Фармакологическая активностьотечественных препаратов на основе фипронила и моксидектина в отношении иксодовых клещей II.. rriicciinnuuss и DD.. rreettiiccuullaattuuss

10

А.М. Бегинина, ФГБОУ «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина»

Ключевые слова: акарициды, иксодовые клещи, фар-

макотерапия

ВведениеИксодовые клещи (семейство Ixodidae) — эктопа-

разиты, которые часто встречаются во всех природно-климатических зонах мира, служат природным резер-вуаром и переносчиками основных групп возбудите-лей трансмиссивных заболеваний животных и человека,включая вирусы, риккетсии, бактерии, спирохеты,анаплазмы, пироплазмиды, тейлерии и др.

Тесные и многообразные связи кровососущих клещейс различными микроорганизмами обусловлены дав-ностью их паразитического образа жизни и разнообра-зием биоценологических связей с хозяевами-прокорми-телями, которыми являются теплокровные животные,человек, реже — рептилии [1, 3]. Семейство Ixodidae

включает в себя роды Haemophysalis, Dermatocentor,

Amblyomma, Boophilus, Hyalomma, Rhipicephalus, Ixodes.

Клещи одного и того же вида могут переносить нес-колько возбудителей, а разные виды возбудителей мо-гут передаваться несколькими видами клещей. Дли-тельность носительства различных возбудителей в ор-ганизме клещей исчисляется годами [4].

Ветеринарные и медицинские специалисты распола-гают большим ассортиментом акарицидных препара-тов для борьбы с иксодовыми клещами. Однако тормо-зом к дальнейшему успешному их применению служитпоявление резистентных популяций рас иксодовых кле-щей. Следовательно, разработка новых эффективныхи безопасных для теплокровных животных отечествен-ных препаратов, позволяющих успешно бороться с чле-нистоногими, представляет собой одну из важнейшихзадач современной паразитологии и фармакологии.

Цель исследованияОпределить фармакологическую активность препа-

ратов Формула 1 и Формула 2 в отношении иксодо-вых клещей I. ricinus и D. reticulatus, а также выявитьовоцидные и ларвоцидные свойства вышеназванныхпрепаратов.

Материалы и методыРабота выполнена в ФГБОУ ВПО МГАВМиБ им.

К.И. Скрябина в соответствии с методикой, утверж-

денной Главным государственным санитарным врачомРФ 28 сентября 2003 г. [2]. Изучали фармакологическуюактивность препаратов, разработанных на основе фип-ронила и моксидектина [6], и условно обозначенныхФормула 1 (для кошек) и Формула 2 (для собак).

Изучение акарицидной активности препаратов.Ее определяли посредством двух методов: погруже-ния голодных имаго в препарат и топикального на-несения препарата на клещей. Использовали самокприродной популяции видов I. ricinus и D. reticulatus,собранных с растительности не более чем за суткидо проведения опытов и хранившихся в пробиркахдифференцированной влажности и во влажных бин-тах при температуре 12 ± 2 °C. Также использовали са-мок иксодовых клещей (рис. 1) тех же видов, лабо-раторного разведения после проверки их двигатель-ной активности и агрессивности.

Метод погружения в препараты голодных имаго.

Самок клещей групп опыта (три группы D. reticulatus

и три группы I. ricinus в трех повторностях по 10 осо-бей в каждой) погружали на 1 мин в исследуемые пре-параты (Формула 1 и Формула 2). Клещей контрольныхгрупп (по одной для каждого вида паразита) поме-щали в дистиллированную воду. Наблюдали за поведе-нием клещей. Отмечали время смены активных дви-жений на ступор и время наступления смерти. Вре-мя контакта с препаратом определяли в зависимос-ти от наступления первой и последней смерти.

Подсчитывали всех погибших клещей и опреде-ляли среднее значение [2]. Первоначальный учет про-водили по истечении 12 мин. Окончательные резуль-таты учитывали спустя сутки.

Метод топикального нанесения препаратов на

клещей. С помощью микродозатора 0,3 мкл раство-ра исследуемого препарата наносили на дорсальнуюповерхность клеща. Для каждого препарата отдельноиспользовали по 20 самок клещей обоих видов. В конт-роле на клещей наносили дистиллированную воду втом же объеме. После высыхания препаратов клещейпомещали в пробирки дифференцированной влажностии содержали при комнатной температуре и естествен-ном освещении. Результаты учитывали в соответствиис методикой.

Изучение овоцидного действия препаратов. Исполь-зовали яйца иксодовых клещей I. ricinus и D. reticulatus.

ФАРМАКОЛОГИЯУДК 619: 615: 616.995.42

Фармакологическая активность отечественных препаратов на основе фипронила и моксидектина в отношении иксодовых клещей I. ricinus и D. reticulatus

РВЖ

•М

ДЖ

•№

5/2

012

11

Свежие яйцекладки клещей (по 50 яиц) помещалина полоски фильтровальной бумаги в чашки Петрии при помощи ручного пульверизатора на все яйца рав-номерно наносили препараты. Затем полоску фильт-ровальной бумаги вместе с яйцекладками помещалив бактериологические пробирки, отверстия которыхзакрывали тканевой салфеткой. Пробирки помещали втермостат при температуре 27 °С до вылупления ли-чинок. Контролем служили яйцекладки, обработан-ные дистиллированной водой.

Изучение ларвоцидного действия препаратов. Ис-пользовали личинок и нимф иксодовых клещей видовI. ricinus и D. reticulatus. Исследовали методом погру-жения на 1 мин 50 личинок, 50 нимф, завернув их вхлопчатобумажный материал. Контрольную группупогружали в дистиллированную воду.

Изучение остаточного действия препарата на кле-щей. Применяли метод принудительного контак-та. Круг фильтровальной бумаги диаметром 10 см(на 1 см больше диаметра стандартной чашки Пет-ри), площадью 78 см2 размещали горизонтально наневпитывающей поверхности (стекло). С помощьюпипетки равномерно наносили на нее изучаемый пре-парат из расчета 1 мл раствора на 100 см2 или 0,78 млна круг. В контрольном варианте на аналогичныекруги наносили тем же способом дистиллированнуюводу. После испарения растворителя фильтры по-мещали на дно чашек Петри так, чтобы края слегказагибались на стенки чашки. После испарения нане-сенных препаратов (в группе опыта) или дистилли-рованной воды (в контрольной группе) клещей поме-щали на бумагу. Продолжительность их контактас бумагой составила 10 мин. Клещей, выползающихза пределы круга, кисточкой возвращали на бума-гу. Поскольку клещи достаточно подвижны, одно-временно в чашку Петри целесообразно помещать неболее 2…3 особей. Контакт при комнатной темпера-туре с каждым препаратом (Формула 1 и Формула 2)включал в себя три повторности, по 10 клещей длякаждой. В контроле, едином на весь опыт, но длякаждого вида клещей, также были 3 повторности по10 клещей. Все работы с контрольными клещами вы-полняли на отдельном столе с использованием чис-тых инструментов (ножниц, кисточек и т. д.). Сра-зу после контакта клещей кисточкой переносилив пробирки дифференцированной влажности (по10 особей в пробирку), которые размещали горизон-тально при комнатной температуре и в условияхестественной освещенности. При учете результа-тов опыта к живым относили клещей, способныхк передвижению, к слабо подвижным — с резкиминарушениями координации движений, к категории«мертвые» — неподвижных клещей, не реагирую-щих на тепло руки и дыхание. Обычно у мертвых ик-содовых клещей раздвинуты пальпы — орган ося-зания.

Во всех опытах определяли среднее число погибшихклещей, среднюю ошибку и акарицидную активностькаждого препарата по формулам, приведенным в ме-тодике [2].

Результаты и обсуждениеПри определении акарицидной активности мето-

дом погружения голодных имаго отмечено, что ми-нимальное время наступления смерти при исполь-зовании Формулы 1 — 11,5 мин, максимальное —11,9 мин, минимальное время для Формулы 2 —8,2 мин, максимальное — 8,4 мин. Следовательно,целесообразно наблюдать за клещами не менее 12 мин.В течение суток погибли все клещи.

В среднем, смерть клещей вида I. ricinus, погружен-ных в препарат Формула 2, наступала быстрее на3,3 мин, чем при их погружении в препарат Форму-ла 1. Клещи D. reticulatus, погруженные в препаратФормула 2, погибали быстрее на 3 мин, чем при по-гружении в препарат Формула 1.

При вычислении времени наступления смерти вы-яснилось, что для клещей I. ricinus и D. reticulatus

разница незначительна (0,3 мин), т. е. препарат оди-наково действует на оба вида паразитов. Исходя из по-лученных данных, мы считаем, что первый учет це-лесообразен спустя 12 мин, окончательный — спустясутки.

Среднюю величину гибели клещей вычисляли, ис-ходя из числа погибших в течение 12 мин. Среднеезначение этого показателя для клещей вида I. rici-

nus при погружении в препарат Формула 1 состави-ло 73,4 %, при погружении в препарат Формула 2 —76,7 %. Для клещей D. reticulatus значение показа-теля при погружении в препарат Формула 1 составило76,7 %, при погружении в препарат Формула 2 — 80 %.Смерть всех особей наступила в течение суток.

Наши исследования показали, что препарат Форму-ла 2 более активен, чем Формула 1, в отношении изу-чаемых видов иксодовых клещей, причем вид D. retic-

ulatus менее устойчив, чем I. ricinus.Данные, полученные при топикальном нанесении

акарицидов, приведены в таблице. Среднее значениепоказателя гибели в течение 12 мин клещей видаI. ricinus при нанесении препарата Формула 1 состави-ло 66,7 %, Формула 2 — 80 %. Значение этого пока-зателя для клещей D. reticulatus при нанесении пре-парата Формула 1 — 70 %, Формула 2 — 88,4 %. Какпри методе погружения иксодовых клещей в пре-параты, так и при топикальном нанесении препарат

Рис. 1. Самки иксодовых клещей рода Dermacentor

А.М. Бегинина

12

SUMMARY

A.M. Beginina. Pharmacological Activity of Fipronil and Moxidektin including Drugs against Ixodic Ticks

I. ricinus and D. reticulatus. We prove, that originally developed Fipronil and Moxidektin including Drugs possess

high pharmacological activity against Ixodic ticks in vitro. Both ovocidal and larvocidal activities of the drugs are shown.

1. Балашов Ю.С. Основные направления эволюции иксоид-ных клещей // Энтомол. обозрение, 2004; 83 (4): 909—923.

2. Дезинсекция. Методы определения эффективности инсек-тицидов, используемых в медицинской дезинсекции, утвержденнойглавным государственным санитарным врачом РФ Г.Г. Онищенко от28 сентября 2003 г.

3. Карбабаев Э.Б. Экологический тип паразито-хозяинных от-ношений иксодовых клещей // Ветеринария, 2004; 8: 33—35.

4. Кирилловских В.А. Инсектоакарицидные препараты, ис-пользуемые в ветеринарии и животноводстве (конструирова-ние, стандартизация и производство). — М.: Россельхозакаде-мия, 1998.

5. Филиппова Н.А. Фауна СССР. Паукообразные. — М.-Л: На-ука, 1966.

6. Veterinary Pharmacology and Therapeuticcs. Edited byH. Richard Adams, — Blackwell Publishing, 2001.

Б и б л и о г р а ф и я

Формула 1 и Формула 2 (в каждой повторности в течение 12 мин, n=20)

Препарат Контроль I. ricinus, повторность D. reticulatus, повторность

1�я 2�я 3�я 1�я 2�я 3�я

Формула 1 0 12 14 14 14 13 15

Формула 2 0 16 18 14 17 18 18

Число погибших клещей при топикальном нанесении препаратов

Формула 2 активнее, чем Формула 1, а клещи видаD. reticulatus уязвимее, чем клещи вида I. ricinus. Всеклещи в данном эксперименте погибли в течение су-ток, т. е. изучаемые препараты показали 100%-ю эф-фективность через сутки.

Из анализа полученных данных следует, что как приметоде погружения, так и при нанесении препара-тов топикально, клещи гибли в течение 12 мин при-мерно в одинаковом соотношении. В течение суток от-мечена 100%-я гибель, что доказывает способностьпрепарата оказывать акарицидное действие на клещейкаждого вида при непосредственном контакте с пре-паратами.

При изучении овоцидного действия препаратов втечение 6 ч было установлено, что акарицидная актив-ность препарата Формула 1 для вида I. ricinus достига-ет 70 %, для D. reticulatus — 76 %, препарата Фор-мула 2 для I. ricinus — 82 %, для D. reticulatus — 82 %.Под лупой отметили изменение внешнего вида яици потемнение. В течение суток погибли все яйца ик-содовых клещей, что свидетельствует об овоцидныхсвойствах изучаемых препаратов.

Опыты на имаго и яйцах иксодовых клещей пока-зали, что оба варианта препарата, содержащего ком-бинации фипронила и моксидектина, вызвали гибельболее 70 % особей в течение 12 мин. Препарат, раз-работанный для собак (Формула 2), был более ак-тивен в отношении клещей изучаемых видов, чемпрепарат, предназначенный для кошек (Формула 1).Овоцидное действие препарата Формула 2 в отноше-нии клещей I. ricinus было на 12 % больше, актив-ность выше на 14 % для личинок и на 18 % для нимф.В отношении клещей вида D. reticulatus овоцидноедействие варианта, предлагаемого для собак, былона 14 % выше аналогичного действия варианта длякошек.

Остаточное действие препаратов определяли мето-дом принудительного контакта клещей с обработаннойповерхностью. В контрольных группах (отдельно I. rici-

nus и D. reticulatus) процент гибели не превысил 5 %.Нами была установлена средняя величина гибели кле-

щей при изучении остаточного действия препаратов пер-воначально в течение 2 ч, затем через сутки. В течение2 ч при использовании препарата Формула 1 для клещейвида I. ricinus показатель составил 73,4 %, для клещейвида D. reticulates 76,7 %, при использовании препара-та Формула 2 для клещей вида I. ricinus средняя вели-чина гибели составила 74,5 %, для клещей вида D. reticu-

latus 80 %. Все клещи погибли в течение суток. Полу-ченные данные свидетельствуют о хорошем остаточномдействии изучаемых препаратов на оба вида клещей.

Анализируя результаты исследования, можно конс-татировать, что остаточное действие препарата Фор-мула 2 выше, нежели аналогичное действие препара-та Формула 1, особенно для клещей вида D. reticulatus.Все клещи погибли в течение суток. Во всех опытахсредняя ошибка не превысила 6 %, следовательно,можно говорить о достоверности результатов.

ВыводыОба изучаемых препарата показали высокую актив-

ность при испытании на преимагинальных формах (яйца,личинки и нимфы), а также на взрослых особях (има-го) иксодовых клещей. Несмотря на то что клещи видаD. reticulatus оказались несколько более устойчивы кдействию изучаемых препаратов, чем клещи вида I. rici-

nus, разница при первоначальном учете была незначи-тельная. Это дает основание подтвердить выраженныеинсектоакарицидные свойства препаратов Формула1 и Формула 2 для данных представителей родов Ixodes

и Dermacentor. Все имаго, яйца и личинки клещейпогибли в течение суток.