第三章 菌种的生产与保藏

菌种，好比农作物的种子，是食用菌生产的根本，其优劣直接影响食用菌的产量和质量。因此，从事食用菌菌种工作的单位都必须认真做好菌种的培育和保藏工作。

一、菌种培育技术

人工培育的菌种有母种、原种和栽培种之分。

1 ）母种（一级菌种）：用孢子分离或组织分离等培育的菌丝体称为母种。

2 ）原种（二级菌种）：把母种扩大到木屑、棉籽壳等为主的培养料上的菌种称为原种。

3 ）栽培种（三级菌种）：由原种扩大培养成为生产上使用的菌种称为栽培种。

4 ）菌种：实质上就是经过人工培养并进一步繁殖的食用菌的纯菌丝体。

食用菌的制种程序

组织分离接种→母种（一级）

　

接种→ →原种（二级）　

接种→→栽培种（三级）

种菇孢子分离

经过这样三级培养，食用菌菌丝数量大大增加。

一般 1 支试管菌种可繁殖 4~6 瓶原种，每瓶原种又可扩大繁殖 60~100 瓶栽培种。

培养

培养

母 种

原种、

栽培种

栽培种

食用菌的制种程序

菌种生产必须在严格的无菌条件下进行。为了保证制种的成功，除必须掌握制种技术外，还需要一些基本的设备和用品。

1 、接种设备⑴ 接种室要求 :

①关闭严密，便于熏蒸、消毒；②空间不宜过大，一般长、宽、高均为 2m 即可 ;

③接种室外面最好有一个缓冲室；④墙壁、天花板和地面都要平整、光洁；⑤内装有紫外灯和日光灯。

( 一 ) 菌种生产常用的设备和用具

1 、接种设备 ⑵ 接种箱 当菌种生产量不大时，可在接种箱内进行。它是用木条作成框架，以 3mm 厚的玻璃作箱壁。要求：① 关闭严密，便于熏蒸；② 装有日光灯和紫外灯。优点：搬动方便，操作人员不会受有毒气体危害。缺点：容量小。

1 、接种设备 ⑶ 超净工作台原理：超净工作台是利用过滤除菌的原理，先将空气过滤，得到无菌空气，然后将无菌空气从风洞打出，使工作台范围内成为无菌状态。要求：放置工作台的房间要清洁，空气流动小，最好安装灭菌灯。优点：有效可靠，操作使用方便，在夏季接种时，使操作人员感到舒适。 每台 3000 元左右，有条件的食用菌专业户，可选用这种先进的接种设备。

超净工作台

( 一 ) 菌种生产常用的设备和用具 2 、灭菌设备

1 ）手提式：容量小，适于斜面试管及玻璃器皿等；

2 ）立式： 容量大，投资大；

3 ）卧式：容量大，投资大；

4 ）家用 24 或 26 cm 压力锅：母种、原种培养基 。

Ⅰ高压蒸气灭菌锅

优点：省时、省燃料、 效果好

2 ）、 3 ）一般在菌种场或研究所应用。

灭菌设备 Ⅰ 高压蒸气灭菌锅

( 一 ) 菌种生产常用的设备和用具 2 、灭菌设备

Ⅱ 　常压灭菌锅 目前农村生产栽培种的必备设备，实际上是一种大型蒸笼式煮灶。底部为铸铁大锅，上部为圆形木桶，桶内装数层供放培养基的格架。桶盖装有活络搭及密闭的橡皮圈，由于锅内温度最高是 100℃，所以灭菌时间需维持 10~12h ，才能达到灭菌效果。

( 一 ) 菌种生产常用的设备和用具 3 、培养设备

⑴ 培养室大小：不宜过大，一般以 20 ~25℃ ℃，培养 500

0~6000 瓶菌种为宜，太大不易保温和管理。要求：干净、通风、保温，应设有调温设备，使室温保持在 20 ~25℃ ℃。门窗应设铁纱，以防鼠、虫为害。⑵ 生化培养箱 是专业工厂生产的恒温电器设备，用于培养母种或少量原种，可以根据需要任意温度调节。

( 一 ) 菌种生产常用的设备和用具 4 、培养菌种的容器母种：试管，常用规格 20×180~200mm ， 18×

180mm 等。

原种、栽培种

菌种瓶：盐水瓶、罐头瓶

菌种袋聚丙稀袋

聚乙稀袋规格有： 12~15×30~35 cm ，

17×35~45 cm

母种 -试管

原种、栽培种—菌种瓶或塑料袋

菌种瓶

( 一 ) 菌种生产常用的设备和用具 5 、接种工具 移植菌种于培养基上的工具称接种工具，主要有以下几种：

接种针、环、刀、钩、铲、锄、枪等；

( 一 ) 菌种生产常用的设备和用具6 、常用的消毒药品

⑴ 70% 酒精：一般用于手、种菇表面消毒；

⑵ 0.1%升汞：常用于玻璃器皿、非金属器械及种菇表面消毒；

⑶ 0.1%KMnO4 ：一般用于用具、器皿消毒；

( 一 ) 菌种生产常用的设备和用具6 、常用的消毒药品

⑷ 5%石炭酸：喷洒墙壁、地面及擦洗桌面等，也可用来苏尔代替；

⑸ 2%来苏尔、新洁尔灭：用法同上；

⑹甲醛（福尔马林）：用于菇房和接种箱等空气消毒；

方法：关闭门窗消毒，自行气化；

用量： 10mL甲醛＋ 5g KMnO4／立方米。

( 一 ) 菌种生产常用的设备和用具( 二 ) 母种生产技术

1 、母种培养基

食用菌母种培养基的种类繁多，由于不同营养类型的食用菌对营养物质的要求不同，所以，在培养不同食用菌母种时，应选择适宜该菌种的培养基。

母种培养基要求营养丰富、完全、氮源、维生素的比例应高。

现将食用菌常用的母种培养基列举如下 ：

( 一 ) 菌种生产常用的设备和用具( 二 ) 母种生产技术

⑴ 配方①马铃薯葡萄糖琼脂培养基（ PDA ） 马铃薯 200g 、葡萄糖（或蔗糖） 20

g 、琼脂 20g 、 H2O 1000mL 、 pH 6.5 。

适用于一般食用菌母种分离与培养，但草菇、猴头菌等在此培养基上生长不良。

( 二 ) 母种生产技术

②综合马铃薯培养基

马铃薯 200g 、葡萄糖（或蔗糖） 20g 、 KH

2PO4 2g 、 MgSO4 0.5g 、维生素 B1 10mg 、琼脂 20g 、 H2O 1000mL 、 pH自然。

适合培养草菇、猴头菌、灵芝及各种食用菌菌种分离、保藏。

( 二 ) 母种生产技术

③胡萝卜葡萄糖琼脂培养基

胡萝卜 200g 、葡萄糖（或蔗糖） 18~20g 、琼脂 20g 、 H2O 1000mL 、 pH自然。

( 二 ) 母种生产技术

④玉米粉培养基

玉米粉 40g 、葡萄糖（或蔗糖） 10g 、琼脂20g 、 H2O 1000mL 、 pH自然；

适用于大多数食用菌菌丝的生长。

⑤马铃薯、葡萄糖、蛋白胨、琼脂培养基

马铃薯 200g 、葡萄糖（或蔗糖） 20g 、蛋白胨 10g 、琼脂 20g 、 H2O 1000mL 、 pH自然；

适用于培养和保藏多种食用菌。

( 二 ) 母种生产技术⑥黄豆芽、松针培养基

黄豆芽 250g 、松针 50g 、葡萄糖（或蔗糖） 20g 、琼脂 20g 、 H2O 1000mL 、pH 5~5.5 。

将松针、黄豆芽按量称好，加水煮 30min ，取滤液，加入葡萄糖、琼脂，充分搅拌，使琼脂熔化，补水至 1000ml ，即分装试管。

主要用于培养竹荪母种。

( 二 ) 母种生产技术

⑦苹果汁培养基

苹果 100g 、蛋白胨 2g 、蔗糖 20g 、琼脂 20g 、 H2O 1000mL ；

主要用于草菇培养

（配制方法同 PDA ）

⑴ 配方

⑵ 配制方法（以 PDA 为例） 马铃薯（去皮、去芽眼）→切成片→称取 200g＋ 1000mL H2O→煮沸→双层纱布过滤→取滤液并补足 1000mL＋琼脂→熔化＋其它营养物质→调节 pH （用 HCl 或 NaOH ）→分装试管→灭菌（高压蒸气灭菌 15-30min ）→制成斜面→检查灭菌效果（即 28~30℃培养 2~3d ）

其它天然培养基或综合培养基，如：玉米粉、黄豆粉、胡萝卜、麸皮等原料，加适量水煮汁过滤，取滤液与其它成分混合。

( 二 ) 母种生产技术

2 、母种分离

母种分离方法

孢子分离

组织分离

基质分离

有性

无性

⑴ 孢子分离法

利用孢子在适宜培养基上形成菌丝来获得纯菌种的方法。

孢子分离法

1 ）单孢子分离法：培养基上只接种 1个担孢子，使它萌发成菌丝体而获得纯菌种的方法。 如：双孢蘑菇、草菇单个孢子分离得到菌丝便能结实。

（一个孢子→萌发→菌丝体→纯种）

2 ）多孢子分离法：许多孢子接种于同一培养基上，使它们萌发自由交配来获得纯菌种的方法。如：香菇、平菇、金针菇、毛木耳等。 （多个孢子→萌发→菌丝体→纯种）

( 二 ) 母种生产技术

下面先解释二个基本概念

1 ）同宗配合：同一担子孢子萌发产生的两条菌丝之间进行结合便能生育（自交亲合、可孕，类似于高等植物自花授粉），可用单孢子分离。

如：双孢蘑菇、草菇

2）异宗配合：同一性别菌丝之间不亲合，只有两条性别不同的菌丝交配才能产生子实体。

大多数食用菌属此类型，需用多孢子分离法。

( 二 ) 母种生产技术

担子菌亚门中，约 10% 菌类属同宗结合， 90% 以上是异宗配合，所以单孢子分离对大多数食用菌不适用，只有育种时才采用。

此法技术复杂，生产上很少采用，在此不作详述。

( 二 ) 母种生产技术 多孢子分离简单易行，生产上经常采用，多孢子分离的具体操作方法有以下几种：

①整菇插种法：伞菌常用此法采得孢子。

即选择成熟度适当的优良种菇，在无菌操作下，插入无菌孢子采集器内，置适温下让其自然弹散孢子。用接种环取少量孢子，放入试管斜面上培养。

种菇选择：菌丝生长健壮，无病虫杂菌，出菇均匀，转潮较快，菇形圆整，菌盖肥厚，达八九成熟。

参见 P48

( 二 ) 母种生产技术

孢子采集器是用来采集食用菌孢子的一种装置。

孢子采集器

搪瓷盘（大号培养皿）

培养皿

种菇支架

玻璃钟罩（大漏斗）

参见 P48

②悬钓法 此法主要用于耳类（黑木耳、毛木耳、银耳等）孢子的采集。

耳片（表面消毒） → 悬挂于培养基上方→培养→ →取出挂钩与耳片→培养→挑取先端菌丝→转管纯化→母种

12~24h

培养基耳片 参见 P48

组织分离：指通过菇体组织分离纯种。

优点：操作简便、取材广泛、不易变异，保持原菌种优良种性。

方法：

① 选择种菇（出菇早、无病虫害、柄短、肉厚、大小适中、 5~6 分成熟）

② 组织分离

⑵ 组织分离法 参见 P45

选择种菇→表面消毒（ 75% 酒精或 0.1%升汞）→撕成两半→取菌柄菌盖交界处→小块菌肉→移入 PDA→ 培养→观察→转管→纯种 上述分离物在 25℃下，经 3d~5d 可看到分离物表面长出白色绒毛状丝，每隔 1d~2d 检查 1次，随时淘汰霉菌、细菌污染的培养物，培养 10d~15d ，再作 1次转管即得到纯种。

⑵ 组织分离法 参见 P45-46

注： ⑴取组织块不要贪大，因组织块小易定植 ;

⑵ 有些食用菌不易用组织分离法获纯种； ⑶ 不同的食用菌切取部位和消毒方法不同。如： 1 ）红菇、乳菇等，因它们菇体细胞已泡囊化，再生能力极弱；又如： 2 ）银耳和木耳等胶质菌，它们子实体中菌丝含量极少，组织分离法不易成功。而只能取其生长的基质即菇木、耳木分离。

⑵ 组织分离法

概念：

由菇木、耳木、培养料等食用菌生长基质中的菌丝分离培养而成。这是利用潜在于寄主组织内的菌丝体获得纯种的方法。

（常用于银耳及木耳菌种分离）

⑶ 基内菌丝分离法（基质分离法）参见 P46-47

段木内菌丝分离法：

取 1~2cm 菇木、耳木（子实体着生部位）→去皮→消毒（ 75% 酒精或 0.1%升汞浸泡 1

min ）→切去四周木块→切成火柴杆粗细， 0.5

cm长的小木梗→取 1 根放入试管斜面上→培养→取菌丝→转管纯化

⑶ 基内菌丝分离法（基质分离法）

参见 P46-47

( 二 ) 母种生产技术3 、菌种提纯与扩大繁殖 用孢子、组织或基质分离法得到的菌种，一般不宜直接用于生产，必须经过提纯方可应用。

⑴ 提纯：选稀疏单菌落→边缘取菌→接种试管斜面（ 3~5支）→培养→纯菌种。

⑵扩大繁殖：提纯的母种或从有关单位引进的母种，数量均很少，应扩大繁殖后再用。

在母种繁殖时，最好一次多移些，不易多次转管，以免影响出菇率，降低产量和质量。

一支斜面母种可移接 40支左右斜面试管。

4 、质量检验 对分离、引进或转管扩大的菌种，应经过质量鉴定，选优去劣，方可使用。1 ）检验方法① 外观鉴定优良菌种：菌丝浓白、粗壮、富有弹性，则生命力强。如有子实体或茶褐色被膜，只要除去仍可使用。老化菌种：菌种已收缩、干燥或菌丝体自溶产生了大量红褐色液体，说明生活力弱，不可使用。

( 二 ) 母种生产技术

②显微镜检验 挑取少许菌丝于载玻片上，加蒸馏水 1滴，盖上盖玻片，观察菌丝形态是否为培育的菌种。

③菌丝生长速度 将其接种到适宜斜面培养基上，在适温下培养。凡菌丝生长较快、整齐、浓密而健壮的就是优良母种。

参见 52( 二 ) 母种生产技术

②显微镜检验③菌丝生长速度④出菇试验 进行子实体产量和品质评比。 经以上检验，通过综合评比，选出菌丝生长速度较快，子实体生长健壮、品质好、产量高的母种，即可供生产上使用。

参见 52( 二 ) 母种生产技术

( 二 ) 母种生产技术

2 ）检验标准

①首先要辨认分离或引进的是不是所需要的菌种；

② 有无杂菌污染，是否老化。

简 答 题

1 、食用菌生产中常用的设备和用具有哪些？2 、什么叫组织分离法？写出组织分离法的步骤和注意事项。3 、写出 PDA 培养基配方及配制方法。

( 二 ) 母种生产技术( 三 ) 原种和栽培种的生产技术

原种和栽培种的生产，无论是培养基成分，配制方法和灭菌方法基本上是相同的。

1 ）原种：是由试管斜面培养基培养的母种作种源接种而成，主要用于繁殖栽培种，也可直接用于生产。（母种→原种）

2 ）栽培种：由原种作种源扩大而成，只能用于生产。（原种→栽培种 )

( 三 ) 原种和栽培种的生产技术

1 、常用培养料的配方和配制方法

培养料

木屑——米糠培养料：木生菇类，如：木耳、银耳、香菇；

草茎或草粪——厩肥培养料：草生菇类，如：蘑菇、草菇；

棉籽壳——米糠培养料：多种菇类。

⑴粪草培养基（适用于蘑菇）

稻草或麦秸 20kg 、粪肥（干） 30kg 、石膏500g 、水适量。

方法：稻草切成 2cm长＋粪肥→混合发酵＋石膏→调水→装瓶→灭菌

⑵稻草麸皮培养基（草菇）

干稻草 78% 、麸皮或米糠 20% 、蔗糖 1% 、过磷酸钙 1% 、水适量

方法：稻草切成 2cm长→发酵→＋蔗糖＋麸皮＋过磷酸钙

1 、常用培养料的配方和配制方法

⑶ 木屑米糠培养基（香菇、木耳、猴头、平菇等）

木屑 78% 、麸皮或米糠 20% 、石膏 1% 、蔗糖 1% 、水适量。

⑷木屑、麸皮、黄豆粉培养基（银耳）

木屑 50kg 、麸皮 15kg 、黄豆粉 1kg 、蔗糖 0.75kg 、 MgSO4 0.25kg 、水 70~75kg 。

⑸棉籽壳培养基（平菇、猴头、金针菇） 棉籽壳 99.7% 、蔗糖 0.1% 、石膏 0.2% 、水适量。

1 、常用培养料的配方和配制方法

( 三 ) 原种和栽培种的生产技术

2 、培养基（料）配制原则

⑴掌握碳氮比例

食用菌对碳和氮的需要有一个比例，简称碳氮比（ C／Ｎ）。

菌丝体生长阶段： C／Ｎ =20 1∶ ；

子实体形成阶段： C／Ｎ =30~40 1∶ ；

C／Ｎ 过高，菌丝体生长过旺，而子实体小、产量低。

2 、培养基（料）配制原则

⑵ 选好培养材料①首先选不含杀菌物质的木屑 杉、松、樟等树种，含酚、酯、精油等杀菌物质，会抑制食用菌生长。要用必须经过处理，如：蒸煮、晒等。 ② 根据食用菌的喜好选木屑 如：培养香菇用桦木屑就比椴木屑好； 培养金针菇用构，楮等木屑就比用榆、槐等木屑好。

⑶ 注意物理性状 培养原料要注意颗粒粗细、质地软硬程度，以及持水性能等物理性状。⑷调节酸碱度 各种食用菌需要的 pH值不同，配制培养料时，应选用 NaOH 、石灰、盐酸或过磷酸钙等物质调节 pH值。霉菌比食用菌喜欢更低的 pH值，生产上有时为了控制这类杂菌的发生，往往将 pH值适当调高 0.5~1 。

2 、培养基（料）配制原则

3 、原料选择的注意事项（几点说明）

⑴ 木屑：

树种：除松树、杉树、柏树、樟树、芸香属、按属等树种之外，绝大多数阔叶树和木屑都可以利用。（因其中含有酚、酯、精油等杀菌物质）

粗细：不宜过细，以免培养基过湿或通气不良。

3 、原料选择的注意事项（几点说明）

⑴ 木屑：

选择：根据食用菌分解能力选择，分解能力较强的食用菌采用硬质阔叶树木屑，反之采用软质树种木屑。

如：金针菇分解能力较弱，以含单宁较少木屑为宜，木屑越陈越好；

茯苓菌分解能力较强，可采用颗粒粗的松木屑或松木钉。

⑵米糠、麸皮作用

作用：补充氮源和维生素。

稻草、麦秸、木屑、棉籽壳等纤维素原料，含氮量低。如：木屑含氮量 0.03% 以下。

麸皮：含氮量比米糠多，但维生素不如米糠。

米糠：含氮量比麸皮少。

用量：一般 10%~20% ，过多易引起污染。

3 、原料选择的注意事项（几点说明）

⑶加糖的作用

①初期补充碳源，用量 1%~5% 。

②诱导胞外酶的产生。

纤维素原料，食用菌利用缓慢。加入少量白糖作为食用菌初期补充碳源，促进菌丝快速生长，同时诱导纤维素酶的产生，更好地利用纤维素。

3 、原料选择的注意事项（几点说明）

⑷Ca2 ＋作用

① 提供食用菌钙离子：原料中加石膏、CaCO3 或过磷酸钙、骨粉提供食用菌钙离子；

②钙不断中和食用菌产生的有机酸；

③钙还能中和单宁；

④减少过量 K 、 Mg对菌丝中毒，促进菌丝生长。

3 、原料选择的注意事项（几点说明）

( 三 ) 原种和栽培种的生产技术

4 、原种、栽培种的制作方法

按配方称取原料→拌料→装瓶（袋）→打洞（孔径 1cm深至瓶底）→灭菌（ 1.5kg／ cm2 ， 1.5~2h ）→冷却→接种（接入黄豆大小一块）→培养（ 25 ~27℃℃）→菌丝长满瓶（袋）→培养 7d~8d→ 扩大成栽培种。

( 三 ) 原种和栽培种的生产技术5 、杂菌检查（菌种检查）

接种后的原种，一般在 3d~5d左右菌丝恢复生长，应每天全面检查杂菌情况，如有污染及时剔除。（正常为白色，若混有其它色泽，应及时处理）；如发现接种块无新菌丝萌发，则认为是死菌，应及时补种。 正常：菌丝白色 杂菌：黄、红、绿、黑 死菌：补种

二、菌种保藏

菌种是食用菌栽培成败的关键。分离筛选一株优良的菌种是一项艰苦的任务，而长期保持优良菌种的性能，也是一项极为重要的工作。食用菌与其他微生物一样，都是有遗传性和变异性。

遗传性：保证了优良菌种的性能相对稳定，能传给下一代，为菌种保藏提供了良好的条件。

变异性：使高产优质的菌种，逐渐衰退，给菌种保藏带来了困难。

菌种保藏的目的：

① 保持菌种的优良性状；

②降低衰退速度。

③确保菌种纯洁，长期在生产上应用。

（不衰退、不死亡、不污染杂菌）

二、菌种保藏

原理：降低菌种代谢活动。

降低代谢活动方法：（创造各种条件）

低温

干燥

缺氧等

在这些条件下，食用菌可处于“休眠”状态或处于微弱的代谢活动。

常用的保存方法有以下几种。

二、菌种保藏

（一）斜面低温保藏法 这是一种较好的简易保藏法，目前应用最多。方法：将培养好的斜面菌种，放入 4℃冰箱内保藏。保存期： 3~6月适用范围：多数食用菌注：不适于草菇。由于草菇对低温的耐受力较差，其菌丝在 5℃下易死亡，所以保藏草菇菌种的温度需提高至 10~12℃或在草菇斜面菌种上加 3~4mL 10%甘油防冻。

二、菌种保藏

（二）石蜡封藏法（隔绝空气法）方法：用注射器注入灭菌的石蜡。注入量以高出斜面尖端 1cm 为宜，然后塞上棉塞或无菌橡皮塞，用蜡封好，保藏在冰箱或低温干燥处。

（菌丝体与空气隔绝，降低其代谢活动，防止培养基干燥）

保存期： 6年

适用范围： 可用于保藏所有不宜用冷冻或干燥保藏的真菌。

石蜡

培养基菌丝体

二、菌种保藏

（三）担孢子保藏法（干燥）

食用菌的孢子，可用滤纸条、河砂、氯化硅胶作吸附剂，干燥后进行保存。

1 、滤纸片保藏法

将食用菌的孢子吸附在无菌的滤纸条上，干燥后进行保存，一般可保存 3~5年。

方法：滤纸片（剪成 4×0.8cm 小条→灭菌）→收集孢子（让孢子弹射到滤纸条上）→将有孢子的滤纸条放入试管中（含硅胶）→封口→冰箱中保存

（三）担子孢子保藏法（干燥）

1 、滤纸片保藏法

2 、砂土管保藏法

砂土（ 2 1∶ ）→装管→灭菌→接入孢子→干燥→保存。

（四）冷冻、真空、干燥保藏法

这种方法是利用低温、干燥、缺氧等条件保存菌种，一般可保存 10

年左右。

二、菌种保藏三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法1 、母种污染处理⑴细菌污染底部取菌：可根据细菌只发生在培养基表面，而真菌菌丝能穿透到培养基内部的特点，用无菌操作法敲破试管取出培养基，在培养基的底部挑取一小块带有菌丝的培养基，移植到另一试管中培养，可得到纯正的母种。

二、菌种保藏三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法1 、母种污染处理⑴细菌污染底部取菌覆盖培养：将熔化培养基冷却到 40℃，倒在已污染细菌的斜面上，使之形成厚约 20 cm 的覆盖层，当食用菌菌丝透过培养基形成新的菌落时，即可挑取转管纯化。

三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法1 、母种污染处理⑴细菌污染⑵真菌污染 若污染的是青霉、黄霉、木霉等真菌，只要母种菌丝与这些杂菌没有相联或尚有一部分菌丝没有相联，并且这些杂菌的菌丝还没有产生孢子时，可以用无菌方法仔细挑取没有相联的一部分菌丝，移植到另外的试管中继续培育，就能得到纯正的母种。

三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法1 、母种污染处理2 、原种、栽培种被杂菌污染的原因有哪些？怎样鉴别？ 根据杂菌开始发生的部位，大致有以下几种污染原因：⑴若杂菌同时在培养基的上、中、下部位发生，主要是由于培养基灭菌不彻底造成的。⑵若杂菌开始发生在接种块上，这很可能是母种或原种已经感染了杂菌；或者是由于接种工具不严格（消毒），把杂菌带入。

2 、原种、栽培种被杂菌污染的原因有哪些？怎样鉴别？⑶若杂菌先在培养基表面发生，这是由于接种过程中无菌操作不严而引起的。⑷若杂菌是在接种后若干天才发生的，而且是发生在瓶口往下挂的，这说明杂菌是从棉花塞侵入培养基的。引起的原因是培养室湿度过大、棉塞受潮，造成霉菌滋生所致。

三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法

3 、为什么母种不能多次转管移植？

母种转管次数多了会削弱菌丝的生活力，降低出菇率，甚至造成菌丝不孕而不能形成子实体。因此母种培育可以一次多培育几支试管，不要反复多次分离转管，以确保菌丝旺盛的生活力。

（发生变异）

4 、优良菌种的标准是什么？

各种食用菌菌种，既有特定的质量标准，也有共同的质量标准。这些共同的质量标准主要是纯、壮两条。

⑴纯：除银耳菌种，其余各种栽培食用菌均是一种菌丝体的纯培养物，不得混入杂菌或纯培养物以外的其它菌种。

例如：香菇 7925 菌种，只能是 7925 菌株菌丝体的纯培养。

4 、优良菌种的标准是什么？

第一、不得混入毛霉、根霉、曲霉、木霉等任何霉菌或细菌、病毒；（杂菌）

第二、也不得混入平菇、金针菇等其它食用菌的菌丝体；（其它食用菌）

第三、也不得混入香菇 7925 菌株以外的任何一种香菇菌株。（其它菌株）

⑵壮：菌种长相正常、长势旺、再生能力强。

1 、培养料中麸皮、米糠的主要作用有（ ）。 A 补充维生素 B 提供碳源 C 提供氮源 D 提供矿质元素

一、选择题

2 、培养料中加石膏、 CaCO3 等的作用主要有（ ）。 A 提供 Ca++ B 中和有机酸 C 补充碳源 D 提供能源

1 、菌种袋内出现了绿色、黑色、黄色、红色等颜色，原因是（ 1 ），若此现象同时发生在菌种袋的上、中、下部位，其原因可能是（ 2 ）。防止此现象发生通常可用（ 3 ）、（ 4 ）等处理。（ 1 ）杂菌污染，（ 2 ）培养料灭菌不彻底，

（ 3 ） 15% 的石灰水， （ 4 ） 0.3% 多菌灵

14 、食用菌栽培常用的消毒药品有（ 5 ）、（ 6 ）、（ 7 ）等。（ 5 ） 70%酒精、（ 6 ） 0.1%升汞、（ 7 ） 0.1%KMn

O4

二、填空题

三、简答题

1 、优良菌种的标准是什么？

2 、菌种保藏的原理和常用的保藏方法？