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生防菌 ANTI-8098A 在番茄植株及土壤中定殖特性的研究. 姓 名：张 彦 专 业：植物病理学 指导老师：唐乐尘 教授 刘波 研究员. 1. 研究背景与意义. 生防菌 ANTI-8098A 与其 gfp 基因标记菌株异质性比较. 2. 3. 生防菌 ANTI-8098A 在番茄植株内的定殖. 4. 生防菌 ANTI-8098A 对番茄生理及根际微生物的影响. 标记生防菌 ANTI-8098A:pCM20 在不同土壤中定殖特性. 5. 6. - PowerPoint PPT Presentation
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生防菌生防菌 ANTI-8098AANTI-8098A 在番茄植在番茄植株及土壤中定殖特性的研究 株及土壤中定殖特性的研究
姓 名：张 彦姓 名：张 彦专 业：植物病理学专 业：植物病理学指导老师：唐乐尘 教授 指导老师：唐乐尘 教授 刘波 研刘波 研究员究员
生防菌生防菌 ANTI-8098AANTI-8098A 对番茄生理及根际微生物的影响对番茄生理及根际微生物的影响4
研究背景与意义 研究背景与意义 1
生防菌生防菌 ANTI-8098AANTI-8098A 与其与其 gfpgfp基因标记菌株异质性比基因标记菌株异质性比较 较
2
生防菌生防菌 ANTI-8098AANTI-8098A 在番茄植株内的定殖在番茄植株内的定殖3
主 要 内 容主 要 内 容
讨 论 讨 论 7
标记生防菌标记生防菌 ANTI-8098A:pCM20ANTI-8098A:pCM20 在不同土壤中定殖特性在不同土壤中定殖特性5
生防菌生防菌 ANTI-8098AANTI-8098A 对番茄青枯病的防效测定对番茄青枯病的防效测定6
研究背景与意义研究背景与意义
番茄青枯病田间症状番茄青枯病田间症状
Ralstonia Ralstonia solanacearumsolanacearum
研究背景与意义研究背景与意义
生防菌 生防菌
作用机制？作用机制？实验室条件下实验室条件下 田间应用田间应用
ANTI-8098A:ANTI-8098A:pCM20 pCM20
ANTI-8098AANTI-8098A
GFPGFP
定殖特性 定殖特性
微生态影响 微生态影响
对植株的影响 对植株的影响
一、一、生防菌生防菌 ANTI-8098AANTI-8098A 与其与其 gfpgfp 基因标记菌株异质性比较 基因标记菌株异质性比较
UV2550UV2550
11 、材料与方法、材料与方法
生长曲线测定生长曲线测定
pHpH 试验试验
抑菌率测定抑菌率测定
TTCTTC 平板平板
ANTI-8098AANTI-8098A
青枯雷尔氏菌青枯雷尔氏菌
混合混合 涂板涂板
ANTI-8098A:pCM20 ANTI-8098A
一、一、生防菌生防菌 ANTI-8098AANTI-8098A 与其与其 gfpgfp 基因标记菌株异质性比较 基因标记菌株异质性比较
菌体菌体
芽孢芽孢芽孢芽孢
菌体菌体
22 、、 ANTI-8098AANTI-8098A 和和 ANTI-8098A:pCM20ANTI-8098A:pCM20 的菌落与菌体形态比较的菌落与菌体形态比较
两者菌落形态两者菌落形态一致，标记菌株在一致，标记菌株在紫外光下发出绿色紫外光下发出绿色荧光；荧光；
两者菌体形态两者菌体形态一致，以二联体或一致，以二联体或多联体形式存在；多联体形式存在；
两者芽孢产生两者芽孢产生位置、芽孢形态一位置、芽孢形态一致。致。
一、一、生防菌生防菌 ANTI-8098AANTI-8098A 与其与其 gfpgfp 基因标记菌株异质性比较 基因标记菌株异质性比较
ANTI-8098A:pCM20ANTI-8098A:pCM20 和和 ANTI-8098AANTI-8098A 生长曲线比生长曲线比较较
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
0.5 2 3.5 5 6.5 8 9.5 11 12.5 14 29 46
.5
培养时间（h）Culture time（h）
OD 值（
600
nm）
OD
val
ue（
600
nm）
ANTI-8098A ANTI-8098A:pCM20
不同不同 pHpH 值条件下值条件下 ANTI-8098A:pCM20ANTI-8098A:pCM20 和 和 ANTI8098AANTI8098A 的生长状况比较的生长状况比较
2. 3
2. 4
2. 5
2. 6
2. 7
2. 8
2. 9
3
6. 4 7 7. 5 8pH值
pH val ue
OD60
0 nm
值（
）OD
val
ue60
0 nm
（）
ANTI -8098A ANTI -8098A pCM20：
33 、、 ANTI-8098AANTI-8098A 和和 ANTI-8098A:pCM20ANTI-8098A:pCM20 的生长曲线与的生长曲线与 pHpH 适应性适应性比较比较
ANTI-8098A:pCM20ANTI-8098A:pCM20
比比 ANTI-8098AANTI-8098A 推迟半推迟半小时小时进入对数生长期；进入对数生长期；
两者最适两者最适 pHpH 值均值均为为 7.07.0~~7.57.5
44 、 、 ANTI-8098AANTI-8098A 和和 ANTI-8098AANTI-8098A:pCM20:pCM20 的抑菌率比较的抑菌率比较
0
20
40
60
80
100
抑菌率%（ ）
68 77 91 427 459
青枯菌编号
ANTI-8098A ANTI-8098A:pCM20
一、一、生防菌生防菌 ANTI-8098AANTI-8098A 与其与其 gfpgfp 基因标记菌株异质性比较 基因标记菌株异质性比较
ANTI-8098A:pCM20ANTI-8098A:pCM20
和和 ANTI-8098AANTI-8098A 对对五种青枯雷尔氏五种青枯雷尔氏菌的抑制率相近菌的抑制率相近
ANTI-8098AANTI-8098A对对 6868 的抑制的抑制 ANTI-8098A:pCM20ANTI-8098A:pCM20对对 6868
的抑制的抑制CKCK
二、二、生防菌生防菌 ANTI-8098AANTI-8098A 在番茄植株内的定殖 在番茄植株内的定殖
11 、材料与方法、材料与方法5 g5 g 组织组织
二、二、生防菌生防菌 ANTI-8098AANTI-8098A 在番茄植株内的定殖 在番茄植株内的定殖
0
50000
100000
150000
200000
250000含菌量（c
fu/g ）
根 茎 叶
分离部位
ANTI-8098A:pCM20 ANTI-8098A
22 、、 ANTI-8098AANTI-8098A 及其标记菌株在番茄植株内的分布及其标记菌株在番茄植株内的分布
ANTI-8098AANTI-8098A 及其标记菌株在根部定殖浓度最高，及其标记菌株在根部定殖浓度最高，茎部次之，叶片最少。茎部次之，叶片最少。
二、二、生防菌生防菌 ANTI-8098AANTI-8098A 在番茄植株内的定殖 在番茄植株内的定殖
33 、、 ANTI-8098AANTI-8098A 标记菌株在番茄根系的分布标记菌株在番茄根系的分布
根外根外
根内根内
根表根表
根系细胞内根系细胞内
ANTI-8098A:pCM20ANTI-8098A:pCM20
在番茄根系内主要在番茄根系内主要以二联体或三联体以二联体或三联体
形式存在形式存在
三、三、生防菌生防菌 ANTI-8098AANTI-8098A 对番茄生理及根际微生物的影响 对番茄生理及根际微生物的影响
11 、、 ANTI-8098AANTI-8098A 对番茄叶绿体色素的影响对番茄叶绿体色素的影响叶绿素叶绿素 aa
0
5
10
15
20
25
5 10 15 20 25 30
接种后天数Days af ter t reatment d（ ）
叶绿素a含量C
a
（m
g/g
·Fw）
处理 CK
叶绿素叶绿素 bb
02468
10
5 10 15 20 25 30
接种后天数Days af ter t reatment d（ ）
bCb
叶绿素含量
mg/g·
Fw
（） 处理 CK
类胡萝卜素类胡萝卜素
0123456
5 10 15 20 25 30
d接种后天数（ ）Days af t er t reatment
Cx.c
类胡萝卜素含量
mg/g·
Fw
（）
处理 CK
Chla/ChlbChla/Chlb
0
5
10
15
5 10 15 20 25 30
d接种后天数（ ）Days af ter t reatment
a/
b叶绿素
叶绿素
chla/chlb
（）
处理 CK
ANTI-8098AANTI-8098A 对番茄叶绿体色素有短期影响对番茄叶绿体色素有短期影响
ANTI-8098AANTI-8098A 对番茄对番茄 PPOPPO 活性的影响活性的影响
三、三、生防菌生防菌 ANTI-8098AANTI-8098A 对番茄生理及根际微生物的影响 对番茄生理及根际微生物的影响
0
100
200
300
400
500
5 10 15 25
处理后天数（d）Days after treatment
PPO活性
（U
·g-1
·min
-1 ）PP
O a
ctiv
ity
处理叶片 CK叶片 处理茎部 CK茎部 处理根部 CK根部
ANTI-8098AANTI-8098A 对番茄对番茄 PODPOD 活性的影响活性的影响
0500
10001500200025003000350040004500
5 10 15 20 25 30
处理后天数（ d）Days after treatment
PO
D 活性（
U·g
-1·m
in-1 ）
PO
D a
ctiv
ity
处理叶片 CK叶片 处理茎部 CK茎部 处理根部 CK根部
ANTI-8098AANTI-8098A 对番茄对番茄 SODSOD 活性的影响活性的影响
050
100150200250300350400450
5 10 15 20 25
处理后天数（d）Days after treatment
SOD活性
（吸光度
/g•F
W）
SOD
act
ivity
处理叶片 CK叶片 处理茎部 CK茎部 处理根部 CK根部
ANTI-8098AANTI-8098A 对番茄可溶性蛋白含量的影响对番茄可溶性蛋白含量的影响
012345678
5 10 15 20 25 30
处理后天数（d）Days after treatment
可溶性蛋白含量（
mg
/g·F
w ） 处理叶片 CK叶片 处理茎部 CK茎部
22 、、 ANTI-8098AANTI-8098A 对番茄生理特性的影响对番茄生理特性的影响
ANTI-8098AANTI-8098A 对番茄可溶性蛋白含量、对番茄可溶性蛋白含量、 SODSOD 、、 PODPOD 活性无明显影响；活性无明显影响； 能够显著提高番茄根系能够显著提高番茄根系 PPOPPO 活性。 活性。
三、三、生防菌生防菌 ANTI-8098AANTI-8098A 对番茄生理及根际微生物的影响 对番茄生理及根际微生物的影响
33 、、 ANTI-8098AANTI-8098A 对番茄根际微生物的影响对番茄根际微生物的影响
细细菌 菌
0246
8101214
5 10 15 20 25处理后天数（d）
Days after treatment
细菌种类（种）
Sor
ts o
f ba
cter
ia
0
2
4
6
8
10
lg细菌数量（
cfu/
g ）Q
uant
ity o
f ba
cter
ia
处理细菌种类 CK细菌种类处理细菌数量 CK细菌数量
真菌 真菌
02468
10121416
5 10 15 20 25
处理后天数（d）Days after treatment
真菌种类（种）
Sort
s of
fung
us
0
1
2
3
4
5
6
lg真菌数量（
cfu/
g ）Q
uant
ity
of fu
ngus
处理真菌种类 CK真菌种类处理真菌数量 CK真菌数量
放线放线菌 菌
0
2
4
6
8
10
12
14
5 10 20 25
处理后天数（d）Days after treatment
放线菌种类（种）
Sor
ts o
f act
omys
etes
0
1
2
3
4
5
6
lg放线菌数量（
cfu/
g ） Q
uant
ity
of a
ctin
obac
teri
a
处理放线菌种类 CK放线菌种类
处理放线菌数量 CK放线菌数量
番茄根际微生物动态变番茄根际微生物动态变化复杂；化复杂；
细菌、真菌、放线菌数细菌、真菌、放线菌数量略下降量略下降
ckck处理处理 ckck
处理处理
三、三、生防菌生防菌 ANTI-8098AANTI-8098A 对番茄生理及根际微生物的影响 对番茄生理及根际微生物的影响
44 、、 ANTI-8098AANTI-8098A 对番茄植株及根系生长的影响对番茄植株及根系生长的影响
处理组根系稀长，处理组根系稀长，对照组根系粗短；对照组根系粗短；
两组植株地上部两组植株地上部分生长差异不明显分生长差异不明显
四、四、标记生防菌 ANTI-8098A:pCM20 在不同土壤中定殖特性
pHpH 全氮全氮(%)(%)
全磷全磷(%)(%)
全钾全钾(%)(%)
速效钾速效钾（（ mg/kmg/k
gg ））
速效氮速效氮（（ mg/kmg/k
gg ））
速效磷速效磷（（ mg/kmg/k
gg ））有机质有机质
(%)(%)有机碳有机碳
(%)(%)
处理一处理一 5.915.91 0.0810.081 0.04830.0483 2.952.95 54.554.5 109.6109.6 11.5711.57 0.7480.748 0.4340.434
处理二处理二 6.466.46 0.02010.0201 0.01540.0154 1.971.97 44.144.1 16.616.6 5.55.5 0.1640.164 0.09510.0951
处理三处理三 7.027.02 0.1650.165 0.130.13 1.521.52 1094.41094.4 151.2151.2 140.3140.3 2.2522.252 1.3061.306
处理四处理四 6.066.06 0.1420.142 0.1530.153 0.6210.621 131.5131.5 143.6143.6 230.4230.4 1.4941.494 0.8670.867
处理五处理五 6.786.78 0.1320.132 0.1340.134 0.6330.633 267.8267.8 133.1133.1 137.5137.5 1.4641.464 0.8490.849
五种土壤理化性质分析五种土壤理化性质分析
11 、材料与方法、材料与方法
四、四、标记生防菌 ANTI-8098A:pCM20 在不同土壤中定殖特性
0
5000
10000
15000
含菌量
×（
102 cfu/g）
1 2 4 8 16 32 60 90 130 160
处理一
处理四
处理五
处理后天数（d）
处理一 处理二 处理四 处理三 处理五
22 、、 ANTI-8098A:PCM20ANTI-8098A:PCM20 在五种土壤中的消长动态在五种土壤中的消长动态
ANTI-8098A:pCM20ANTI-8098A:pCM20 在不同土壤中定殖能力不同； 在不同土壤中定殖能力不同； ANTI-8098A:pCM20ANTI-8098A:pCM20 在不同土壤中定殖存活时间长。在不同土壤中定殖存活时间长。
四、四、标记生防菌 ANTI-8098A:pCM20 在不同土壤中定殖特性
33 、土壤中回收的、土壤中回收的 ANTI-8098A:PCM20ANTI-8098A:PCM20 菌株的菌株的 gfpgfp基因检测基因检测
700 bp700 bp
700 bp700 bp
处理后处理后 160160 天各土壤中天各土壤中 ANTI-8098A:pCM20ANTI-8098A:pCM20 菌株均带有最初标记的菌株均带有最初标记的gfpgfp 基因 基因
1-91-9 ，， 10-1810-18 ，， 19-2719-27 ，， 28-3628-36 ，， 37-4437-44 分 别 为 处 理 一 、 二 、 三 、 四 、 五 中 分 离 到 的分 别 为 处 理 一 、 二 、 三 、 四 、 五 中 分 离 到 的
ANTI-8098A:pCM20ANTI-8098A:pCM20 菌 的菌 的 gfpgfp 基 因 扩 增 结 果 ，基 因 扩 增 结 果 ， 4545 为 阳 性 对 照 ，为 阳 性 对 照 ， 4646 为 无 菌 双 蒸 水 对 照 。为 无 菌 双 蒸 水 对 照 。
四、四、标记生防菌 ANTI-8098A:pCM20 在不同土壤中定殖特性
44 、、 ANTI-8098A:PCM20ANTI-8098A:PCM20 对五种土壤生物标记总量的影响对五种土壤生物标记总量的影响
0
500000
1000000
1500000
2000000
2500000
1 4 16 60 90d处理后天数（ ）
Days af ter treatment
生物标记总量
处理一 CK1
0100000200000300000400000500000600000700000800000
1 4 16 60 90
d处理后天数（ ）Days af ter t reatment
生物标记总量
处理二 CK2
0
200000
400000
600000
800000
1000000
1 4 16 60 90d处理后天数（ ）
Days af ter treatment
生物标记总量
处理三 CK3
0
200000
400000
600000
800000
1000000
1200000
1400000
1600000
1 4 16 60 90
d处理后天数（ ）Days af ter treatment
生物标记总量
处理四 CK4
0
200000
400000
600000
800000
1000000
1200000
1400000
1 4 16 60 90
d处理后天数（ ）Days af ter t reatment
生物标记总量
处理五 CK5
处理后第处理后第 9090 天，五种土壤中生物标记总量均高于各自的对照天，五种土壤中生物标记总量均高于各自的对照组组
生防效果（生防效果（ %% ））
生防菌生防菌 ANTI-8098AANTI-8098Agfpgfp 标记生防菌标记生防菌 ANTI-ANTI-
8098A:pCM208098A:pCM20 CKCK
101088 cfu/mL cfu/mL 101066 cfu/mL cfu/mL 101088 cfu/mL cfu/mL 101066 cfu/mL cfu/mL 接种病原接种病原 不接种不接种
第第1414天天
发病率发病率 00 1515 55 1515 3535 00
防治效果防治效果 100100 57.157.1 85.785.7 57.157.1 -- --
校正防效校正防效 100100 57.157.1 85.785.7 57.157.1 -- --
第第1515天天
发病率发病率 3535 2020 3030 2525 6060 00
防治效果防治效果 41.741.7 66.766.7 5050 58.358.3 -- --
校正防效校正防效 41.741.7 66.766.7 5050 58.358.3 -- --
处处
理理
发发病病
率率天天 数数
五、五、生防菌 ANTI-8098A 对番茄青枯病的防效测定
ANTI-8098AANTI-8098A 及其标记菌株对番茄青枯病的盆栽防效及其标记菌株对番茄青枯病的盆栽防效
ANTI-8098AANTI-8098A 及其标记菌株对番茄青枯病均有较高防效；及其标记菌株对番茄青枯病均有较高防效； 第第 1515 天低浓度生防菌液表现更好的生防效果。天低浓度生防菌液表现更好的生防效果。
五、五、生防菌 ANTI-8098A 对番茄青枯病的防效测定
1
43
5 6
21.1. 9191 号青枯雷尔氏号青枯雷尔氏
菌液处理菌液处理2.2. 清水对照清水对照
3.3. 101088 cfu/mlANTI-8098A cfu/mlANTI-8098A
预处理预处理4.4. 10106 6 cfu/mlANTI-8098Acfu/mlANTI-8098A
预处理预处理
5.5. 108 cfu/ml ANTI-108 cfu/ml ANTI-
8098A:pCM208098A:pCM20 预处理预处理6.6. 106 cfu/ml106 cfu/ml ANTI-ANTI-
8098A:pCM208098A:pCM20 预处理预处理
ANTI-8098AANTI-8098A 及其标记菌株对番茄青枯病的盆栽防效及其标记菌株对番茄青枯病的盆栽防效
第七章 讨 论
ANTI-8098A:pCM20ANTI-8098A:pCM20 与与 ANTI-8098AANTI-8098A 生物学特性以及生物学特性以及抑菌效果的一致性 保证了研究结果的可 靠性；抑菌效果的一致性 保证了研究结果的可 靠性；
ANTI-8098AANTI-8098A 可以很好的定殖于番茄植株各个部位，可以很好的定殖于番茄植株各个部位，根部最多，茎部、叶片次之；根部最多，茎部、叶片次之；
ANTI-8098AANTI-8098A 对番茄叶绿素有短期影响，能显著提对番茄叶绿素有短期影响，能显著提高根系高根系 PPOPPO 活性，对其它生理指标影响不明显；活性，对其它生理指标影响不明显；
第七章 讨 论
ANTI-8098A:pCM20ANTI-8098A:pCM20 具有较好的定殖适应性和时间具有较好的定殖适应性和时间延续性，在不同性质土壤中定殖力差异较大，定延续性，在不同性质土壤中定殖力差异较大，定殖时间殖时间 >160 d>160 d ；；
ANTI-8098A:pCM20ANTI-8098A:pCM20 的引入可以引起不同性质土壤的引入可以引起不同性质土壤中生物标记总量和特征性脂肪酸标记量的增加；中生物标记总量和特征性脂肪酸标记量的增加；
ANTI-8098AANTI-8098A 及其标记菌株对番茄青枯病均表现较及其标记菌株对番茄青枯病均表现较好防效。好防效。
进一步的研究建议进一步的研究建议 ANTI-8098AANTI-8098A 对番茄根际以及植株内青枯雷尔氏菌数量的对番茄根际以及植株内青枯雷尔氏菌数量的
影响以及两者间的互作值得探讨；影响以及两者间的互作值得探讨； ANTI-8098AANTI-8098A 对番茄根际微生态的影响是如何产生的，不对番茄根际微生态的影响是如何产生的，不
同浓度生防菌液的定殖效应如何？同浓度生防菌液的定殖效应如何？ ANTI-8098AANTI-8098A 在番茄植株内的定殖为进一 步研究生防菌与在番茄植株内的定殖为进一 步研究生防菌与
青枯菌在植株内的互作奠定基础，也是下一步需要解决青枯菌在植株内的互作奠定基础，也是下一步需要解决的问题。的问题。
第七章 讨 论
致 谢致 谢 感谢我的导师唐乐尘教授和刘波研究员感谢我的导师唐乐尘教授和刘波研究员对我的精心指导，不仅培养了我的专业能力，对我的精心指导，不仅培养了我的专业能力，还教会了我很多为人处世之道；还教会了我很多为人处世之道；感谢实验室的车建美在试验和论文撰写过感谢实验室的车建美在试验和论文撰写过程中给予的指导和帮助；程中给予的指导和帮助；实验室肖荣风、刘丹莹、林营志、苏明星实验室肖荣风、刘丹莹、林营志、苏明星等工作人员的热心帮助；等工作人员的热心帮助；
致 谢致 谢
感谢福建省医科大学的林凌老师对激光感谢福建省医科大学的林凌老师对激光共聚焦显微拍照提供的便利和帮助；共聚焦显微拍照提供的便利和帮助；感谢我的同学和实验室的兄弟姐妹们对感谢我的同学和实验室的兄弟姐妹们对我试验和生活上的帮助；我试验和生活上的帮助；感谢我的父母和家人；感谢我的父母和家人；
