Upload
others
View
0
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
ผลการทดลอง
1.อาการของมะเขอเทศหลงการปลกเชอ CLVd ( Columnea latent viroid )
พชทดสอบคอมะเขอเทศทง 6 สายพนธ โดยใชวธกลในการปลกเชอ สงเกตอาการผดปกต
บนมะเขอเทศโดยเปรยบเทยบกบมะเขอเทศปกต ซงอาการผดปกตทพบมลกษณะคลายกนใน
มะเขอเทศทง 6 สายพนธ คอ เซลลตายบรเวณใบ เนอใบ กานใบ และล าตน ล าตนแคระแกรน
ใบบดเบยวผดรปทรง ลกษณะของยอดซด ใบสมวงกรอบแตกงาย การแตกพมบรเวณยอด
อาการดงกลาวจะปรากฏหลงจากปลกเชอประมาณ 4 สปดาห และปรากฏชดเจนในสปดาหท 8
และอาการของโรคจะรนแรงขนเมออากาศเรมอนขนในสปดาหท 12-16 บางสายพนธจะแสดง
อาการชดเจนหลงสปดาหท 8
ตารางท 2 อาการของมะเขอเทศพนธ Rutgers สดาทพย 3 สดาลกผสมสมต า เรดแอรโร
181 เลสตา และ สดาลกผสมเพชรชมพ ทไดรบการปลกเชอ CLVd และ ไมไดปลกเชอ
พนธมะเขอเทศ
ระยะเวลาหลงการปลกเชอ
สปดาหท 4 สปดาหท 8 สปดาหท 12 สปดาห 16
ตนปกต Rutgers 1 - - - -
ตนปกต Rutgers 2 - - - -
Rutgers 1 - ++ +++ ++++
Rutgers 2 - ++ +++ ++++
Rutgers 3 - ++ +++ ++++
Rutgers 4 + ++ +++ ++++
ตนปกตสดาทพย 3, 1 - - - -
ตนปกตสดาทพย 3, 2 - - - -
สดาทพย 3, 1 - ++ +++ ++++
สดาทพย 3, 2 - ++ +++ ++++
ตารางท 2 ตอ
พนธมะเขอเทศ
ระยะเวลาหลงการปลกเชอ
สปดาหท 4 สปดาหท 8 สปดาหท 12 สปดาห 16
สดาทพย 3, 3 - ++ +++ ++++
สดาทพย 3, 4 + ++ +++ ++++
ตนปกตสดาลกผสมสมต า 1 - - - -
ตนปกตสดาลกผสมสมต า 2 - - - -
สดาลกผสมสมต า 1 - ++ +++ ++++
สดาลกผสมสมต า 2 - ++ +++ ++++
สดาลกผสมสมต า 3 - + +++ ++++
สดาลกผสมสมต า 4 + + +++ ++++
ตนปกตเรดแอรโร 181, 1 - - - -
ตนปกตเรดแอรโร 181, 2 - - - -
เรดแอรโร 181, 1 - ++ +++ ++++
เรดแอรโร 181, 2 + ++ +++ ++++
เรดแอรโร 181, 3 + ++ +++ ++++
เรดแอรโร 181, 4 + ++ +++ ++++
ตนปกตเลสตา 1 - - - -
ตนปกตเลสตา 2 - - - -
เลสตา 1 - ++ +++ ++++
เลสตา 2 - + +++ ++++
เลสตา 3 + + ++ +++
เลสตา 4 + + ++ ++++
ตารางท 2 ตอ
หมายเหต - คอไมแสดงอาการ
+ คอแสดงอาการในระดบต า
++ คอแสดงอการในระดบปานกลาง
+++ คอแสดงอาการในระดบรนแรง
++++ คอแสดงอาการในระดบรนแรงมากขน
พนธมะเขอเทศ
ระยะเวลาหลงการปลกเชอ
สปดาหท 4 สปดาหท 8 สปดาหท 12 สปดาห 16
ตนปกตสดาลกผสมเพชรชมพ 1 - - - -
ตนปกตสดาลกผสมเพชรชมพ 2 - - - -
สดาลกผสมเพชรชมพ 1 - ++ +++ ++++
สดาลกผสมเพชรชมพ 2 - + ++ ++++
สดาลกผสมเพชรชมพ 3 - + ++ ++++
สดาลกผสมเพชรชมพ 4 - ++ +++ ++++
2. ความสงของตนมะเขอเทศหลงไดรบการปลกเชอ CLVd (Columnea latent viroid)
โดยจะใชการวดความสงซงการวดความสงจะใชตลบเมตร ในการวดระดบความสงหนวยเปน
เซนตเมตร แบงระยะการเจรญเปน สปดาห ท 4,8, 12 และสปดาหท 16 (ตารางท 3) และภาพท 4-9
ตารางท 3 ความสงของมะเขอเทศพนธ Rutgers สดาทพย 3 สดาลกผสมสมต า เรดแอรโร 181
เลสตา สดาลกผสมเพชรชมพ ทไดรบการปลกเชอ CLVd และ ไมไดปลกเชอ
พนธมะเขอเทศ ความสงของมะเขอเทศ (เซนตเมตร)หลงปลกเชอ CLVd
สปดาหท 4 สปดาหท 8 สปดาหท 12 สปดาห 16
ตนปกต Rutgers 1 46 85 123 148
ตนปกต Rutgers 2 18 64 101 132
Rutgers 1 25 27 29 28
Rutgers 2 39 50 50 50
Rutgers 3 31 33 37 37
Rutgers 4 41.5 46 51 49
ตนปกตสดาทพย 3, 1 57 99 150 190
ตนปกตสดาทพย 3, 2 46 97 135 160
สดาทพย 3, 1 55 73.5 84 87
สดาทพย 3, 2 44 53.5 69 68
สดาทพย 3, 3 64 77 84 95
สดาทพย 3, 4 50 62 63 62
ตนปกตสดาลกผสมสมต า 1 74 85 139 156
ตนปกตสดาลกผสมสมต า 2 39 92 133 165
สดาลกผสมสมต า 1 63 83 89 96
สดาลกผสมสมต า 2 58 74 81 82
สดาลกผสมสมต า 3 73 77 92 90
ตารางท 3 ตอ
พนธมะเขอเทศ ความสงของมะเขอเทศ (เซนตเมตร)หลงปลกเชอ CLVd
สปดาหท 4 สปดาหท 8 สปดาห 12 สปดาห 16
สดาลกผสมสมต า 4 66 75 79 79
ตนปกตเรดแอรโร 181 1 69 110 160 170
ตนปกตเรดแอรโร 181 2 51 103 137 156
เรดแอรโร 181 1 57 63 63 62
เรดแอรโร 181 2 70 72 74 73
เรดแอรโร 181 3 56 66 69 67
เรดแอรโร 181 4 56 61 63 62
ตนปกตเลสตา 1 51 72 104 120
ตนปกตเลสตา 2 35 73 106 120
เลสตา 1 58 70 82 89
เลสตา 2 61 68 69 66
เลสตา 3 61 80 102 111
เลสตา 4 56 73 71 88
ตนปกตสดาลกผสมเพชรชมพ 1 48.5 84 120 130
ตนปกตสดาลกผสมเพชรชมพ 2 36 86 125 145
สดาลกผสมเพชรชมพ 1 57 60 60 59
สดาลกผสมเพชรชมพ 2 70 82 84 93
สดาลกผสมเพชรชมพ 3 56 70 87 91
สดาลกผสมเพชรชมพ 4 56 64 67 68
กราฟแสดงการเจรญเตบโตของมะเขอเทศแตละสายพนธเมอเทยบกบตนปกตในระหวาง
สปดาหท 4 - 16
ภาพท 4 คาเฉลยความสงของมะเขอเทศพนธ Rutgers
ภาพท 5 คาเฉลยความสงของมะเขอเทศพนธ สดาทพย 3
0
20
40
60
80
100
120
140
160
สปดาหท 4 สปดาหท 8 สปดาหท 12 สปดาหท 16
ตนปกต Rutgers 1
ตนปกต Rutgers 2
Rutgers 1
Rutgers 2
Rutgers 3
Rutgers 4
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
200
สปดาท 4 สปดาหท 8 สปดาหท 12 สปดาหท 16
ตนปกตสดาทพย 1
ตนปกตสดาทพย 2
สดาทพย 1
สดาทพย 2
สดาทพย 3
สดาทพย 4
ภาพท 6 คาเฉลยความสงของมะเขอเทศพนธ สดาลกผสมสมต า
ภาพท 7 คาเฉลยความสงของมะเขอเทศพนธ เรดแอรโร 181
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
สปดาหท 4 สปดาหท 8 สปดาหท 12 สปดาหท 16
ตนปกตสดาลกผสมสมต า 1
ตนปกตสดาลกผสมสมต า 2
สดาลกผสมสมต า 1
สดาลกผสมสมต า 2
สดาลกผสมสมต า 3
สดาลกผสมสมต า 4
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
สปดาหท 4 สปดาหท 8 สปดาหท 12 สปดาหท 16
ตนปกตลกผสมเรดแอรโร 181 1
ตนปกตลกผสมเรดแอรโร 181 2
ลกผสมเรดแอรโร 181 1
ลกผสมเรดแอรโร 181 2
ลกผสมเรดแอรโร 181 3
ลกผสมเรดแอรโร 181 4
ภาพท 8 คาเฉลยความสงของมะเขอเทศพนธ เลสตา
ภาพท 9 คาเฉลยความสงของมะเขอเทศพนธ ลกผสมเพชรชมพ
0
20
40
60
80
100
120
140
สปดาหท 4 สปดาหท 8 สปดาหท 12 สปดาหท 16
ตนปกตเลสตา 1
ตนปกตเลสตา 2
เลสตา 1
เลสตา 2
เลสตา 3
เลสตา 4
0
20
40
60
80
100
120
140
160
สปดาหท 4 สปดาหท 8 สปดาหท 12 สปดาหท 16
ตนปกตสดาลกผสมเพชรชมพ 1
ตนปกตสดาลกผสมเพชรชมพ 2
สดาลกผสมเพชรชมพ 1
สดาลกผสมเพชรชมพ 2
สดาลกผสมเพชรชมพ 3
สดาลกผสมเพชรชมพ 4
Dก Hก
Dข Hข
Dค Hค
ภาพท 10 แสดงลกษณะอาการผดปกตของตนมะเขอเทศท ไดรบการปลกเชอ CLVd (D) นาน 16
สปดาห เทยบกบ ตนปกต (H) ของมะเขอเทศพนธ Rutgers (ก), สดาทพย 3 (ข) และ สดาลกผสม
สมต า (ค)
Dง Hง
Dจ Hจ
Dฉ Hฉ
ภาพท 11 แสดงลกษณะอาการผดปกตของตนมะเขอเทศท ไดรบการปลกเชอ CLVd (D) นาน 16
สปดาห เทยบกบ ตนปกต (H) ของมะเขอเทศพนธ เรดแอรโร 181 (ง), เลสตา (จ) และ สดาลกผสม
เพชรชมพ (ฉ)
3.การตรวจสอบเชอไวรอยดดวยเทคนค reverse transcription - polymerase chain
reation
น า Total RNA ทสกดไดจากวธ CTAB ตามวธการของ Scottish Agricultural Scince
Agency (Jeffrices and Tina , 2004) Wah and Symons (1997) มาท าการตรวจสอบเชอไวรอยด
CLVd ในตนมะเขอเทศทง6 สายพนธ ไดแก Rutgers สดาทพย 3 เรดแอรโร 181 ลกผสมสมต า
ลกผสมเพชรชมพ และเลสตา ดวยวธ RT-PCR ซงออกแบบมาใหจ าเพาะเจาะจงกบเชอไวรอยด
CLVd แลตรวจสอบผลของปฏกรยาดวย 1.5 % agarose gel electrophoresis พบวาปรากฏแถบด
เอนเอทเปนเชอไวรอยด CLVd ของตวอยางมะเขอเทศทท าการปลกเชอไวรอยดทง 6 สายพนธ
โดยใชสายพนธละ 2 ตวอยาง คอมะเขอเทศ Control แตละสายพนธในตวอยางท 1, 2, 3, 4, 5, 6
ซงเปนมะเขอเทศทไมไดรบการปลกเชอและในตวอยางท 3 ซงเปน Negative จงไมปรากฏแถบด
เอนเอแตจะพบแถบดเอนเอในตวอยางท 7, 8, 9, 10, 11, 12 เปนมะเขอเทศทไดรบการปลกเชอ
และในตวอยางท 2 ซงเปนมะเขอเทศพนธ Rutgers ทไดรบการปลกเชอ CLVd ทมขนาด 370 ค
เบส ซงใชเปน Positive control จงปรากฏแถบดเอนเอขน
M P N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 M
ภาพท 12 การตรวจสอบเชอไวรอยดในมะเขอเทศทง 6 สายพนธ คอ Rutgers สดาทพย 3
ลกผสมสมต า เรดแอรโร 181 ลกผสมเพชรชมพ และ เลสตา ทแสดงอาการใบหดลดรป กาน
ใบและยอดหดสน หลงการปลกเชอ CLVd ดวยเทคนค RT-PCR
M = 100 bps DNA Ladder
P = DNA จากมะเขอเทศพนธ Rutgers ทไดรบการปลกเชอ (Positive control)
N = DNA จากมะเขอเทศพนธ Rutgers ทไมไดรบการปลกเชอ (Negative control)
1 = DNA จากมะเขอเทศพนธสดาทพย 3 ทไมไดรบการปลกเชอ CLVd
2 = DNA จากมะเขอเทศพนธลกผสมเพชรชมพทไมไดรบการปลกเชอ CLVd
3 = DNA จากมะเขอเทศพนธเรดแอโร 181 ทไมไดรบการปลกเชอ CLVd
4 = DNA จากมะเขอเทศพนธเลสตาทไมไดรบการปลกเชอ CLVd
5 = DNA จากมะเขอเทศพนธลกผสมสมต าทไมไดรบการปลกเชอ CLVd
6 = DNA จากมะเขอเทศพนธ Rutgers ทไมไดรบการปลกเชอ CLVd
7 = DNA จากมะเขอเทศพนธสดาทพย 3 ทไดรบการปลกเชอ CLVd
500 bp
400 bp
300 bp
8 = DNA จากมะเขอเทศพนธลกผสมเพชรชมพทไดรบการปลกเชอ CLVd
9 = DNA จากมะเขอเทศพนธเรดแอร 181 โรทไดรบการปลกเชอ CLVd
10 = DNA จากมะเขอเทศพนธเลสตาทไดรบการปลกเชอ CLVd
11 = DNA จากมะเขอเทศพนธลกผสมสมต าทไดรบการปลกเชอ CLVd
12 = DNA จากมะเขอเทศพนธ Rutgers ทไดรบการปลกเชอ CLVd