フローサイトメトリーの特徴

フローサイトメトリーの特徴 細胞の個々の大きさと形態の情報，および蛍光染色した DNA/RNA

や蛍光抗体で染色したタンパク等の情報を迅速かつ高感度に測定する方法．

1960年代後半に開発された． 蛍光を測定する標準的な方法の蛍光顕微鏡に比べて下記のような

特徴がある．　・短時間に多くの細胞を生きたまま客観的に測定できる（リアルタ

イム・高速性・定量性）　・微弱な蛍光を測定できる（高感度）　・人為的要因による結果のバラツキが少ない（高再現性）　・１回の測定で多くの情報を取得できる（マルチパラメータ解析・

クラスター解析）　・特定の細胞の高速分取が出来る（ソーティング）

超高速セルソーター超高速セルソーター MoFloMoFlo

製造： Dako (Denmark)

セルソーター：細胞を蛍光物質で標識し，高速で流しながら解析・分取する装置

ソーティングの原理

最大３つのレーザーを搭載でき，最大 10種類の蛍光を同時測定可能．

ノズル前方散乱光

検出器

レーザー光、

(3波長同時励起可能 )

ソーティングサンプル受け

（ 4 種同時に分離可能 )

廃液受け

水平電場

形成電極板

液滴形成点

液滴への

チャージ

+

+

+

+

-

-

-

ドロップディレイ

側方散乱光、各種蛍光、ミラーで分光

Nozzle tipin view

Stream

Pinholes

Optics専用の CCDカメラを見ながら

光軸調整できる

Fixed Focal distance

Fixed Side Scatter Collection Objective

Pinhole Strip

FSC DetectorStage

CytoNozzle Stage

Laser Focus Stage

Nozzle tipin view

Stream

Pinholes

専用の専用の CCDCCD カメラを見ながら光軸調整できるカメラを見ながら光軸調整できる

従来，光軸調整がやっかい．オシロスコープによる調整が必要．

光軸調整不要の機種もある．主要回路のブラックボックス化．

60khz

High Speed Sorting液滴が小さく、多いことで高速でも超高速分離可能 30khz

0.0001 sec

MoFLo100khz

40,000 events/sec

MoFloの特長

–超高速の信号処理（特許）–特許 Nozzle（高圧でも細胞にダメージを与えない）– High power　–光軸調整が容易–高い回収率・純度–高速ソーティングに最も適している ( 最速 70,000/sec)

– SP解析、分離精度が高い–解析しやすい

ソーターの比較ソーターの比較

MoFlo Aria Vantage

分離速度 10 5 1

レーザー 紫外線 紫色 紫外線

SP解析 秀（速い，高分解能）

不可 可

光軸調整 容易（直感的）

不要( ブラックボックス化 )

面倒

Hoechst 33342Hoechst 33342 によるマウス骨髄単核細胞染色によるマウス骨髄単核細胞染色

Hoechst-Blue (424/44)

Hoechst-Red (585/42)

S-G2M

G0/G1

Side Population(SP) cell

造血幹細胞

○

×

×

Goodell et al J Exp Med. 1996;183:1797.

SP細胞は種を越えて存在する .Goodell MA et al. Nat

Med.1997;3:1337.

SP細胞はさまざまな組織に存在する． SP細胞は， ABCトランスポーターを介して色素を細

胞外に排出する．Zhou S et al. Nat Med. 2001;7:1028.

心筋梗塞後に SP細胞由来の心筋再生が起こる．Jackson KA et al. J Clin Invest.

2001;107:1395.

SPSP 細胞の特徴細胞の特徴

再生医学研究部

MoFlo を用いたマウス SP 細胞の Sorting

マウス（ B6／ 8週齢）の骨髄より分離した単核球分画を、 Hoechst 染色後、MoFlo を用いて SP 細胞の分取を行った。

Sorting 前

0.29% 98.25%

マウス骨髄単核球分画

結果：純度 98% のマウスの SP 細胞分画が分取できた。

0.17%

Sorting 後分取細胞の解析結果

マウス各組織の SP細胞

0.8% 0.3% 0.7% 0.44%

Brain Liver Kidney Pancreas

0.5% 2.8%

Ho-

Blue

Ho-Red

Muscle Heart

慶応大学 松崎有実ら

MoFloのまとめ

さまざまな動物種の各組織に存在する幹細胞の解析や単離を可能にする．

　　 多くの講座の研究の発展に寄与する．　　 15講座の申請，共用機器室に設置．

細胞を超高速で処理できる．　　 サル・ブタのような大型動物を用いた細胞移

　植実験にも対応可能．

セルソーターについて注意事項

使いやすくなってきたが，依然トラブルの多い，手のかかる装置である．

最近のフローサイトメーターは８カラー以上の解析が可能になった（最大１８）．その際にはコンペンセーションなど，多重解析の原理を理解することが大切．

今後はソーティング機能をぜひ役立てていただきたい．細胞を生きたまま分離して解析できるのがフローサイトメーターの最大の長所だから．