血清谷丙转氨酶血清谷丙转氨酶活性的测定 活性的测定

实验目的

掌握谷丙转氨酶活性测定的 原理和方法

血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及 a一酮戊二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸

血清加基液保温后产生丙酮酸的多少，即反应出谷丙转氨酶活性的大小。

丙酮酸与 2， 4- 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在酸性溶液中显黄色，在碱性溶液中成醌型显棕红色。

实验原理

• 本实验是在碱性条件下，生成醌类化合物的量反应丙酮酸的量，即反应了谷丙转氨酶的活性。

• 本法以 lml 血清与基质液在 37℃ ，保温 30 分钟生成 2.5μg 丙酮酸为谷丙转氨酶活性 1 单位

• 求酶活性单位的方法：• 1、标准品对照法：检品与标准丙酮酸液同样处

理呈色，进行比色，计算出酶活性单位。• 2、标准曲线法：取含待测物的一系列标准溶

液，作标准曲线，由标准曲线查得活性单位。

一、标准品对照法 取试管 4 支，标号，按下表加试剂：

基质液

血清

丙酮酸

水

4 个管同时放入 37℃ 水浴中。准确保温30 分钟，

呈色试剂

基质液

A （检品） 0.5 0.1 — — 0.5 —

B （检对照） — 0.1 — — 0.5 0.5

S （标准） 0.5 — 0.1 — 0.5 —

S’（标对照）

— — — 0.1 0.5 0.5

实验操作

56℃ 放置 5 分钟。

加 0.4N NaOH 液 5.0ml

慢慢加入（约 1 分钟），边加边混匀。

室温放置 30 分钟，

测 OD 值，波长 520nm ，用蒸馏水调零点。

计 算（ ODA-ODB ）（ ODs-ODs ＇）

=X （待测样品丙酮酸含量）

50ug/ml × 0.1 ml

X =（ ODA-ODB ）（ ODs-ODs ＇）

× 5

SGPT 单位 =

（ ODA-ODB ）（ ODs-ODs ＇）× 5

0.1 2.5×

=（ ODA-ODB ）（ ODs-ODs ＇） × 20

二、标准曲线法 配制一系列不同浓度的标准丙酮酸液，并且各加以适量的基质液，作成标准曲线。具体做法如下表。

管号 1 2 3 4 5 空白标准丙酮酸（ 50

μg/ml ）基质液 ml蒸馏水 ml

丙酮酸含量μg相当 GPT 单位

0.05

0.50.45

2.510

0.1

0.50.4

5.020

0.2

0.50.3

1040

0.3

0.50.2

1560

0.4

0.50.1

2080

-

0.50.5

-0

。

各管混匀，放 37℃ 水浴 5 分钟

加 0.4N NaOH 液 5.0ml

慢慢加入（约 1 分钟），边加边混匀

然后各加呈色试剂 0.5ml ，混匀

56℃ 放置 5 分钟。

室温放置 30 分钟

测定 OD 值 , 波长 520nm ，用蒸馏水调零点。

A B S S’

OD 值

一标准对照法

１ .原始数据记录

2 、公式计算酶活性单位（要求带入数据，写出结果）二、标准曲线法 １ . 原始数据记录

1 2 3 4 5 空白OD 标准OD 标准 – OD 空白 ( 纵坐标 )

--------

标准 GPT 单位 ( 横坐标 ) 10 20 40 60 80 ---------

2 、绘制标准曲线，（要求规范作图）

3 、通过方法一的 ODA-ODB ，在标准曲线中，查得酶活性单位

实验结果

注意事项 操作中加 0.4N NaOH 液时，需以较慢速度加入，并且边加边摇匀加快时则 a一戊酮二酸引起的发色增强。

本实验中各试剂加量都需要准确，并且要注意控制条件，保温时间要严格

本法测定 SGTP 正常值为 40 单位以下。

分析实验误差产生的原因

血清 GPT 活性测定的意义

实验讨论