ЛЕКЦІЯ № 1¡ерологічні_реакції.pdf · Сумський державний університет Медичний інститут Кафедра мікробіології,вірусології

Сумський державний університет

Медичний інститут

Кафедра мікробіології,вірусології та імунології

Тема: СЕРОЛОГІЧНІ

РЕАКЦІЇ

Лектор: к.б.н. кафедри

Івахнюк Т. В.

ЗНАЧЕННЯ ДІАГНОСТИКИ ЯК ПРОЦЕСУ

РОЗПІЗНАВАННЯ ІНФЕКЦІЙНОЇ ХВОРОБИ

є основою для раціонально та ефективного

лікування хворого;

дозволяє в більшості випадків передбачити

можливі варіанти подальшого перебігу

захворювання та його наслідків;

дозволяє вчасно провести протиепідемічні та

профілактичні заходи.

2

МЕТОДИ ДІАГНОСТИКИ ІНФЕКЦІЙНИХ

ХВОРОБ

Клінічні

анамнестичний

метод (скарги

хворого, анамнез

захворювання,

анамнезжиття та

епідеміологічний

анамнез)

3

Методи специфічної

(лабораторної) та

структурно

функціональної

(інструментальної)

діагностики

4

МЕТОДИ СПЕЦИФІЧНОЇ ДІАГНОСТИКИ

ІНФЕКЦІЙНИХ ХВОРОБ

мікроскопічний

бактеріологічний

біологічний

серологічний

алергологічний

молекулярно-

біологічний

МІКРОСКОПІЧНИЙ МЕТОД

дає змогу виявити

збудника безпосередньо у

матеріалі від хворого за

допомогою різних методів

мікроскопічного

дослідження.

5

РІФ – реакція прямої та

непрямої

імунофлюоресценції

ці реакції відно-

сяться і до експрес-

методів діагностики

РІФ – ПРЯМА РЕАКЦІЯ ІМУНОФЛУОРЕСЦЕНЦІЇ

(МЕТОД КУНСА) Компоненти реакції:

1) Матеріал від пацієнта, в

якому міститься збудник.

2) Специфічна люмінісцента

сироватка, яка містить

антитіла проти відомого

збудника оброблені

флуорохромом.

6

Принцип реакції:

Мікроорганізми оброблені

антитіла міченими флуо-

рохромом, здатні світитися під

люмінесцентним мікроскопом.

РНІФ – НЕПРЯМА РЕАКЦІЯ ІМУНОФЛУОРЕСЦЕНЦІЇ

Компоненти реакції:

1) Матеріал від пацієнта, в якому міститься збудник.

2) Специфічна сироватка, яка містить антитіла проти відомого

збудника.

3) Антиглобулінова сироватка, мічена флуорохромом.

7


На першому етапі мікроорганізми взаємодіють із антитілами

специфічної сироватки. Далі наносять на імунний комплекс

антиглобулінову сироватку, мічену флуорохромом. Імунний

комплекс за допомогою даного конюгату світиться під

люмінісцентним мікросокпом.

8

БАКТЕРІОЛОГІЧНИЙ МЕТОД

дає змогу виявити

збудника безпосередньо у

матеріалі від хворого за

допомогою виділення

чистої культури (ЧК)

бактерій

9

з метою ідентифікації вивчають антигенні властивості

ЧК у РА (реакції аглютинації) на склі

та вивчають токсигенні властивості ЧК у РП (реакції

преципітації) у гелі

РА НА СКЛІ


1) Чиста культура збудника, виділена від пацієнта.

2) Аглютинуюча специфічна сироватка, яка містить антитіла

проти відомого збудника, отримана шляхом гіперімунізації

кролів.

10

11


У РА антиген приймає

участь у вигляді

корпускулярної частки.

При змішуванні

специфічної аглюти-нуючої

сироватки та ЧК

відбувається склею-вання

АГ мікробів та АТ

сироватки і візуально це

розрізняється виявлення

«пластівців» – імунних

комплексів.

РА НА СКЛІ

12

РП У ГЕЛІ


1) Чиста культура збудника,

виділена від пацієнта.

2) Антитоксична сироватка, яка

містить антитіла проти екзотоксину

відомого збудника (антитоксини),

отримана шляхом гіперімунізації

коней специфічним анатоксином.


Виділення ЧК бактерій → Смужка фільтрувального паперу

змочена антитоксичною сироваткою → Засів ЧК бактерій від

пацієнтів навколо смужки → Інкубація у термостаті → При

наявності токсигенної культури у місці взаємодії токсину з

антитоксином утворюється лінія преципітації.

БІОЛОГІЧНИЙ МЕТОД

полягає у відтворенні

інфекційної хвороби на

тваринах, вивчають

специфічні зміни у

органах, тканинах, що

спричинені дією мікроба

або токсину.

13

у біологічному методі діагностики правцю, ботулізму,

стафілококової інтоксикації та інших інфекцій може

бути використана РН (реакція нейтралізації)

14


РН токсинів використовується

для ідентифікації бакте-ріальних

екзотоксинів за видовою або

типовою їх приналежністю.

Принцип заснований на здатності

антитоксинів зв'язувати токсин та

блокувати його.

Для постановки реакції токсин

(матеріал від пацієнта, залишки

їжі тощо) змішують з

антитоксич-ними сироватками

та вводять тваринам. При

відповідності типу сироватки та

антитоксинів загибелі тварин не

спостерігають.

РН

СЕРОЛОГІЧНИЙ (ІМУНОЛОГІЧНИЙ)

МЕТОД

метод, який дозволяє

провести діагностику

інфекційного захворю-

вання через виявлення

антитіл до антигенів в

сироватці крові пацієнта

15

Сироватка крові

пацієнта

(АТ?)

+

Діагностичний

антигенний

препарат (АГ)

АТ+АГ

РП

РРА

РНГА

ІФА

та інші

16

РРА (РЕАКЦІЯ РОЗГОРНУТОЇ АГЛЮТИНАЦІЇ)

КІЛЬКІСНИЙ МЕТОД


1) Сироватка крові

пацієнта (невідоме АТ).

2) Специфічний

діагностику (відомий АГ).

3) Електроліт - фізрозчин.


Відомий АГ (діагностикум - вбитий відомий мікроорганізм)

зв'язується з АТ сироватки крові пацієнта → утворення

«пластівців» – імунних комплексів АГ+АТ

17

РРА (РЕАКЦІЯ РОЗГОРНУТОЇ АГЛЮТИНАЦІЇ)

КІЛЬКІСНИЙ МЕТОД (РЕЗУЛЬТАТ)

18

РНГА (РЕАКЦІЯ НЕПРЯМОЇ ГЕМАГЛЮТИНАЦІЇ)



1) Сироватка крові пацієнта (АТ?).

2) Специфічний еритроцитарний

діагностикум (відомий АГ фіксований на

еритроциті).

3) Елетроліт - фізрозчин.


Реакція заснована на адсорбції відомого реагенту (АГ) на

поверхні еритроциту. Утворення комплексу АГ-АТ

призводить до склеювання еритроцитів, що легко

враховувати. Таким чином, еритроцити не приймають

участь безпосередньо в утворенні комплексу АГ-АТ, але є

його індикаторами.

19


Позитивна

реакція –

«парасолька»

Негативна

реакція –

«гудзик»

20


21

РЗК (РЕАКЦІЯ ЗВ'ЯЗУВАННЯ КОМПЛЕМЕНТУ)


22


ПРИНЦИП РЕАКЦІЇ:

Позитивна

реакція

Негативна

реакція


РЕЗУЛЬТАТ РЕАКЦІЇ

23

24

ІФА (ІМУНОФЕРМЕНТНИЙ АНАЛІЗ)


1) Фіксований на твердій фазі відомий антиген.

2) Сироватка крові пацієнта (АТ?).

3) Антиглобулінова сироватка+Фермент (АГС-Ф), яка містить

антитіла проти людських антитіл мічені ферментом, наприклад

пероксидаза хрону.

4) Субстрат.

5) Індикатор.

Високочутлий метод виявлення АТ на

основі реакції АТ-АГ з використанням

мічених ферментами АТ.

25

ІФА (ПОЗИТИВНИЙ РЕЗУЛЬТАТ)

ІФА (НЕГАТИВНИЙ РЕЗУЛЬТАТ)

26

РЕАКЦІЯ ФЛОКУЛЯЦІЇ, ВИКОРИСТОВУЄТЬСЯ ДЛЯ

ВИЗНАЧЕННЯ АКТИВНОСТІ ІМУННИХ

АНТИТОКСИЧНИХ СИРОВАТОК І АНАТОКСИНІВ

Для постановки реакції

флокуляції з антигеном. Після

змішування компонентів пробірку

струшують та витримують у

термостаті 2 години, після чого

залишають на 18 – 20 годин при

кімнатній температурі. При

позитивній реакції на дно

пробірки випадає преципітат.

Реакцію враховують неозброєним

оком або за допомогою лупи.

27

ЕКСПРЕС-МЕТОДИ

28

29

РЕАКЦІЯ КІЛЬЦЕПРЕЦИТАЦІЇ, ЯК ЕКСПРЕС МЕТОД

ДІАГНОСТИКИ


1) Матеріал від

пацієнта (АГ?).

2) Специфічна

преципітуюча сироватка,

яка містить відомі антитіла.


У реакції кільцепреципітації приймають участь розчинні

антигени. При контакті з антитілами – преципітинами –

утворюється кільце преципітації на межі двох компонентів.

ІФА, ЯК ЕКСПРЕС-ДІАГНОСТИКА

ІНФЕКЦІЙНИХ ЗАХВОРЮВАНЬ

30


1) Фіксоване на твердій фазі відоме

антитіло.

2) Матеріал від пацієнта (АГ?).

3) Специфічна сироватка + Фермент,

яка містить антитіла проти АГ, що

вивчається.

4) Субстрат.

5) Індикатор.

31

Documents

ЛЕКЦІЯ № 1¡ерологічні_реакції.pdf · Сумський державний університет Медичний інститут Кафедра мікробіології,вірусології