الجيني.   الطريقة التعبير من Rكال الخاليا IمPنظIت الطريقةGene ExpressionGene Expression عن الناجم Jالبروتيني عن والمنتج الناجم Jالبروتيني والمنتج

. الـ تقانة تعد ولذلك التعبير . هذا الـ تقانة تعد ولذلك التعبير وسيلةE وسيلةRT-PCRRT-PCR Eهذاالكميات قياس عبر وذلك ، Pالكمي للتحري Eالكميات عملية قياس عبر وذلك ، Pالكمي للتحري Eعملية

الـ من Eجدا الـ الضئيلة من Eجدا استخدام . . mRNAmRNAالضئيلة يمكن استخدام كما يمكن كمامن معين تتالي وجود وتقدير كشف في من الطريقة معين تتالي وجود وتقدير كشف في الطريقة

. DNADNAالدنا الدنا اختبارية عينات .في اختبارية عينات فيمتفلورة، أصبغة استخدام على الطريقة متفلورة، تقوم أصبغة استخدام على الطريقة تقوممع نوعي\ بشكل[ المتفلور الصباغ يرتبط مع حيث نوعي\ بشكل[ المتفلور الصباغ يرتبط حيث

السلسلة مضاعف الدنا السلسلة كامل مضاعف الدنا dsDNAdsDNA Eكامل E معطيا معطيا. محددة بنسبة[ .فلورة محددة بنسبة[ فلورة

للـ. 1 التفاعلية العينة Iر GحضIتRT-PCR ضافIوي. المتفلوران المسباران

الـ. 2 تفاعل ارتباط RT-PCRيبدأ عبرالهدف الموقع على والمسبارين المشرعين

الدنا عينة في تضخيمه .RNAأو DNAالمرادالدنا . 3 بوليميراز إنزيم Taq-Polymeraseيبدأ

المشرعين، بين المنطقة وتضخيم بالعملالمسبارين، منطقة إلى اإلنزيم يصل وحالما

المسبارين نزع قدرة له البوليميراز إنزيم Gفإن(Exonuclease activity ) مما' 3إلى' 5باالتجاه ،

بعضهما، عن المسبارين فصل إلى يؤدي. E ليزريا قياسها يجري التي الفلورة من ويزيد

الـ. 4 جهاز شدتها RT-PCRيقيس وازدياد الفلورةاألسية العالقة بحسب تضَخيمية دورة كل مٍع

للتضَخيم Wاألسي الطور أثناء وذلك الدنا، لتضَخيمExponential phase . التركيز تعيين يجري ثم

عدد على الفلورة قيم إسقاط عبر للدنا Wالنسبي. اللوغاريتمي المقياس بحسب التضَخيم دورات

الـ. 5 جهاز الـ RT-PCRيقيس  RNAكميةالـ معياري\ DNAأو Mخٍط مٍع النتائج مقارنة عبر

معيارية Mممددة Mسلسلة استَخدام عبر الجهاز ينفذهالـ من التركيز الـ RNAمعروفة .DNAأو

هذا يعد • بواسطة الرنوية الحمات كشفإلى  االختبار أهمية السريرية التطبيقات أكثر. هذا يومنا

•  لـ الكمية المقايسات أصبحت وقد -RTهذاPCR  لكشف بالنسبة مألوف شيئ

.HCVوالـ  HIVالـ الحمض • لتضَخيم الكمية الطبيعة تستَخدم فعندما

  عياريات مٍع باالقتران كمية  Standardsالنوويهذه ) كمية لقياس تستَخدم ما عادة خارجية  )  والتي المريض دم في الموجودة الحمات

  عادة  تعرف الحموي .Viral loadبالحمل

ثنائي  -1 الدنا مٍع تتداخل التي المتفلورة األصبغة استَخدامتفاعل. في الطاق مضاعف الدنا تركيز ازدياد الطاق

التي  PCRالـ  التألق أو الفلورة شدة ازدياد إلى سيؤدي  دورة كل في ألن  )PCRتقاس اإلطالة مرحلة نهاية في

) الطاق ثنائية المرحلة هذه في تكون الدنا جزيئات كافةنكليوتيدات-  2• عدة من مؤلفة معدلة الدنا من مسابير

المكمل الدنا طاق مٍع تتهجن عندما تتألق والتي. لها الموافق

•. تكلفة أكثر ولكنها ومعولية دقة األكثر الطريقة هينوعية • الرنا أو الدنا من مصنوعة مسابير تستَخدم إنها

نوعية الطريقة هذه فإن لذلك كشفه، المراد بالناتجفي حتى المستهدف الدنا تركيز قياس باإلمكان حيث

. نوعية غير نواتج وجود حال

الروتينية • التطبيقات في التقنية هذه استَخدام يمكن  الـ ال.   PCRلتفاعل التي للتطبيقات وكذلك التقليدي

  الـ معها التقليدي: PCRيتناسب•1. للحمات-  الكمية المعايرات•2. الجيني-  للتعبير الكمي القياس•3. الدوائية-  المعالجة فعالية•4. للدنا-  األذى قياس•5. الَخمجية-  الممرضة العوامل اكتشاف في•6. الوراثي-  التنميٍط

11 . ابراهيم- علي . د ابراهيم- علي http://dc399.4shared.com/doc/QBpQ80af/preview.htmlد

الحرة- 44 الموسوعة بيديا الحرة- ويكي الموسوعة بيديا ويكي

http://ar.wikipedia.org/wiki/%D8%AA%D9%81%D8%A7%D8%B9%D9%84_http://ar.wikipedia.org/wiki/%D8%AA%D9%81%D8%A7%D8%B9%D9%84_

%D8%A7%D9%84%D8%A7%D9%84