به نام خدا

نگهداری ژرم پالسم و انتقال و کشت بدون ویروس وامن موز

تهیه کننده : محمدجواد بهروزی

:استاد راهنما

1

مقدمه

درصد تجارت جهانی موز را دربر دارد.13رقم کاواندیش موز به تنهایی

موز،به دلیل تکثیرکلنی و تک کشتی،مستعدبه انواع بیماریها میباشد

.نگهداری ژرمپالسم،میتواند منبع درجه یک مواد ژنتیکی گیاه باشد

نگهداری بذر،راحت ترین راه نگهداری ژرم پالسم،در میوه ها،در موز بیدانه جوابگو نیست

نگهداری و انتخاب ژرمپالسم ازبافت درخت در این ویترو هم به خاطر هزینه بر بودن کاربرد

ندارد

نگهداری در شرایط انجماد روشی است که درآن تمام فعل وانفعاالت شیمیایی متوقف

میگردد

دراین روش مواد گیاهی به مدت محدود میتوان نگهداری کرد

روش نگهداری ژرمپالسم برای موز را تشریح میکنیم3دراین مقاله 2

موادو روش ها

نگهداری ژرمپالسم توده مریستمی با شیشه ای شدن:

برای این منظور،نوک شاخه،به محیط کشت نیمه منجمدMSمنتقل شد

محیطMS،میکرومول 100 حاوی BA، 1 میکرومول IAA

محلولPVS2،ساکارز، به 0/4 درصد دی متیل سولفوکسیدو 15 درصد اتیلن گلیکول،15 درصدگلیسرول،30 حاوی

تنظیم شد.5/8 روی PHمحیط کشت اضافه و

دقیقه 60،120،150،180 درجه ،0مریستم هاتحت دمای

.قرار گرفتند

بعدازین تیمارمریستم به میکرو وسپس به ازت مایع

.منتقل شد

روز مریستم ها به محیط باززایی در محیطی2بعداز

3 تاریک منتقل شدند

مریستم ها و بستر کشت

4

نمودار زیوایی و

نسبت کالوس به

شاخه بعد از تیمار و

انجماد

5

:نگهداری ژرمپالسم سوسپانسیون سلولهای جنین زا

سوسپانسیون سلول های جنین زا ازپرآوری کشت مریستم ازارقام مختلف موز بدست آمد این سوسپانسیون در محیط ZZ حاوی نصف مقادیر استاندارد میکرو و ماکرو المنت ها و

میباشدMSویتامین های محیط ،درصد 7/5سوسپانسیون بامحلول انجماد حاویDMSO گرم برلیترساکارز تیمار شد180 و - درجه سردشد40سپس محلول مذکور به ازت مایع منتقل و تا درجه به 40سپس سوسپانسیون بالفاصله،با آب مقطر دقیقه گرم شد.2مدت سوسپانسیون های جنین زا درنهایت به محیط باززایی ماه گیاهچه ها شمارش شد3منتقل وبعد از مشاهده شد که برخی سوسپانسیون ها،گاهیاوقات میتوان نتیجه متفاوتی در جوانه زنی و باززایی نمونه ها نشان دهد

6

سوسپانسیون سلول های جنین زا

7

نابودسازی ویروس ها

جهت آزمایشات،ویروسCMV و BSV از گیاه

توباکو استخراج،و به ارقام موز منتقل شد.

10 دقیقه بعداز آلودگی،،برگ موز با آب

شستشو داده شد.

ازتوده های مریستمی گیاهان ویروسی مذکور

جهت انجماد استفاده شد

( با روش ایمونواسیELISA جهت شناسایی)

جهت TAS-ELISA و با روش CMVویروس

8 استفاده شد.BSVشناسایی ویروس

نتایج

آزمایشات اخیرنشان دادکه در رشو اول تیمارباPVS2 بعد از ازت مایع توده مریستم،به نوع گونه

بستگی داردو در همه ارقام یکسان نیست

دقیقه ای با 40 تا 20برای مریستم های بیشترارقام موز،یک تیمار PSV2بهینه میباشد

ساعته با1 ساعته در مقایسه با تیمار 2/5درکل یک تیمار PSV2 15 عملکرد خوبی با افزایش

درصدی باززایی مریستم ها پس از انجماد داشته است

مهمترین عاملی که باززایی سلول های جنین زا تحریک میکند کیفیت آنها است

سوسپانسیون های حاوی نسبت بیشترسلول جنین زا،در انجماد زنده ماندند

نتایج نشان دادکه درصد گیاهچه های باززایی شده بعداز انجماد عاری از ویروسCMV و BSV به

درصد بود90 و 34ترتیب

نتایج همینطورثابت کرد هر چه اندازه مریستم کوچک تر باشد،احتمال آلودگی هم کمتر خواهد بود9

درصد جوانه زنی 57 با THPبیشترین میزان جوانه زنی مربوط به سوسپانسیون میباشد

10

درصد گیاهان ویروسی جوانه زده

سالم پس ازکشت مریستم وسپس

انجماد

طبق نمودار ستون سمت راستی آبی رنگ،گیاهچه های جوانه زده بعد از کشت مریستم و انجماد را نشان

میدهد که بیشترین جوانه زنی را

دارد.کمترین مقدار هم مربوط به ستون سمت چپی و ستون شاهد ماست که به

طور مستقیم از جنین زایی به وجود

آمد 11

نتیجه گیری

نگهداری ژرم پالسم در حالت انجماد،تکنیک بسیار امیدوار کننده،برای پاکسازی

بیماریهای ویروسی از موز میباشد

عمل وقت گیر برش مریستم در این ویترو به کنار رفته و به عالوه سیاه شدن

ناشی از مواد فنولیک هم به پایان میرسد.

ماه از نگهداری ،سلول ها جوانه زده و زایایی و قوه نامیه آنها در طول 1بعد از

انجماد دست نخورده مانده بود

12

چکیده

نگهداری ژرم پالسم برای نگهداری طوالنی مدت درختان بیدانه و کلنی ها مثل موز کاربرد

دارد.

.سه روش برای انجماد ژرم پالسم انجام شد

هفته2روش اول انجمادسریع مریستم ها ی پیش تیمارشده با ساکارزبه مدت

روش دوم شیشه ای کردن نوک مریستم ریشه ها در شرایط این ویترو

روش سوم و بهترین روش ترکیب دو روش قبلی

عالوه بر نگهداری ژرمپالسم،روش انجمادباعث نابودسازی ویروس ها در گیاهان آلوده

میشود

13

پیشنهادات

استفاده از کشت مریستم جهت تولید گیاهان عاری از ویروس

استفاده از انجماد ژرمپالسم جهت نگهداری ژنوتیپ های مرقوب گیاهان

استفاده از روش سوم این مقاله جهت انجماد

پیش تیماری باPSV2باعث بهبود جوانه زنی بعد از خروج از ازت مایع است

استفاده از ژرمپالسم جهت تولید گیاهان عاری از ویروس

14

منابع

15