รายงานความกาวหนา (Progress Report)

โครงการวจยและพฒนาผลตภณฑสารออกฤทธเฉพาะทางจาก พชตระกล Zanthoxylum ชาเมยง และตะไครตน

ภายใตชดโครงการ : โครงการวจยรวบรวมองคความรและพฒนาผลตภณฑ

จากความหลากหลายทางชวภาพและภมปญญาทองถนบนพนทสง

แผนงาน : วจยเชงปฏบตการในพนทขยายผลโครงการหลวง

โดย

นางสาวสรตวด ภาคอทย

สนบสนนทนวจยโดย สถาบนวจยและพฒนาพนทสง (องคการมหาชน)

ประจำาปงบประมาณ พ.ศ. 2551

รายงานความกาวหนา (Progress Report)

ชอโครงการ : โครงการวจยและพฒนาผลตภณฑสารออกฤทธเฉพาะทางจากพชตระกล Zanthoxylum ชาเมยง และตะไครตน

ผรบผดชอบ : นางสาวสรตวด ภาคอทย

สถานทตดตอ : หองปฏบตการกลาง คณะเกษตรศาสตรมหาวทยาลยเชยงใหม อ. เมอง จ. เชยงใหมโทรศพท : 053 – 9444090 – 1 ตอ 21โทรสาร : 053 – 225221

งบประมาณทไดรบอนมต 812,500 บาท (แปดแสนหนงหมนสองพนหารอยบาทถวน)

ระยะเวลาดำาเนนงาน 270 วน (15 มกราคม – 10 ตลาคม 2551)สถานทดำาเนนงานวจย 1) พนท โครงการหลวง และพ นท ขยายผลโครงการหลวง

2

2) หองปฏบต การกลาง คณะเกษตรศาสตร มหาวทยาลยเชยงใหม

หลกการและเหตผล :

ปจจบนผบรโภคใหความสำาคญกบความปลอดภยในการบรโภคอาหาร ยา และสารเสรม ตาง ๆ สารเสรม (Food additive) และยา ทใชในปจจบนสวนมากไดมาจากการสงเคราะหทางเคม ยกตวอยาง เชน butylated hydroxyanisole (BHA) หรอ butylated hydroxytoluene (BHT) เปนตน ซงสารทงสองชนดใชเปนสารกนบดอยางแพรหลายในอตสาหกรรมผลตอาหาร สารดงกลาวอาจสงผลกระทบตอสขภาพของผบรโภค โดยอาจเปนสาเหตกระตนใหเกดมะเรงตามอวยวะตาง ๆ ได ดงนนการหาแหลงวตถดบจากธรรมชาตมาผลตสารแอนตออกซเดนท (natural antioxidant) จงเปนทางเลอกใหม และนาจะปลอดภยกวาการใชสารเคมสงเคราะห

พชทพบตามธรรมชาตทวไป เชน พชอาหาร พชพนเมอง และพชสมนไพร เปนแหลงวตถดบทมประโยชนสามารถนำามาสกดสารออกฤทธเฉพาะทาง เชน สารตานอนมลอสระ (Antioxidant) สารตานเชอรา สารตานแบคทเรย และสารตานการเกดมะเรง เปนตน โดยสารออกฤทธทสกดไดจากพชเหลานคาดวาจะปลอดภยมากกวาสารทสงเคราะหดวยวธการทางเคม และยงสามารถเพมมลคาใหแกพชเหลานดวย นอกจากจะสามารถเพมมลคาใหแกพชได ยงเปนทางเลอกใหมในการเลอกวตถดบทางธรรมชาตสำาหรบผประกอบการธรกจอาหาร ยา และเครองสำาอาง คาดวาผบรโภคจะใหความสนใจกบผลตภณฑทไดมาจากสารสกดทางธรรมชาตดวย

สารสกดจากพชมสารออกฤทธเปนทเปนประโยชนเปนสวนประกอบอยหลายชนด ดงนนถาหากเราสามารถสกดสารออกฤทธเหลานนได กจะสามารถนำาไปประยกตเปนผลตภณฑทนำาไปใชอตสาหกรรมผลตยา

3

อตสาหกรรมผลตอาหาร และอตสาหกรรมผลตเครองสำาอาง เพอทดแทนสารเคมสงเคราะห

วตถประสงค :

เพอศกษาหาแนวทางเบองตน ในการใชประโยชนจากสารสกดทไดจากพชตระกล Zanthoxylum ชาเมยง และตะไครตนในการตานอนมลอสระ และยบยงเอนไซม tyrosinase ในขบวนการสรางเมลานน

วธการดำาเนนการ :

1.การเกบพชตวอยาง และการเตรยมตวอยาง

พชตระกล Zanthoxylum spp. งานวจยน เลอกมะแขวน เปนตวแทนในการศกษา มะแขวนผลแหงจำานวน 1 กโลกรม ซงเกบมาจากโครงการขยายผลโครงการหลวงปาแปนำามาสกดตามวธขอ 2.2.

ตะไครตน (Litsea cucerba spp.) สองสายพนธ ไดแก Litsea cubeba var. cubeba ซงมลกษณะใบกวาง สเขยวเขม จำานวน 800 กรม และ Litsea cubeba var. formosana ซงมลกษณะใบเรยวยาว

4

รปท 1 ผลมะแขวนสด (ก) และผลมะแขวนแหง (ข)(ก (ข

สเขยวออน จำานวน 300 กรม แบงตวอยางออกเปน 2 กลมคอ ใบสด และใบแหง การเตรยมใบแหงทำาไดโดยการนำาใบสด (var. cubeba 300 กรม และ var. formosana 100 กรม) ไปอบทอณหภม 70 องศาเซลเซยส นาน 18 ชวโมง หลงจากนนนำาทงใบสด และใบแหงไปสกดดวยวธตามขอ 2.2.

A

B

รปท 2 แสดงลกษณะลำาตน ใบ และเมลดของตะไครตน Litsea cubeba var.cubeba (A) และ Litsea cubeba var. formosana (B)

5

ชาเมยง (Camellia sinensis var. assamica) เกบตวอยางใบชาสดสำาหรบทำาเมยง เมยง (ชาหมก) และยอดใบชา จากโครงการขยายผลโครงการหลวงปางมะโอ ปรมาณ 1 กโลกรม นำามาสกดตามวธขอ 2.2

รปท 3 แสดงลกษณะของตนชาเมยง ยอดชา และลกษณะการหมกเมยงของชาวบานปางมะโอ อ.เชยงดาว จ.เชยงใหม

2.สกดสารออกฤทธจากพชตวอยาง

การสกดสารออกฤทธจากตะไครตน พชตระกล Zanthoxylum spp. และชาเมยง (ดดแปลงจาก Yamazaki et al., 2007)

(1) บดตวอยางใหละเอยดดวยเครองบดหยาบ (Blender) แลวใสในขวดแกวขนาด 2 ลตร

(2) เตมสารเมธานอลปรมาตร 2 ลตร ลงในขวดแกว ปดฝาขวด ตงทงไวทอณหภมหอง เปนเวลา 72 ชวโมง

(3) กรองสารดวยกระดาษกรองเบอร 42 แลวนำาไประเหยใหแหงดวย evaporator เพอใหไดสารสกดหยาบ (crude extract)

(4) กากของพชทไดจากการสกดดวยเมธานอล จะนำามาสกดอกครงดวยเฮกเซน ปรมาตร 2 ลตร ตงทงไวทอณหภมหองเปน

6

เวลา 72 ชวโมง กรอง และระเหยใหแหงเชนเดยวกนกบ สารสกดจากเมทานอล

วธการทดสอบฤทธของสารสกด

(1) วเคราะหหาปรมาณฟนอลโดยรวม (Total phenol content) ตามวธของ Folin and Ciocalteu, 1927 โดยทำาการเจอจางสารสกด ใหไดความเขมขนทเหมาะสม

ปรมาตร 0.1 มลลลตร ผสมกบสารละลาย Folin-Ciocalteu 1 มลลลตร (เจอจางอตราสวน 1:1 ระหวางสารละลายและนำากลน) รวมกบ 10 % Na2CO3 1 มลลลตร และนำากลน 1 มลลลตร จากนนบมทงไวในทมด อณหภมหอง นาน 1 ชวโมง วดปฏกรยาดวยการวดคาดดกลนแสงท 760 นาโนเมตร

ปรมาณฟนอลสามารถวดเทยบไดกบสารมาตรฐาน โดยใช gallic acid เป นสารมาตรฐาน มหน วยวดเป นมลล กรมต อมลลล ตรตอตวอยางหนงกรม (mg GE/g sample; GE = Gallic acid Equivalent)(2) ว เคราะหความสามารถในการต านอน ม ลอ สระ (DPPH

radical scavenging activity) ตา มว ธ ข อง Brand-William et al., 1995เตรยมสารละลายของ DPPH ทความเขมขน 0.08 mM ใน

สารละลายเอทานอล 100 % หลงจากนนผสมสารละลาย DPPH, tris buffer solution และ 80 % เอทานอล ในอตราสวน 1: 1: 1 เพอใหไดสารผสมปรมาตร 1.8 มล. หลงจากนนเตมสารสกดจากตวอยางปรมาตร 0.6 มลลลตร (ในกรณของสารมาตรฐานใหเตมสารมาตรฐานความเขมขนตางๆ ลงไปแทนสารสกดจากตวอยาง โดยใช Trolox เปนสารมาตรฐาน) ปรมาตรสดทาย

7

เทากบ 2.4 มลลลตร บมปฏกรยาไวนาน 30 นาท ในทมด วดปฏกรยาโดยวดคาดดกลนแสงท 525 นาโนเมตร หนวยวดมคาเทากบ มลลโมลาร Trolox ตอกรมตวอยาง (mM TE/g sample)

(3) วเคราะหความสามารถในการยบยงการสรางเมลานน

วเคราะหความสามารถในการยบยงเอนไซมไทโรซเนส (Tyrosinase inhibition activity) ดดแปลงวธการจาก Shoji et al., 2005

เอนไซมไทโรซเนส เปนเอนไซมทสำาคญเอนไซมหนงในขบวนการผลตเมลานน ดงนนการวดการยบยงการทำางานของเอนไซมชนดนอาจเปนตวบงชวาสารสกดสามารถยบยงการสรางเมลานนได

เตรยมเอนไซมไทโรซเนสทความเขมขน 0.75 mg/ 80 ml จากนนเตมเอนไซมทเตรยมแลวปรมาตร 0.4 มล. รวมกบสารส ก ด ป ร ม า ต ร 0.2 ม ล . (ส า ร ส ก ด ล ะ ล า ย อ ย ใ น 0.1 M phosphate buffer pH 6.8) บม ไว ท อ ณ ห ภม 37 อ ง ศาเซลเซยส นาน 10 นาท หลงจากนนเตม L-dopa ปรมาตร 0.4 มล. บมไวนาน 15 นาท หลงจากนนวดปฏกรยาโดยวดคาดดกลนแสงท 475 นาโนเมตร นำาคาทวดไดมาคำานวณหาคา tyrosinase inhibition activity จากสตรคำานวณดงน

% inhibition = (B-C)/A x 100 โดย A คอ คาดดกลนแสงท 475 นาโนเมตร ของหลอดทเตมแต tyrosinase B คอ คาดดกลนแสงท 475 นาโนเมตรของหลอดทเตมตวอยาง และ tyrosinase

8

C คอ คาดดกลนแสงท 475 นาโนเมตรของหลอดทเตมตวอยาง และ tyrosinase แตไมเตม L-Dopa

9

พชตวอยาง

กากทสกดดวย

สกดดวยเมทานอล

สกดดวยเฮ

สารสกดเมทานอล

สารสกดเฮกเซน

รปท 2 แสดงขนตอน และวธการสกดสารสกดหยาบ วธวเคราะหทางเคม และวธการแยก และจำาแนกชนดของสารออกฤทธ

ผลการดำาเนนงาน :

1. ปรมาณสารสกดหยาบ (crude extract)หลงจากทำาการเกบตวอยางจากแหลงตาง ๆ แลว นำามาสกดเพอให

ไดสารสกดหยาบ (Crude extract) โดยในเบองตนน สกดสารสกดหยาบจากตวอยางตะไครตน มะแขวน และชาเมยง แสดงไดดงตารางท 1 – 3 จากการศกษาของ Waterman และ Mole (1994) ไดแนะนำาใหใชเมทานอลในการสกดสารกลมฟนอลจากตวอยางพชสด เนองจากเมทานอลสามารถสกดเอาสารกลมฟนอลออกมาไดด

10

วเคราะหทางเคมTotal phenol content, DPPH radical scavenging activity

และ Tyrosinase inhibitory

Thin layer chromatograph

High Performance liquid chromatography/

Mass spectrometry

เลอกสารสกดหยาบ

เลอก Fractionทใหผลบวก

ตารางท 1 แสดงปรมาณสารสกดหยาบของตะไครตนทไดจากการสกดดวยเมทานอล และเฮกเซน

ตวอยาง ปรมาณสารสกด (กรม)Litsea cubeba var. cubeba ใบสดสกดดวยเมทานอล

ใบสดสกดดวยเฮกเซน

ใบแหงสกดดวยเมทานอล

ใบแหงสกดดวยเฮกเซน

7.9410.592.072.25

Litsea cubeba var. formosana ใบสดสกดดวยเมทานอล

ใบสดสกดดวยเฮกเซน

ใบแหงสกดดวยเมทานอล

ใบแหงสกดดวยเฮกเซน

2.874.441.810.53

11

ตารางท 2 แสดงปรมาณสารสกดหยาบของตะไครตนทไดจากการสกดดวยเมทานอล และเฮกเซน

ตวอยาง ปรมาณสารสกด (กรม)มะแขวนสกดดวยเมทานอล 54.59มะแขวนสกดดวยเฮกเซน ไดนำามนปรมาตร 200 มล.

ตารางท 3 แสดงปรมาณสารสกดหยาบของตะไครตนทไดจากการสกดดวยเมทานอล และเฮกเซน

ตวอยางสารสกด ปรมาณสารสกด

(กรม)

ยอดชาเมยงเมทานอล

เฮกเซน

15.037.05

ใบเมยงสด เมทานอล

เฮกเซน

12.095.10

เมยงหมก เมทานอล

เฮกเซน

23.1012.30

12

2.ผลการวเคราะหทางเคม

2.1. ป ร ม า ณ ฟ น อ ล โ ด ย ร ว ม (Total phenol content; TPC)

เมอเปรยบปรมาณฟนอลโดยรวมระหวางพชแตละชนด พบวาสารสกดจากชาเมยง ทงสามสวน (ยอดชา ใบชาตดสำาหรบทำาเมยง และเมยงหมก) ตะไครตน และมะแขวน พบวา ชาเมยงใหคาฟนอลรวมสงทสด เมอเปรยบเทยบกบพชชนดอน ๆ โดยสารสกดหยาบของเมยงหมกทสกดดวย เมทานอลมปรมาณสงสดเทากบ 339.91 mg GE/g sample (ผลแสดงดงตารางท 4 และรปภาพท 4) คา TPC ทสงอาจในใบชาเปนผลเนองจากมสวนประกอบของสารฟนอล เชน catechin, gallocatechin, gallocatechin gallate, epigallocathechin, epichatechin และ epigallocatechin gallate เปนตน (Yen and Chen, 1995) เมอเปรยบเทยบระหวางอายของใบชาทนำามาทดสอบพบวา ยอดชา (shoot) มคา TPC สงกวาใบชาทนำาไปทำาเมยง ซงเปนใบแก (mature leaves) (325.01 vs 179.25 in MeOH extracts and 265.97 vs 260.16 in hexane extracts) ซงสอดคลองกบการศกษาของ Chen et al. (2007) พบวาคา TPC ในยอดชามปรมาณสงกวาใบออน และใบแก

13

เมอศกษาถงความสามารถในการสกดของสารละลาย พบวา สารสกดหยาบทไดจากการสกดดวยเมทานอลใหคา TPC สงกวาสกดดวยเฮกเซน ยกเวนในตวอยางของใบเมยง จากการศกษาของ Waterman and Mole (1994) ไดแนะนำาใหใชเมทานอลในการสกดสารฟนอลจากพชสด

มะแขวน ทมคา TPC ตำากวาตวอยางของชามาก อาจเนองมาจากสาเหตทพชใหผลผลตในรปของสารสกดหยาบทมสวนประกอบของนำามน และเมอสกดดวยเฮกเซนจะไดนำามนเปนผลผลต ซงจากรายงานของ สารในกลม terpenoids เชน citral, geranial, α-terpinol, linalool เปนตน (โชตรส, เนองดวยลกษณะโครงสรางดงกลาวไมไดอยในกลมของฟนอล ดงนนจงทำาใหคา TPC ทไดตำา

คา TPC จากสารสกดหยาบ สามารถเรยงลำาดบจากมากไปหานอยไดดงน

เมยงหมก > ยอดชาเมยง > ใบเมยง > Cubeba Fresh > Formosana Fresh > Formosana Dried > มะแขวน > Cubeba Dried

ตารางท 4 แสดงปรมาณฟนอลโดยรวม (Total phenol content) ของสารสกดเมทานอล และเฮกเซนของตวอยางพชตระกล Zanthoxylum, ชาเมยง และตะไครตน

ชอตวอยาง สวนทนำามาสกด

ชนดสารสกด

Total Phenol Content

14

(mg GE/g sample)

มะแขวน ผล เมทานอล 67.36(Zanthoxylum myriacanthum)

เฮกเซน 6.58

ต ะ ไ ค ร ต น (Litsea cubeba)Litsea cubeba var. cubeba

ใบสด เมทานอล

เฮกเซน

183.1245.10

ใบแหง เมทานอล

เฮกเซน

66.7824.78

Litsea cubeba var. Farmosana

ใบสด เมทานอล

เฮกเซน

101.6315.68

ใบแหง เมทานอล

เฮกเซน

86.9125.36

ชาเมยง (Camellia sinensis var. Assam)

ยอดชา เมทานอล

เฮกเซน

325.01265.97

ใบเมยงสด เมทานอล

เฮกเซน

179.25260.16

เมยงหมก เมทานอล 339.91258.03

15

เฮกเซน

2.2. ความสามารถในการต านอน ม ลอ สระ (DPPH radical scavenging activity)

อนมลอสระ (Free radical) หมายถง สารใดๆ กตามซงมอเลกตรอนทไมไดจบค (unpaired electron) มากกวาหรอเทากบหนงอเลกตรอนในโมเลกล อนมลอสระ (Free radical) เปนปจจยสำาคญอยางหนงทกอใหเกดโรค โดยผานกระบวนการเปลยนแปลงในระดบดเอนเอ โปรตน และโมเลกลตาง ๆ ทสำาคญ

การทดสอบฤทธตานอนมลอสระโดยใชสาร DPPH เนองจากเปนวธทงาย ใชเวลาในการวเคราะหนอย สารสกด หรอสารออกฤทธสามารถทำาปฏกรยาโดยตรงกบอนมลอสระ (DPPH) วธ DPPH มหลกการคอ อเลกตรอนทไมไดจบค (unpaired electron) ในโมเลกลของอนมล DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) สามารถดดกลนพลงงานแสงไดทความยาวคลนสงสด 517 นาโนเมตร ทำาใหมองเหนเปนสมวง และเมออนมล DPPH ถกรดวซโดยสารตานอนมลอสระทมคณสมบตเปน hydrogen donor อนมล DPPH จะเปลยนเปน DPPH-H ซงการสญเสยอเลกตรอนดงกลาวจะทำาใหอนมล DPPH สามารถดดกลนพลงงานแสงไดนอยลง สารดงกลาวจงเปลยนเปนสเหลอง (ปยาภทร, 2549; Brand-William et al., 1995)

การศกษาครงน สารสกดหยาบทสกดดวยเมทานอลแสดงฤทธตานอนมลอสระสงกวาสารสกดหยาบทสกดดวยเฮกเซนในทกกลมพช (แสดงผลดงตารางท 5 และรปท 5) เมอเปรยบเทยบผลการศกษาระหวางพชแตละชนด พบวาสารสกดหยาบจากชาเมยง (เมยงหมก ยอดชาเมยง และใบเมยง) ออกฤทธตานอนมลอสระสง ซงสอดคลองกบคา TPC ของทงสารสกดหยาบทงสามชนด มคาสงกวาสาร สกดหยาบจาก

16

พชชนดอน ๆ อยางเหนไดชด โดยสารสกดหยาบจากเมยงหมกทสกดดวยเมทานอลมคาสงทสดเทากบ 3.71 mmol TE/g sample สาเหตทสารสกดหยาบจากชาเมยงอาจเปนผลเนองมาจากฤทธของ catechins และสารกลมฟนอลโมเลกลขนาดเลกบางชนด ซงสารดงกลาวสามารถถายทอดอเลคตรอนกบอนมลอสระ (electron transfer/hydrogen donating ability) (Manian et al.,2008) สาร catechin และสารฟนอลอน ๆ เปนองคประกอบหลกในพชตระกลชา (Yen and Chen, 1995)

DPPH radical scavenging activity จากสารสกดหยาบ สามารถเรยงลำาดบจากมากไปหานอยไดดงน

เมยงหมก > ยอดชาเมยง > ใบเมยง > Cubeba Fresh > มะแขวน > Cubeba Dried > Formosana Fresh > Formosana Dried

ตารางท 5 แสดงปรมาณ DPPH radical scavenging activity ของสารสกดเมทานอล และเฮกเซนของตวอยางพชตระกล Zanthoxylum, ชาเมยง และตะไครตน

ชอตวอยาง สวนทนำามาสกด

ชนดสารสกด

DPPH radical

scavenging activity

(mmol TE/g

sample)มะแขวน ผล เมทานอล 0.33

17

050

100150200250300350400

มะแขวน CubebaFresh

CubebaDried

FomonasaFresh

FomonasaDried

ยอดชา ใบเมยง เมยง

MeOH Hexane

เฮกเซน 0.11ต ะ ไ ค ร ต น (Litsea cubeba)Litsea cubeba var. cubeba

ใบสด เมทานอล

เฮกเซน

1.190.11

ใบแหง เมทานอล

เฮกเซน

0.210.001

Litsea cubeba var. Farmosana

ใบสด เมทานอล

เฮกเซน

0.150.06

ใบแหง เมทานอล

เฮกเซน

0.090.001

ชาเมยง (Camellia sinensis var. Assam)

ยอดชา เมทานอล

เฮกเซน

3.472.51

ใบเมยงสด เมทานอล

เฮกเซน

2.952.30

เมยงหมก เมทานอล

เฮกเซน

3.712.08

18

DPPH Radical Scavenging activity

0.01.02.0

3.04.05.0

มะแขวน Cubebafresh

CubebaDried

Formosanafresh

FormosanaDried

ยอดชา ใบเมยง เมยงหมก

mm

ol T

E/g

sam

ple

MeOH Hexane

รปท 4 แสดงปรมาณฟนอลรวม (Total phenol content) ของสารสกดหยาบจากพชทงสามชนด

รปท 5 แสดงคา DPPH radical scavenging activity ของสารสกดหยาบจากพชทงสามชนด

2.3. ความสามารถในการยบยงเอนไซม tyrosinase ในขบวนการสรางเมลานน

19

ผลของการศกษาน ยงไมสำาเรจเนองจากคาปฏกรยาทวดได มขอผดพลาด เปนผลจากการทตวอยางมสนำาตาล ซงในการทำาปฏกรยาระหวางสารตงตนกบเอนไซม ใหผลลพธเปนสนำาตาลเชนกน จงไมสามารถตรวจวดปฏกรยาได ดงนนจงตองกรองตวอยางดวยตวกรองทสามารถกำาจดสของตวอยางใหไดเปนสารละลายไมมส แลวนำาไปวดปฏกรยาตอไป

2.4. ลกษณะของสารสำาคญทเปนองคประกอบในชาเมยง

เพอเปนการศกษาสารออกฤทธทสำาคญในสารสกดหยาบ ทมฤทธตานอนมลอสระได โดยนำาสารสกดหยาบทไดมาแยกดวยวธการทางโครมาโตรกราฟ ทเรยกวา Thin layer chromatography (TLC) ซงเปนวธการทไมซบซอน รวดเรว และสามารถจำาแนกชนดสารไดชดเจน ซงสามารถนำาผลการวเคราะหดงกลาวไปใชเปรยบเทยบความแตกตางของชนดสารทเปนองคประกอบในสารสกดหยาบแตละชนดได

ในการศกษาครงนไดใช Chloroform: MeOH ในอตราสวน 9:1 เปนสารละลายทใชแยกในวธการ TLC จากรปท 6 จะเหนไดวาในสารสกดหยาบของเมยงหมกทสกดดวยเมทานอลมแถบสารทแตกตางไปจากสารสกดหยาบทสกดดวยเมทานอลจากใบเมยง และยอดชาเมยง ซงอาจเปนสารทสงผลใหฤทธตานอนมลอสระสงกวา ตวอยางอน ๆ เพอยนยนผลการทดลองน จะตองพนสาร DPPH ลงไปบนเพลท TLC เพ อด ปฏกรยาอกครงหนง ซงจะไดทำาการทดลองในขนตอไป

20

รปท 6 แสดงลกษณะการแยกชนดสารออกฤทธทเปนองคประกอบอยในชาเมยง ดวยวธการ TLC สรปผลการดำาเนนการ

สารสกดหยาบทสกดดวยเมทานอล สามารถสกดสารออกฤทธทมสวนประกอบของสารกลมฟนอล เนองจากมคา TPC สง และมฤทธตานอนมลอสระสง เมอเปรยบเทยบกบสารสกดดวยเฮกเซน โดยเฉพาะสารสกดจากชาเมยง โดยเมยงหมกทสกดดวยเมทานอลใหคา TPC และมฤทธตานอนมลอสระสงกวากลมอน ๆ

เอกสารอางอง

โชตรส โตวณชย. 2545 องคประกอบทางเคมและฤทธตานจลชพของนำามนระเหยงาย จากผลของพชในสกลแซนโทไซลม. วทยานพนธวทยาศาสตรมหาบณฑต สาขาเภสชเวท มหาวทยาลยเชยงใหม, เชยงใหม. 99 หนา.

ปยาภทร ไตรสนธ. 2550. ผลของความสงพนทและสายพนธตอกจกรรมในการตานอนมลอสระของตะไครตน. วทยานพนธวทยาศาสตรมหาบณฑต สาขาพชสวน มหาวทยาลยเชยงใหม. เชยงใหม. 139 หนา.

Brand-Williams, W., Cuvelier, M.E. and Berset, C. 1995. Use of a free radical method to evaluate antioxidant activity. Lebensm.-Wiss.u.-Technol. 28: 25 – 30.

Chan, E.W.C, Y.Y. Lim and Y.L. Chew. 2007. Antioxidant activity of Camellia sinensis leaves and tea from a

21

lowland plantation in Malaysia. Food Chemistry 102: 1214 – 1222.

Folin, O. and Ciocalteu, U. 1927. On tyrosine and tryptophan determinations protein. J. Biol. Chem. 73: 627 – 650.

Manian, R., N. Anusuya, P. Siddhuraju and S. Manian. 2008. The antioxidant activity and free radical scavenging potential of two different solvent extracts of Camellia sinensis (L.) O. Kuntz, Ficus bengalensis L. and Ficus racemosa L. 2008. Food Chemistry 107: 1000 – 1007.

แผนการดำาเนนงานตลอดโครงการ

แผนงานเดอนท

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

เกบตวอยางพช Xสกดสารออกฤทธ - ตะไครตน - ชาเมยง - พชตระกล Zanthoxylum spp.ทดสอบฤทธเฉพาะทางของสารสกด - Total phenol content - DPPH radical

22

scavenging activity - Tyrosinase inhibition activityจ ำาแนกประ เภทสารออกฤทธ เฉพาะทาง - Thin layer chromatography - Preparative thin layer chromatography - High performance chromatographyจดทำารายงานผลการทดลอง X X X X

= ดำาเนนการไปแลว

การดำาเนนงานตอไป1)วเคราะหสารออกฤทธยบยงการทำางานของเอนไซม

tyrosinase ในสวนของตวอยางทยงไมไดดำาเนนการ และใชเซลล melanoma B16 เปนโมเดลในการยบยงปฏกรยาของขบวนการ melanogenesis

2)แยกสารบรสทธโดยวธการทางโครมาโตรกราฟ และจำาแนกประเภทสารออกฤทธดวยวธ HPLC

รายละเอยดงบประมาณ ป พ.ศ. 2551

  ไตรมาส 1

ไตรมาส 2

ไตรมาส 3

ไตรมาส 4

รวม (บาท)

1.งบบคลากร          คาจาง

23

12,000 36,000 36,000 36,000 120,000

คาตอบแทน 5,000

15,000

15,000

15,000

50,000

รวม17,00

0 51,000 51,000 51,000170,00

02. งบดำาเนนการ2.1 คาใชสอย

เบยเลยง 2,000

5,000

5,000

5,000

17,000

จางเหมา 10,000

30,000

35,000

20,000

95,000

ทำารายงาน 1,500

5,000

8,000

10,000

24,500

ชดเชยเกษตรกร 5,000

30,000

45,000

40,000

120,000

อนๆ - - - 5,000

5,000

2.2 วสดสำานกงานและ

คอมฯ 3,000

15,000

20,000

50,000

88,000

เชอเพลง 5,000

20,000

35,000

30,000

90,000

เกษตร สารเคม 10,000

45,000

50,000

25,000

130,000

รวม 53,500

201,000

249,000

236,000

739,500

3. คาใชจายอนๆ -สาธารณปโภค - - - - -

4. งบลงทน - - - - -5. คาบรหารโครงการ - 36,500 -

36,500

73,000

24

รวมทงสน (บาท)53,50

0237,50

0249,00

0272,50

0812,50

0หมายเหต ขอถวเฉลยงบประมาณทกรายการ

ปญหา อปสรรค

ตวอยางตะไครตนทใชในการศกษาครงน มเพยงใบเทานน เนองจากชวงเรมตนของการศกษา ไมมผลผลตดานผลของตะไครตน จงทำาใหไดขอมลไมครบถวน

25