第四章第四章

抗 体 制 药抗 体 制 药

第四章第四章

抗 体 制 药抗 体 制 药

第一节 概述第一节 概述 18901890 年年 BehringBehring 和北里柴三郎和北里柴三郎 发现白喉抗毒素发现白喉抗毒素 ,, 建立了血清疗法建立了血清疗法 ,,

开创了抗体制药。开创了抗体制药。 19371937 年年 TiseliusTiselius 用电泳法将用电泳法将 血清蛋白分离为白蛋白、血清蛋白分离为白蛋白、 αα 、、 ββ 、、 γγ

球蛋白，并证明抗体活性主要球蛋白，并证明抗体活性主要 存在于存在于 γγ 球蛋白组分。球蛋白组分。

18901890 年年 BehringBehring 和北里柴三郎和北里柴三郎 发现白喉抗毒素发现白喉抗毒素 ,, 建立了血清疗法建立了血清疗法 ,,

开创了抗体制药。开创了抗体制药。 19371937 年年 TiseliusTiselius 用电泳法将用电泳法将 血清蛋白分离为白蛋白、血清蛋白分离为白蛋白、 αα 、、 ββ 、、 γγ

球蛋白，并证明抗体活性主要球蛋白，并证明抗体活性主要 存在于存在于 γγ 球蛋白组分。球蛋白组分。

抗体抗体是指能与相应抗原特异性是指能与相应抗原特异性结合具有免疫功能的球蛋白。结合具有免疫功能的球蛋白。

抗体的产生抗体的产生：机体免疫系统受：机体免疫系统受抗原刺激后，抗原刺激后， BB 淋巴细胞被活淋巴细胞被活化增殖和分化为浆细胞，由浆化增殖和分化为浆细胞，由浆细胞合成和分泌的球蛋白。细胞合成和分泌的球蛋白。

抗体抗体是指能与相应抗原特异性是指能与相应抗原特异性结合具有免疫功能的球蛋白。结合具有免疫功能的球蛋白。

抗体的产生抗体的产生：机体免疫系统受：机体免疫系统受抗原刺激后，抗原刺激后， BB 淋巴细胞被活淋巴细胞被活化增殖和分化为浆细胞，由浆化增殖和分化为浆细胞，由浆细胞合成和分泌的球蛋白。细胞合成和分泌的球蛋白。

2020 世纪世纪 6060 年代发现多发性骨髓年代发现多发性骨髓瘤是浆细胞癌变形成的恶性增殖性瘤是浆细胞癌变形成的恶性增殖性疾病。病人血清中出现同抗体结构疾病。病人血清中出现同抗体结构类似的球蛋白， 统称为类似的球蛋白， 统称为免疫球蛋免疫球蛋白白（（ immunoglobulinimmunoglobulin ，， IgIg ）。）。所以所以 IgIg 是化学结构的概念，而是化学结构的概念，而抗抗体体是生物学功能的概念。是生物学功能的概念。

2020 世纪世纪 6060 年代发现多发性骨髓年代发现多发性骨髓瘤是浆细胞癌变形成的恶性增殖性瘤是浆细胞癌变形成的恶性增殖性疾病。病人血清中出现同抗体结构疾病。病人血清中出现同抗体结构类似的球蛋白， 统称为类似的球蛋白， 统称为免疫球蛋免疫球蛋白白（（ immunoglobulinimmunoglobulin ，， IgIg ）。）。所以所以 IgIg 是化学结构的概念，而是化学结构的概念，而抗抗体体是生物学功能的概念。是生物学功能的概念。

多克隆抗体多克隆抗体：病原微生物含：病原微生物含有多种抗原决定簇的抗原物有多种抗原决定簇的抗原物质，因此这些抗体制剂也是质，因此这些抗体制剂也是多种抗体的混合物，故称多多种抗体的混合物，故称多克隆抗体。 克隆抗体。

多克隆抗体多克隆抗体：病原微生物含：病原微生物含有多种抗原决定簇的抗原物有多种抗原决定簇的抗原物质，因此这些抗体制剂也是质，因此这些抗体制剂也是多种抗体的混合物，故称多多种抗体的混合物，故称多克隆抗体。 克隆抗体。

19751975 年年 KohlerKohler 和和 MilsteinMilstein 首先首先利用利用 BB 淋巴细胞杂交瘤技术制备出淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体单克隆抗体（（ monoclonal antibmonoclonal antibody ody McAbMcAb ）。）。

单克隆抗体具有高度特异性、均单克隆抗体具有高度特异性、均一性、来源稳定、可大量生产等特一性、来源稳定、可大量生产等特点，为抗体制备和应用提供了全新点，为抗体制备和应用提供了全新的手段，还促进了基础和临床医学的手段，还促进了基础和临床医学的发展。的发展。

19751975 年年 KohlerKohler 和和 MilsteinMilstein 首先首先利用利用 BB 淋巴细胞杂交瘤技术制备出淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体单克隆抗体（（ monoclonal antibmonoclonal antibody ody McAbMcAb ）。）。

单克隆抗体具有高度特异性、均单克隆抗体具有高度特异性、均一性、来源稳定、可大量生产等特一性、来源稳定、可大量生产等特点，为抗体制备和应用提供了全新点，为抗体制备和应用提供了全新的手段，还促进了基础和临床医学的手段，还促进了基础和临床医学的发展。的发展。

单克隆抗体作为抗体制剂，在单克隆抗体作为抗体制剂，在临床上主要用与疾病的诊断和治临床上主要用与疾病的诊断和治疗。疗。

单克隆抗体检测与某些疾病有单克隆抗体检测与某些疾病有关的抗原，辅助临床诊断。用放关的抗原，辅助临床诊断。用放射性核素标记单克隆抗体进行肿射性核素标记单克隆抗体进行肿瘤显像，做免疫定位诊断。瘤显像，做免疫定位诊断。

单克隆抗体作为抗体制剂，在单克隆抗体作为抗体制剂，在临床上主要用与疾病的诊断和治临床上主要用与疾病的诊断和治疗。疗。

单克隆抗体检测与某些疾病有单克隆抗体检测与某些疾病有关的抗原，辅助临床诊断。用放关的抗原，辅助临床诊断。用放射性核素标记单克隆抗体进行肿射性核素标记单克隆抗体进行肿瘤显像，做免疫定位诊断。瘤显像，做免疫定位诊断。

单克隆抗体用于临床治疗，单克隆抗体用于临床治疗， CCD3D3 单克隆抗体作为免疫抑制剂单克隆抗体作为免疫抑制剂对器官移植免疫排斥有抑制作对器官移植免疫排斥有抑制作用。用。

以单克隆抗体作为载体的药物以单克隆抗体作为载体的药物对肿瘤进行定向治疗。对肿瘤进行定向治疗。

单克隆抗体用于临床治疗，单克隆抗体用于临床治疗， CCD3D3 单克隆抗体作为免疫抑制剂单克隆抗体作为免疫抑制剂对器官移植免疫排斥有抑制作对器官移植免疫排斥有抑制作用。用。

以单克隆抗体作为载体的药物以单克隆抗体作为载体的药物对肿瘤进行定向治疗。对肿瘤进行定向治疗。

第二节 单克隆抗体第二节 单克隆抗体

单克隆抗体单克隆抗体是将抗体产生细胞是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的。克隆细胞系而产生的。

单克隆抗体单克隆抗体是将抗体产生细胞是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的。克隆细胞系而产生的。

一、抗原与动物免疫一、抗原与动物免疫 制备特定抗原的单克隆抗体，首制备特定抗原的单克隆抗体，首

先要制备用于免疫的适当抗原，再用先要制备用于免疫的适当抗原，再用抗原进行动物免疫。抗原进行动物免疫。

有的抗原可以用化学合成：地高辛有的抗原可以用化学合成：地高辛 多数抗原物为混合物须经免疫、筛多数抗原物为混合物须经免疫、筛选、克隆化。选、克隆化。

一、抗原与动物免疫一、抗原与动物免疫 制备特定抗原的单克隆抗体，首制备特定抗原的单克隆抗体，首

先要制备用于免疫的适当抗原，再用先要制备用于免疫的适当抗原，再用抗原进行动物免疫。抗原进行动物免疫。

有的抗原可以用化学合成：地高辛有的抗原可以用化学合成：地高辛 多数抗原物为混合物须经免疫、筛多数抗原物为混合物须经免疫、筛选、克隆化。选、克隆化。

为使杂交瘤细胞稳定，免疫为使杂交瘤细胞稳定，免疫动物和骨髓瘤细胞供体同一品系动物和骨髓瘤细胞供体同一品系动物进行免疫。动物进行免疫。

目前常用的骨髓瘤细胞系多来目前常用的骨髓瘤细胞系多来自自 BALB/cBALB/c小鼠和 小鼠和 LOULOU大鼠，大鼠，因此免疫动物也采用相应的品系。因此免疫动物也采用相应的品系。

为使杂交瘤细胞稳定，免疫为使杂交瘤细胞稳定，免疫动物和骨髓瘤细胞供体同一品系动物和骨髓瘤细胞供体同一品系动物进行免疫。动物进行免疫。

目前常用的骨髓瘤细胞系多来目前常用的骨髓瘤细胞系多来自自 BALB/cBALB/c小鼠和 小鼠和 LOULOU大鼠，大鼠，因此免疫动物也采用相应的品系。因此免疫动物也采用相应的品系。

免疫的方法免疫的方法采用体内免疫法和体采用体内免疫法和体外免疫法。外免疫法。

体内免疫法体内免疫法适用于免疫原性强、抗适用于免疫原性强、抗原量较多时应用，一般用原量较多时应用，一般用 88～～ 1212周龄雌性鼠。周龄雌性鼠。

颗粒性抗原（如细菌细胞抗原）的颗粒性抗原（如细菌细胞抗原）的免疫原性强，可不加佐剂，直接注免疫原性强，可不加佐剂，直接注入腹腔入腹腔 1010个细胞进行初次免疫，间个细胞进行初次免疫，间隔隔 11～～ 33周，再追加免疫周，再追加免疫 11～～ 22次。次。

免疫的方法免疫的方法采用体内免疫法和体采用体内免疫法和体外免疫法。外免疫法。

体内免疫法体内免疫法适用于免疫原性强、抗适用于免疫原性强、抗原量较多时应用，一般用原量较多时应用，一般用 88～～ 1212周龄雌性鼠。周龄雌性鼠。

颗粒性抗原（如细菌细胞抗原）的颗粒性抗原（如细菌细胞抗原）的免疫原性强，可不加佐剂，直接注免疫原性强，可不加佐剂，直接注入腹腔入腹腔 1010个细胞进行初次免疫，间个细胞进行初次免疫，间隔隔 11～～ 33周，再追加免疫周，再追加免疫 11～～ 22次。次。

7

可溶性抗原按每只小鼠可溶性抗原按每只小鼠 1010～～ 100μg100μg抗原与福氏完全佐剂等量混合后注抗原与福氏完全佐剂等量混合后注入腹腔内，进行初次免疫，间隔入腹腔内，进行初次免疫，间隔22～～ 44 周，再用不加佐剂原抗原追加周，再用不加佐剂原抗原追加

免疫免疫 11～～ 22次。次。一般再采脾细胞前一般再采脾细胞前 33日由静脉注射最日由静脉注射最后一次抗原。刺激后一次抗原。刺激 BB 细胞分裂。细胞分裂。

可溶性抗原按每只小鼠可溶性抗原按每只小鼠 1010～～ 100μg100μg抗原与福氏完全佐剂等量混合后注抗原与福氏完全佐剂等量混合后注入腹腔内，进行初次免疫，间隔入腹腔内，进行初次免疫，间隔22～～ 44 周，再用不加佐剂原抗原追加周，再用不加佐剂原抗原追加

免疫免疫 11～～ 22次。次。一般再采脾细胞前一般再采脾细胞前 33日由静脉注射最日由静脉注射最后一次抗原。刺激后一次抗原。刺激 BB 细胞分裂。细胞分裂。

脾内免疫法即在麻醉下直接将脾内免疫法即在麻醉下直接将 0.10.1～～ 0.2ml0.2ml 抗原注入脾脏进抗原注入脾脏进

行免疫。细胞抗原需行免疫。细胞抗原需 101055 个，个，可溶性抗原需可溶性抗原需 10μg10μg 。。

脾内免疫法即在麻醉下直接将脾内免疫法即在麻醉下直接将 0.10.1～～ 0.2ml0.2ml 抗原注入脾脏进抗原注入脾脏进

行免疫。细胞抗原需行免疫。细胞抗原需 101055 个，个，可溶性抗原需可溶性抗原需 10μg10μg 。。

体外免疫法用于不能采用体内免体外免疫法用于不能采用体内免疫的情况下，如制备人源性单克疫的情况下，如制备人源性单克隆抗体；免疫源性极弱，易引起隆抗体；免疫源性极弱，易引起免疫抑制。免疫抑制。

优点：需抗源量少，免疫期短，优点：需抗源量少，免疫期短，干扰因素少。干扰因素少。

体外免疫法：用体外免疫法：用 44 ～～ 88周龄周龄 BALBBALB/c/c

小鼠的脾脏制成单细胞悬液，再加小鼠的脾脏制成单细胞悬液，再加入适当抗原使其浓度达入适当抗原使其浓度达 0.50.5～～ 5μ5μg/ml,g/ml, 在在 5% CO5% CO 　　 37 C 37 C 下培养下培养44 ～～ 55天天 ,,再分离脾细胞再分离脾细胞 ,, 进行细进行细胞融合。胞融合。

22o

二、细胞融合与杂交瘤细胞的 二、细胞融合与杂交瘤细胞的 选择性培养 选择性培养

细胞融合的方法：细胞融合的方法： 脾细胞（脾细胞（ 1×101×10 　）　） 骨髓瘤细胞（骨髓瘤细胞（ 2×102×10 　）混合　）混合 聚乙二醇诱导下融合，聚乙二醇诱导下融合， 22 分钟，然后分钟，然后

用培养液将融合液缓慢稀释。用培养液将融合液缓慢稀释。

二、细胞融合与杂交瘤细胞的 二、细胞融合与杂交瘤细胞的 选择性培养 选择性培养

细胞融合的方法：细胞融合的方法： 脾细胞（脾细胞（ 1×101×10 　）　） 骨髓瘤细胞（骨髓瘤细胞（ 2×102×10 　）混合　）混合 聚乙二醇诱导下融合，聚乙二醇诱导下融合， 22 分钟，然后分钟，然后

用培养液将融合液缓慢稀释。用培养液将融合液缓慢稀释。

88

77

用于细胞融合的骨髓瘤细胞应具有用于细胞融合的骨髓瘤细胞应具有融合率高，自身不分泌抗体，所产生融合率高，自身不分泌抗体，所产生的杂交瘤细胞分泌抗体能力强，长期的杂交瘤细胞分泌抗体能力强，长期稳定。稳定。

PEGPEG 相对分子量相对分子量 40004000 ，浓度为，浓度为 5050%%

二甲基亚砜增加融合率。二甲基亚砜增加融合率。

用于细胞融合的骨髓瘤细胞应具有用于细胞融合的骨髓瘤细胞应具有融合率高，自身不分泌抗体，所产生融合率高，自身不分泌抗体，所产生的杂交瘤细胞分泌抗体能力强，长期的杂交瘤细胞分泌抗体能力强，长期稳定。稳定。

PEGPEG 相对分子量相对分子量 40004000 ，浓度为，浓度为 5050%%

二甲基亚砜增加融合率。二甲基亚砜增加融合率。

细胞融合后可产生多种融合。细胞融合后可产生多种融合。　脾—脾、脾—瘤、瘤—瘤融合细胞。　脾—脾、脾—瘤、瘤—瘤融合细胞。 选择性培养选择性培养 ::

培养基 为培养基 为 HATHAT培养液。 次黄嘌呤培养液。 次黄嘌呤 (H)(H)氨甲喋呤氨甲喋呤 (A)(A)胸腺嘧啶胸腺嘧啶 (T)(T)配制。配制。

AA阻断阻断 DNADNA 合成。合成。

细胞融合后可产生多种融合。细胞融合后可产生多种融合。　脾—脾、脾—瘤、瘤—瘤融合细胞。　脾—脾、脾—瘤、瘤—瘤融合细胞。 选择性培养选择性培养 ::

培养基 为培养基 为 HATHAT培养液。 次黄嘌呤培养液。 次黄嘌呤 (H)(H)氨甲喋呤氨甲喋呤 (A)(A)胸腺嘧啶胸腺嘧啶 (T)(T)配制。配制。

AA阻断阻断 DNADNA 合成。合成。

三、筛选阳性克隆与克隆化三、筛选阳性克隆与克隆化 筛选阳性克隆常用检测方法：筛选阳性克隆常用检测方法： 免疫酶技术、免疫荧光技术、放射免免疫酶技术、免疫荧光技术、放射免

疫技术等。疫技术等。 克隆化是指单个细胞通过无性繁殖而克隆化是指单个细胞通过无性繁殖而获得细胞集团的整个培养过程。获得细胞集团的整个培养过程。

三、筛选阳性克隆与克隆化三、筛选阳性克隆与克隆化 筛选阳性克隆常用检测方法：筛选阳性克隆常用检测方法： 免疫酶技术、免疫荧光技术、放射免免疫酶技术、免疫荧光技术、放射免

疫技术等。疫技术等。 克隆化是指单个细胞通过无性繁殖而克隆化是指单个细胞通过无性繁殖而获得细胞集团的整个培养过程。获得细胞集团的整个培养过程。

ELISAELISA 用于破伤风抗体的筛选用于破伤风抗体的筛选ELISAELISA 用于破伤风抗体的筛选用于破伤风抗体的筛选

四、杂交瘤细胞与抗体性状的鉴定 四、杂交瘤细胞与抗体性状的鉴定 杂交瘤细胞鉴定：染色体分析。它是杂交瘤细胞鉴定：染色体分析。它是 鉴定的客观指标，了解分泌抗体的能鉴定的客观指标，了解分泌抗体的能

力。力。 单抗进行单抗进行 IgIg 类和亚类鉴定：类和亚类鉴定： 用羊或兔抗用羊或兔抗 IgIg不同类或亚类抗体，进不同类或亚类抗体，进

行免疫扩散或行免疫扩散或 ELISAELISA 鉴定。鉴定。 亲和力、特异性、纯度、分子量测定。亲和力、特异性、纯度、分子量测定。

四、杂交瘤细胞与抗体性状的鉴定 四、杂交瘤细胞与抗体性状的鉴定 杂交瘤细胞鉴定：染色体分析。它是杂交瘤细胞鉴定：染色体分析。它是 鉴定的客观指标，了解分泌抗体的能鉴定的客观指标，了解分泌抗体的能

力。力。 单抗进行单抗进行 IgIg 类和亚类鉴定：类和亚类鉴定： 用羊或兔抗用羊或兔抗 IgIg不同类或亚类抗体，进不同类或亚类抗体，进

行免疫扩散或行免疫扩散或 ELISAELISA 鉴定。鉴定。 亲和力、特异性、纯度、分子量测定。亲和力、特异性、纯度、分子量测定。

五、五、单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的大量制备 体外培养法可获的体外培养法可获的 10μg/ml10μg/ml 抗体抗体 体内诱生法可获的体内诱生法可获的 55～～ 20mg/ml20mg/ml 抗抗

体体 用用 BALB/cBALB/c小鼠。小鼠。 降植烷 接种杂交瘤细胞 取腹水 离降植烷 接种杂交瘤细胞 取腹水 离心 上清。心 上清。

五、五、单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的大量制备 体外培养法可获的体外培养法可获的 10μg/ml10μg/ml 抗体抗体 体内诱生法可获的体内诱生法可获的 55～～ 20mg/ml20mg/ml 抗抗

体体 用用 BALB/cBALB/c小鼠。小鼠。 降植烷 接种杂交瘤细胞 取腹水 离降植烷 接种杂交瘤细胞 取腹水 离心 上清。心 上清。

六、六、单克隆抗体的纯化单克隆抗体的纯化 依单抗依单抗 IgGIgG类和亚类不同，选各种不同类和亚类不同，选各种不同

的纯化方法。的纯化方法。 体内诱生法体内诱生法单克隆抗体的单克隆抗体的纯化方法：纯化方法：11 离心 取上清，超滤，盐析。离心 取上清，超滤，盐析。22 分离 ⑴凝胶过滤用于分离 ⑴凝胶过滤用于 IgG IgMIgG IgM 单抗纯单抗纯

化。⑵阴离子交换层析化。⑵阴离子交换层析 IgGIgG单抗纯化。单抗纯化。⑶亲和层析 ⑶亲和层析 IgGIgG单抗纯化。单抗纯化。

六、六、单克隆抗体的纯化单克隆抗体的纯化 依单抗依单抗 IgGIgG类和亚类不同，选各种不同类和亚类不同，选各种不同

的纯化方法。的纯化方法。 体内诱生法体内诱生法单克隆抗体的单克隆抗体的纯化方法：纯化方法：11 离心 取上清，超滤，盐析。离心 取上清，超滤，盐析。22 分离 ⑴凝胶过滤用于分离 ⑴凝胶过滤用于 IgG IgMIgG IgM 单抗纯单抗纯

化。⑵阴离子交换层析化。⑵阴离子交换层析 IgGIgG单抗纯化。单抗纯化。⑶亲和层析 ⑶亲和层析 IgGIgG单抗纯化。单抗纯化。

第三节 鼠源性第三节 鼠源性单克隆抗体单克隆抗体的改造的改造

第三节 鼠源性第三节 鼠源性单克隆抗体单克隆抗体的改造的改造

杂交瘤单抗为鼠源性，应用人体产杂交瘤单抗为鼠源性，应用人体产生人抗鼠抗体及毒副作用。对鼠源生人抗鼠抗体及毒副作用。对鼠源性的单抗进行基因加工和改造。性的单抗进行基因加工和改造。

目的：降低免疫源性；降低相对分目的：降低免疫源性；降低相对分子量。子量。

人人 --鼠嵌合抗体、改形抗体 、小分鼠嵌合抗体、改形抗体 、小分子抗体。子抗体。

杂交瘤单抗为鼠源性，应用人体产杂交瘤单抗为鼠源性，应用人体产生人抗鼠抗体及毒副作用。对鼠源生人抗鼠抗体及毒副作用。对鼠源性的单抗进行基因加工和改造。性的单抗进行基因加工和改造。

目的：降低免疫源性；降低相对分目的：降低免疫源性；降低相对分子量。子量。

人人 --鼠嵌合抗体、改形抗体 、小分鼠嵌合抗体、改形抗体 、小分子抗体。子抗体。

IgIg 分子结构分子结构IgIg 分子结构分子结构

IgIg 分子的基因结构分子的基因结构IgIg 分子的基因结构分子的基因结构

一、人鼠嵌合抗体一、人鼠嵌合抗体一、人鼠嵌合抗体一、人鼠嵌合抗体 抗原抗体结合功能—抗体可变区（抗原抗体结合功能—抗体可变区（ VV ）） 同种性免疫源性—抗体稳定区（同种性免疫源性—抗体稳定区（ CC ）） 在基因水平上将鼠源单抗的在基因水平上将鼠源单抗的 H H 和和 LL链链

可变区基因分离出来，分别与人可变区基因分离出来，分别与人 IgIg 的的 H H 和和 LL链的稳定区（链的稳定区（ CC ）基因连接成人）基因连接成人 --鼠嵌合抗体的鼠嵌合抗体的 H H 和和 LL链基因，再共转链基因，再共转染骨髓瘤细胞，就能表达完整人染骨髓瘤细胞，就能表达完整人 --鼠嵌鼠嵌合抗体。合抗体。

二、改形抗体（二、改形抗体（ CDRCDR 移植抗体）移植抗体）二、改形抗体（二、改形抗体（ CDRCDR 移植抗体）移植抗体）

Ig Ig 分子中参与构成抗原结合部位的区分子中参与构成抗原结合部位的区域是域是 HH和和 LL 链链 VV 区中的互补决定区区中的互补决定区（（ CDRCDR 区），而不是整个可变区。 区），而不是整个可变区。 HH和和 LL 链各有三个链各有三个 CDRCDR，其它部分称框，其它部分称框架区。架区。

用用鼠源单抗的鼠源单抗的 CDRCDR 序列替换人序列替换人 Ig Ig 分分子中子中 CDRCDR 序列，则可使人的序列，则可使人的 Ig Ig 分子分子具有具有鼠源单抗的抗原结合特异性。可鼠源单抗的抗原结合特异性。可消除免疫源性。消除免疫源性。

Ig Ig 分子中参与构成抗原结合部位的区分子中参与构成抗原结合部位的区域是域是 HH和和 LL 链链 VV 区中的互补决定区区中的互补决定区（（ CDRCDR 区），而不是整个可变区。 区），而不是整个可变区。 HH和和 LL 链各有三个链各有三个 CDRCDR，其它部分称框，其它部分称框架区。架区。

用用鼠源单抗的鼠源单抗的 CDRCDR 序列替换人序列替换人 Ig Ig 分分子中子中 CDRCDR 序列，则可使人的序列，则可使人的 Ig Ig 分子分子具有具有鼠源单抗的抗原结合特异性。可鼠源单抗的抗原结合特异性。可消除免疫源性。消除免疫源性。

三、小分子抗体三、小分子抗体三、小分子抗体三、小分子抗体 基因工程小分子抗体仅表达鼠源单抗的基因工程小分子抗体仅表达鼠源单抗的VV 区片段，相对分子量为原抗体的区片段，相对分子量为原抗体的 1/81/800～～ 1/31/3 。即保留。即保留 CDRCDR 区，而区，而 Ig Ig 分分子中的子中的 CC区区不表达。不表达。

小分子抗体类型有：小分子抗体类型有： 　①　① FabFab片段抗体片段抗体　 ②　 ② FvFv抗体抗体 ③ ③单链抗体单链抗体

基因工程小分子抗体仅表达鼠源单抗的基因工程小分子抗体仅表达鼠源单抗的VV 区片段，相对分子量为原抗体的区片段，相对分子量为原抗体的 1/81/800～～ 1/31/3 。即保留。即保留 CDRCDR 区，而区，而 Ig Ig 分分子中的子中的 CC区区不表达。不表达。

小分子抗体类型有：小分子抗体类型有： 　①　① FabFab片段抗体片段抗体　 ②　 ② FvFv抗体抗体 ③ ③单链抗体单链抗体

④④单域抗体单域抗体⑤⑤最小识别单位最小识别单位单链抗体的优点：单链抗体的优点：①①可去除非特异性反应的竞争性表面可去除非特异性反应的竞争性表面

蛋白，肿瘤显象背景更加清晰性。蛋白，肿瘤显象背景更加清晰性。②②易渗透肿瘤组织中增加药物治疗浓易渗透肿瘤组织中增加药物治疗浓

度。度。③③免疫源性小，可消除人抗鼠的排异免疫源性小，可消除人抗鼠的排异反应。反应。

④④单域抗体单域抗体⑤⑤最小识别单位最小识别单位单链抗体的优点：单链抗体的优点：①①可去除非特异性反应的竞争性表面可去除非特异性反应的竞争性表面

蛋白，肿瘤显象背景更加清晰性。蛋白，肿瘤显象背景更加清晰性。②②易渗透肿瘤组织中增加药物治疗浓易渗透肿瘤组织中增加药物治疗浓

度。度。③③免疫源性小，可消除人抗鼠的排异免疫源性小，可消除人抗鼠的排异反应。反应。

单链抗体大多在大肠杆菌中单链抗体大多在大肠杆菌中表达，有三种形式：表达，有三种形式：　①直接在细胞质中表达；　①直接在细胞质中表达；　②与其它菌体融合表达融合　②与其它菌体融合表达融合

蛋白；蛋白；　③分泌表达具有功能的单链　③分泌表达具有功能的单链

抗体抗体。。

单链抗体大多在大肠杆菌中单链抗体大多在大肠杆菌中表达，有三种形式：表达，有三种形式：　①直接在细胞质中表达；　①直接在细胞质中表达；　②与其它菌体融合表达融合　②与其它菌体融合表达融合

蛋白；蛋白；　③分泌表达具有功能的单链　③分泌表达具有功能的单链

抗体抗体。。

四、双功能抗体四、双功能抗体

双功能抗体就是双特性抗体。它是一种双功能抗体就是双特性抗体。它是一种非天然性抗体。其结合抗原的两个臂非天然性抗体。其结合抗原的两个臂具有不同的特异性。具有不同的特异性。

构建方法：构建方法：⒈⒈化学交联法化学交联法⒉⒉生物学方法（杂种生物学方法（杂种 -- 杂交瘤）杂交瘤）⒊⒊基因工程法基因工程法

双功能抗体就是双特性抗体。它是一种双功能抗体就是双特性抗体。它是一种非天然性抗体。其结合抗原的两个臂非天然性抗体。其结合抗原的两个臂具有不同的特异性。具有不同的特异性。

构建方法：构建方法：⒈⒈化学交联法化学交联法⒉⒉生物学方法（杂种生物学方法（杂种 -- 杂交瘤）杂交瘤）⒊⒊基因工程法基因工程法

五、抗体融合蛋白五、抗体融合蛋白五、抗体融合蛋白五、抗体融合蛋白 抗体融合蛋白广义属双功能抗体。抗体融合蛋白广义属双功能抗体。 类型：类型： ① ①配基配基 -- 配基型融合蛋白；配基型融合蛋白； ② ②配基配基 -Ig-Ig型嵌合蛋白；型嵌合蛋白； ③ ③配基配基 -Fv-Fv 型融合蛋白；型融合蛋白； ④ ④受体受体 -Fv-Fv 型融合蛋白；型融合蛋白； ⑤ ⑤酶酶 --抗体型融合蛋白；抗体型融合蛋白；

抗体融合蛋白广义属双功能抗体。抗体融合蛋白广义属双功能抗体。 类型：类型： ① ①配基配基 -- 配基型融合蛋白；配基型融合蛋白； ② ②配基配基 -Ig-Ig型嵌合蛋白；型嵌合蛋白； ③ ③配基配基 -Fv-Fv 型融合蛋白；型融合蛋白； ④ ④受体受体 -Fv-Fv 型融合蛋白；型融合蛋白； ⑤ ⑤酶酶 --抗体型融合蛋白；抗体型融合蛋白；